Introduction
Культура клеток кардиомиоцитов является важным инструментом в современной сердечной исследований. Новорожденных кардиомиоцитов крыс (NRCMs) обычно используются с изоляцией и культура легче, чем у взрослых кардиомиоцитов крыс 1. Метод NRCM еще имеет ряд ограничений, включая длительную процедуру выделения и распространения ограниченной клеток в блюдо. Есть многочисленные протоколы для изоляции NRCMs с наиболее широко требуя 4-48 ч работы 2-6. Кроме того, клетки часто изолированы от 1 до 2-дневных крысят 2,4-7; Сроки рождения могут быть непредсказуемыми и конфликт с другой работой в лаборатории. Выделений может быть неэффективным и расточительным, если только небольшое количество клеток, необходимых для экспериментов. Большинство усилий по улучшению внимания рабочего процесса на сокращение времени изоляции, но это не решает проблемы синхронизации рождение щенков.
В качестве альтернативы, многие лаборатории используюткардиомиоциты, полученные из эмбриональных стволовых клеток (ЭСК) или индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК). Тем не менее, процесс перепрограммирования и / или дифференцировки может быть очень много времени и дорого, а также. Там могут быть и другие проблемы при использовании этих клеток, как в пробирке моделей миоцитов. Оба Esc- и iPSC- полученные кардиомиоциты как было показано, демонстрируют разницу в электрофизиологических из первичных кардиомиоцитов 8-10.
Диссоциированные NRCMs способны храниться в течение нескольких дней с помощью охлаждения 11, но это позволит на длительное хранение. Жидкий азот, как правило, используется для сохранения клеток в течение более длительного периода времени, но требует криопротектора, такие как диметилсульфоксид (ДМСО). Предыдущие исследования показали, что идеальным концентрация 5-10% ДМСО в морозильной СМИ позволяет криоконсервации NRCMs, но даже тогда жизнеспособность остается низким 12. Хотя ДМСО помогает защитить клетки во время бесплатноZing, он может быть токсичным к клеткам при концентрации выше 1,5% 13. Предыдущие исследования показали, что медленно снимая ДМСО из клеток, может улучшить Жизнеспособность 14.
Мы стремились повысить эффективность NRCM на основе клеток анализов по криоконсервировать клеток следующую изоляции. Это позволяет клеткам быть размораживали и использовали в случае необходимости, уменьшая частоту выделений и потребления животным. Используя этот метод, мы покажем, что можно криоконсервируют NRCMs и оттепель их для использования в более позднее время. После оттаивания клетки поддерживать приемлемый жизнеспособность и производить NRCM культур, которые являются положительными для α-саркомерный актинин (α-SA) и договора спонтанно.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Следующий протокол предназначен для выделения кардиомиоцитов из одного помета новорожденных крысят (10-14 щенков). Если размер помета значительно отличается, то процедура может иметь быть расширены, чтобы компенсировать. Щенки должны быть около 48 ± 6 ч назад. Все процедуры здесь были утверждены Государственного университета Северной Каролины Уходу за животными и Комитета использования (IACUC).
1. Выделение клеток Подготовка
ПРИМЕЧАНИЕ: Выполните следующие шаги накануне изоляции.
- Автоклав следующие: большие ножницы, маленькие ножницы, маленькие острые щипцы, большие щипцы. Использование силы тяжести цикл в течение 60 мин при минимуме 121 ° С и времени сушки 30 мин.
- Поместите 40 мл 0,1% раствора трипсина в холодильник, чтобы оттаять O / N. Охладите Хэнка Сбалансированные Соли раствор (HBSS), если уже не холодно. Подготовка 20% фетальной бычьей сыворотки (FBS) сток медиа раствора.
- В 400 мл ПГКСМИ Ове модифицированной Дульбекко (IMDM) добавить 100 мл FBS, 5 мл L-глютамин (200 мм), 2,5 мл гентамицин (10 мг мл -1), а 0,9 мл 2-меркаптоэтанола. Стерилизовать при помощи вакуумного фильтра. Магазин средств массовой информации при 4 ° С в течение 3-х недель, и это является масштабируемым для небольших или больших объемах. Развести 20% FBS складе сред 1: 1 с IMDM с получением 10% FBS NRCM носитель. Сделать только небольшими партиями, чтобы предотвратить повторное нагревание и охлаждение средств массовой информации.
2. Выделение клеток День 1
- Выполните следующую работу в капюшоне культуры, чтобы предотвратить загрязнение образцов. Для лучшего времени начать эту работу во второй половине дня, так как есть O / N инкубации.
- Подготовка рабочего места внутри стерильной капот культуры. Поместите скамейке площадку в капюшоне культуры. Заполните два 250 мл стаканы с 70% этанола и поместите хирургические инструменты в них. Поместите маленькое ведро льда в капот. Убедитесь, что он достаточно большой, чтобы провести несколько трубок и 150 мм блюдо. УФ-стерилизации капот FOR 10 мин. Поместите 40 мл 0,1% трипсина на льду.
- Получить новорожденных крысят от матери. Чтобы держать животных теплой до использования, поместите их в изолированном контейнере, таком как ведерко со льдом, завернутый в скамейке площадку, чтобы держать их в тепле.
- Заполните 150 мм культуры блюдо с 25 мл HBSS и место на льду. Разверните 2-3 марлевые подушечки и место в рабочей области. Проведение щенка в кожу на задней части шеи, опрыскивают раствором 70% -ного этанола и места в шкафу. ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы лучше сохранить стерильность, это может быть сделано другим человеком, который помещает очищенный щенка в капоте.
- Держите щенка в кожу на задней части шеи. Затем, используя большие ножницы, одним быстрым, сильным разреза эвтаназии путем обезглавливания. Пятно крови марлей. ПРИМЕЧАНИЕ: Из-за разницы в требованиях IACUC, это может быть более подходящим для очистки щенка с этанолом вытереть, а не распыления. Будьте уверены, чтобы проверить с университетом IACUC, чтобы их руководящих принципов для этого шага.
- Продолжить резки вниз переднюю сторону чЭСТ через грудную клетку. Сожмите кожу на шее, чтобы помочь открыть грудную клетку до тех пор, сердце не видно. Использование маленькие ножницы, удалить сердце и место в культуре блюдо ССРХ на льду. Повторите эти действия для других щенков.
- Удалите все-ткани сердца от образцов и вращать HBSS осторожно, чтобы вымыть сердца. Передача ткани сердца к другой культуре блюдо с свежей HBSS и далее промойте ткань. Отрежьте ткань дальше, пока кусочки не 1-3 мм 3, а затем передать раствора трипсина. Поместите раствора трипсина на качалке в 4 ° C холодильник O / N.
Выделение клеток День 2
Примечание: В то время как аспирационных в следующих шагов, использовать пипетку, а не с вакуумной линией. Ткань перемещается легко, и вакуумный трубопровод будет забивать или удалить ткань еще содержащий клетки. Лучше всего использовать пипетку для аспирации вместо этого. Если ткань входит в пипетку, пипетки назад, чтобы снять ее.
- Make Tглухие аликвоты 10% NRCM СМИ: одна с 25 мл и две 15 мл. Поместите один 25 мл трубки средств массовой информации в 37 ° С на водяной бане. Добавить 4 мл HBSS до 5 различных 15 мл конические пробирки и поместите все на льду. На каждом 15 мл трубки # 1-5.
- Добавить 40 мл HBSS до 50 мл коническую трубку. Добавить 10 мл HBSS, чтобы коллагеназы, пипетки, чтобы приостановить, и объединить решения для создания 50 мл 1 мг мл -1 раствором коллагеназы. Стерилизацию с использованием 0,22 мкм вакуумный фильтр и хранить при комнатной температуре.
- Получить сердечной ткани / трипсин трубку. Убедитесь, что трипсин ясно, и ткани появляется пушистый. Разрешить ткани оседают на углу трубки и аспирации столько жидкости, сколько возможно.
- Добавить 25 мл теплой 10% FBS NRCM СМИ к трубе и встряхните рукой. Крышка и вращаться в 37 ° С на водяной бане в течение 2 мин. Отберите жидкость снова. Ткань должна плавать на этом этапе; Если это так, аспирата из нижней части трубки.
- Добавить 10 мл коллагеназы. Поворот на водяной бане в течение 2 мин или до раствор мутный. Цюйickly аспирации жидкости. Добавить 10 мл свежей коллагеназы в пробирку, содержащую ткань и вращаться в водяной бане в течение 2 мин. Внесите смешивать, передавать решение трубки # 1, и место на льду. Оно не может быть возможно удалить всю жидкость. Повторите этапы 3,2-3,6 для других трех 15 мл конические пробирки. Трансфер оставшуюся жидкость в пробирку # 5.
- Центрифуга 15 мл трубки на 410 RCF в течение 8 мин. В то время как центрифугирование, место 15 мл 10% FBS NRCM медиа трубку в водяной бане. Поместите 40 мкм ячейки фильтра на вершине 50 мл коническую трубку и влажный с 2 мл холодного HBSS.
- Отберите супернатант из формованных вниз клеток. Добавить 6 мл холодной HBSS в каждую пробирку и ресуспендируют. Внесите суспензии клеток через сито в 50 мл коническую удалить любую ткань. Промыть стороны каждого 15 мл пробирку с 3 мл холодного HBSS и добавить к фильтра. Центрифуга клеток при 410 RCF в течение 10 мин. Отберите супернатант. Осадок клеток Ресуспендируйте в 10 мл 10% FBS NRCM СМИ и передачи в T-75 колбу. Промыть конические с 5 мл средства массовой информации и добавить к FLспросить.
- Инкубировать в течение 1 ч при 37 ° С и 5% СО 2. В прошлом 15 мл 10% FBS NRCM СМИ трубку в водяной бане. Передача содержимого Т-75 в новую колбу Т-175, промыть T-75 с 15 мл среды и добавить к Т-175. Инкубировать в течение 1 часа.
4. Криоконсервация
- Поместите замораживания средств массовой информации на льду. Перевести клеток средств массовой информации из Т-175 до 50 мл коническую трубку, и собрать 10 мкл клеточной суспензии для сотового считая с использованием трипанового синего. Центрифуга при 410 RCF в течение 5 мин. В то время как центрифугирование, рассчитывать клеток с использованием клеток счетчика.
- Аспирируйте культуральные среды и ресуспендирования клеток в замораживании носитель в концентрации 2-4 миллиона клеток на мл. Поместите 1 мл клеточной суспензии в криогенных флакон, а затем место флаконы контролируемую скорость охлаждения морозильной контейнера, а место в -80 ° С морозильной O / N. В течение 1-2 дней, передавать флаконы в жидком азоте.
5. Размораживание Клетки
- Пальто блюдо в фибронектина путем растворения 250 мкл60; фибронектина (складочном концентрации 1 мг мл -1) в 9,75 мл воды (конечная концентрация 0,025 мг мл -1). Добавьте достаточно решение для крышки культуры пластины и инкубировать при 37 ° С в течение по крайней мере 30 мин.
- В четыре 15 мл конических пробирок, сделать ДМСО / медиа смеси следующим образом, добавив ДМСО до 20% информации. Добавить (5%) 9,5 мл среды с 500 мкл ДМСО. Добавить (2,5%) 9,75 мл среды с 250 мкл ДМСО. Добавить 10 мл среды (сделать два из них).
- Нагрейте вышеупомянутые смеси средств массовой информации в C водяной бане 37 °. Удалить соты из жидкого азота и поставить на сухом льду. Когда СМИ смеси теплые, оттепель клетки в 37 ° С на водяной бане, пока только разморозить. Не оставляйте ячейки в водяной бане слишком долго, так как это может привести к повреждению клеток.
- Перенесите содержимое криогенной флакона 5% ДМСО / СМИ трубки. Центрифуга при 410 RCF в течение 8 мин. Отберите супернатант оставляя осадок клеток. Добавить содержимое 2,5% ДМСО / СМИ трубки осадок клеток и гesuspend. Центрифуга при 410 RCF в течение 8 мин. Отберите супернатант оставляя осадок клеток.
- Добавить содержимое одного 0% ДМСО / СМИ трубки осадок клеток и ресуспендируют. Центрифуга при 410 RCF в течение 8 мин. Отберите супернатант оставляя осадок клеток.
- Добавить содержимое второй 0% ДМСО / СМИ клеточного осадка и ресуспендируют. Возьмите маленький образец для подсчета клеток. Центрифуга при 410 RCF в течение 8 мин. Хотя центрифугирования Граф клеток в гемоцитометра с использованием трипанового синего для обозначения мертвые клетки. Рекордное количество клеток, а также жизнеспособность.
- Отберите супернатант оставляя осадок клеток. Ресуспендируют в 10% NRCM СМИ (опционально: добавить 100 мкм бромдезоксиуридин (BrdU)) и пластины клеток на фибронектина покрытием блюд.
6. Клеточная культура
- Пластина клеток при температуре около 100 тысяч клеток на см 2. Регулировка плотности металлизации на основе предполагаемого использования культуры. Подготовка 2% NRCM средств массовой информации путем разбавления 20% средств массовой информации в IMDM в соотношении 1:10. Ниже приведено краткое описание типичного культуры. </ Li>
- На 1 день, промыть мертвые клетки от теплой IMDM, добавить 10% NRCM (опция 100 мкМ BrdU). На 2-й день, промыть мертвые клетки от теплой IMDM, добавить 10% NRCM. День 3-добавить 2% NRCM. На 4-й день добавить 2% NRCM. На 5-й день гарантировать, что клетки вырожденная размола. Поддерживать клетки в культуре в течение около одной недели. В этот момент фибробласты могут начать значительно перерасти NRCMs.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
После выделения из неонатальных кардиомиоцитов крысы, клетки замораживали в жидком азоте, и могут храниться в течение по крайней мере нескольких месяцев. Обычно при оттаивании, жизнеспособность определяется трипанового синего анализа будет в пределах 40-60%. Хотя это меньше, чем в других типах клеток, при правильном посеве и культуры, клетки будут размножаться (рис 1). Для того чтобы проверить сократимость, клетки могут быть отображены с помощью фазово-контрастной микроскопии. Клетки должны начать спонтанно сокращаться в течение трех дней (рисунок 2). Для Иммуноцитохимическая (МКК) анализов, клетки высевали на слайдах культуры 4-луночных с 200000 клеток на лунку. Для того, чтобы показать, что клетки в культуре NRCMs клетки, меченные α-SA и визуализируют с помощью флуоресцентной микроскопии. Есть многочисленные α-SA-позитивные клетки, указывающие NRCMs в культуре (рисунок 4). Другие эксперименты были проведены в том числе кульТьюринга NRCMs с мобильного полученных экзосом сердца стволовыми человека, чтобы проверить регенеративные свойства экзосом (рисунок 5).
Рисунок 1. NRCM Распространение в пробирке. Флуоресцентной микроскопии изображение NRCM с окрашиванием для α-SA (зеленый), Ki67 (красный), и DAPI (синий) и для (А) свежевыделенные NRCMs и (B) криоконсервированные затем оттаивают NRCMs. Стрелки указывает пролиферирующих клеток (Ki67-положительный). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой цифры.
Рисунок 2. Сокращение КРИОКОНСЕРВИРОВАННЫХ и оттаивали NRCM в пробирке. NRCMs Spontaneменно заражения в лабораторных условиях. В отличие от свежевыделенных NRCMs, это может занять несколько дней, прежде чем сократимость восстанавливается. Видео было записано пять дней после оттаивания. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть это видео.
Рисунок 3. Сокращение Свежевыделенные NRCM в пробирке. Свежевыделенные NRCMs спонтанно сжимается в пробирке. Эти клетки начнут проявлять сократимость гораздо раньше. Видео были записаны 3 дней после изоляции. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть это видео.
Рисунок 4. Чистота NRCM культуры. </ STRONG> флуоресцентный микроскоп изображения в обоих направлениях (A) свежевыделенные NRCMs в культуре и (В) криоконсервированного и талой NRCMs после 5 дней в культуре. NRCMs показать положительное окрашивание для α-SA (зеленый), тогда как фибробласты можно увидеть, где ядра (синие) не окружены α-SA. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой цифры.
Рисунок 5. Использование талой NRCM для Клеточная определение. Конфокальной микроскопии изображение NRCMs, подчеркнул α-SA (зеленый), инкубировали с DiI-меченных экзосом (красный) от остановки стволовых клеток. Ядра клеток, меченных DAPI (синий). Для того чтобы создать модель окислительного стресса, NRCMs обрабатывали 100 мкМ перекиси водорода в течение 18 часов, перед тем, как инкубировали с exosoмес в течение 4 часов, чтобы обратить вспять окислительного стресса. Стрелки указывают области высоких концентраций экзосом в некоторых клетках. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этой цифры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Этот протокол позволяет NRCMs должны быть изолированы, криоконсервированы, и оттаивали. Размораживание клеток является важным часть процедуры. Серия ДМСО разведений используется для удаления ДМСО медленно из клеток 14. Важно, что извлечение ДМСО быть выполнена быстро, как клетки особенно чувствительны к смерти сразу же после оттаивания. Если более или менее клетки, необходимые для размораживания, объемы растворов ДМСО могут быть расширены в случае необходимости.
Одна из трудностей, изоляции и культуры NRCM является быстрое распространение фибробластов. Этот протокол использует перед металлизацией, которые, как было показано, чтобы уменьшить количество фибробластов 15. Перед металлизацией работы с использованием непокрытых колбы, к которой крепятся фибробласты гораздо быстрее, чем кардиомиоцитов. Последовательность смены носителя могут быть изменены, чтобы уменьшить рост фибробластов. Фибробласты перерастет NRCMs в 10% NRCM СМИ, но роста фибробластов значительно медленнее в 2% NRCM медIa. Существуют и другие методы, такие как Перколл градиентов, чтобы удалить фибробластов до посева в 16,17 или добавление BrdU, чтобы замедлить рост фибробластов 3. Чрезмерный рост фибробластов может быть трудно обнаружить с помощью фазового микроскопа, но легко показать, используя NRCM специфического окрашивания, такие как α-SA (рисунок 3). Если остается чрезмерный рост фибробластов, количество FBS в средствах массовой информации может быть уменьшен до 2% FBS в день 2. При необходимости, покрытие может быть сделано в 5% FBS информации, хотя это может привести к увеличению гибели клеток.
Эта процедура ограничена и больше не выгодно, если с помощью культуры клеток, которые требуют больших количеств клеток 18,19. В тех случаях, когда количество клеток, необходимых приближается к половине количества клеток возможное, чтобы собрать из помета, эта процедура потребует больше животных, поскольку примерно половина из клеток, утраченных в результате криоконсервации. Преимущества криоконсервации больше, при использовании меньшего количества КВЖДLs для анализов, таких как иммунное окрашивание.
Этот протокол иллюстрирует методы для изоляции, криоконсервации и последующего из NRCMs. Есть несколько альтернатив, таких как покупка замороженных клеток от поставщиков, чтобы с помощью этого метода, но покупают клетки могут быть сопряжено с запретом в некоторых лабораториях. Наши методы требуют только материалы и реагенты, обычно используемые в клеточной культуре. Кроме того, используя эти методы могут значительно повысить эффективность и гибкость работы лаборатории в то время как сокращение использования лабораторных животных. Способы, описанные получения жизнеспособных культур, которые могут быть использованы для последующего в пробирке исследования.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| IMDM (+25 mM HEPES +L-glutamine) | Gibco | 12440-046 | With added 25 mM HEPES and L-glutamine |
| L-glutamine | Gibco | 25030-081 | |
| FBS | Hyclone | SH30070.03 | |
| Gentamicin | Gibco | 15710-064 | |
| 2-Mercaptoethanol | Gibco | 21985-023 | |
| HBSS (+Ca +Mg) | Corning | 21-020-CV | With added calcium and magnesium, pH 7.1-7.4 |
| Trypsin 0.25% | Gibco | 25300-056 | |
| Trypsin 0.05% | Gibco | 25300-054 | |
| Cryostor CS5 | BioLife Solutions | 205102 | Freezing media |
| Cryogenic Vial | Corning | 430659 | |
| Collagenase | Sigma | C1889-50MG | |
| 40 μm Cell Strainer | Greiner Bio-One | 542040 | |
| Sterilizing Vacuum Filter (0.22μm) | Corning | 431118 | |
| 50 ml Conical | Corning | 430828 | |
| 15 ml Conical | Corning | 430790 | |
| trypan blue | Cellgro | 25-900-CI | |
| Mr Frosty Freezing Container | ThermoScientific | 5100-0001 | |
| Millicell EZ SLIDES | Millipore | PEZGS0416 | |
| α-sarcomeric actinin antibody | Sigma | A7811 | |
| Fibronectin | Corning | 356008 | |
| Bromodeoxyuridine | BD Biosciences | 51-7581KZ |
References
- Louch, W. E., Sheehan, K. Methods in cardiomyocyte isolation, culture, and gene transfer. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 51 (3), 288-298 (2011).
- Miragoli, M., Salvarani, N., Rohr, S. Myofibroblasts Induce Ectopic Activity in Cardiac Tissue. Circulation Research. 101, 755-758 (2007).
- Simpson, P., Savion, S. Differentiation of rat myocytes in single cell cultures with and without proliferating nonmyocardial cells. Cross-striations, ultrastructure, and chronotropic response to isoproterenol. Circulation Research. 50 (1), 101-116 (1982).
- Simpson, P., McGrath, a, Savion, S. Myocyte hypertrophy in neonatal rat heart cultures and its regulation by serum and by catecholamines. Circulation Research. 51 (6), 787-801 (1982).
- Rohr, S., Flückiger-Labrada, R., Kucera, J. P. Photolithographically defined deposition of attachment factors as a versatile method for patterning the growth of different cell types in culture. Pflügers Archive : European Journal of Physiology. 446 (1), 125-132 (2003).
- Zhang, B., Green, J. V., Murthy, S. K., Radisic, M. Label-free enrichment of functional cardiomyocytes using microfluidic deterministic lateral flow displacement. PloS One. 7 (5), e37619 (2012).
- Boateng, S. Y., Hartman, T. J., Ahluwalia, N., Vidula, H., Desai, T. Inhibition of fibroblast proliferation in cardiac myocyte cultures by surface microtopography. American Journal of Physiology. Cell Physiology. 285 (1), C171-C182 (2003).
- Fu, J. -D., Li, J., et al. Crucial role of the sarcoplasmic reticulum in the developmental regulation of Ca2+ transients and contraction in cardiomyocytes derived from embryonic stem cells. FASEB Journal: Official Publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 20 (1), 181-183 (2006).
- Liu, J., Fu, J. D., Siu, C. W., Li, R. a Functional sarcoplasmic reticulum for calcium handling of human embryonic stem cell-derived cardiomyocytes: insights for driven maturation. Stem Cells. 25 (12), 3038-3044 (2007).
- Knollmann, B. C. Induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes: boutique science or valuable arrhythmia model. Circulation Research. 112 (6), 969-976 (2013).
- Uchida, T., Nagayama, M., Taira, T., Shimizu, K., Sakai, M., Gohara, K. Optimal temperature range for low-temperature preservation of dissociated neonatal rat cardiomyocytes. Cryobiology. 63 (3), 279-284 (2011).
- Miyamura, K., Nagayama, M., et al. Evaluation of viability of cryopreserved rat cardiac myocytes and effects of dimethyl sulfoxide concentration on cryopreservation. Cryobiology. 59 (3), 375 (2010).
- Rana, P., Anson, B., Engle, S., Will, Y. Characterization of human-induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes: bioenergetics and utilization in safety screening. Toxicological Sciences: An Official Journal of the Society of Toxicology. 130 (1), 117-131 (2012).
- Yokomuro, H., Mickle, D. aG., Weisel, R. D., Li, R. -K. Optimal conditions for heart cell cryopreservation for transplantation. Molecular and Cellular Biochemistry. 242 (1-2), 109-114 (2003).
- Simpson, P., McGrath, a, Savion, S. Myocyte hypertrophy in neonatal rat heart cultures and its regulation by serum and by catecholamines. Circulation Research. 51 (6), 787-801 (1982).
- Evans, H. J., Western Goodwin, R. L. array analysis of cell cycle protein changes during the hyperplastic to hypertrophic transition in heart development. Molecular and Cellular Biochemistry. 303 (1-2), 189-199 (2007).
- Golden, H. B., Gollapudi, D., et al. Methods in Molecular Biology. , 205-214 (2012).
- Zlochiver, S., Muñoz, V., Vikstrom, K. L., Taffet, S. M., Berenfeld, O., Jalife, J. Electrotonic myofibroblast-to-myocyte coupling increases propensity to reentrant arrhythmias in two-dimensional cardiac monolayers. Biophysical Journal. 95 (9), 4469-4480 (2008).
- Chang, M. G., Zhang, Y., et al. Spiral waves and reentry dynamics in an in vitro model of the healed infarct border zone. Circulation Research. 105 (11), 1062-1071 (2009).
