Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Environment

En optimeret Berigelse Teknik til isolering af doi: 10.3791/52781 Published: April 9, 2015

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Den allestedsnærværende Arthrobacter arter i jordmiljøer tilbyder et stort antal og mangfoldighed af fager, der kan isoleres fra denne art af værtsbakterier. Bakterielle medlemmer af Acintobacteriaceae familien er mest kendt for deres kataboliske veje for nedværdigende genstridige forbindelser som atrazin og forskellige andre pesticider og herbicider 1,2,3. Selv om de fleste forskning er blevet gjort ved hjælp miljøet stammer af Arthrobacter er kliniske isolater af denne slægt findes i blod, urin, øjne, og mange andre menneskelige kilder alle udviser fylogenetisk heterogenitet 4.

Mens der er en temmelig omfattende mængde forskning på Arthrobacter bakterier, kun få undersøgelser rapport om fager stand til at inficere medlemmer af denne forskelligartede slægt. Interessant dog arbejde tidligere på Arthrobacter fager rører på flere centrale forskellige emner som typning af jord <em> Arthrobacter arter 5, industrielle anvendelser med henblik på at reducere skadelige skum i aktiverede slambehandlingsanlæg 6, og arbejde fremhæve stedspecifik rekombination og integrase gener 7.

Forskellige berigelse teknik protokoller er blevet anvendt til at generere ren fag isolater i Arthrobacter arter. Tidlige procedurer omfatter inkuberinger jord tilsat giftige stoffer som nikotin salte til perioder over et år 8 giver anledning til fager i stand til kun at inficere A. globiformis. Undersøgelser foretaget ved hjælp af jord sivet med labile organiske syntes at producere påviselige fager via plaqueanalyse teknikker, udelade langvarige inkubationsperioder 8. Interessant var dog en teknik der ligner direkte plettering anvendt tidligere har givet anledning til adskillige fager mens der stadig er en særlig lav succesrate ved efterforskerne 5, citerer tidligere undersøgelser med lave succesrater

Samlet set isoleringsteknikker brugt tidligere var kendt for at have lidt effekt i praksis på trods af Arthrobacter slægt repræsenterer den mest almindelige aerobe jord isolere i naturen 4,9, Van Twest og Kropinski 10 nuværende berigelse metoder til isolering af fager fra vand og jord tilpasset fra tidligere teknikker, der anvendes til at berige miljøet bakterieisolater men disse miljøberigelsesmetoder vist sig ineffektiv i at isolere Arthrobacter fager. Formålet med den her beskrevne fremgangsmåde er at vise "proof of concept", som de tidlige berigningsmetoder kan tilpasses konsekvent og effektivt isolere Arthrobacter fager, overvinde tidligere tekniske udfordringer forbundet med at isolere fager fra denne bakteriel slægt.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. Fremstilling af Arthobacter celler til fag Isolation

  • Kultur Arthrobacter sp. KY3901 kolonier udstrøget på en Luria Bertaini (LB) agar plade inkuberet ved 30 ° C i 2-3 dage. Vælg en koloni og bruge en steril løkke for at føje den til 250 ml LB-bouillon i en forvirret dyrkningskolbe og inkuber i en rysteinkubator ved 225 rpm ved 30 ° C.
  • Tillad cirka 24 timer af vækst for at opnå sene eksponentielle / tidlig stationær fase celler til faginfektion eksperimenter. Overvåg tilstanden af ​​bakterievækst nøje for at forhindre celler i at komme ind i midten til slutningen af ​​stationære vækst tilstand.
    BEMÆRK: Cellevækst bør bestå af en optisk densitet OD 600 mellem 0,5-.0.7 for fag isolerings- og oprensningsprocedurer / trin beskrevet nedenfor.

2. Indsamling af fag fra jordprøver

  1. Saml 200-400 g jord fra det ønskede sted. Bemærk: Da bakterier i ArthrobaCter slægten er almindelige jordbakterier de og fager, som inficerer dem kan findes i og er vidt udbredt i de fleste typer af jord.
  2. Tilsæt mindst 400 ml af fag Buffer (PB) [68 mM NaCl, 10 mM MgSO4, 10 mM Tris-CI (pH 7,5)] på jorden og blandes i en stor nok kolbe, således at mindst 200 ml PB er i supernatanten og er i stand til at blive ekstraheret.
  3. Bland ved forsigtigt omrøring eller hvirvlende indtil jorden er suspenderet, og lad jorden sediment at bilægge, typisk 30 min.
  4. Før "jord ekstrakt" gennem filtrerpapir ved hjælp af tyngdekraften filtrering til fjernelse af sediment snavs jord.
  5. Tilføj LB pulver og bland at lave en 2% opløsning (4 g LB pulver i 200 ml jord ekstrakt).
  6. Før opløsningen gennem et 0,22 um filter ved vakuumfiltrering til opnåelse af et sterilt filtrat. Hvis det er muligt, skal du fortsætte til trin 2.7 med det samme. Om nødvendigt, butik filtrerede prøver ved 4 ° C i op til en uge før proceduren imidlertid antallet af levedygtige fagpartiklervil blive reduceret.
  7. Alikvot flere 50 ml portioner af filtersteriliseret LB / jord ekstrakt blandingen i individuelle 250 ml steriliseret ryste forbløffet dyrkningskolber anvendelse af aseptisk teknik. Tilføj steril 2,0 M CaCl2-opløsning til det endelige ønskede koncentrationer (0-50 mM), da forskellige Arthrobacter fager vokser optimalt under forskellige CaCl2 betingelser.
    BEMÆRK: Vi finder, at størstedelen af Arthrobacter fager identificeret ved os er inden for området 1 mM-2,5 mM CaCl2. Men flere af de isolerede fager voksede med os udelukkende ved 0 mM CaCl2 .eller ved meget høje CaCl2 koncentrationer. Fortsæt straks til trin 3.1.

3. Fag Isolation

  1. Tilsæt 1 til 2,5 ml af slutningen af ​​den eksponentielle / tidlig stationær fase bakteriekultur til hver af kolberne. For en OD 600 0,5-0,7, bruge 1 ml celler. For en OD600 højere end en OD på 0,7 anvende 2,5 mlceller.
    BEMÆRK: Celler i eksponentiel vækstfase giver typisk flere fager og højere titre end celler i stationær vækstfase.
  2. Rystekolber ved 250 rpm ved 30 ° C i ca. 24 timer i en rysteinkubator.
  3. Efter en 24 timers inkubationstid fjerne berigelse kolber fra rysteinkubator og fortynde berigelse prøverne ti gange i fag buffer.
  4. Opsætning kultur rør med 0,5 ml af sene eksponentielle / tidlig stationær fase bakteriekultur og tilføje forskellige mængder af berigelseskulturen (5 pi til 500 pi af en 10 -1 fortynding i PB) til dyrkningsrør.
    BEMÆRK: Det tilrådes at afprøve en bred vifte af koncentrationer da hver jordprøve genererer forskellige fag titre efter berigelse.
  5. Tilføj CaCl2 til dyrkningsrør at foretage en endelig koncentration svarende til koncentrationen til stede i den oprindelige berigelse kolben. Brug en række forskellige CaCl2-koncentrationer til at vælge for mange fager wi'te varierende CaCl2 afhængigheder.
    BEMÆRK: De fleste fager vil blive isoleret i CaCl2 området 1-2,5 mm, men der er fager isoleret mest optimalt overalt 0-50 mM CaCl2 koncentrationer. På grund af dette er det bedst at kontrollere en række CaCl2 koncentrationer for at maksimere antallet af unikke isolerede Arthrobacter fager.
  6. Bland 4,5 ml LB topagar i kulturen rør og hæld blandingen på en LB-agarplade. Bland forsigtigt for at fordele over pladen jævnt og giver mulighed for topagar at størkne i ca. 15 min.
    BEMÆRK: Top agar kan fremstilles i større partier (250 ml) og ekstra topagar kan opbevares ved stuetemperatur og genanvendes til efterfølgende forsøg i mindst to uger. Selv om der er forskellige formler anvendes til at gøre topagar, gør vi topagar hjælp 7g / l agar blandes med LB. Place top agar i et 60 ° C vandbad for at opretholde den flydende tilstand i løbet af et eksperiment.
  7. Invertér than plade og inkuberes ved den ønskede temperatur (temperaturen til 30 ° C) O / N til 48 timer. Varier disse betingelser for at optimere for fager tilstedeværende. Mest isoleret fager kommer fra pladerne blev inkuberet ved 30 ° C ved 1-2,5 mM CaCl2 koncentrationen efter en 24 timers inkubationsperiode.

4. Fag Oprensning

  1. Efter en 24 timers inkubation check på plakdannelse på plader. Fortsæt inkubation i op til 72 timer, hvis der ikke plaques er indlysende, eller at afgøre, om yderligere plaques vises. Hvis det er nødvendigt, lagre plader med formodede plaques i op til en uge ved 4 ° C før du fortsætter.
    BEMÆRK: Det er ikke ualmindeligt at finde en række forskellige plaque morfologier på én plade. Finde plaques efter 3 dages inkubation er mulig, men sjældne.
  2. Oprens ønskede fager fra klart isoleret plaques ved hjælp af streak plaque-metoden. Tryk på en mindeplade med en steril træpind. Streak plak ved at køre en træpind gennem en flamme, allowing pinden kortvarigt afkøle og derefter gnide pinden på agarplade i blid bevægelse, som vist i figur 1. Gentag dette ved hjælp af en ren pind for hver passage.
  3. Alternativt kan du bruge den traditionelle plaque titer assay at isolere de enkelte fag plaques. The plaque titer assayet kræver anvendelse af flere reagenser, såsom LB-agar og LB topagar og materialer såsom petriskåle til fag plaque-isolering. Vi har været meget vellykket ved hjælp af den stribe plaque metode, men det er teknisk lettere at isolere individuelle plaques ved hjælp af plaque titer assayet.
  4. Når LB-agar pladen udstryges mindst tre gange, markere området med den laveste koncentration af formodede fagpartikler og forsigtigt anvende 0,5 ml Arthrobacter og 4,5 ml smeltet LB top agar (indeholdende den samme koncentration af calciumchlorid som forælder plade ) og lad det sprede sig jævnt over hele pladen.
  5. Vend og inkuberes plade O / N. Gentag stribe plakteknik til mindst tre iterationer for at sikre en ren fag art isoleres. Store plader ved 4 ° C i op til en uge efter behov mellem striber uden signifikant tab af fag levedygtighed.
  6. Når de ønskede plaques er blevet dyrket og isoleret på den endelige streak plade, berøres en godt isoleret plaque med en mikropipettespids og re-suspendere i 100 pi PB. Serielt fortyndes denne 10 0 opløsning ud til 10 -8 fortynding ved at passere 20 pi af prøven i 180 pi frisk PB.
  7. Tilsæt 10 gl af hver fortynding til 0,5 ml dyrket Arthrobacter i en kultur rør i 5 til 10 minutter ved stuetemperatur og pladen ved at blande de inficerede bakterier med 4,5 ml smeltet LB topagar indeholdende den samme koncentration af CaCl2 anvendt til at isolere fagen fra den oprindelige jordprøve. Gem alle fortyndinger foretaget ved 4 ° C indtil den næste dag.
  8. Bestem fagen seriefortynding nødvendige for at gøre en web mønster ved hjælp af traditionelle plaque titer somsige. Formålet med plaque titer assayet er at bestemme fagtiteren nødvendig for at opnå en web modelpladen. Identificer en web mønster plade som hovedsagelig blottet for bakterier, men som indeholder rester af bakterier, der endnu ikke er blevet lyseret ved fager. Der tilsættes 5 ml sene eksponentielle / tidlig stationær Arthrobacter kultur til en steril 50 ml kultur kolbe.
    1. Tilsæt 100 pi af fortynding (der gav en web mønster til Arthrobacter kultur) i dyrkningskolbe og lade fagerne at inficere bakteriecellerne for 5 til 10 minutter ved stuetemperatur. Bland med smeltet LB topagar indeholdende den samme koncentration af CaCl2, som anvendes til indledningsvis at identificere fag og pladen 5 ml af denne blanding på 10 friske LB-plader. Lad det størkne og inkuberes inverterede plader ved 30 ° C.
  9. Den næste dag, oversvømme pladerne web mønster med 5 ml PB og opbevare O / N ved 4 ° C eller 4 timer ved stuetemperatur.
  10. Filter faglysatet gennem et 0,22 um sprøjtefilterog opbevares ved 4 ° C. Brug denne endelige fag-stamopløsning til yderligere eksperimenter, såsom elektronmikroskopi billeder af fagpartikler, fag genomisk DNA isolation for enzymet DNA restriktion analyse og genomisk sekventering ved anvendelse af standardprocedurer. For lang opbevaring af fag stock sigt tilsættes samme mængde af faglysat til steril glycerol i små hætteglas til lager arkivering ved -80 ° C.
    BEMÆRK: For dem der ikke har oplevet med disse fag teknikker, en stor ressource er online-tilgængelige www.phagesdb.org hjemmeside.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

For at demonstrere reproducerbarhed af det forbedrede berigelse teknik til Arthrobacter fager blev 30 forskellige jordprøver anvendes på forskellige tidspunkter og steder i løbet af foråret og sommeren 2014. Af disse 30 jordprøver unikke Arthrobacter fager blev indhentet fra 22 af de indsamlede jordprøver ved hjælp af denne berigelse procedure. Standarden berigelse fremgangsmåde gav unikke fager fra 3 af de samme jordprøver. Prøverne berigelse kan have en meget høj fagtiteren behøver indledende fortynding at isolere plaques eller en relativt lav fagtiteren kræver en større mængde beriget Arthrobacter for vellykket detektion af plaques. Vi bruger plaque streak metode til at isolere rene fag populationer efter indledende berigelse og udpladning på LB-agar (figur 2). Alternativt kan en traditionel standard plaque titer-assay anvendes til at isolere en ren fag isolat selvom denne fremgangsmåde tager længere tid, reagenser og materialers. Som tidligere nævnt, gør vi bruge plaque titer assayet empirisk bestemme fagtiteren numre og antallet af plakdannende enheder (PFU) til dannelse af en gjord mønster på en plade. Figur 3 viser et sæt af seriefortyndinger til fag Banana og demonstrerer for en af pladerne, hvad en god web mønster skal se ud. Figur 4 viser elektron mikrofoto- billeder af 20 Arthrobacter fager isoleret under anvendelse af berigelse teknik. Af de 25 fager aktuelt isolerede, 23 af dem er siphoviruses med temmelig lange haler. To af de isolerede fager myoviruses indeholdende hoved diametre lignende længde til at deres haler.

Figur 1
Figur 1. Udstrygningspladeteknikken skematisk anvendes til isoleringen af individuelle fag-plakker. Den gule stjerne repræsenterer det område på pladen, at LBtopagar plus bakterier opløsning bør forsigtigt hældt på pladen efter fag plaque striber er afsluttet.

Figur 2
Figur 2. Eksempler på Udstrygningspladeteknikken anvendes til isolering af plaques til en fag (Dylan) ved tre forskellige temperaturer. Bemærk, at fag Dylan producerer lignende plaques ved stuetemperatur, 30 ° C og 37 ° C. De røde cirkler på to af pladerne surround klart isolerede plaques.

Figur 3
Figur 3. Plaque titer assay. Arthrobacter fag Banana var seriel fortyndet i PB og udpladet på agarplader, som beskrevet i afsnit 4.6 og 4.7 i protokollen tekst. Vist er seriefortyndinger T-4 til T-8 (fra toppen). Bemærk, at the T-5 fortynding (fra bund til top) gav en web mønster med kun en lille mængde af den bakterielle plæne stadig tilbage. Lavere seriefortyndinger (T-1 til T-3) skabte klare plader med alle bakterierne lyseret ved fagpartikler påvises ved manglen på enhver bakterievækst.

Figur 4
Figur 4. Electron mikrofoto- billeder af 20 Arthrobacter fager isoleret ved hjælp af berigelse teknik. Billederne blev taget med et FEI Morgagni TEM. Klik her for at se en større udgave af dette tal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Trods mange tidligere forsøg på at isolere fager stand til at inficere Arthrobacter værter, vi havde lidt succes ved hjælp af standard berigelse procedurer. Den generaliserede metode til bakteriel berigelse udviklet og tilpasset af van Twest og Kropinski 10 at berige fager fra miljøprøver er fortsat grundlaget for størstedelen af berigelse procedurer. Dokumentation fra tidligere undersøgelser tyder på, at metoder til direkte plating har produceret påviselige plaque på stammer af Arthrobacter omend med meget lave succesrater for isolation 5. Med den direkte plettering metode, fager udvindes fra jordprøver i et fag-puffer og filtreret for at fjerne kontaminerende bakterier. Den filtrerede ekstrakt indeholdende fagpartikler tilsættes til den ønskede bakterier vært for at tillade værten celleinfektion og udpladet uden yderligere runder af bakterievækst og fag amplifikation.

Vores berigelse teknik er robust og OPtimized for relativt nem isolering af Arthrobacter fager fra Arthrobacter sp. KY3901. Med traditionelle tilsaetningsmetoderne, fager, sammen med mange forskellige typer af bakterier i jordprøverne, ekstraheres fra jorden i fag buffer og tilsat til frisk vækstmedium med ønskede bakterieceller, der anvendes som vært for faginfektion. Med berigelse metode alle jordbakterier fjernes fra jorden ekstraheret fag prøver ved filtrering gennem et 0,22 um filter. De sterile filtrerede lysat indeholdende fagpartikler, men ikke jordbakterier, fortyndes i 2x LB bouillon med de ønskede bakterier, der anvendes som fag formering vært. Den væsentligste forskel mellem vores berigelse procedure, og andre, er, at der er ingen forurenende jordbakterier konkurrerer om vækst med værten bakterier i løbet af berigelse inkubationstid periode. Den eneste vært jorden ekstraheret fag kan inficere er, at den ønskede vært bakterier og derfor MaximiZES potentiale værten bakterier og forstærkning af de ønskede værtsspecifikke fager vækst.

I udviklingen af den her beskrevne procedure, vi har forsøgt at redegøre for selektiv forspænding forbundet med enhver procedure berigelse ved at teste en række CaCl2 koncentrationer 11. Hvad blev klart, at nogle fag-isolater viser fysiologiske forskelle afhængige parametre som calcium ion koncentration og temperatur. For fremtidige Arthrobacter fag isoleringer planlægger vi at teste de vigtigste faktorer som ligesom pH, temperatur, saltholdighed, næringsstoffer, divalente metalioner at isolere fager kan gengive i deres værter optimalt under forskellige miljøforhold.

Vi bruger frisk dyrket Arthrobacter celler i dette eksperiment. Vi bruger ikke celler, der når midten til slutningen af ​​stationære vækstfase, da vi har haft svært ved at isolere fag eller har ordentlige titre med kendte fager på ther vækstperiode. Andre har vist en hæmning af faginfektion i stationær fase Achromobacter celler 12, som kan forklare den manglende succes til isolering af fager ved hjælp af bakterieceller i midten til slutningen af stationære vækstfase. Vi har haft succes ved hjælp kulturer for disse eksperimenter med en celletæthed overalt fra en OD6 00 fra 0,5 til 0,9. Grown kulturer opbevares ved 4 ° C og kan anvendes til fag-isolation op til syv dage. Men jo længere Arthrobacter celler opbevaret ved 4 ° C lavere titeren og brast størrelse af infektiøse fagpartikler. Lignende resultater blev fundet med anvendelse af Escherichia coli til infektion af phageT4 13. Derfor hjælp bakterieceller snarest muligt efter de har nået den ønskede vækst maksimerer chancerne for at opnå en hidtil ukendt fag fra en jordprøve.

Generelt er anvendelsen af ​​denne berigelse teknik med LB medier bør vise sig at være næsteneksklusivt til isolering af Arthrobacter fager. Mens LB er branchens standard for dyrkning E. coli-stammer og andre medlemmer af Enterobacteriaceae, understøtter væksten af en bred vifte af bakterier i aerobe betingelser 14. Den næringsrige sammensætning LB medier kan sandsynligvis anvendes i denne metode til at udbrede fager i en utrolig forskelligartet gruppe af aerobe bakterier forhindrer tekniske udfordringer fra hindre fag opdagelse.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne erklærer nogen konkurrerende finansielle interesser.

Acknowledgments

Finansiering af udviklingen af ​​denne protokol blev leveret af det sydøstlige Pennsylvania Consortium for videregående uddannelse og det Cabrini College Science afdeling. Yderligere finansiering og støtte kom fra Arcadia University og Immaculata Universitet. Vi har især takke Dr. Karen Snetselaar på St. Joseph University for venligt at tage elektron mikroskopiske billeder af vores isolerede fager. Yderligere støtte blev givet af Howard Hughes Medical Institute Science Education Alliance Fag Hunters Advancing Genomics og Evolutionary Science (SEA-fager) program.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
LB Broth powder Fisher BP9722-2 It's best to order these in bulk.
Granulated Agar Fisher BP1423-2 It's best to order these in bulk.
0.22 um syringe filters Fisher 09-719A
0.22 um buchner filters Fisher 430320 More than 50 ml of liquid can be obtained by carefully swapping the receiving tube.
Eppendorf Tubes Fisher 05-408-129
5 ml pipets individual Fisher 13-678-11D
50 ml conical tubes Fisher 76002844
15 ml conical tubes Fisher 76002845
10 ml pipets individual Fisher 13-676-10J
25 ml pipets individual Fisher 13-676-10K
Whatman qualitative filter paper Fisher 1001-824

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Shapir, N., Mongodin, E. F., Sadowsky, M. J., Daugherty, S. C., Nelson, K. E., Wackett, L. P. Evolution of Catabolic Pathways: Genomic Insights into Microbial s-Triazine Metabolism. J Bacteriol. 189, (3), 674-682 (2007).
  2. Qingyan, L., Ying, L., Xikun, Z., Baoli, C. Isolation and Characterization of Atrazine Degrading Arthrobacter sp. AD26 and Use of this Strain in Bioremediation of Contaminated Soil. J Environ Sci. 20, 1226-1230 (2008).
  3. Wang, J., Zhu, L., Liu, A., Ma, T., Wang, Q., Xie, H., Wang, J., Jiang, T., Zhao, T. Isolation and characterization of an Arthrobacter sp. Strain HB-5 that Transforms Atrazine. Environ Geochem Hlth. 33, 259-266 (2011).
  4. Mages, I. S., Frodl, R., Bernard, K. A., Funke, G. Identities of Arthrobacter spp. And Arthrobacter-Like Bacteria Encountered in Human Clinical Specimens. J Clin Microbiol. 46, (9), 2980-2986 (2008).
  5. Brown, D. R., Holt, J. G., Pattee, P. A. Isolation and Characterization of Arthrobacter Bacteriophages and Their Application to Phage Typing of Soil Arthrobacters. Appl Environ Microbiol. 35, (1), 185-191 (1978).
  6. Petrovski, S., Seviour, R. J., Tillett, D. Prevention of Gordonia and Nocardia Stabilized Foam Formation by Using Bacteriophage GTE7. Appl Environ Microbiol. 77, (21), 7864-7867 (2011).
  7. Le Marrec, C., Moreau, S., Loury, S., Blanco, C., Trautwetter, a Genetic Characterization of Site-specific Integration Functions of phi AAU2 infecting “Arthrobacter aureus” C70. J Bacteriology. 178, (7), 1996-2004 (1996).
  8. Casida, L. E., Liu, K. C. Arthrobacter globiformis and Its Bacteriophage in Soil. J Appl Microbiol. 28, (6), 951-959 (1974).
  9. Einck, K. H., Pattee, P. A., Holt, J. G., Hagedorn, C., Miller, J. A., Berryhill, D. L. Isolation and Characterization of a Bacteriophage of Arthrobacter globiformis. J Virol. 12, (5), 1031-1033 (1973).
  10. Twest, R., Kropinski, A. M. Bacteriophage Enrichment from Soil and Water. Methods Mol Bio. 501, 15-21 (2009).
  11. Fullner, K. J., Hatfull, G. F. Mycobacteriophage L5 Infection of Mycobacterium bovis BCG: Implications for Phage Genetics in the Slow-growing Mycobacteria. Mol Microbiol. 26, (4), 755-766 (1997).
  12. Robb, S. M., Woods, D. R., Robb, F. T. Phage Growth Characteristics on Stationary Phase Achromobacter cells. J Gen Virol. 41, (2), 265-272 (1978).
  13. Bolger-Munro, M., Cheung, K., Fang, A., Wang, L. T4 Bacteriophage Average Burst Size Varies with Escherichia coli B23 Cell Culture Age. Journal of Experimental Microbiology and Immunology. 17, 115-119 (2013).
  14. MacWilliams, M. P., Liao, M. K. Luria Broth (LB) and Luria Agar, Media and Their Uses Protocol. ASM MicrobeLibrary. Available from: http://www.microbelibrary.org/library/laboratory-test/3020-luria-broth-lb-and-luria-agar-la-media-and-their-uses-escherichia-coli (2013).
En optimeret Berigelse Teknik til isolering af<em&gt; Arthrobacter</em&gt; Bakteriofag Arter fra jordprøve Isolerer
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Cross, T., Schoff, C., Chudoff, D., Graves, L., Broomell, H., Terry, K., Farina, J., Correa, A., Shade, D., Dunbar, D. An Optimized Enrichment Technique for the Isolation of Arthrobacter Bacteriophage Species from Soil Sample Isolates. J. Vis. Exp. (98), e52781, doi:10.3791/52781 (2015).More

Cross, T., Schoff, C., Chudoff, D., Graves, L., Broomell, H., Terry, K., Farina, J., Correa, A., Shade, D., Dunbar, D. An Optimized Enrichment Technique for the Isolation of Arthrobacter Bacteriophage Species from Soil Sample Isolates. J. Vis. Exp. (98), e52781, doi:10.3791/52781 (2015).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter