Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Environment

Een Geoptimaliseerd Verrijking Techniek voor de isolatie van doi: 10.3791/52781 Published: April 9, 2015

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

De alomtegenwoordigheid van Arthrobacter soorten in de bodem omgevingen en biedt een groot aantal en de diversiteit van fagen kunnen worden geïsoleerd van deze soort van gastheer bacteriën. Bacteriële leden van de familie Acintobacteriaceae zijn het meest bekend om hun katabole paden van vernederende recalcitrante verbindingen zoals atrazine en diverse andere pesticiden en herbiciden 1,2,3. Hoewel de meeste onderzoek is gedaan met behulp van het milieu stammen van Arthrobacter, wordt klinische isolaten van deze soort gevonden in bloed, urine, ogen, en vele andere menselijke bronnen die allemaal van fylogenetische heterogeniteit 4.

Hoewel er een vrij uitgebreid lichaam van het onderzoek op Arthrobacter bacteriën, slechts een paar studies rapporteren over de fagen kunnen infecteren leden van deze diverse geslacht. Interessant is echter, werk eerder gedaan op Arthrobacter fagen hand gelegd aan een aantal belangrijke verschillende onderwerpen, zoals de typering van de bodem <em> Arthrobacter species 5, industrieel gebruik met het oog op het verminderen van schadelijke schuim in actief slib zuiveringsinstallaties 6, en werk benadrukken locatiespecifieke recombinatie en integrase genen 7.

Verschillende verrijkingstechniek protocollen zijn gebruikt voor het genereren zuivere faag isolaten Arthrobacter species. Vroege procedures omvatten incubaties van de bodem met toegevoegde giftige stoffen zoals nicotine zouten voor een periode van meer dan één jaar 8 die aanleiding geven tot fagen staat alleen infecteren A. globiformis. Studies gedaan met behulp van de bodem gepercoleerd met labiele organische bleek detecteerbare fagen te produceren via plaque assay technieken, met weglating van lange incubatietijd 8. Interessant is echter, een techniek lijkt rechtstreeks plateren werd in het verleden gebruikt die tot verschillende fagen terwijl nog steeds een opmerkelijk lage slagingspercentage van de onderzoekers 5, citeren eerdere studies met lage succespercentages

Kortom, de isolatietechnieken die in het verleden waren opmerkelijk voor die weinig werkzaamheid in de praktijk, ondanks het geslacht Arthrobacter die de meest voorkomende aerobe bodem isoleren natuur 4,9, Van Twest en Kropinski 10 verrijking onderhavige werkwijzen voor het isoleren van fagen van water en grond aangepast van eerdere technieken gebruikt om het milieu bacteriële isolaten maar deze verrijking technieken verrijken inefficiënt gebleken in het isoleren van Arthrobacter fagen. Het doel van de hier beschreven werkwijze verlangde "proof of concept" dat de vroege verrijking werkwijzen kunnen worden aangepast om consistent en effectief te isoleren Arthrobacter fagen overwinnen voorafgaande technische uitdagingen van fagen isoleren van deze bacteriële genus.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. Bereiding van Arthobacter Cellen voor Phage Isolatie

  • Cultuur Arthrobacter sp. KY3901 kolonies uitgestreken op Luria Bertaini (LB) agar plaat geïncubeerd bij 30 ° C gedurende 2-3 dagen. Kies een kolonie en een steriele lus toe te voegen aan 250 ml LB-bouillon in een baffled cultuur kolf en geïncubeerd in een incubator schudden bij 225 rpm bij 30 ° C.
  • Laat ongeveer 24 uur van de groei van de laat-exponentiële / vroeg-stationaire cellen voor faaginfectie experimenten te verkrijgen. Toezicht houden op de toestand van de bacteriële groei nauw aan cellen voorkomen dat het midden tot de late stationaire groei staat.
    OPMERKING: Celgroei moet bestaan ​​uit een optische dichtheid OD 600 van 0,5-.0.7 de faag isolatie- en zuiveringswerkwijzen / stappen hieronder beschreven.

2. Het verzamelen van Fagen van bodemmonsters

  1. Verzamel 200-400 g grond van gewenste locatie. Let op: Omdat de bacteriën in de Arthrobacter geslacht zijn gemeenschappelijke bodembacteriën zij en de fagen die hen infecteren kan worden gevonden in en zijn alomtegenwoordig in de meeste grondsoorten.
  2. Voeg minstens 400 ml faag buffer (PB) [68 mM NaCl, 10 mM MgSO4, 10 mM Tris-CL (pH 7,5)] om de bodem en meng in een voldoende grote kolf zodat ten minste 200 ml PB is in het supernatant en kan worden geëxtraheerd.
  3. Meng door zachtjes te roeren of zwenken totdat de bodem is opgehangen en laat de bodem neerslag bezinken, meestal 30 min.
  4. Voorbij de "bodem extract" door filtreerpapier door de zwaartekracht filtratie om bodemsedimenten vuil te verwijderen.
  5. Voeg LB poeder en meng tot een oplossing van 2% (4 g LB poeder in 200 ml grond extract) te maken.
  6. Laat de oplossing door een filter van 0,22 pm door vacuümfiltratie om een ​​steriele filtraat te verkrijgen. Indien mogelijk, verder op om onmiddellijk stap 2.7. Indien nodig, opslag gefilterd monsters bij 4 ° C gedurende maximaal een week voor procedure echter het aantal levensvatbare faagdeeltjesworden verminderd.
  7. Portie meerdere porties van 50 ml de filter gesteriliseerde LB / bodem extract mengsel in de individuele 250 ml gesteriliseerd schudden verbijsterd kweekflessen behulp van aseptische technieken. Voeg steriele 2,0 M CaCl2-oplossing om de uiteindelijke gewenste concentraties (0-50 mM) aangezien verschillende Arthrobacter fagen groeien optimaal onder verschillende CaCl2 voorwaarden.
    OPMERKING: We zien dat de meerderheid van de Arthrobacter fagen die door ons zijn binnen het bereik van 1 mM-2,5 mM CaCl2. Echter, een aantal van de geïsoleerde fagen groeide door ons exclusief op 0 mM CaCl2 .of bij zeer hoge CaCl2 concentraties. Ga onmiddellijk naar stap 3.1.

3. Fagen Isolatie

  1. Voeg 1 tot 2,5 ml late exponentiële / vroege stationaire fase bacteriekweek aan elk van de kolven. Voor een OD 600 0,5-0,7, gebruik 1 ml van de cellen. Voor een OD 600 lager dan een OD van 0,7 gebruiken 2.5 mlcellen.
    OPMERKING: Cellen in exponentiële groeifase leveren doorgaans meer fagen en hogere titers dan cellen in stationaire groeifase.
  2. Schudflessen bij 250 rpm bij 30 ° C gedurende ongeveer 24 uur in een schudincubator.
  3. Na een 24 uur incubatietijd verwijderen verrijking flesjes uit de schudincubator en verdun de verrijking monsters tienvoudige in faag buffer.
  4. Stel cultuur buizen met 0,5 ml van laat-exponentiële / vroege stationaire fase bacteriekweek en voeg verschillende hoeveelheden verrijking kweek (5 ui tot 500 ui van een 10 -1 verdunning in PB) aan de kweek buizen.
    OPMERKING: Het is raadzaam om een ​​breed scala van concentraties te testen, aangezien elk grondmonster genereert verschillende faagtiters na verrijking.
  5. Voeg CaCl2 cultuur buizen tot een uiteindelijke concentratie van de aanwezige concentratie in het oorspronkelijke verrijking kolf maken. Gebruik een reeks verschillende CaCl2 concentraties selecteren voor vele fagen wi variërende CaCl2 afhankelijkheden.
    LET OP: De meeste fagen wordt geïsoleerd binnen de CaCl2 scala van 1-2,5 mM maar er zijn fagen geïsoleerd meest optimaal overal 0-50 mM CaCl2 concentraties. Hierdoor is het het beste om een reeks van CaCl2 concentraties controleren om het aantal unieke geïsoleerde fagen Arthrobacter maximaliseren.
  6. Meng 4,5 ml LB top agar in de cultuur buis en giet het mengsel op een LB agar plaat. Roer voorzichtig te verspreiden over de plaat gelijkmatig en zorgen voor top agar stollen voor ongeveer 15 min.
    OPMERKING: topagar kunnen worden bereid in grote series (250 ml) en extra topagar kunnen worden bewaard bij kamertemperatuur en opnieuw gebruikt voor daaropvolgende experimenten minstens twee weken. Hoewel er verschillende formules gebruikt om de top agar, maken we top afstrijken met 7 g / L van agar gemengd met LB. Plaats top agar in een 60 ° C waterbad voor het vloeibare toestand behouden in de loop van een experiment.
  7. Omkeren tHij plaat en incubeer bij de gewenste temperatuur (temperatuur 30 ° C) O / N tot 48 uur. Variëren deze voorwaarden te optimaliseren voor de huidige fagen. De meeste fagen geïsoleerd vandaan platen geïncubeerd bij 30 ° C bij 1-2,5 mM CaCl2-concentratie na 24 uur incubatie periode.

4. Fagen Zuivering

  1. Na 24 uur incubatie cheque voor de vorming van tandplak op platen. Verder incubatie tot 72 uur indien geen plaques zijn evident of om te bepalen of aanvullende plaques verschijnen. Indien nodig, opslag platen met vermeende plaques voor tot een week bij 4 ° C alvorens verder te gaan.
    LET OP: Het is niet ongewoon om een ​​verscheidenheid van verschillende plaque morfologie vinden op een bord. Het vinden plaques na 3 dagen incubatie mogelijk maar zeldzaam.
  2. Zuiveren gewenste fagen uit duidelijk geïsoleerd plaques met behulp van de streak plaque methode. Raak een plaquette met een steriele houten stok. Streak de plaque door het uitvoeren van een houten stok door een vlam, allowinG de stok kort afkoelen en vervolgens wrijven de stok op de agar plaat in de zachte beweging zoals weergegeven in figuur 1. Herhaal deze met een schone stick voor elke doorgang.
  3. U kunt ook gebruik maken van de traditionele plaque titer test om individuele faagplaques isoleren. De plaque assay titer vereist het gebruik van reagentia zoals LB agar en LB top agar en materialen zoals petrischalen voor faag plaque isolatie. We zijn zeer succesvol verlopen met behulp van de streak plaque methode, maar het is technisch eenvoudiger om individuele plaques met behulp van de plaque titer test te isoleren.
  4. Zodra de LB agar plaat minstens driemaal strepen, markeer het gebied met de laagste concentratie van putatieve faagdeeltjes en voorzichtig 0,5 ml Arthrobacter en 4.5 ml van gesmolten LB top agar (die dezelfde concentratie van calciumchloride als het werkstukoppervlak ) en laat het gelijkmatig over de plaat gespreid.
  5. Omkeren en incubeer plaat O / N. Herhaal de streak plaquetechniek minstens drie iteraties te zorgen voor een soort zuivere faag wordt geïsoleerd. WINKEL platen bij 4 ° C gedurende maximaal een week nodig tussen stroken zonder significant verlies van levensvatbaarheid faag.
  6. Zodra de gewenste plaques zijn geteeld en op de laatste streak plaat geïsoleerd, raakt een goed geïsoleerd plaquette met een micropipet tip en opnieuw op te schorten in 100 ul PB. Serieel verdunnen deze 10 0 oplossing uit naar de 10 -8 verdunning door het passeren van 20 ul van het monster in 180 ul van verse PB.
  7. Voeg 10 ul van elke verdunning tot 0,5 ml gekweekt Arthrobacter in een kweekbuis 5 tot 10 minuten bij kamertemperatuur en de plaat door het mengen van de geïnfecteerde bacteriën met 4,5 ml van gesmolten LB top agar die dezelfde concentratie van CaCl 2 gebruikt om de faag te isoleren van de oorspronkelijke bodemmonster. Bewaar alle verdunningen gemaakt bij 4 ° C tot de volgende dag.
  8. Bepaal de faag seriële verdunning nodig om een ​​web patroon met behulp van de traditionele plaque titer zo makenzeg eens. Het doel van de plaque assay titer is de faag titer nodig om een ​​web patroon plaat verkrijgen bepalen. Identificeer een web patroon plaat als grotendeels verstoken van bacteriën maar die resten van bacteriën die nog niet gelyseerd door fagen. Voeg 5 ml van de laat-exponentiële / vroeg-stationaire Arthro- cultuur tot een steriele 50 ml kolf.
    1. Voeg 100 ul van de verdunning (dat gaf Webpatroon de Arthrobacter cultuur) in cultuur kolf en laat de fagen om de bacteriën infecteren gedurende 5 tot 10 min bij kamertemperatuur. Meng met gesmolten LB top agar die dezelfde concentratie van CaCl 2 zoals gebruikt aanvankelijk identificeren faag en plaat 5 ml van dit mengsel op 10 vers LB-platen. Laten stollen en incubeer omgekeerde platen bij 30 ° C.
  9. De volgende dag, overstromen Webpatroon platen met 5 ml PB en opslaan O / N bij 4 ° C of 4 uur bij KT.
  10. Filter de faaglysaat door een 0,22 pm spuitfilteren bewaar bij 4 ° C. Met deze laatste faagvoorraad aanvullende experimenten zoals elektronen microscopie foto van faagdeeltjes faag genomisch DNA isolatie van DNA restrictie-enzymanalyse en genomische sequencing met behulp van standaardprocedures. Voor de lange termijn opslag van de faag voorraad, voeg een gelijke hoeveelheid van de faaglysaat om steriele glycerol in kleine flesjes voor voorraad archivering bij -80 ° C.
    OPMERKING: Voor degenen die niet ervaren met deze faag technieken, een geweldige bron is de online toegankelijk www.phagesdb.org website.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Om de reproduceerbaarheid van de verbeterde verrijking techniek voor Arthrobacter fagen te tonen, werden 30 verschillende grondmonsters gebruikt op verschillende tijdstippen en locaties tijdens de lente en zomer van 2014. Van deze 30 grondmonsters unieke Arthrobacter fagen werden verkregen uit 22 van verzamelde grondmonsters met behulp van deze verrijking procedure. De standaard verrijkingsprocedure leverde unieke fagen van 3 van dezelfde bodemmonsters. De verrijking monsters kunnen een faag titer hoog hoeven initiële verdunning om plaques of faag titer relatief laag die een groter volume verrijkt Arthrobacter voor een succesvolle detectie van plaques te isoleren. We gebruiken de plaque streak methode faagpopulaties zuivere isolaat na initiële verrijking en uitplaten op LB-agar (figuur 2). Als alternatief kan een traditionele standaard plaque assay titer worden gebruikt om een ​​faagisolaat zuiver isoleren hoewel deze werkwijze meer tijd kost, reagentia en materialens. Zoals eerder vermeld, wij gebruiken de plaque assay titer empirisch bepalen faag titer nummers en het aantal plaquevormende eenheden (PVE) een singelband patroon op een plaat te vormen. Figuur 3 toont een reeks seriële verdunningen van faag banaan en toont voor één van de platen wat een goede web patroon eruit moet zien. Figuur 4 toont elektron Micrografische beelden van 20 Arthrobacter fagen geïsoleerd met behulp van de verrijking techniek. Van de 25 fagen momenteel geïsoleerd, 23 van hen zijn siphoviruses met tamelijk lange staarten. Twee van de geïsoleerde fagen bevatten myoviruses hoofd diameters gelijk in lengte aan die van hun staart.

Figuur 1
Figuur 1. Streak plaattechniek schema voor de isolatie van afzonderlijke faag plaques. De gele ster vertegenwoordigt het gebied op het bord dat de LBtop agar plus bacterieoplossing zorgvuldig gegoten op de plaat na de faag plaque strepen is voltooid.

Figuur 2
Figuur 2. Voorbeelden van de streep plaat techniek voor het isoleren van plaques één faag (Dylan) op drie verschillende temperaturen. Let faag Dylan produceert vergelijkbare plaques bij kamertemperatuur, 30 ° C en 37 ° C. De rode cirkels op twee platen omringen duidelijk geïsoleerde plaques.

Figuur 3
Figuur 3. Plaque assay titer. Arthrobacter faag banaan werd serieel verdund in PB en uitgeplaat op agarplaten zoals beschreven in paragrafen 4.6 en 4.7 van het protocol tekst. Getoond worden seriële verdunningen T-4 T-8 (van boven). Merk op dat the T-5 verdunning (van beneden naar boven) leverde een web patroon met slechts een kleine hoeveelheid van het bacteriedek nog overgebleven. Lagere seriële verdunningen (T-1 tot T-3) duidelijk gemaakt platen met alle bacteriën gelyseerd door faagdeeltjes aangetoond door het ontbreken van bacteriegroei.

Figuur 4
Figuur 4. Electron Micrografische beelden van 20 Arthrobacter fagen geïsoleerd met behulp van de verrijking techniek. De beelden werden genomen met behulp van een FEI Morgagni TEM. Klik hier om een grotere versie van deze afbeelding te bekijken.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Ondanks vele eerdere pogingen om fagen kunnen infecteren Arthrobacter gastheren isoleren, we hadden weinig succes met behulp van standaard verrijking procedures. De algemene werkwijze van bacteriële verrijking ontwikkeld en aangepast door van Twest en Kropinski 10 fagen verrijken van milieumonsters blijft de basis voor de meeste verrijking procedures. Bewijs uit eerdere studies blijkt dat methoden van directe plating detecteerbaar plaques op stammen van Arthrobacter hebben geproduceerd, zij het ​​met een zeer lage slagingspercentages van isolatie 5. Met de directe plating methode worden fagen gewonnen uit grondmonsters in een faag buffer en gefilterd aan besmettelijke bacteriën te verwijderen. Het gefiltreerde extract bevattende faagdeeltjes worden toegevoegd aan de gewenste bacterie gastheer gastheercel infectie mogelijk en uitgeplaat zonder bijkomende ronden van groei bacteriën en faag amplificatie.

De verrijking techniek is robuust en opseerd voor de relatief gemakkelijke isolatie van Arthrobacter fagen uit Arthrobacter sp. KY3901. Bij traditionele verrijking procedures, fagen, samen met vele verschillende soorten bacteriën in de bodemmonsters worden geëxtraheerd uit grond in faag buffer en toegevoegd aan verse groeimedia met gewenste bacteriële cellen gebruikt als gastheer voor faag-infectie. Bij de werkwijze van verrijking worden alle bodembacteriën uit de grond geëxtraheerd faagmonsters door filtratie door een 0,22 um filter. De steriel gefiltreerde lysaat bevattende faagdeeltjes, maar niet bodembacteriën worden verdund in 2x LB bouillon met de gewenste bacteriën gebruikt als faag voortplanting gastheer. Het belangrijkste verschil tussen onze verrijkingsprocedure en anderen is dat er geen verontreinigende bodembacteriën concurreren voor groei van de gastheer bacteriën tijdens de verrijking incubatietijd periode. De enige gastheer de bodem geëxtraheerd faag kan infecteren dat de gewenste gastheer bacteriën en derhalve MaximiZES het groeipotentieel van de gastheer bacteriën en versterking van de gewenste gastheer-specifieke fagen.

Bij de ontwikkeling van de hier beschreven werkwijze probeerden we te verantwoorden selectieve systematische fout van verrijking procedure testen van een reeks concentraties CaCl2 11. Wat gebleken is dat sommige faag isolaten vertonen fysiologische verschillen afhankelijk van parameters zoals calcium ion concentratie en temperatuur. Voor toekomstige Arthrobacter faag isolaties we van plan testen sleutelfactoren zoals zoals pH, temperatuur, zoutgehalte, nutriënten, tweewaardige metaalionen fagen kan reproduceren in hun gastheren optimaal onder verschillende milieuomstandigheden isoleren.

Wij gebruiken vers gekweekte Arthrobacter cellen in dit experiment. We hebben geen cellen die midden bereiken late stationaire fase van groei sinds we moeite het isoleren van faag of met fatsoenlijke titers met bekende fagen bij Th hebben gehad gebruikenis de groei periode. Anderen vertoonden een remming van faag infectie bij stationaire fase Achromobacter cellen 12 die het mislukte isoleren van fagen met bacteriële cellen in het midden tot de late stationaire groeifase kan verklaren. We hebben succes met kweken van deze experimenten met een celdichtheid overal van een OD6 00 van 0,5 tot 0,9 heeft. Gekweekte kweken worden bewaard bij 4 ° C en kan worden gebruikt voor faag isoleren tot zeven dagen. Echter, hoe langer de Arthrobacter cellen bewaard bij 4 ° C lager de titer en barstte grootte van infectieuze faagdeeltjes. Soortgelijke resultaten werden gevonden met behulp Escherichia coli voor de infectie van phageT4 13. Daarom gebruiken bacteriële cellen zo snel mogelijk na het bereiken van de gewenste groei maximaliseert kansen op een nieuwe faag uit een bodemmonster.

In het algemeen, het gebruik van deze verrijking techniek LB media moeten blijken nauwelijksexclusief voor de isolatie van Arthrobacter fagen. Terwijl LB de industrie standaard is geweest voor het kweken van E. coli stammen en andere leden van de Enterobacteriaceae, ondersteunt de groei van een groot aantal bacteriën in aërobe omstandigheden 14. De voedingsrijke samenstelling van LB-medium kan waarschijnlijk worden gebruikt bij deze werkwijze fagen propageren in een zeer diverse groep van aërobe bacteriën voorkomen technische uitdagingen bemoeilijken faag ontdekking.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Auteurs verklaren geen concurrerende financiële belangen.

Acknowledgments

Financiering voor de ontwikkeling van dit protocol is verstrekt door de Southeastern Pennsylvania Consortium voor het hoger onderwijs en de Cabrini College Science Department. Aanvullende financiering en ondersteuning kwam van Arcadia University en Immaculata University. Wij danken vooral Dr. Karen Snetselaar in het St. Joseph Universiteit voor vriendelijk het nemen van de elektronenmicroscopische beelden van onze geïsoleerde fagen. Aanvullende steun werd verleend door het Howard Hughes Medical Institute Science Education Alliance Fagen Jagers Voortschrijdende Genomics en Evolutionaire Science programma (SEA-fagen).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
LB Broth powder Fisher BP9722-2 It's best to order these in bulk.
Granulated Agar Fisher BP1423-2 It's best to order these in bulk.
0.22 um syringe filters Fisher 09-719A
0.22 um buchner filters Fisher 430320 More than 50 ml of liquid can be obtained by carefully swapping the receiving tube.
Eppendorf Tubes Fisher 05-408-129
5 ml pipets individual Fisher 13-678-11D
50 ml conical tubes Fisher 76002844
15 ml conical tubes Fisher 76002845
10 ml pipets individual Fisher 13-676-10J
25 ml pipets individual Fisher 13-676-10K
Whatman qualitative filter paper Fisher 1001-824

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Shapir, N., Mongodin, E. F., Sadowsky, M. J., Daugherty, S. C., Nelson, K. E., Wackett, L. P. Evolution of Catabolic Pathways: Genomic Insights into Microbial s-Triazine Metabolism. J Bacteriol. 189, (3), 674-682 (2007).
  2. Qingyan, L., Ying, L., Xikun, Z., Baoli, C. Isolation and Characterization of Atrazine Degrading Arthrobacter sp. AD26 and Use of this Strain in Bioremediation of Contaminated Soil. J Environ Sci. 20, 1226-1230 (2008).
  3. Wang, J., Zhu, L., Liu, A., Ma, T., Wang, Q., Xie, H., Wang, J., Jiang, T., Zhao, T. Isolation and characterization of an Arthrobacter sp. Strain HB-5 that Transforms Atrazine. Environ Geochem Hlth. 33, 259-266 (2011).
  4. Mages, I. S., Frodl, R., Bernard, K. A., Funke, G. Identities of Arthrobacter spp. And Arthrobacter-Like Bacteria Encountered in Human Clinical Specimens. J Clin Microbiol. 46, (9), 2980-2986 (2008).
  5. Brown, D. R., Holt, J. G., Pattee, P. A. Isolation and Characterization of Arthrobacter Bacteriophages and Their Application to Phage Typing of Soil Arthrobacters. Appl Environ Microbiol. 35, (1), 185-191 (1978).
  6. Petrovski, S., Seviour, R. J., Tillett, D. Prevention of Gordonia and Nocardia Stabilized Foam Formation by Using Bacteriophage GTE7. Appl Environ Microbiol. 77, (21), 7864-7867 (2011).
  7. Le Marrec, C., Moreau, S., Loury, S., Blanco, C., Trautwetter, a Genetic Characterization of Site-specific Integration Functions of phi AAU2 infecting “Arthrobacter aureus” C70. J Bacteriology. 178, (7), 1996-2004 (1996).
  8. Casida, L. E., Liu, K. C. Arthrobacter globiformis and Its Bacteriophage in Soil. J Appl Microbiol. 28, (6), 951-959 (1974).
  9. Einck, K. H., Pattee, P. A., Holt, J. G., Hagedorn, C., Miller, J. A., Berryhill, D. L. Isolation and Characterization of a Bacteriophage of Arthrobacter globiformis. J Virol. 12, (5), 1031-1033 (1973).
  10. Twest, R., Kropinski, A. M. Bacteriophage Enrichment from Soil and Water. Methods Mol Bio. 501, 15-21 (2009).
  11. Fullner, K. J., Hatfull, G. F. Mycobacteriophage L5 Infection of Mycobacterium bovis BCG: Implications for Phage Genetics in the Slow-growing Mycobacteria. Mol Microbiol. 26, (4), 755-766 (1997).
  12. Robb, S. M., Woods, D. R., Robb, F. T. Phage Growth Characteristics on Stationary Phase Achromobacter cells. J Gen Virol. 41, (2), 265-272 (1978).
  13. Bolger-Munro, M., Cheung, K., Fang, A., Wang, L. T4 Bacteriophage Average Burst Size Varies with Escherichia coli B23 Cell Culture Age. Journal of Experimental Microbiology and Immunology. 17, 115-119 (2013).
  14. MacWilliams, M. P., Liao, M. K. Luria Broth (LB) and Luria Agar, Media and Their Uses Protocol. ASM MicrobeLibrary. Available from: http://www.microbelibrary.org/library/laboratory-test/3020-luria-broth-lb-and-luria-agar-la-media-and-their-uses-escherichia-coli (2013).
Een Geoptimaliseerd Verrijking Techniek voor de isolatie van<em&gt; Arthrobacter</em&gt; Bacteriophage Soorten uit Soil Sample Isoleert
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Cross, T., Schoff, C., Chudoff, D., Graves, L., Broomell, H., Terry, K., Farina, J., Correa, A., Shade, D., Dunbar, D. An Optimized Enrichment Technique for the Isolation of Arthrobacter Bacteriophage Species from Soil Sample Isolates. J. Vis. Exp. (98), e52781, doi:10.3791/52781 (2015).More

Cross, T., Schoff, C., Chudoff, D., Graves, L., Broomell, H., Terry, K., Farina, J., Correa, A., Shade, D., Dunbar, D. An Optimized Enrichment Technique for the Isolation of Arthrobacter Bacteriophage Species from Soil Sample Isolates. J. Vis. Exp. (98), e52781, doi:10.3791/52781 (2015).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter