Introduction
tromboza ve anti-trombotik ilaçların etkinliğinin değerlendirilmesinde ilgili mekanizmaların çalışma ile deneysel hayvan modelleri kurulmuştur gerektirir. Onlar kemirgenler 1 den insanlara büyük gemiler daha benzer sağlamak gibi büyük hayvan modellerinde kullanılmak üzere ilk edildi. Ancak, yüksek maliyet, gerekli büyük tesisler ve onları manipüle zorluk genetik kullanımlarına önemli dezavantajları vardır ve kemirgenler üzerinde ön testler kesin sonuç 2 verdik kez büyük hayvanlar artık geç preklinik çalışmalarda sınırlıdır. In vivo test edilmesi için gerekli olan anti-trombotik ilaçlarının miktarı en aza indirir transgenik ve boşaltma suşlar ve bunların küçük boyutu geniş durumu ile, fareler esas olarak tromboz araştırma için kullanılmıştır. Bu nedenle, trombotik bozuklukların ve çeşitli modelleri, farelerde 3 geliştirilmiştir.
Birçok kurulan tromboz modellerinde intim bozabilirkan pıhtılaşması 4 oluşumunu uyaran kan akışına alt endotel hücre dışı matrisin maruz bırakılarak, ardından damar duvarının bir tabaka. trombüsler ve / pıhtılaşma kaskadını 5 aktive doku faktörünün maruz veya trombosit aktivasyonunu tetikleyen kollajen maruz neden olabilir. Çeşitli teknikler sonra başlangıç damar yaralanması elde etmek için kullanılır. Pierangeli ve ark. Femoral ven 6 bir mikrocerrahi aracıyla mekanik bozulma modeli geliştirmiştir. Kikushi ve ark., Yeşil ışık (540 nm), 7 ile çıkar damar duvarı belirli bir uyarım ardından endoteliyal hücrelerin lipid çift tabakası içinde biriken bir verilmedi reaktif bileşik (Rose Bengal) uygulanmasından oluşur, bir modeli tarif. yaralanması aynı zamanda, kısa bir yüksek yoğunluklu darbe lazer aydınlatma 8 tarafından indüklenebilir. Başka bir teknik öncelikle sıçanların karotis arter üzerine kurulmuşdemir klorür, topikal uygulama (FeCl3), 9 oluşur. Bu durumda, FeCl3 ile yaratılan serbest köklerin alınan damar denüdasyon sonuçları olan endotel hücreleri 10 lipid peroksidasyonu ve tahribata yol açar. yaralanma lökositlerin işe gibi trombosit yapışması ve yığılmasını tetikleme birçok yapışma moleküllerinin ifadesini indükler. Bu lökosit, özellikle nötrofiller, tromboz 11 giden kan pıhtılaşma kaskadının aktivasyonuna çok önemli bir rol oynadığı gösterilmiştir. Bu yöntem de koagulasyon akışını üretmek için uygundur; Araştırmacılar, insanlarda tromboz çoğunlukla hastalıklı örneğin meydana oysa bu fare modelinde, tromboz genellikle sağlıklı damarlar indüklenir, akılda tutmak gerekir. aterosklerotik gemiler.
Bu modeli uygulamak için çok basit ve aynı zamanda farelerde etkili olduğu gibi, bu en çok kullanılan tromboz moduin vivo çalışmalar küçük hayvan için l. Buna ek olarak, bu teknik, gemilerin çeşitli trombüs oluşumunu uyarmak için imkanı sunar. Hedef gemiler arterler veya büyük çaplı (karotis, femoral, vena kava) ya da küçük çaplı (mezenter, cremaster) 12-14 damarları olabilir. Daha yakın bir zamanda, aynı zamanda, inme 15 bir model geliştirmek için proksimal orta serebral arter kullanıldı. tromboz oluşumu ile doğrudan trombosit ve lökosit flüoresan etiketleme sonra intravital mikroskopi ile gözlemlenmiştir veya sıcaklık sensörü veya Doppler prob 12,16,17 kan akışı azalma ölçülerek izlenebilir. Örneğin kapama süresi, trombus oluşumu zaman veya trombüs büyüklüğü gibi çeşitli parametreler araştırılabilir. gemiler arasındaki fizyolojik farklılıklar elde trombüsün önemli farklılıklar sonucu araştırıldı. Bu nedenle, araştırmacılar genellikle measu isteyen parametrelere göre hedef geminin seçinyeniden ve / veya araştırmak istediğiniz ayarı hastalığı. Tipik olarak, karotis arter model vena kava üzerinde çalışmalar derin ven trombozu araştırma için daha uygun iken, miyokard infarktüsü veya inme ile ilişkili aterotromboz araştırma için daha uygun olduğunu. Farklı damarların erişilebilirlik de trombüs gelişimini ölçmek için kullanılan bir yöntem belirler. Örneğin, mezenterik damarlar intravital mikroskopik gözlem ve trombüs oluşumu dinamikleri çalışması için bu model de uygun hale erişmek kolaydır. Karotis arter daha az erişilebilir ama sağlayan kan akımı ölçümleri daha büyük ve tıkayıcı trombozu incelemek için mükemmel bir model oluşturabilir.
ferrik klorür trombozu modeli bu patolojinin anlayışında muazzam bir ilerleme sağlamıştır. Bu tromboz oluşumunun 18,19 von Willebrand faktör rolü üzerinde duruluyor birçok çalışmada kullanılmıştır. Genetik modi ile birliktenağı teknikleri, bu trombotik bozukluklar dahil birçok spesifik genin belirlenmesini sağladı. Lamrani ve diğ. Örneğin JAK2 V617F geninin bir knock-istikrarsız pıhtı 20 hızlanan oluşumu ile ilişkili olduğunu göstermiştir. Zhang ve ark. P2Y12 trombosit reseptörü fizyolojik ima incelendi ve trombositler özel olarak bu reseptörü aşırı ifade eden transgenik fareler, sadece, FeCl3 21 yaralı mezenterik arter içinde daha hızlı ve kararlı bir trombüs oluşumunu gösterildi olduğunu göstermiştir. doku-tipi plazminojen aktivatörü (tPA) ve fibrin bozunma süreci ürokinaz tipi plazminojen aktivatörü (uPA) önemli bir rol de bu yöntemle 22 olarak araştırılmıştır. Bundan başka, bu model, aynı zamanda, in vivo olarak pek çok yeni ilaçların fibrinolitik kapasiteleri test basit ve doğru bir şekilde sağlar. Örneğin, Wang ve diğ. Th Bu model kullanmışaktive trombositler 23 karşı hedeflenen yeni rekombinant plazminojen aktivatörü e preklinik doğrulama. Bu yöntem aynı zamanda kene, vampir yarasalar ve sivrisinek tükürük ya da hedefin 24-27 spesifik tanımlama ile yılan zehirinden izole terapötik proteinlerin doğrulama sağladı. Bu örnekler, ferrik klorür modelinin çok yönlülüğünü göstermektedir. Bu yazıda iki yöntem üzerinde durulacak ve iki farklı damar tipine demir klorür kaynaklı tromboz çalışma; mezenterik damar ve karotid arter.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Hayvanlarla ilgili tüm deneyler Alfred Tıbbi Araştırma ve Eğitim Semt Hayvan Etik Komitesi (E / 1534/2015 / B) tarafından onaylanmıştır. Tüm cerrahi manipülasyonlar tam anestezi altında gerçekleştirildi ve hayvanlar herhangi bir aşamada ağrı deneyimi yoktu. Tarif edilen tüm deneyler olmayan kazanımı vardır.
1. Hazırlık
- Filtre kağıdı (1 mm x 2 mm), ince şeritler kesilir.
- Taze% 4 demir klorür 2 çözüm hazırlanması (a / h) ve% 6 (w / v) deiyonize su içinde seyreltilmiştir. 0.22 um ile filtrelenmiştir, PBS içinde rodamin 6G solüsyon 0.3% hazırlayın.
- Şırınga sargının beyaz plastikten küçük bir parça (5 mm x 1 cm) kesin.
Intravital Mikroskopi tarafından Gözlenen 2. Mezenter Arteriole trombüs oluşumu
- 10-12 haftalık erkek C57BL / 6 vahşi tip fare tartılır ve intraperitoneal enjeksiyon olsa ketamin karışımı (100 mg / kg) ve ksilazin (10 mg / kg) ile buna göre anestezi. Ayak, kuyruk ve / veya cilt tutam, kornea ve palpebral tutam gelen reaktivite ve bıyıkları hareketin olmaması tepki ile anestezi derinliği izleyin. Gerekirse, hayvanın anesteziyi muhafaza etmek üzere ketamin ikinci bir doz (50 mg / kg) enjekte edilir. Anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için gözleri veteriner merhem sürün. 37 ° C'ye ayarlanmış bir ısıtma pedi üzerine yerleştirilmiş küçük bir petri fare yerleştirin.
NOT: IP enjeksiyon hayvanlar için ağrıya neden olabilir, ancak bu rahatsızlık süresi asgari (en az 3 sn) olacaktır. Enjeksiyonlar ile ilişkili ağrı ve rahatsızlık deneyimli ve yetkin personeli ve uygun iğne boyutu (25 G) kullanımı ile minimize edilecektir. Tüm prosedürler izlenerek, sonra servikal dislokasyon yapılmıştır ketamin ve ksilazin bir doz aşımı ile tüm hayvanlar ötenazi. - Deride yaklaşık 3 cm'lik bir abdominal orta hat kesi gerçekleştirin ve dikkatli Periton kesti.
- Pet tarafında fare yerleştirinri çanak, yavaşça bağırsak exteriorize ve dikkatle Petri kabı yüzeyine uygun bir kap getirmek için 2 pamuk tomurcukları ile mezenter yayıldı. Hassas bir silecek ile düzgün kurulayın.
Not: mezenterik damar hareketini sınırlamak için, papaverin bağırsak peristalsis inhibe etmek için de kullanılabilir. - Damarlarını dilate ve lökosit ve trombosit sayısında etiketlemek için bir 29 G şırınga ile fare kuyruğu damar içine Rodamin 6G (% 0.3) 30 ul enjekte ılık suda fare kuyruğu ıslatın.
- Ters bir mikroskop altında Petri kabı yerleştirin ve parlak saha kanalı kullanılarak seçilen arteriole odaklanın.
- % 6 (ağırlık / hacim), demir (III) klorid ile filtre kağıdı bir bant emmek ve iki forseps ile arteriol filtre kağıdı uygulanır; İlki filtre kağıdı yavaşça ilgi alanı üzerine basın ikinci bir tutun. Filtre kağıdı çökelmesi sonraki ilk 10 saniye içinde trombus oluşumu dikkate alınmalıdır.
NOT: Bu oldukça comm olduğunuçevrili mikrovaskuleterini ve filtre kağıdı birikimi ve yavaşça basınç hassasiyeti yaralama bu sorunu sınırlamak için önemlidir. - Filtre kağıdı ile: floresan mikroskop ile trombüs oluşumunu (tepe uyarma 557 nm, pik emisyon 576 nm TRITC kanalı) dikkate alınmalıdır. Trombüs içine Rodamin 6G ve agregasyonu kadar almış dolaşan lökosit ve trombosit sayısında uyun dolayısıyla tespit etmek kolaydır.
- Demir (III) klorür maruz kalma 1 dakika sonra filtre kağıdı çıkarın ve trombüs oluşumunu izlemeye devam edin. PBS ile kap yıkayın.
- Gözlemleyin ve Rodamin 6G ile trombositlerin ve lökositlerin etiketleme ile vurgulanan trombüs dinamik oluşumunu kaydedin. Görüntü yakalamak ve trombüs boyutunu ölçmek. Bu tarifnamede sunulan resimler TRITC floresan kanal, objektif 4X da, ters intravital mikroskobu ile elde edildi.
- Ftüm işlemleri ollowing, servikal dislokasyon tarafından takip ketamin ve ksilizin aşırı dozda kullanarak hayvan euthanize.
3. Karotis Arter trombüs oluşumu Kan Akış Hızı Ölçümü tarafından Değerlendirilen
- 10-12 haftalık erkek C57BL / 6 fare tartılır ve intraperitoneal enjeksiyon da ketamin (100 mg / kg) ve ksilazin (10 mg / kg) karışımı ile anestezi buna göre. Anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için gözleri veteriner merhem sürün.
- 37 ° C ayarlanmış bir ısıtma yastığı, bacaklarda yapışkan bant kullanarak bir işletim mikroskop altında fare sabitleyin.
- Tek silecek dışında küçük bir yastık yapmak ve hafifçe başını yükseltmek için fare başının altında bantlayın. (Üst dişleri kullanın) burun aşağı çekmek için maşa ile bir iplik döngü kullanın. Bu kolay erişim için karotis arter bölgesini gösterecektir.
- Aşağı sternum, doğrudan çene altında küçük bir deri 5 mm derinliğinde kesi gerçekleştirin.
- Fa teşrihscia çatallanma üzerinde sağ veya sol ortak karotid arter ya da bir fragmanını izole eder.
- Dikkatle-in arasındaki arter ve onları ayırmak için sinir cımbız tanıtmak. Yakın artere çalışan sinir rahatsız ve o olabilir gemiye zarar olarak karotis arter çok dokunmamak etmeyin. Arterin en az 5 mm'lik bir bölümü izole edin.
- Herhangi bir sıvı FeCl3 müdahale önlemek için düzgün silecekler arterin alanını kurutun.
- Çevre dokularda emmek değil FeCl 3 çok yaygın karotid izole bir parçası altında küçük beyaz plastik parçası koyun. Bu amaç için, arter altında plastik kağıt sonra yavaş yavaş ilk bir parçası getirmek kaymasına ikinci forseps kullanır.
- % 4 (a / h) ya da% 6 (ağırlık / hacim), ferrik klorid ile filtre kağıdı parçası daldırın ve arter çevresindeki tüm yerleştirin.
- 3 dk maruz kaldıktan sonra, filtre kağıdı çıkarmak PBS ile durulayın ve kurulayın w alanıi silecekler.
- Yaralı alanda geminin etrafında Doppler probu yerleştirin ve akış değişiklikleri kaydetmeye başlayın. Yetişkin farelerin sağlıklı genel karotis, akış genellikle yaklaşık 1 ml / dk'dır. Dikkat! Herhangi bir temas kaçınılmalıdır böylece demir klorür ile prob temas probu zarar verecektir. Burada sunulan veriler, bir nano Doppler akış sondası 0.5 PBS ile donatılmış bir Transonic System Inc. Akış ölçer, TS420 perivasküler modülü ile elde edilmiştir.
NOT: demir klorid konsantrasyonu, farklı bir oklüzyon zamanlarda elde edilen trombus oluşumunun kinetiği değiştirebilir. Böylece,% 6'lık bir maruziyet (a / h), ferrik klorür, ferrik klorür (w / v)% 4 maruz daha hızlı bir oklüzyon verir. - Tüm prosedürler izlenerek, servikal dislokasyon tarafından takip ketamin ve ksilizin aşırı dozda kullanan tüm hayvanlar euthanize ve dikkatle Doppler probu temizleyin.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Rodamin 6G birikimini ortaya koyacaktır mezenter floresan intravital mikroskopi gözlem FeCl3 yaralandı damar duvarı boyunca trombosit ve lökositlerin etiketli. kısmi trombüs aşamalı oluşumu 200 um mezenter kabına (Şekil 1) takip edilir. Bir trombüs yavaş görünür ve açıkça FeCl 3 maruz kalma ilk dakikadan sonra tanımlanabilir (Şekil 1, t = 60 sn). 40 saniye FeCl3 ile ıslatılmış filtre kağıdı çıkarılmasından sonra, tromboz hızla ilerler ve son olarak gözlemlenen tüm kap bölümünün çeperi üzerinde mevcut olan (Şekil 1, T 100 sn =).
Şekil 1:. Trombüs Büyüme mezenter Gemi üzerinde Floresan Intravital Mikroskopi tarafından gözlenen Görüntüler, 60 15 saniye alındısn'dir ve FeCl3 çözeltisi (ağırlık / hacim)% 6 ile ıslatılmış filtre kağıdı yerleştirilmesinden sonra 100 san. filtre kağıdı maruz 60 saniye sonra uzaklaştırıldı. Lökositler ve trombositlerin rodamin 6G ön enjeksiyonu ile etiketlenmiştir (% 0.5 w / v). Kırmızı oklar trombosit / lökositlerin agrega göstermektedir. Ölçek çubuğu 200 mikron. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Bir içi karotid trombus izole edilmiş bir karotid arterinin etrafına FeCl3 çözelti içinde ıslatılmış bir filtre kağıdı uygulanması ve Doppler akış probu (Şekil 2) ile kaydedilmiş yaralanma alt kan akışında değişimler tarafından indüklenir. 1.1 ml civarında bir genel sabit bir kan akışı / dakika hasarlı olmayan karotid arter ölçülür. FeCl3 çözeltisi (ağ / hac)% 4 ile ıslatılmış bir filtre kağıdı ile kabın bir 3 dakika maruz kaldıktan sonra, tıkayıcı bir trombüs o olduğunu13 dk ve maruz kalma başladıktan sonra 30 saniye bir tıkanma zamanla btained. % 6 ıslatılmış bir filtre kağıdı ile 3 dakika maruz kaldıktan sonra (a / h) FeCl3, tıkayıcı bir trombüs 9 dakika maruz başladıktan sonra 30 saniyelik bir kapama süresi ile elde edilir.
Şekil 2. FeCl3 Yaralanma. Kan akışı sonra Karotid Arter yoluyla Kan Akımının Temsilcisi Kayıtlar% 4 (w / v) veya% 6 (ile ıslatılmış filtre kağıdı sadece aşağı karotid arter üzerine yerleştirilen bir Doppler akım probu ile ölçüldü ağırlık / hacim) FeCl3. filtre kağıdı maruz 3 dakika sonra uzaklaştırılmıştır. Bir kontrol kan akımı sağlıklı karotid arter ölçerek elde edildi gibi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
ferrik klorür trombozu modeli mükemmel bir araştırma aracıdır. Bu çalışmada gösterildiği gibi, uygulanması son derece kolay ve intravital mikroskobiyle veya doppler akış ölçer ile kombinasyon halinde kullanıldığında, bu trombus oluşumu için iyi bir gerçek zamanlı izlenmesini sağlar. Zaman pozlama ve FeCl3 konsantrasyonu ayarlanması, aynı zamanda tıkayıcı-olmayan ya da tıkayıcı ya trombüs üretmek için imkan sunuyor.
Bununla birlikte, bu yöntem, aynı zamanda bazı sınırlamalar vardır. Karotid arter olarak, büyük dezavantajı tıkanıklığı Zamanı etkili modifiye edilebilir, ancak modelin tekrarlanabilirliği tam trombüs büyüklüğü ve büyüme hızı 10 kontrol etmek çok zayıf kalmasıdır. Birçok grup modeli 28,29 bir standardizasyon üzerinde çalıştım. Owens ve ark. Bu, güvenilir ve yeniden üretilebilir bir oklüzyon süresi uygulama ile ve yaşı gibi tüm varyasyon faktörlerinin azaltılması ile elde edilebilir önerdifareler, farelerin genetik arka planı, kullanılan anestezi, ferrik klorür maruz tekniği ve demir klorid çözeltisine 28 konsantrasyonu. Doppler probu kendisi de tıkanma belirlenmesini etkileyebilir arka plan sinyali mevcut belli bir derece ile bazı sınırlamalar vardır. kan akışı, aynı zamanda kararsız bir trombus oluşumu ile değiştirilebilir.
Mesentrik hazne üzerinde, tekrarlanabilirlik fazla karotid arter ve yaralanma ölçüde azaltabilir yağ mevcudiyetinde daha değişir kabın boyutu etkilenebilir. Elde edilen trombüsler medya tabakasının 30 düz kas hücreleri dökülme endotele ya da etkilediği kısıtlayabilen damar duvarı lezyonun büyüklüğüne göre farklı olduğu bildirilmiştir. Lazer ışınlama modeli daha iyi bir tekrarlanabilirlik sağlayan demir klorür modelinin iyi bir alternatif teşkil 8. Bununla birlikte, lazer penetrasyonunu sağlamak için yeterince şeffaf olan küçük kaplar ile sınırlıdır. Aynı zamanda, bu modelde, endotel hücreleri, ferrik klorür uygulamadan sonra imha edilir ve bu nedenle endotelyal hücrelerinin rolüne ilişkin çalışmalar için uygun olmadığı fark edilmelidir. Bununla birlikte, endotel 31 aktivasyonu ile sınırlı zayıf bir yaralanma, elde edilmesi için kalsiyum iyonofor ile ferrik klorür değiştirmek mümkündür.
Bu modelin bir diğer sınırlaması hastalığın uzun vadeli evrim incelemek için uygun değildir olmasıdır. Bu şartı yerine getirmek için, Boulaftali ve ark., Birkaç hafta 32 üzerinden aynı trombüs izlenmesi sağlayan dorsal deri altı odaları geliştirdik. Bu teknik, özellikle de trombüs vadeye göre trombolitik ilaçların etkilerini incelemek için uygundur. Bu çalışmada, pıhtı yaşlanma Tissu'nun olan rekombinant şeklini litik işlem bozduğu bulunmuşturŞu anda insan kullanımı için trombolitik ilaçların altın standart e plazminojen aktivatörü.
Dikkate alınması gereken bazı sakıncaları rağmen, FeCl3 modeli insan tromboz çalışmaya alakalı. Elde edilen trombus bileşim, histolojik bölümü ve içi karotid trombüs 33 tespit edilmiştir trombositler, fibrin ve kırmızı kan hücrelerinin varlığı ile analiz edilmiştir. Bunun yanı sıra, aterotrombotik bozukluk FeCl3 model mekanik bir foto-kimyasal ya da lazerden daha insan hastalıklarının patofizyolojisi taklit etmek için daha çok bir oksido-redüksiyon reaksiyonu da damar hasarı uyarılması, lipoproteinlerin oksidasyona tarafından başlatılan varsayılır yana yaralanması 34 indükledi.
demir klorür, aynı zamanda anti-koagülan ve anti-trombosit ilaçlar hem duyarlı olduğu tarif edilmiştir da trombus meydana. Örneğin Heparin ve Klopidogrel temsilcisi olmuşturkarotis arter 29 yılında kurulan trombüsün tıkanma süresini uzatmak için orted. Hirudin bir rekombinant formda uygulanması önemli ölçüde mezenter mikrovasküler 17 trombus oluşumu süresi uzamış sahiptir. Bu nedenle, demir klorür modeli tromboz mükemmel bilgiler sağlar ve yeni trombolitik, antikoagülan ve anti-trombosit ilaçların klinik öncesi doğrulama için son derece uygun bir araçtır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Yazarlar NHMRC ve NHF teknik Joy Yao Dr. Karen Alt destek yanı sıra, fon kabul etmek istiyorum.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Whatman chromatography paper | GE Healthcare | 3030917 | |
| Iron (III) chloride 40% (w/v) | VWR | 24212.298 | |
| Rhodamine 6G | Sigma | R4127 | |
| Inverted microscope | Olympus | IX81 | |
| Digital black-and-white camera | Olympus | XM10 | |
| Doppler flowmeter | Transonic | TS420 | |
| Nano-doppler flow probe | Transonic | 0.5 PBS | |
| Ketamine | Hospira | 0409-2051-05 | |
| Xylazine (Rampun) | Bayer | 75313 | |
| Petri dish | Sarstedt | 82.1472 | |
| Insulin syringe (29 G) | BD Ultra-Fine | 326103 | |
| Cotton tipped applicators | BSN medical | 211827A | |
| Dynek dysilk sutures | Dynek Pty Ltd | CS30100 | |
| Dulbecco's phosphate buffer saline (PBS) | Gibco life technologies | 21600-069 | |
| Heating pad | Kirchner | T60 |
References
- Leadley, R. J., Chi, L., Rebello, S. S., Gagnon, A. Contribution of in vivo models of thrombosis to the discovery and development of novel antithrombotic agents. J Pharmacol Toxicol Methods. 43 (2), 101-116 (2000).
- Johnson, G. J., Griggs, T. R., Badimon, L. The utility of animal models in the preclinical study of interventions to prevent human coronary artery restenosis: analysis and recommendations. On behalf of the Subcommittee on Animal, Cellular and Molecular Models of Thrombosis and Haemostasis of the Scientific and Standardization Committee of the International Society on Thrombosis and Haemostasis. Thromb Haemost. 81 (5), 835-843 (1999).
- Day, S. M., Reeve, J. L., Myers, D. D., Fay, W. P. Murine thrombosis models. Thromb Haemost. 92 (3), 486-494 (2004).
- Sachs, U. J. H., Nieswandt, B. In vivo thrombus formation in murine models. Circ Res. 100 (7), 979-991 (2007).
- Furie, B., Furie, B. C. Mechanisms of thrombus formation. N Engl J Med. 359 (9), 938-949 (2008).
- Pierangeli, S. S., Liu, X. W., Barker, J. H., Anderson, G., Harris, E. N. Induction of thrombosis in a mouse model by IgG, IgM and IgA immunoglobulins from patients with the antiphospholipid syndrome. Thromb Haemost. 74 (5), 1361-1367 (1995).
- Kikuchi, S., Umemura, K., Kondo, K., Saniabadi, A. R., Nakashima, M. Photochemically induced endothelial injury in the mouse as a screening model for inhibitors of vascular intimal thickening. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 18 (7), 1069-1078 (1998).
- Rosen, E. D., Raymond, S., et al. Laser-induced noninvasive vascular injury models in mice generate platelet- and coagulation-dependent thrombi. Am J Pathol. 158, 1613-1622 (2001).
- Kurz, K. D., Main, B. W., Sandusky, G. E. Rat model of arterial thrombosis induced by ferric chloride. Thromb Res. 60 (4), 269-280 (1990).
- Eckly, A., Hechler, B., et al. Mechanisms underlying FeCl3-induced arterial thrombosis. J Thromb Haemost. 9 (4), 779-789 (2011).
- Darbousset, R., et al. Involvement of neutrophils in thrombus formation in living mice. Pathol Biol (Paris). 62 (1), 1-9 (2014).
- Denis, C., Methia, N., et al. A mouse model of severe von Willebrand disease: defects in hemostasis and thrombosis). Proc Natl Acad Sci U S A. 95 (16), 9524-9529 (1998).
- Wang, X., Hagemeyer, C. E., et al. Novel single-chain antibody-targeted microbubbles for molecular ultrasound imaging of thrombosis: validation of a unique noninvasive method for rapid and sensitive detection of thrombi and monitoring of success or failure of thrombolysis in mice. Circulation. 125 (25), 3117-3126 (2012).
- Wang, X., Smith, P. L., Hsu, M. -Y., Ogletree, M. L., Schumacher, W. A. Murine model of ferric chloride-induced vena cava thrombosis: evidence for effect of potato carboxypeptidase inhibitor. J Thromb Haemost. 4 (2), 403-410 (2006).
- Karatas, H., Erdener, S. E., et al. Thrombotic distal middle cerebral artery occlusion produced by topical FeCl(3) application: a novel model suitable for intravital microscopy and thrombolysis studies. J Cereb Blood Flow Metab. 31 (6), 1452-1460 (2011).
- Jirousková, M., Chereshnev, I., Väänänen, H., Degen, J. L., Coller, B. S. Antibody blockade or mutation of the fibrinogen gamma-chain C-terminus is more effective in inhibiting murine arterial thrombus formation than complete absence of fibrinogen. Blood. 103 (6), 1995-2002 (2004).
- Dubois, C., Panicot-Dubois, L., Merrill-Skoloff, G., Furie, B., Furie, B. C. Glycoprotein VI-dependent and -independent pathways of thrombus formation in vivo. Blood. 107 (10), 3902-3906 (2006).
- Navarrete, A. -M., Casari, C., et al. A murine model to characterize the antithrombotic effect of molecules targeting human von Willebrand factor. Blood. 120 (13), 2723-2732 (2012).
- Rayes, J., Hollestelle, M. J., et al. Mutation and ADAMTS13-dependent modulation of disease severity in a mouse model for von Willebrand disease type 2B. Blood. 115 (23), 4870-4877 (2010).
- Lamrani, L., Lacout, C., et al. Hemostatic disorders in a JAK2V617F-driven mouse model of myeloproliferative neoplasm. Blood. 124 (7), 1136-1145 (2014).
- Zhang, Y., Ye, J., et al. Increased platelet activation and thrombosis in transgenic mice expressing constitutively active P2Y12. J Thromb Haemost. 10 (10), 2149-2157 (2012).
- Schäfer, K., Konstantinides, S., et al. Different mechanisms of increased luminal stenosis after arterial injury in mice deficient for urokinase- or tissue-type plasminogen activator. Circulation. 106 (14), 1847-1852 (2002).
- Wang, X., Palasubramaniam, J., et al. Towards effective and safe thrombolysis and thromboprophylaxis: preclinical testing of a novel antibody-targeted recombinant plasminogen activator directed against activated platelets. Circ Res. 114 (7), 1083-1093 (2014).
- Decrem, Y., et al. Ir-CPI, a coagulation contact phase inhibitor from the tick Ixodes ricinus, inhibits thrombus formation without impairing hemostasis. J Exp Med. 206 (11), 2381-2395 (2009).
- Ma, D., et al. Desmolaris, a novel factor XIa anticoagulant from the salivary gland of the vampire bat (Desmodus rotundus) inhibits inflammation and thrombosis in vivo. Blood. 122 (25), 4094-4106 (2013).
- Lei, X., et al. Anfibatide, a novel GPIb complex antagonist, inhibits platelet adhesion and thrombus formation in vitro and in vivo in murine models of thrombosis. Thromb Haemost. 111 (2), 279-289 (2014).
- Waisberg, M., et al. Plasmodium falciparum infection induces expression of a mosquito salivary protein (Agaphelin) that targets neutrophil function and inhibits thrombosis without impairing hemostasis. PLoS Pathog. 10 (9), e1004338 (2014).
- Owens, A. P., Lu, Y., Whinna, H. C., Gachet, C., Fay, W. P., Mackman, N. Towards a standardization of the murine ferric chloride-induced carotid arterial thrombosis model. J Thromb Haemost. 9 (9), 1862-1863 (2011).
- Wang, X., Xu, L. An optimized murine model of ferric chloride-induced arterial thrombosis for thrombosis research. Thromb Res. 115 (1-2), 95-100 (2005).
- Tseng, M. T., Dozier, A., Haribabu, B., Graham, U. M. Transendothelial migration of ferric ion in FeCl3 injured murine common carotid artery. Thromb Res. 118 (2), 275-280 (2006).
- Bonnard, T., et al. Leukocyte mimetic polysaccharide microparticles tracked in vivo on activated endothelium and in abdominal aortic aneurysm. Acta Biomater. 10 (8), 3535-3545 (2014).
- Boulaftali, Y., Lamrani, L., et al. The mouse dorsal skinfold chamber as a model for the study of thrombolysis by intravital microscopy. Thromb Haemost. 107 (5), 962-971 (2012).
- Konstantinides, S., Schäfer, K., Thinnes, T., Loskutoff, D. J. Plasminogen activator inhibitor-1 and its cofactor vitronectin stabilize arterial thrombi after vascular injury in mice. Circulation. 103 (4), 576-583 (2001).
- Li, W., McIntyre, T. M., Silverstein, R. L. Ferric chloride-induced murine carotid arterial injury: A model of redox pathology. Redox Biol. 1 (1), 50-55 (2013).
