Introduction
Studiet av de mekanismene som er involvert i utviklingen av trombose og evalueringen av effektiviteten av anti-trombotiske midler krever veletablerte eksperimentelle dyremodeller. Store dyremodeller var de første til å bli brukt som de gir store fartøy mer lik for mennesker enn gnagere 1. Men høye kostnader, større fasiliteter som kreves og vanskeligheten med å manipulere dem genetisk er store ulemper for deres bruk og store dyr er nå begrenset til slutten av prekliniske studier gang foreløpige tester på gnagere har gitt konkluderende resultater 2. Med store tilgjengeligheten av transgene og knockout stammer og deres lille størrelse som minimerer mengden av antitrombotiske legemidler som kreves for in vivo testing, er mus i hovedsak brukt for trombose forskning. Derfor har flere modeller av blodpropp er utviklet i mus tre.
Mange etablerte trombose modeller forstyrre intimet lag av karveggen, etterfulgt av eksponering av under endotelial ekstracellulære matriks til blodstrømmen å indusere dannelsen av blodpropper 4. Den tromber kan oppstå ved eksponering av kollagen som utløser aktivering av blodplater og / eller fra eksponering av vev faktor som aktiverer koagulasjonskaskaden 5. Flere teknikker blir så anvendt for å oppnå den første skade fartøyet. Pierangeli et al. Utviklet en mekanisk avbrudd modell med en mikro verktøyet på lårvenen 6. Kikushi et al., Beskrives en modell som består i administrering av en foto reaktiv forbindelse (Rose Bengal) som akkumuleres i det ytre lipid bilaget av endotelceller, etterfulgt av den spesifikke eksitasjon av karveggen av interesse med grønt lys (540 nm) 7. Skaden kan også være forårsaket av en kort høy intensitet puls laser belysning 8. En annen teknikk for det første etablert på halspulsåren hos rotterbestår i at topisk anvendelse av ferriklorid (FeCl3) 9. I dette tilfelle, idet fartøyet denudasjon resultatene fra frie radikaler som genereres av FeCl3 som forårsaker lipidperoksidasjon og ødeleggelse av endotelceller 10. Skaden induserer ekspresjon av flere adhesjonsmolekyler utløsende blodplateadhesjon og aggregering samt leukocytter rekruttering. Det har blitt demonstrert at leukocytter, særlig neutrofiler, spiller en avgjørende rolle i aktivering av koagulasjonskaskaden som fører til trombose 11. Denne fremgangsmåte er godt egnet til å reprodusere koaguleringskaskaden; etterforskere må huske på at i denne musemodell, er trombose vanligvis indusert hos friske fartøy mens blodpropp hos mennesker er i hovedsak skjer i syke f.eks. aterosklerotiske fartøy.
Når denne modellen er meget enkel å gjennomføre, og er også effektive i mus, er det nå mest brukt trombose modusl for små dyr in vivo studier. I tillegg har denne teknikken muligheten til å indusere dannelsen av tromber i en rekke fartøyer. Target fartøy kan være arterier eller vener med stor diameter (carotis, femoral, vena cava) eller liten diameter (mesentery, cremaster) 12-14. Mer nylig ble det også brukt på den proksimale midtre cerebral arterie for å utvikle en modell for slag 15. Den trombose Formasjonen kan observeres direkte ved intravital mikroskopi etter fluorescerende merking av blodplater og leukocytter eller overvåkes ved måling av blodstrømmen reduseres med en temperatursonde eller en sonde Doppler 12,16,17. Flere parametre som okklusjon tid, trombedannelse tid eller trombe størrelse kan deretter bli undersøkt. De fysiologiske forskjeller mellom karene undersøkt resultat i betydelige variasjoner i tromber oppnådd. Derfor etterforskere vanligvis velge målet fartøy i henhold til parametrene de ønsker å målere og / eller sykdommen sette de ønsker å undersøke. Vanligvis er modellen på halspulsåren mer relevant for forskning på aterotrombose relatert til hjerteinfarkt eller hjerneslag mens studier på vena cava er mer relevant for forskning på dyp venetrombose. Tilgjengeligheten av de forskjellige fartøyene bestemmer også den metoden som brukes til å måle tromben vekst. For eksempel, den mesenteriske fartøyene er lett tilgjengelige, noe som gjør denne modellen godt egnet for intra mikroskopisk observasjon og studiet av dynamikken i trombedannelse. Halspulsåren er mindre tilgjengelig, men større slik at blodstrømsmåling og gir en utmerket modell for å studere okklusivt trombose.
Den jernklorid indusert trombose modellen har gitt enorm fremgang i forståelsen av denne patologi. Det har blitt brukt i mange studier som fokuserer på rollen til von Willebrand-faktor i trombose formasjonen 18,19. Kombinert med genetisk modifikasjons- teknikker, har det tillatt identifisering av mange bestemt gen involvert i blodpropp. Lamrani et al. for eksempel har vist at en knock-in av JAK2 V617F genet er assosiert med en akselererende dannelse av ustabile blodpropp 20. Zhang et al. Har undersøkt den fysiologiske implikasjon av P2Y12 blodplate-reseptoren og viste at transgene mus som overuttrykker spesielt denne reseptoren på blodplater bare, viste en raskere og mer stabil trombedannelse i mesenterisk arterie skadet med FeCl3 21. Det avgjørende rolle Tissue-type plasminogen aktivator (tPA) og urokinase-type plasminogen aktivator (uPA) i fibrin nedbrytningsprosessen er også blitt undersøkt på denne måten 22. Videre denne modellen gir også en enkel og nøyaktig måte å teste de fibrinolytiske kapasiteten til mange nye legemidler in vivo. For eksempel, har Wang et al. Benyttet denne modellen for the preklinisk validering av en roman rekombinant plasminogenaktivator rettet mot aktiverte plater 23. Denne metoden har også gjort det mulig for validering av terapeutiske proteiner isolert fra spytt av flått, vampyrflaggermus, og mygg eller fra giften av slanger med spesifikk identifisering av målet 24-27. Disse eksemplene viser allsidigheten av ferriklorid modell. I denne artikkelen fokuserer vi på to metoder og studere jernklorid indusert trombose på to forskjellige skipstype; mesenterisk fartøy og halspulsåren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle forsøk med dyr ble godkjent av Alfred Medical Research and Education Precinct Animal etiske komité (E / 1534/2015 / B). Alle kirurgiske manipulasjoner ble utført under full narkose og dyrene ikke opplever smerte på noe tidspunkt. Alle forsøk som er beskrevet er ikke-utvinning.
1. Forberedelse
- Skjær tynne bånd av filterpapir (1 mm x 2 mm).
- Tilbereder to oppløsninger av treverdig jernklorid på 4% (vekt / volum) og 6% (w / v) fortynnet i avionisert vann. Forbered rodamin 6G oppløsning 0,3% i PBS, filtrert gjennom 0,22 um.
- Klipp et lite stykke (5 mm x 1 cm) fra den hvite plastsprøyte wrapper.
2. mesenterium arteriole Trombusdannelse Observert ved intraMikros
- Veie 10-12 uker gamle hann C57BL / 6 mus og villtype bedøve følgelig med en blanding av ketamin (100 mg / kg) og xylazin (10 mg / kg) intraperitoneal injeksjon skjønt. Overvåke anestesidybden ved respons på tå, hale og / eller hud klype, reaktivitet fra hornhinnen og palpebral klemme, og fravær av værhår bevegelse. Om nødvendig kan sprøyte inn en annen dose av ketamin (50 mg / kg) for å opprettholde bedøvelse av dyret. Påfør dyrlege salve på øynene for å hindre tørrhet mens under anestesi. Den plasseres i en liten petriskål plassert på en varmepute justert til 37 ° C.
MERK: Selv om IP-injeksjon kan føre til smerte for dyrene, vil varigheten av dette ubehaget være minimal (mindre enn 3 sekunder). Smerter og ubehag forbundet med injeksjoner vil minimeres gjennom bruk av erfarne og kompetente personell og hensiktsmessig p (25 G). Etter alle prosedyrer, avlive alle dyr med en overdose av ketamin og xylazin fulgt ved halshugging. - Utfør en abdominal midtlinjen snitt på ca 3 cm i huden og forsiktig klippe bukhinnen.
- Plasser musen på siden av kjæledyrri fatet, forsiktig exteriorize dens innvoller og nøye fordele mesenteriet med to bomullspinner for å bringe et egnet kar til overflaten av petriskålen. Tørke skikkelig med en delikat svisker.
MERK: Hvis du vil begrense bevegelsen av mesenteric fartøy kan Papaverine brukes til å hemme gut peristaltikk. - Sug halen av musen i varmt vann for å strekke fartøyene og injisere 30 ul Rhodamine 6G (0,3%) i halevenen av musen med en 29 G sprøyte til å merke leukocytter og blodplater.
- Plasser petriskål i henhold til et invertert mikroskop og fokus på det valgte arteriole hjelp av lysfelt-kanalen.
- Sug et band av filterpapir med 6% (w / v) jern (III) klorid og gjelder filterpapiret på arteriole med to tang; den første til å holde filterpapiret, den andre en til, og trykk den på det området av interesse. Observer trombedannelse i de første 10 sekunder etter avsetningen av filterpapiret.
MERK: Det er ganske commpå å skade den omgitt microvasculature og presisjonen av avsetningen av filterpapiret og den svakt trykk er derfor viktig å begrense dette problemet. - Observere trombusdannelse ved fluorescens mikroskopi (TRITC kanal: peak eksitasjon 557 nm, peak utslipp 576 nm), gjennom filterpapiret. Observere de sirkulerende leukocytter og blodplater som har tatt opp Rhodamine 6G og deres aggregering inn tromben er derfor lett å identifisere.
- Ta filterpapiret av etter 1 min av eksponering for jern (III) klorid og fortsetter å overvåke dannelsen av tromben. Vask fartøyet med PBS.
- Observere og registrere den dynamiske dannelsen av tromben uthevet med merking av blodplater og leukocytter med Rhodamine 6G. Ta bildene og måle størrelsen av tromben. De her presenterte bilder ble oppnådd med en invertert mikroskop intra, skjønt en objektiv 4X, i TRITC fluorescerende kanalen.
- Following alle prosedyrer, avlive dyret ved hjelp av en overdose av ketamin og xylazin fulgt ved halshugging.
3. arteria carotis Trombusdannelse Vurdert av Blood Flow hastighetsmåling
- Veie 10-12 uker gamle hann C57BL / 6 mus og bedøve følgelig med en blanding av ketamin (100 mg / kg) og xylazin (10 mg / kg) selv om intraperitoneal injeksjon. Påfør dyrlege salve på øynene for å hindre tørrhet mens under anestesi.
- Fest musen under en drifts mikroskopet med tape på bena, på en varmepute justeres til 37 ° C.
- Lag en liten pute ut av en vindusvisker og tape den under hodet av musen til å heve hodet litt. Bruk en tråd sløyfe med en tang til å trekke snuten ned (bruk øvre tennene). Dette vil utsette det område av halspulsåren for lett tilgang.
- Utføre en liten 5 mm dype innsnitt i huden direkte under kjeven, ned til sternum.
- Dissekere fascia og isolere et fragment av enten venstre eller høyre arteria carotis communis over bifurkasjonen.
- Nøye innføre pinsett i-mellom arterie og nerve til å skille dem. Ikke forstyrr nerve kjører nær arterien og unngå å trykke for mye av halspulsåren som kan det forårsaker skade på fartøyet. Isolere en seksjon av en minst 5 mm av arterien.
- Tørk område av arterien på riktig måte med vindusviskere for å unngå at eventuell væske som griper inn i FeCl3.
- Sett den lille hvite plastbiten under isolert del av arteria carotis så FeCl3 ikke suge i omkringliggende vev. For dette formålet, kan du bruke et sekund pinsett for å få stykket til den første som deretter sakte skyv plast papir under arterien.
- Sug et stykke filterpapir med 4% (vekt / volum) eller 6% (w / v) ferriklorid og plasser det hele rundt arterien.
- Etter 3 min eksponering, ta av filterpapiret, skyll med PBS og tørk området wed vindusviskere.
- Plasser Doppler strømningsprobe rundt fartøyet på det skadde området og starte opptak endringene i flyt. I den sunne arteria carotis fra voksne mus, er strømnings vanligvis rundt 1 ml / min. Forsiktig! kontakt av proben med ferriklorid vil ødelegge sonden slik at enhver kontakt bør unngås. De her presenteres data ble oppnådd med en Transonic System Inc. Flow meter, TS420 perivaskulære modul utstyrt med en Nano Doppler flow probe 0,5 PBS.
MERK: Konsentrasjonen av jern-III-klorid kan endre kinetikken for trombedannelse som resulterer i forskjellige tider okklusjon. Således vil en eksponering til 6% (w / v) jernklorid gir en raskere enn okklusjon eksponering til 4% (w / v) jernklorid. - Etter alle prosedyrer, avlive alle dyr ved hjelp av en overdose av ketamin og xylazin fulgt ved halshugging og rengjør nøye sonden.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Det fluorescerende intravital mikroskopi observasjon av mesenteriet vil avdekke akkumulering av Rhodamine 6G merkede blodplater og leukocytter langs karveggen skadet av FeCl3. Den progressive dannelse av en partiell trombe blir overvåket på en 200 um mesenteriet fartøy (figur 1). En trombe langsomt vises, og er klart identifiserbar etter det første minutt av eksponering for FeCl3 (figur 1, t = 60 sek). 40 sekunder etter fjernelse av filterpapir dynket med FeCl3, trombose utvikler seg raskt, og endelig er til stede på veggen av hele skipet seksjonen observert (figur 1, t = 100 sek).
Figur 1:. Blodpropp Vekst Observert ved Fluorescent intraMikros på en mesenterium Vessel Bilder ble tatt på 15 sek, 60sek og 100 sekunder etter avsetningen av filterpapir dynket med 6% (w / v) FeCl3-løsning. Filterpapiret ble fjernet etter 60 sekunders eksponering. Leukocytter og blodplater ble merket ved pre-injeksjon av Rhodamine 6G (0,5% w / v). Røde piler indikerer blodplater / leukocytter aggregater. Scale bar 200 mikrometer. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
En intra-carotis trombus induseres ved anvendelse av et filterpapir dyppet i FeCl3-løsning rundt en isolert karotidarterie og forandringene i blodstrømmen nedstrøms av skaden blir registrert med en Doppler strømningsprobe (figur 2). En samlet konstant blodstrøm rundt 1,1 ml / min, målt i den ikke-skadede karotidarterien. Etter en 3 minutters eksponering av fartøyet med et filterpapir dyppet i 4% (w / v) FeCl3-løsning, er en okklusiv trombe obtained med en okklusjon tid på 13 minutter og 30 sekunder etter begynnelsen av eksponeringen. Etter en 3 minutters eksponering med et filterpapir dyppet i 6% (w / v) FeCl3, er en okklusiv trombe oppnådd med en okklusjon i løpet av 9 minutter og 30 sekunder etter begynnelsen av eksponeringen.
Figur 2. Representative opptak av blodstrømmen gjennom halspulsåren etter FeCl3 skade. Blodstrømmen ble målt med en Doppler strømningsprobe plassert på halsarterien umiddelbart nedstrøms av filterpapir fuktet med 4% (vekt / volum) eller 6% ( w / v) FeCl3. Filterpapiret ble fjernet etter 3 min eksponering. Som en kontroll blodstrøm ble oppnådd ved å måle den friske halspulsåren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Den jernklorid indusert trombose modellen er et utmerket verktøy for forskning. Som vist i denne studien, er det svært enkelt å implementere og når de brukes i kombinasjon med intramikroskopi eller Doppler strømningsmåler, gir det en god sanntidsovervåking av trombedannelse. Justering av tidseksponering og konsentrasjonen av FeCl3, og tilbyr også muligheten for å fremstille enten ikke-okklusive eller okklusive tromber.
Imidlertid har denne metoden også noen begrensninger. I halspulsåren, er den store ulempen at selv om okklusjon tid effektivt kan modifiseres, reproduserbarheten av modellen fremdeles for svak til å nøyaktig kontrollere trombe størrelse og veksthastighet 10. Flere grupper har jobbet på en standardisering av modellen 28,29. Owens et al. foreslo at pålitelig og reproduserbar okklusjon tid kan oppnås med praksis og ved å redusere alle variant faktorer som aldermus, en genetisk bakgrunn av musene, anestesi anvendes, teknikken for ferriklorid utstilling og konsentrasjonen av jern-III-klorid-oppløsning 28. Sonden i seg selv har også noen begrensninger med en viss grad av bakgrunnssignal som kan påvirke bestemmelsen av okklusjon. Blodstrømmen kan også bli endret ved dannelse av ustabile tromber.
På den mesenteriske kar, kan reproduserbarheten påvirkes av størrelsen på fartøyet som varierer mer enn carotis og tilstedeværelsen av fett som kan reduserer omfanget av skaden. Det har blitt rapportert at tromber oppnådd varierer i henhold til størrelsen av beholderveggen lesjonen som kan begrense til endotel shedding eller også påvirke de glatte muskelceller fra mediet laget 30. Den laserbestråling modellen utgjør et godt alternativ til ferriklorid modell som tilveiebringer en bedre reproduserbarhet 8. Imidlertid er det begrenset til mindre fartøy som er transparente nok til å muliggjøre inntrengning av laseren. Det skal også merke til at i denne modellen, er endotelceller ødelagt etter ferriklorid programmet, og det er derfor ikke egnet for studier over rollen til endotelceller. Det er imidlertid mulig å erstatte ferriklorid ved kalsiumionofor å oppnå en svakere skade, begrenset til aktivering av endotel 31.
En annen begrensning ved denne modellen er at det ikke er egnet til å studere langsiktig utviklingen av sykdommen. For å oppfylle dette krav, har Boulaftali et al. Utviklet rygg skinfold kammere som gjør det mulig å overvåke den samme tromben over flere uker 32. Denne teknikk er spesielt godt egnet til å undersøke effektene av trombolytiske midler i henhold til tromben modenhet. I denne studien ble klumpen aldring funnet å svekke den lytiske virkning av en rekombinant form av tissue plasminogenaktivator, som nå er gullstandarden for trombolytiske legemidler til mennesker.
Til tross for noen ulemper som må tas i betraktning, er det FeCl3 modellen er relevant for studiet av menneskelige trombose. Sammensetningen av den oppnådde blodpropper er blitt analysert på histologisk seksjon og tilstedeværelsen av blodplater, fibrin og røde blodceller er blitt identifisert i det intra-carotid tromber 33. Dessuten, ettersom aterotrombotisk forstyrrelse antas å bli initiert ved oksidasjon av lipoproteiner, indusere fartøyet skade selv om en oksydasjons-reduksjons-reaksjonen i FeCl3-modellen er mer sannsynlig å etterligne patofysiologien av sykdom hos mennesker enn en mekanisk, fotokjemisk eller laser indusert skade 34.
Tromben dannet skjønt jernklorid er også blitt beskrevet å være følsomme overfor både antikoagulant og anti-blodplate-legemidler. Heparin og Klopidogrel for eksempel har vært repunderstøttes for å forlenge den tid okklusjon av tromber dannet i halspulsåren 29. Administrering av en rekombinant form av Hirudin har forlenget signifikant trombedannelse tid på mesenteriet mikrovaskulaturen 17. Derfor gir jernklorid modellen meget god innsikt i trombose og er et svært relevant verktøy for preklinisk validering av ny trombolytisk, antikoagulantia og platehemmende legemidler.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Forfatterne ønsker å takke teknisk støtte fra Joy Yao og Dr. Karen Alt, samt midler fra NHMRC og NHF.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Whatman chromatography paper | GE Healthcare | 3030917 | |
| Iron (III) chloride 40% (w/v) | VWR | 24212.298 | |
| Rhodamine 6G | Sigma | R4127 | |
| Inverted microscope | Olympus | IX81 | |
| Digital black-and-white camera | Olympus | XM10 | |
| Doppler flowmeter | Transonic | TS420 | |
| Nano-doppler flow probe | Transonic | 0.5 PBS | |
| Ketamine | Hospira | 0409-2051-05 | |
| Xylazine (Rampun) | Bayer | 75313 | |
| Petri dish | Sarstedt | 82.1472 | |
| Insulin syringe (29 G) | BD Ultra-Fine | 326103 | |
| Cotton tipped applicators | BSN medical | 211827A | |
| Dynek dysilk sutures | Dynek Pty Ltd | CS30100 | |
| Dulbecco's phosphate buffer saline (PBS) | Gibco life technologies | 21600-069 | |
| Heating pad | Kirchner | T60 |
References
- Leadley, R. J., Chi, L., Rebello, S. S., Gagnon, A. Contribution of in vivo models of thrombosis to the discovery and development of novel antithrombotic agents. J Pharmacol Toxicol Methods. 43 (2), 101-116 (2000).
- Johnson, G. J., Griggs, T. R., Badimon, L. The utility of animal models in the preclinical study of interventions to prevent human coronary artery restenosis: analysis and recommendations. On behalf of the Subcommittee on Animal, Cellular and Molecular Models of Thrombosis and Haemostasis of the Scientific and Standardization Committee of the International Society on Thrombosis and Haemostasis. Thromb Haemost. 81 (5), 835-843 (1999).
- Day, S. M., Reeve, J. L., Myers, D. D., Fay, W. P. Murine thrombosis models. Thromb Haemost. 92 (3), 486-494 (2004).
- Sachs, U. J. H., Nieswandt, B. In vivo thrombus formation in murine models. Circ Res. 100 (7), 979-991 (2007).
- Furie, B., Furie, B. C. Mechanisms of thrombus formation. N Engl J Med. 359 (9), 938-949 (2008).
- Pierangeli, S. S., Liu, X. W., Barker, J. H., Anderson, G., Harris, E. N. Induction of thrombosis in a mouse model by IgG, IgM and IgA immunoglobulins from patients with the antiphospholipid syndrome. Thromb Haemost. 74 (5), 1361-1367 (1995).
- Kikuchi, S., Umemura, K., Kondo, K., Saniabadi, A. R., Nakashima, M. Photochemically induced endothelial injury in the mouse as a screening model for inhibitors of vascular intimal thickening. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 18 (7), 1069-1078 (1998).
- Rosen, E. D., Raymond, S., et al. Laser-induced noninvasive vascular injury models in mice generate platelet- and coagulation-dependent thrombi. Am J Pathol. 158, 1613-1622 (2001).
- Kurz, K. D., Main, B. W., Sandusky, G. E. Rat model of arterial thrombosis induced by ferric chloride. Thromb Res. 60 (4), 269-280 (1990).
- Eckly, A., Hechler, B., et al. Mechanisms underlying FeCl3-induced arterial thrombosis. J Thromb Haemost. 9 (4), 779-789 (2011).
- Darbousset, R., et al. Involvement of neutrophils in thrombus formation in living mice. Pathol Biol (Paris). 62 (1), 1-9 (2014).
- Denis, C., Methia, N., et al. A mouse model of severe von Willebrand disease: defects in hemostasis and thrombosis). Proc Natl Acad Sci U S A. 95 (16), 9524-9529 (1998).
- Wang, X., Hagemeyer, C. E., et al. Novel single-chain antibody-targeted microbubbles for molecular ultrasound imaging of thrombosis: validation of a unique noninvasive method for rapid and sensitive detection of thrombi and monitoring of success or failure of thrombolysis in mice. Circulation. 125 (25), 3117-3126 (2012).
- Wang, X., Smith, P. L., Hsu, M. -Y., Ogletree, M. L., Schumacher, W. A. Murine model of ferric chloride-induced vena cava thrombosis: evidence for effect of potato carboxypeptidase inhibitor. J Thromb Haemost. 4 (2), 403-410 (2006).
- Karatas, H., Erdener, S. E., et al. Thrombotic distal middle cerebral artery occlusion produced by topical FeCl(3) application: a novel model suitable for intravital microscopy and thrombolysis studies. J Cereb Blood Flow Metab. 31 (6), 1452-1460 (2011).
- Jirousková, M., Chereshnev, I., Väänänen, H., Degen, J. L., Coller, B. S. Antibody blockade or mutation of the fibrinogen gamma-chain C-terminus is more effective in inhibiting murine arterial thrombus formation than complete absence of fibrinogen. Blood. 103 (6), 1995-2002 (2004).
- Dubois, C., Panicot-Dubois, L., Merrill-Skoloff, G., Furie, B., Furie, B. C. Glycoprotein VI-dependent and -independent pathways of thrombus formation in vivo. Blood. 107 (10), 3902-3906 (2006).
- Navarrete, A. -M., Casari, C., et al. A murine model to characterize the antithrombotic effect of molecules targeting human von Willebrand factor. Blood. 120 (13), 2723-2732 (2012).
- Rayes, J., Hollestelle, M. J., et al. Mutation and ADAMTS13-dependent modulation of disease severity in a mouse model for von Willebrand disease type 2B. Blood. 115 (23), 4870-4877 (2010).
- Lamrani, L., Lacout, C., et al. Hemostatic disorders in a JAK2V617F-driven mouse model of myeloproliferative neoplasm. Blood. 124 (7), 1136-1145 (2014).
- Zhang, Y., Ye, J., et al. Increased platelet activation and thrombosis in transgenic mice expressing constitutively active P2Y12. J Thromb Haemost. 10 (10), 2149-2157 (2012).
- Schäfer, K., Konstantinides, S., et al. Different mechanisms of increased luminal stenosis after arterial injury in mice deficient for urokinase- or tissue-type plasminogen activator. Circulation. 106 (14), 1847-1852 (2002).
- Wang, X., Palasubramaniam, J., et al. Towards effective and safe thrombolysis and thromboprophylaxis: preclinical testing of a novel antibody-targeted recombinant plasminogen activator directed against activated platelets. Circ Res. 114 (7), 1083-1093 (2014).
- Decrem, Y., et al. Ir-CPI, a coagulation contact phase inhibitor from the tick Ixodes ricinus, inhibits thrombus formation without impairing hemostasis. J Exp Med. 206 (11), 2381-2395 (2009).
- Ma, D., et al. Desmolaris, a novel factor XIa anticoagulant from the salivary gland of the vampire bat (Desmodus rotundus) inhibits inflammation and thrombosis in vivo. Blood. 122 (25), 4094-4106 (2013).
- Lei, X., et al. Anfibatide, a novel GPIb complex antagonist, inhibits platelet adhesion and thrombus formation in vitro and in vivo in murine models of thrombosis. Thromb Haemost. 111 (2), 279-289 (2014).
- Waisberg, M., et al. Plasmodium falciparum infection induces expression of a mosquito salivary protein (Agaphelin) that targets neutrophil function and inhibits thrombosis without impairing hemostasis. PLoS Pathog. 10 (9), e1004338 (2014).
- Owens, A. P., Lu, Y., Whinna, H. C., Gachet, C., Fay, W. P., Mackman, N. Towards a standardization of the murine ferric chloride-induced carotid arterial thrombosis model. J Thromb Haemost. 9 (9), 1862-1863 (2011).
- Wang, X., Xu, L. An optimized murine model of ferric chloride-induced arterial thrombosis for thrombosis research. Thromb Res. 115 (1-2), 95-100 (2005).
- Tseng, M. T., Dozier, A., Haribabu, B., Graham, U. M. Transendothelial migration of ferric ion in FeCl3 injured murine common carotid artery. Thromb Res. 118 (2), 275-280 (2006).
- Bonnard, T., et al. Leukocyte mimetic polysaccharide microparticles tracked in vivo on activated endothelium and in abdominal aortic aneurysm. Acta Biomater. 10 (8), 3535-3545 (2014).
- Boulaftali, Y., Lamrani, L., et al. The mouse dorsal skinfold chamber as a model for the study of thrombolysis by intravital microscopy. Thromb Haemost. 107 (5), 962-971 (2012).
- Konstantinides, S., Schäfer, K., Thinnes, T., Loskutoff, D. J. Plasminogen activator inhibitor-1 and its cofactor vitronectin stabilize arterial thrombi after vascular injury in mice. Circulation. 103 (4), 576-583 (2001).
- Li, W., McIntyre, T. M., Silverstein, R. L. Ferric chloride-induced murine carotid arterial injury: A model of redox pathology. Redox Biol. 1 (1), 50-55 (2013).
