Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Хлорного железа, вызванной Тромбоз мышь Модель на сонной артерии и брыжейки судна

doi: 10.3791/52838 Published: June 29, 2015

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Изучение механизмов, участвующих в развитии тромбоза и оценки эффективности антитромботических лекарств требует хорошо известны экспериментальные животные модели. Большие модели на животных были первыми, чтобы быть использованы, поскольку они обеспечивают большие сосуды больше похож на человека, чем грызунов 1. Тем не менее, высокая стоимость, большие объекты, необходимые и трудность в манипулировании их генетически являются основными недостатками в их использовании и крупные животные в настоящее время ограничивается конце доклинических исследований сразу предварительные испытания на грызунах дали убедительных результатов 2. С широкой доступности трансгенных и нокаут штаммов и их небольшого размера, что минимизирует количество антитромбоцитарных препаратов, необходимых для тестирования в естественных условиях, мыши используются в основном для тромбоза исследований. Таким образом, несколько моделей тромботических заболеваний были разработаны в мышей 3.

Многие установленные модели тромбоза нарушить интимслой стенки сосуда, с последующим воздействием на суб эндотелиальной внеклеточного матрикса в кровоток индуцировать образование тромбов 4. Тромбы могут возникнуть в результате воздействия коллагена, который вызывает активацию тромбоцитов и / или от воздействия тканевого фактора, который активирует каскад коагуляции 5. Некоторые методы которые затем используют для достижения первоначальной травмы сосудов. Pierangeli др. Разработали механическую модель с разрывом микрохирургии инструмента на бедренную вену 6. Kikushi др. Описал модель, которая состоит в управлении фотографией реактивной соединения (бенгалроза), который накапливается в липидный бислой эндотелиальных клеток с последующим конкретной возбуждения стенки сосуда интересов с зеленым светом (540 нм) 7. Травма может также быть вызвано короткого высокоинтенсивного импульса лазерного излучения 8. Другой метод, во-первых создана на сонной артерии крыссостоит в местном применении хлорида железа (FeCl 3) 9. В этом случае результаты судно денудационные от свободных радикалов, генерируемых FeCl 3, который вызывает перекисное окисление липидов и разрушение эндотелиальных клеток 10. Травма индуцирует экспрессию нескольких молекул адгезии, вызывающих адгезию тромбоцитов и агрегацию, а также лейкоцитов набора. Было показано, что лейкоциты, в частности, нейтрофилы, играют решающую роль в активации каскада свертывания крови, ведущего к тромбозу 11. Этот метод хорошо подходит для воспроизведения каскад коагуляции; Следователи должны иметь в виду, что в этой модели мыши, тромбоз обычно возникает у здоровых сосудов, тогда как тромбоз у человека в основном происходит в больном например. атеросклеротические сосуды.

В этой модели очень прост в реализации и также эффективен у мышей, то теперь в основном используется режим тромбозл для маленького животного в естественных условиях исследования. Кроме того, этот метод дает возможность индуцировать образование тромбов в различных сосудах. Целевые суда могут быть артерий или вен большого диаметра (сонной, бедренной, кава) или малого диаметра (брыжейки, кремастер) 12-14. Совсем недавно, он был также использован на проксимальной средней мозговой артерии разработать модель инсульта 15. Формирование тромбоза может быть непосредственно наблюдается прижизненной микроскопии после флуоресцентного мечения тромбоцитов и лейкоцитов или контролируется путем измерения уменьшение кровотока с датчиком температуры или доплеровского зонда 12,16,17. Некоторые параметры, такие как время окклюзии, время образования тромба или размера тромба может быть исследована. Физиологические различия между судами исследованы привести к значительным изменениям в тромбов, полученного. Таким образом, исследователи, как правило, выбор целевого сосуда в соответствии с параметрами, которые они хотят measuвновь и / или болезнь установки они хотят, чтобы исследовать. Как правило, модели на сонной артерии является более актуальным для исследования атеротромбоза, связанного с инфарктом миокарда или инсульта в то время как исследования по полой вены являются более актуальными для исследования глубокого венозного тромбоза. Доступность различных сосудов также определяет метод, используемый для измерения роста тромба. Например, мезентериальные сосуды легко получить доступ делает эта модель хорошо подходит для прижизненной микроскопом и исследования динамики формирования тромба. Сонной артерии менее доступен, но больше, позволяющие измерения кровотока и обеспечивают отличную модель для изучения окклюзионной тромбоз.

Хлорид железа индуцированных тромбоза модель обеспечила огромный прогресс в понимании этой патологии. Он был использован во многих исследованиях, посвященных роли фактора Виллебранда в формировании тромбоза 18,19. В сочетании с генетической модусовметоды фикации, это позволило выявить многие специфического гена, участвующего в тромботических нарушений. Ламрани др. Например, показали, что стук в гена JAK2 V617F связано с ускоряющим образование неустойчивых сгустка 20. Чжан и др. Исследовали физиологические последствия рецептора тромбоцитов P2Y12 и показали, что трансгенные мыши, избыточно специально этот рецептор тромбоцитов только отображается более быстрое и стабильное образование тромбов в брыжеечной артерии травмированного с FeCl 3 21. Решающая роль тканевого типа активатор плазминогена (ТАП) и урокиназы типа активатора плазминогена (УАП) в процессе деградации фибрина также были исследованы в этом методе 22. Кроме того эта модель также обеспечивает простой и точный способ проверки фибринолитической потенциала многих новых препаратов в естественных условиях. Например, Ван и др. Использовали эту модель для гое доклинические проверка нового рекомбинантного активатора плазминогена, направленные против активированных тромбоцитов 23. Этот метод также включен проверку терапевтических белков, выделенных из слюнных клещей, летучих мышей-вампиров, и комаров или из яда змей с конкретной идентификации цели 24-27. Эти примеры показывают универсальность железа хлорида модели. В этой статье мы сосредоточимся на двух методов и изучения железа хлорида индуцированного тромбоза в двух различных типов судов; брыжеечных сосудов и сонная артерия.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Все эксперименты с участием животных были утверждены Альфреда медицинских исследований и образования участковой комитета по этике животных (E / 1534/2015 / B). Все хирургические манипуляции проводились под общим наркозом, и животные не испытывали боли на любом этапе. Все эксперименты, описанные не являются восстановление.

1. Подготовка

  1. Вырезать тонкие полосы фильтровальной бумаги (1 х 2 мм).
  2. Свежий подготовить 2 растворы хлорида железа, 4% (вес / объем) и 6% (вес / объем) разводили в деионизированной воде. Подготовьте родамин 6G Solution 0,3% в PBS, фильтруют через 0,22 мкм.
  3. Вырезать небольшой кусок (5 мм х 1 см) от белого пластика шприца обертку.

2. Брыжейка артериол Тромб Формирование наблюдали Прижизненное микроскопии

  1. Весить 10-12 недель самцов C57BL / 6 дикого типа мышь и анестезию, соответственно смесью кетамина (100 мг / кг) и ксилазина (10 мг / кг), хотя внутрибрюшинной инъекции, Монитор глубины анестезии ответ на носок, хвост и / или щепоткой кожи, реактивности от роговицы и глазных крайнем случае, и отсутствие движения усов. При необходимости ввести вторую дозу кетамина (50 мг / кг), чтобы поддерживать анестезию животного. Применить ветеринар мазь на глаз, чтобы предотвратить сухость под наркозом. Место мыши в небольшую чашку Петри помещают на грелку доводили до 37 ° С.
    Примечание: Хотя инъекцией может привести к боли для животных, длительность этого дискомфорта будет минимальным (менее 3 сек). Боль и дискомфорт, связанные с инъекций будут сведены к минимуму за счет использования опытных и компетентных работников и соответствующего размера иглы (25 г). После всех процедур, усыпить всех животных с помощью передозировки кетамина и ксилазина затем путем смещения шейных позвонков.
  2. Выполните брюшной срединный разрез около 3 см в коже и аккуратно вырезать брюшины.
  3. Расположите курсор на стороне домашним животнымри блюдо, осторожно экстериоризоваться свои кишечник и осторожно раскрывайте брыжейки с 2 ватные палочки, чтобы принести подходящее судно на поверхность чашки Петри. Высушите правильно с нежным стеклоочистителя.
    Примечание: Чтобы ограничить движение сосудов брыжейки, Папаверин может быть использовано, чтобы ингибировать кишки перистальтику.
  4. Замочите хвост мыши в теплой воде, чтобы расширить сосуды и ввести 30 мкл родамина 6G (0,3%) в хвостовую вену мыши с 29 G шприца для обозначения лейкоциты и тромбоциты.
  5. Поместите чашку Петри под инвертированным микроскопом и сосредоточиться на выбранной артериол, используя яркий канал поле.
  6. Замачивание полосу фильтровальной бумаги с 6% (вес / объем) хлорида железа (III) и применять фильтровальную бумагу на артериол с двумя щипцами; Первая провести фильтровальную бумагу, вторая осторожно прижмите его к сфере интересов. Заметим, образование тромба в первые 10 сек после осаждения из фильтровальной бумаги.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Это довольно коммна травмировать окруженный микроциркуляторного русла и точность осаждения фильтровальной бумаги и аккуратно давлением Поэтому важно, чтобы ограничить эту проблему.
  7. Заметим, образование тромба с помощью флуоресцентной микроскопии (TRITC канала: пикового возбуждения 557 нм, пик излучения 576 нм), через фильтровальную бумагу. Соблюдайте циркулирующих лейкоцитов и тромбоцитов, что взяли на себя родамина 6G и их агрегацию в тромба, поэтому легко идентифицировать.
  8. Возьмите фильтровальную бумагу после 1 мин воздействия хлорида железа (III) и продолжать следить за формирование тромба. Вымойте судно с PBS.
  9. Наблюдайте и запишите динамическое образование тромба выделенного с маркировки тромбоцитов и лейкоцитов с родамина 6G. Захват изображения и измерить размер тромба. В данном документе представлены изображения были получены с перевернутым микроскопом прижизненной, хотя объективно 4X, в флуоресценции канала TRITC.
  10. Following все процедуры, усыпить животное, используя дозу кетамина и ксилазина затем путем смещения шейных позвонков.

3. сонной артерии Тромб Формирование оценивается крови измерения скорости потока

  1. Взвешивание 10-12 недель самцов C57BL / 6 мыши и обезболивания, соответственно смесью кетамина (100 мг / кг) и ксилазина (10 мг / кг), хотя внутрибрюшинной инъекции. Применить ветеринар мазь на глаз, чтобы предотвратить сухость под наркозом.
  2. Закрепить мышь под операционного микроскопа с использованием липкой ленты на ногах, на грелку доводили до 37 ° С.
  3. Сделайте небольшую подушку из одного стеклоочистителя и прикрепить ее под голову мыши, чтобы немного поднять голову. Используйте нить петлю щипцами тянуть морду вниз (используйте верхние зубы). Это будет подвергать область сонной артерии для легкого доступа.
  4. Выполните небольшой 5 мм глубиной разрез кожи прямо под челюстью, до грудины.
  5. Проанализируйте ФаScia и изолировать фрагмент левой или правой общей сонной артерии выше бифуркации.
  6. Осторожно ввести пинцетом в период между артерией и нерва, чтобы отделить их. Не беспокоить нерв работает близко к артерии, не касаясь слишком много сонной артерии, как это может стать причиной повреждения судна. Изолировать сечение не менее 5 мм от артерии.
  7. Сушат площадь артерии должным образом с стеклоочистителей, чтобы избежать какой-либо жидкости, что мешает FeCl 3.
  8. Положите маленький белый пластиковый кусок под изолированной части общей сонной артерии, так что FeCl 3 не замочить в окружающих тканях. Для этой цели использовать второй щипцов, чтобы принести часть к первой затем медленно скользить пластиковую бумагу под артерии.
  9. Кусок фильтровальной бумаги с 4% (вес / объем) или 6% (вес / объем) хлорида железа и поместить все вокруг артерии.
  10. Через 3 мин воздействия, снять бумагу фильтра, промыть PBS и высушите область WIth дворники.
  11. Поместите зонд доплеровского потока вокруг судна в травмированной области и начать запись изменений в потоке. В здоровой общей сонной артерии у взрослых мышей, поток, как правило, около 1 мл / мин. Внимание! контакт зонда с хлоридом железа может повредить зонд так что любой контакт следует избегать. В данном документе представлены данные были получены с помощью измерителя Трансзвуковой System Inc. потока, TS420 периваскулярного модуля, снабженный датчиком потока Доплера Нано 0,5 PBS.
    Примечание: концентрация хлорида железа может изменить кинетику образования тромбов в результате в разное время окклюзии. Таким образом, воздействие на 6% (вес / объем) хлорида железа дает более быстрый, чем окклюзии воздействия до 4% (вес / объем) хлорида железа.
  12. После всех процедур, усыпить всех животных с помощью передозировки кетамина и ксилазина затем путем смещения шейных позвонков и тщательно очистите Доплера зонд.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Люминесцентные прижизненной микроскопии наблюдения брыжейки покажет накопление родамина 6G помечены тромбоциты и лейкоциты вдоль стенки сосуда потерпевшей по FeCl 3. Прогрессивная формирование тромба частичной контролируется в брыжейки судна 200 мкм (рис 1). Тромб постепенно появляется и однозначно определяется после первой минуты воздействия FeCl 3 (рис 1, т = 60 сек). 40 сек после удаления фильтровальной бумаги, пропитанной FeCl 3, тромбоз быстро прогрессирует, и, наконец, присутствует на стенке секции всей наблюдаемой сосуда (Рисунок 1, Т = 100 сек).

Фигура 1
Рисунок 1:. Тромб Рост наблюдаемых Люминесцентная микроскопия Прижизненное на брыжейки судна Изображения были приняты на 15 сек, 60сек и 100 сек после осаждения на фильтровальной бумаге, пропитанной 6% (вес / объем) раствора FeCl 3. Фильтровальная бумага была удалена после 60 секунд воздействия. Лейкоцитов и тромбоцитов были помечены путем предварительного инъекции родамина 6G (0,5% вес / объем). Красные стрелки указывают тромбоциты лейкоциты / агрегатов. Масштабная линейка 200 мкм. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Внутри тромба сонной индуцируется применением фильтровальной бумаги, пропитанной раствором FeCl 3 вокруг изолированной сонной артерии и изменения кровотока вниз по течению от травмы записывается с зондом Доплера потока (рисунок 2). Общий постоянный поток крови около 1,1 мл / мин измеряется в неповрежденной сонной артерии. После 3 мин воздействия на сосуд с фильтровальной бумагой, смоченной в 4% (вес / объем) раствора FeCl 3, окклюзионные тромб Obtained с времени окклюзии 13 мин и 30 сек после начала экспозиции. После 3 мин экспозиции с фильтровальной бумагой, смоченной в 6% (вес / объем) FeCl 3, окклюзионные тромб получены при времени окклюзии 9 мин и 30 сек после начала экспозиции.

Рисунок 2
Рисунок 2. Представитель записи кровотока через сонной артерии после FeCl 3 травмы. Кровоток измеряли с помощью зонда Доплера потока размещены на сонной артерии вниз по течению от фильтровальной бумаги, пропитанной 4% (вес / объем) или (6% вес / объем) FeCl 3. Фильтровальная бумага была удалена после 3 мин экспозиции. В управление потоком кровь получали путем измерения здорового сонную артерию.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Железа хлорид индуцированных тромбоза модель отлично инструмент исследования. Как показано в этом исследовании, это очень легко реализовать, и при использовании в сочетании с прижизненной микроскопии или доплеровского расходомера, что обеспечивает хорошую мониторинг в реальном времени образования тромбов. Регулировка времени экспозиции и концентрации FeCl 3, он также предлагает возможность производить либо не окклюзионные или окклюзионные тромбы.

Тем не менее, этот способ также имеет некоторые ограничения. В сонной артерии, основным недостатком является то, что хотя время окклюзии может быть эффективно изменена, воспроизводимость модели остается слишком слабым, чтобы точно контролировать размер тромба и скорость роста 10. Несколько групп работали на стандартизации модели 28,29. Оуэнс и др. Предполагается, что надежные и воспроизводимые время окклюзии могут быть получены с практикой и уменьшения всех факторов вариации, такие как возрастмыши, генетический фон мышей, анестезии используется, метод для железа экспозиции хлорида и концентрация раствора хлорида железа 28. Сам зонд Доплера также имеет некоторые ограничения с определенной степенью настоящее фонового сигнала, которые могут повлиять на определение окклюзии. Кровоток может также быть изменена путем формирования нестабильной тромбов.

На брыжеечной судна, воспроизводимость может зависеть от размера судна, который изменяется более чем на сонных артерий и наличием жиров, которые могут уменьшает степень повреждения. Было сообщено, что тромбы получены различаются в зависимости от размера сосуда стенки поражения, которые могут сдерживать с эндотелием или пролить также влияют на гладкомышечные клетки медиа слоя 30. Лазерное облучение модель представляет собой хорошую альтернативу трехвалентного модели хлорида, который обеспечивает лучшую воспроизводимость 8, Тем не менее, оно ограничено мелких сосудов, которые достаточно прозрачна, чтобы позволить проникновение лазера. Следует также отметить, что в этой модели, эндотелиальные клетки разрушаются после применения железа хлорида, и поэтому не подходит для изучения роли эндотелиальных клеток. Тем не менее, можно заменить хлорид железа по кальциевым ионофором получить травму слабый, ограниченный к активации эндотелия 31.

Другим ограничением этой модели является то, что он не подходит для изучения долгосрочной эволюции болезни. Чтобы выполнить это требование, Boulaftali др. Разработали спинной кожной складки камеры, которые позволяют мониторинг той же тромба в течение нескольких недель 32. Этот метод особенно хорошо подходит для изучения влияния тромболитиков в соответствии с зрелости тромба. В этом исследовании, сгусток старение было найдено, чтобы ухудшить литическую действие рекомбинантной формы Tissuе активатор плазминогена, который в настоящее время золотым стандартом тромболитиков для человека.

Несмотря на некоторые недостатки, которые должны быть приняты во внимание, модель, FeCl 3 имеет отношение к изучению человеческого тромбоза. Состав полученного тромбов был проанализирован на гистологического среза и наличии тромбоцитов, фибрина и эритроцитов были определены в внутри сонной тромбов 33. Кроме того, поскольку атеротромботический расстройства предполагается быть инициирована окислении липопротеинов, индуцировать повреждение сосудов при том, что реакции окислительно-восстановительного модель FeCl 3, более вероятно, чтобы имитировать патофизиологии болезни человека, чем механические, фото-химических или лазера индуцированной травмы 34.

Тромб образуется хлорид железа, хотя было также описано, чувствительны как к антикоагулянта и антитромбоцитарных препаратов. Гепарин и клопидогрел, например, были Reported, чтобы продлить время окклюзии тромбов, образованной в сонной артерии 29. Администрация рекомбинантной формы гирудина значительно продлевается время формирования тромба на брыжейки микрососудов 17. Таким образом, железа хлорид модель обеспечивает отличные идеи в тромбоза и весьма актуальны инструмент для доклинической проверки нового тромболитической, антикоагулянта и анти-тромбоцитов препаратов.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

Авторы хотели бы поблагодарить техническую поддержку от Joy Яо и доктора Карен Alt, а также финансирование из NHMRC и НФЗ.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Whatman chromatography paper GE Healthcare 3030917
Iron (III) chloride 40% (w/v) VWR 24212.298
Rhodamine 6G Sigma R4127
Inverted microscope  Olympus IX81
Digital black-and-white camera  Olympus XM10
Doppler flowmeter Transonic TS420
Nano-doppler flow probe Transonic 0.5 PBS
Ketamine Hospira  0409-2051-05
Xylazine (Rampun) Bayer 75313 
Petri dish Sarstedt 82.1472
Insulin syringe (29 G) BD Ultra-Fine 326103
Cotton tipped applicators BSN medical 211827A
Dynek dysilk sutures Dynek Pty Ltd CS30100
Dulbecco's phosphate buffer saline (PBS) Gibco life technologies 21600-069
Heating pad Kirchner T60

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Leadley, R. J., Chi, L., Rebello, S. S., Gagnon, A. Contribution of in vivo models of thrombosis to the discovery and development of novel antithrombotic agents. J Pharmacol Toxicol Methods. 43, (2), 101-116 (2000).
  2. Johnson, G. J., Griggs, T. R., Badimon, L. The utility of animal models in the preclinical study of interventions to prevent human coronary artery restenosis: analysis and recommendations. On behalf of the Subcommittee on Animal, Cellular and Molecular Models of Thrombosis and Haemostasis of the Scientific and Standardization Committee of the International Society on Thrombosis and Haemostasis. Thromb Haemost. 81, (5), 835-843 (1999).
  3. Day, S. M., Reeve, J. L., Myers, D. D., Fay, W. P. Murine thrombosis models. Thromb Haemost. 92, (3), 486-494 (2004).
  4. Sachs, U. J. H., Nieswandt, B. In vivo thrombus formation in murine models. Circ Res. 100, (7), 979-991 (2007).
  5. Furie, B., Furie, B. C. Mechanisms of thrombus formation. N Engl J Med. 359, (9), 938-949 (2008).
  6. Pierangeli, S. S., Liu, X. W., Barker, J. H., Anderson, G., Harris, E. N. Induction of thrombosis in a mouse model by IgG, IgM and IgA immunoglobulins from patients with the antiphospholipid syndrome. Thromb Haemost. 74, (5), 1361-1367 (1995).
  7. Kikuchi, S., Umemura, K., Kondo, K., Saniabadi, A. R., Nakashima, M. Photochemically induced endothelial injury in the mouse as a screening model for inhibitors of vascular intimal thickening. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 18, (7), 1069-1078 (1998).
  8. Rosen, E. D., Raymond, S., et al. Laser-induced noninvasive vascular injury models in mice generate platelet- and coagulation-dependent thrombi. Am J Pathol. 158, 1613-1622 (2001).
  9. Kurz, K. D., Main, B. W., Sandusky, G. E. Rat model of arterial thrombosis induced by ferric chloride. Thromb Res. 60, (4), 269-280 (1990).
  10. Eckly, A., Hechler, B., et al. Mechanisms underlying FeCl3-induced arterial thrombosis. J Thromb Haemost. 9, (4), 779-789 (2011).
  11. Darbousset, R., et al. Involvement of neutrophils in thrombus formation in living mice. Pathol Biol (Paris). 62, (1), 1-9 (2014).
  12. Denis, C., Methia, N., et al. A mouse model of severe von Willebrand disease: defects in hemostasis and thrombosis). Proc Natl Acad Sci U S A. 95, (16), 9524-9529 (1998).
  13. Wang, X., Hagemeyer, C. E., et al. Novel single-chain antibody-targeted microbubbles for molecular ultrasound imaging of thrombosis: validation of a unique noninvasive method for rapid and sensitive detection of thrombi and monitoring of success or failure of thrombolysis in mice. Circulation. 125, (25), 3117-3126 (2012).
  14. Wang, X., Smith, P. L., Hsu, M. -Y., Ogletree, M. L., Schumacher, W. A. Murine model of ferric chloride-induced vena cava thrombosis: evidence for effect of potato carboxypeptidase inhibitor. J Thromb Haemost. 4, (2), 403-410 (2006).
  15. Karatas, H., Erdener, S. E., et al. Thrombotic distal middle cerebral artery occlusion produced by topical FeCl(3) application: a novel model suitable for intravital microscopy and thrombolysis studies. J Cereb Blood Flow Metab. 31, (6), 1452-1460 (2011).
  16. Jirousková, M., Chereshnev, I., Väänänen, H., Degen, J. L., Coller, B. S. Antibody blockade or mutation of the fibrinogen gamma-chain C-terminus is more effective in inhibiting murine arterial thrombus formation than complete absence of fibrinogen. Blood. 103, (6), 1995-2002 (2004).
  17. Dubois, C., Panicot-Dubois, L., Merrill-Skoloff, G., Furie, B., Furie, B. C. Glycoprotein VI-dependent and -independent pathways of thrombus formation in vivo. Blood. 107, (10), 3902-3906 (2006).
  18. Navarrete, A. -M., Casari, C., et al. A murine model to characterize the antithrombotic effect of molecules targeting human von Willebrand factor. Blood. 120, (13), 2723-2732 (2012).
  19. Rayes, J., Hollestelle, M. J., et al. Mutation and ADAMTS13-dependent modulation of disease severity in a mouse model for von Willebrand disease type 2B. Blood. 115, (23), 4870-4877 (2010).
  20. Lamrani, L., Lacout, C., et al. Hemostatic disorders in a JAK2V617F-driven mouse model of myeloproliferative neoplasm. Blood. 124, (7), 1136-1145 (2014).
  21. Zhang, Y., Ye, J., et al. Increased platelet activation and thrombosis in transgenic mice expressing constitutively active P2Y12. J Thromb Haemost. 10, (10), 2149-2157 (2012).
  22. Schäfer, K., Konstantinides, S., et al. Different mechanisms of increased luminal stenosis after arterial injury in mice deficient for urokinase- or tissue-type plasminogen activator. Circulation. 106, (14), 1847-1852 (2002).
  23. Wang, X., Palasubramaniam, J., et al. Towards effective and safe thrombolysis and thromboprophylaxis: preclinical testing of a novel antibody-targeted recombinant plasminogen activator directed against activated platelets. Circ Res. 114, (7), 1083-1093 (2014).
  24. Decrem, Y., et al. Ir-CPI, a coagulation contact phase inhibitor from the tick Ixodes ricinus, inhibits thrombus formation without impairing hemostasis. J Exp Med. 206, (11), 2381-2395 (2009).
  25. Ma, D., et al. Desmolaris, a novel factor XIa anticoagulant from the salivary gland of the vampire bat (Desmodus rotundus) inhibits inflammation and thrombosis in vivo. Blood. 122, (25), 4094-4106 (2013).
  26. Lei, X., et al. Anfibatide, a novel GPIb complex antagonist, inhibits platelet adhesion and thrombus formation in vitro and in vivo in murine models of thrombosis. Thromb Haemost. 111, (2), 279-289 (2014).
  27. Waisberg, M., et al. Plasmodium falciparum infection induces expression of a mosquito salivary protein (Agaphelin) that targets neutrophil function and inhibits thrombosis without impairing hemostasis. PLoS Pathog. 10, (9), e1004338 (2014).
  28. Owens, A. P., Lu, Y., Whinna, H. C., Gachet, C., Fay, W. P., Mackman, N. Towards a standardization of the murine ferric chloride-induced carotid arterial thrombosis model. J Thromb Haemost. 9, (9), 1862-1863 (2011).
  29. Wang, X., Xu, L. An optimized murine model of ferric chloride-induced arterial thrombosis for thrombosis research. Thromb Res. 115, (1-2), 95-100 (2005).
  30. Tseng, M. T., Dozier, A., Haribabu, B., Graham, U. M. Transendothelial migration of ferric ion in FeCl3 injured murine common carotid artery. Thromb Res. 118, (2), 275-280 (2006).
  31. Bonnard, T., et al. Leukocyte mimetic polysaccharide microparticles tracked in vivo on activated endothelium and in abdominal aortic aneurysm. Acta Biomater. 10, (8), 3535-3545 (2014).
  32. Boulaftali, Y., Lamrani, L., et al. The mouse dorsal skinfold chamber as a model for the study of thrombolysis by intravital microscopy. Thromb Haemost. 107, (5), 962-971 (2012).
  33. Konstantinides, S., Schäfer, K., Thinnes, T., Loskutoff, D. J. Plasminogen activator inhibitor-1 and its cofactor vitronectin stabilize arterial thrombi after vascular injury in mice. Circulation. 103, (4), 576-583 (2001).
  34. Li, W., McIntyre, T. M., Silverstein, R. L. Ferric chloride-induced murine carotid arterial injury: A model of redox pathology. Redox Biol. 1, (1), 50-55 (2013).
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Bonnard, T., Hagemeyer, C. E. Ferric Chloride-induced Thrombosis Mouse Model on Carotid Artery and Mesentery Vessel. J. Vis. Exp. (100), e52838, doi:10.3791/52838 (2015).More

Bonnard, T., Hagemeyer, C. E. Ferric Chloride-induced Thrombosis Mouse Model on Carotid Artery and Mesentery Vessel. J. Vis. Exp. (100), e52838, doi:10.3791/52838 (2015).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter