Summary
ההתפשטות הגרורה של הסרטן היא הסיבה העיקרית למוות הקשורים לסרטן. אנו מספקים תיאור מעמיק של מתודולוגיה ניתוח ההישרדות שלנו להקמת מערכת "חולה-כמו" orthotopic מודל עכבר syngeneic לחקר המנגנונים של גרורות בגידולים מוצקים איבר.
Protocol
הצהרת אתיקה
כל המחקרים בבעלי החיים אושרו על ידי הוועדה המוסדית הטיפול בבעלי חיים והשימוש (IACUC) של האנטר קולג 'של האוניברסיטה של העיר ניו יורק.
הערה: שמונה עכברי BALB / ג שמשו בהליך ניסיוני זו. חמישה עכברים / ג BALB הושתלו עם 5 X 10 6 תאי קרצינומה hepatocellular BNL 1ME A.7R.1 עכבר כדי לייצר גידולים הראשוניים. שלושה עכברי BALB / ג ללא השתלות שמשו כקבוצת ביקורת. BNL 1ME A.7R.1 היא שורת תאי קרצינומה עכברית hepatocellular שנגזרה על ידי שינוי כימי משורת תאי hepatocyte שאינו סרטנית בעכברי BNL CL.2. BNL 1ME A.7R.1 התקבל מהסוג האמריקאי תרבות האוסף (ATCC).
1. טרום ניתוח
- ודא עכברים שלכל ניתוחי ההישרדות בריאים. כדי להבטיח שעכברים בריאים, לבדוק סימנים של התייבשות על ידי האהלה של העור. אין להשתמש בעכברים עם כל ראיה של מחלה או דאיסטרס בניסויים אלה.
- לשקול עכברים כדי לוודא שהם לא בתת משקל. ודא שהמשקל הוא לפחות 16-20 גרם.
- הכן 5 × תאי HCC עכבר 10 6 BNL 1ME A.7R.1 להשתלה לעכבר:
- תקשורת לשאוב מ- 10 מיליליטר 60% - 70% צלחת תרבית תאים ומחוברות של תאי HCC עכבר A.7R.1 BNL 1ME. לשטוף פעמיים עם 5 מיליליטר PBS. הוסף 2 מיליליטר של טריפסין לצלחת ולדגור על 37 מעלות צלזיוס חממת humidified עם האוויר ו 5% CO 2 למשך 5 דקות.
- בהמשך לכך, פיפטה 10 μl trypsinized תאים לתוך hemocytometer ידני לספירת תאים תחת מיקרוסקופ בהגדלה של 10X. לספור את המספר הכולל של תאים הנמצאים בארבעה הריבועים הפינתיים הגדולים ולהכפיל את הגורם לדילול במספר הכולל של תאים. לאחר מכן, לחלק במספר הריבועים נספרו ולהכפיל ב -10 6 לריכוז התאים (תאים למ"ל).
- שימוש בחישוב, לאסוף 5 מיליון תאים לכל עכבר בסטרילי1.5 מיליליטר צינורות microcentrifuge. תווית 1.5 מיליליטר צינורות microcentrifuge.
- Resuspend 5 × 10 6 תאי BNL 1ME A.7R.1 עכבר HCC בשל נאגר מלוח פוספט 100 μl (PBS). לשמור על תאים אלה על קרח עד השתלה בניתוח.
- לבצע פעולות הנדרשות להכנת עכברים לניתוח כגון אינדוקציה הרדמה ושיער גזיר מציוד וחומרי סטרילי כדי למנוע זיהום.
- לגרום להרדמה כללית בעכברים על ידי שאיפה של isoflurane באמצעות מכשיר אדים isoflurane יחד עם חמצן בקצב זרימה מתמיד של ריכוז 1 ליטר לדקה (כ. 2.1%). הערה: מערכת היא עצמאית, וכוללת מאדה דיוק, אספקת חמצן ופחם מיכל שצמוד למעגל נשימה הדרוש להדחת גז / הרדמה.
- ודא שהרדמה היא נאותה כדי למנוע את החיה מעובר כאב במהלך הניתוח. בצע הבוהן קמצוץ ולצפות בבעלי חיים לאי-responתאוות כדי לאשר הרדמה.
- באותו זמן, לעבור את קו השסתום, חותם לתיבה ופתוח לחרטום.
- ברגע שהעכבר הוא מורדם, למרוח כמות קטנה של משחת עיניים לקרניות כאמצעי מניעה מייבוש והנזק.
- בהמשך לכך, להעביר את בעלי החיים לאזור ההכנה, עם החרטום ממוקם כראוי ומחובר (להרדמת תחזוקה). הכן את האתר של החתך הניתוחי לניתוח על ידי הסרת שיער באזור הכנה זו.
- ודא שהאזור של ניתוח הוא במיקום ללא כל הפעילות אחרת.
- ודא שמשטח העבודה יציב ומחוטא כראוי, לא הוכתם ולפני הניתוח ללא עומס. מניחים פיסת פשתן או מגש כירורגית על זה סטרילי.
- ודא שהשדה האופרטיבי הוא זמין רק אנשי ביצוע הניתוח. ודא שחדר הניתוח הוא ניקה ושטף עם חומר ניקוי מתאים וריסס עם disinfe מתאיםctant.
- לוודא שהוא גם ממוקם במרחק של דלתות וחלונות כזרמי אוויר יכול להתפשט אבק מוביל לזיהום של האתר.
- לבצע את ניתוח ההישרדות עם מכשירים סטריליים. כך או לספוג מכשירים בחומר חיטוי בהתאם להמלצתו של היצרן או החיטוי. השתמש בחומרים מתכלים בסיסיים סטרילי כי הם מוכנים לשימוש.
- מכשירים נפרדים לפי פונקציה כדי למנוע זיהום של אזורים סטריליים.
- לגלח כ 1 אינץ 'סביב האתר של חתך (חתך קו האמצע) כדי לגשת לכבד של בעלי החיים. להסיר את השיער מבעלי החיים מהמקום של ניתוח.
- לאחר גילוח, לשפשף את האזור עם סבון חיטוי (לשפשף בטאדין כירורגית) ולשטוף את חומר החיטוי העודף משם עם פתרון PBS סטרילי. בצע את זה כמה פעמים, בתהליך שנמשך כ לשפשף כל 5 דקות. הסר והושלך כפפות משומשות.
- לאחר מכן, לשנות לביגוד מגן כגון surgicשמלת אל, ראש לשפשף, ופניו מסכה. בשלב הבא, לטהר את הידיים עם פתרון לשפשף נכון לפני שתרכיב את כפפות מנתחים. הערה: זה הוא צעד הכרחי כדי למנוע שפיכה ומזהם את האתר כירורגית עם מזהמים פוטנציאליים.
2. ניתוח
- לספק מקור חום חיצוני לחום לאורך כל התקופה של הרדמה. בעלי החיים עלולים להיתקל כמה היפותרמיה בגלל הרדמה גורמת להפרעות בויסות החום; לכן, לשמור על טמפרטורת הגוף.
- הנח את העכבר על גבה לאורך כל הניתוח.
- תקן את הגפיים קדמי, גפיים אחוריות והזנב של העכבר על שולחן הניתוחים עם חתיכות של קלטות כירורגית.
- לעשות חתך קו ישר באופן מיידי נחותים xyphisternum.
- השתמש במפשק כירורגי שמירה עצמית סטרילי לחשוף את הכבד.
- עם מזרק שמחט 20G, לאט ובזהירות להזריק של PBS 100 μl המכיל 5 × 10 6 BNL 1ME A.7R.1תאי העכבר HCC לאונה הימנית של הכבד.
- לאחר הסרת המחט, תחול מקלון צמר גפן סטרילי דקות לפחות 1 לעצור כל דימום פוטנציאלי עקב גבוה כלי דם של הכבד.
- סגור את הרקמה התת עורית עם תפר נספג ואחרי סגירת עור באמצעות קליפים כירורגית. בהמשך לכך, לנקות את הפצע שוב עם לשפשף בבטאדין. הערה: הפעולה זו תבטיח את סגירת פצע הניתוח.
- תת עורי לתת למלח רגיל 100 μl.
3. לאחר ניתוח
- מייד לאחר ניתוח, להעביר את העכבר לכלוב נקי עם כרטיס זיהוי שלאחר ניתוח להודיע מטפלים של מצב העכבר. לספק מזון ומים. הערה: מניסיוננו, עכבר שזה עתה עבר ניתוח יעלה בגורלם הטוב ביותר אם שוכנו לבד עם אוכל ומים רטובים לתקופה שלאחר הניתוח 24 שעות הראשונית.
- שמור חמים לבעלי החיים עם מנורת חום שיוצר חום לא מצוין 38 מעלות צלזיוס. Use מדחום למדידת הטמפרטורה עד העכבר התאושש לחלוטין.
- בית החיה בכלוב רצוי עם מצעי נייר כדי להבטיח נוחות.
- לאחר התאוששות ראשונית, לפקח על בעלי החיים לסימנים של אי נוחות, דימום, כאב ומצוקה. תן עצירות (0.05 -0.1 מ"ג / קילוגרם) כדי להקל על כאב. באופן הדוק לפקח על הפעילות, ההתנהגות ומראה, כמו גם מים וצריכת מזון לכ 2 שעות. אם אמבולטורי, להעביר את בעלי החיים בחזרה לאזור לדיור רגיל רגיל של עכברים וימשיך לעקוב במרווחים של 6-12 שעות שללאחר ניתוח 24 שעות. לבצע בדיקת משקל אם תרצה בכך.
- עם זאת, אם בעל החיים הוא שיש בעיות מחלים, לנקוט בפעולות טיפול תומך מתאימות. אם עכברים אינם מסוגלים לשחזר, הומני להרדים עכברים באמצעות CO 2 מחנק ונקע בצוואר הרחם. פעל לפי הנחיות מוסדיות מאושרות להמתת חסד.
- לאחר ניתוח, לבדוק ראיות קליניות של HCC שהיא בדרך כלל observabהפחתה משמעותית כle בציון מצב גוף. הערה: בשלב זה, גידול ראשוני סביר שפותח בכבד ובפיקדונות גרורתי שסביר להניח שפותחו בריאות.
- בשלב זה, להקריב את כל העכברים (ניסיון ושליטה) מעורבים בניסוי על ידי המתת חסד הומנית. להכפיף את העכברים למחנק פחמן דו חמצני: לשחרר באיטיות פחמן דו חמצני לתוך התא על פני תקופה של 5 -10 דקות. זה יגרום דום נשימה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
הכבדים של עכברים / ג BALB הושתלו עם 5 × 10 6 תאי HCC עכבר BNL 1ME A.7R.1. ראיות קליניות של פיתוח HCC הייתה נצפות 63 ימים שלאחר ניתוח. כתוצאה מכך, עכברים מורדמים אנושי. נתיחה לאחר המוות בוצעה בעכברים מורדמים. הריאות והכבד היו כריתה ובדיקת ברוטו זהירה בוצעה לזהות גידולים מקרוסקופית. בעכבר אחד, גידול שטחי נצפה על פני השטח של הכבד עם כמה קובץ מצורף לקיר הבטן (איור 1 א). בעכבר שני, כבד באופן חריג למראה נצפה. החריגות בצורה חזקות מאוד נראית כמו גידול שטחי (איור 1). כצפוי, עכברים בקבוצת הביקורת ללא השתלה של תאי BNL 1ME A.7R.1 HCC פיתחו שום גידולים, כפי שמעידים כבד (1D איור) וריאות (איור 1E) מעכבר שליטה. כמו כן, הריאות מהעכברים עם גידולים נראים חריגות במקצת, תצוגה אזורי ing של נמק המורגי (איור 1 ג). בהתבסס על הניסיון קודם, ריאות אלה עשויים נמל פיקדונות גרורתי 3.
איור 1. בדיקה הגולמית של גידול וגרור. עכברים / ג BALB הושתלו עם 5 X 10 6 תאים סרטניים BNL 1ME A.7R.1 ומורדם 63 ימים לאחר מכן. גידולי נציג כבד נצפו צולמו ומוצג כאן. (A ו- B) שני להראות גידולים בכבדים שטחיים. (ג) הוא ריאות מתאי גידול מושתלים עכברים. (ד) מציגה כבד של עכבר שליטה. (ה) מציין ריאות של שליטה עכבר. לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
GE = "תמיד"> 
איור 2. סכמטי של המתודולוגיה של מודל "חולה-כמו" orthotopic עכבר syngeneic של גרורות קרצינומה hepatocellular. הרדימו פעם, כבד עכבר מושתל עם 5 X 106 קרצינומה hepatocellular עכבר A.7R.1 BNL 1ME תאים (HCC). כאשר ראיות קליניות של HCC היא לצפייה, בעלי החיים מוקרבים על ידי המתת חסד הומני (נתון למחנק פחמן דו חמצני, ואחריו exsanguination intracardiac מלעורית ונקע בצוואר הרחם). אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
במאמר זה תיאור מעמיק של השיטה הוא נתון שלאחרונה דווח על ידי Ogunwobi ועמיתים של ההקמה המוצלחת של מודל עכבר syngeneic orthotopic של גרורות HCC (איור 2) 3. שיעור המיצוי של גידולים להליך זה הוא בדרך כלל גבוה. יש לנו שנצפה קודם לכן שיעור מיצוי גידול של 100% 3. עם זאת, השיעור המיצוי יכול להיות משתנה בהתאם לסמכותו של החוקר. בניסוי האחרון שבוצע על ידי סטודנט לתואר שני חדש תחת הדרכה, שיעור מיצוי הגידול היה נמוך כמו 40%. למרות שרוב הניסויים הסתיימו ב 4 - 6 שבועות עקב הירידה בציון מצב גוף, אנו מאמינים מניסיון עם השתלה תת עורית של אותם תאים לאותו עכברים שגידולים ראשוניים עשויים להיות שהוקמו על ידי 2 - 3 שבועות. בדרך כלל אנחנו מצפים לראות גולה גידול אחד מניסוי מוצלח. ולמרות שאנו מצפים גרורות ריאות לפתח בין 4 - 6 שבועות, זה conceivתוכל שגידול בכבד עשוי להתרחש הרבה יותר מוקדם.
טכניקות ניתוחיות טובות ותנאים אספטיים הם חיוניות להצלחה של שיטת ניתוח הישרדות זה. עכברים המשמשים לניתוח הישרדות צריכים להיות בריאים. משקל-ניתוח שלאחר מראש והוא מנהג טוב. המשקולות מראש הניתוח הממוצעת של העכברים המשמשות בניסוי או האחרון היה 18 גרם, ובסופו של דבר נקודת ניסוי (לאחר ניתוח השתלה 63 ימים) המשקל הממוצע שלהם היה רק 22 גרם. רווח של רק 4 גרם של משקל במהלך תקופת זמן זו, ככל הנראה משום שהייתה איזו ירידה במשקל עקב מחלה מערכתית מהגידול. היו לנו הערכה אובייקטיבית יותר של זה שהיו לנו נמדד במשקל עכבר פעם או פעמיים בשבוע לאורך כל הניסוי. זה מומלץ להתאמן הכי טוב.
כפי שסוכם באיור 2, עכברים צריכים להיות מורדמים כראוי לפני הניתוח ובמשך כל התקופה של ניתוח, כדי למנוע כאב מצוקת nd. האזור צריך להיות חופשי מכל העומס, וגישה צריכה להיות זמינה רק לאלה המבצעים את הניתוח. שני אזור הניתוח, כמו גם המכשירים המשמשים צריך להיות סטרילי כל.
צעד חיוני להצלחה של השתלה הוא ההכנה של תאי HCC עכבר BNL 1ME A.7R.1 להיות מושתלת. במהלך ההכנה, זה הוא חיוני כדי למנוע זיהום של האוסף של התאים ממנות תרביות תאים ומחוברות. יש לבצע את הפעולות הבאות בברדס תרבית תאים בתנאים סטריליים. ספירת תאים יש גם נעשתה על מנת להבטיח 5 תאים × 10 6 BNL 1ME A.7R.1 עכבר HCC כבר נאספו בצינור microcentrifuge 1.5 מיליליטר סטרילי לכל עכבר שresuspended ב 100 פוספט μl נאגר (PBS). כתמי כחולי Trypan יכולים גם להתבצע אופציונלי כדי לאשר את הכדאיות של התאים. תאים אלה צריכים להיות כל הזמן על קרח לא יותר משעה 2 לפני ההשתלה בכבדים של עכברים.
_content "> ההשתלה של תאי הסרטן יש לטפל בזהירות בשל האופי העדין של הכבד (איור 2). במהלך ההזרקה של התאים הסרטניים, להימנע עמוק מדי לנקב שעלולה לגרום למחט עוברת כל הכבד . זה חיוני כדי להזריק את תאי הסרטן לאט ובזהירות. מצד שני, רדוד מדי לנקב עם המחט לפני ההזרקה צפויה לגרום לדליפה של תאי הסרטן מוזרקים לתוך חלל הצפק. כמו כן, לאחר הסרת המחט, תמיד יש פוטנציאל של האיבר מדמם עקב גבוה כלי הדם שלו. לכן, יישום מקלון צמר גפן סטרילי דקות לפחות 1 מומלץ. טיפול ותשומת לב יבטיחו השיעור הגבוה ביותר של הצלחת השתלה. גם בעלי החיים צריכים להיות מסופקים מקור חיצוני של חום בכל ההליך כהיפותרמיה הוא דאגה עיקרית בגרימת הפרעות בויסות החום במהלך הרדמה. לאחר ניתוח, בעלי החיים צריכים להיות במעקב לכל סימנים של אי נוחות או כאב שבצריך להינתן טיפול מתאים נקודה. אם העכבר אינו מסוגל להתאושש מהניתוח, זה צריך להיות מורדמים אנושי.כגרורות סרטן היא הסיבה העיקרית לתמותה מסרטן, זה הוא חיוני כדי להתוות את מנגנוני הפצת hematogenous 2-4. תאי גידול במחזור הרומן הוקמו ממודל זה orthotopic syngeneic עכבר של HCC גרורות 3. יתר על כן, CTCs נגזר ממודל זה באופן עקבי מראה עליית ייזום גידול ויכולת גרורתי 3. תאי גידול במחזור המבודדים באמצעות שיטה זו עשויים להיות חשוב מאוד ויעזרו לנו לפענח גורמים ספציפיים מולקולריים, סמנים ומטרות טיפוליות אפשריות של גרורות סרטן 2-4. מתודולוגיה זו כבר זיהתה שיש עלייה בגברת ביטוי של גורם גדילת hepatocyte (HGF) וקולטה, ג-Met בתאי גידול במחזור בהשוואה לתאי גידול הראשוני של HCC 3. תוצאות אלו לבנות על העבודה קודמת הוכחה כי היבט חשוב של גרורות סרטניים הוא התהליך הסלולרי של מעבר אפיתל- mesenchymal 2-4,10. תאי גידול נוספים במחזור אפיון באמצעות מודל חדשני זה יהיה להגביר את ההבנה של המנגנונים המורכבים של גורמים המקדמים את התהליך ובכך מוביל להתפתחות של ניהול יעיל יותר של HCC 1-3,10.
נכון לעכשיו, דגמי הגידול של בעלי החיים הנפוצים ביותר הם דגמי גידול xenograft עכבר שבו תאים סרטניים אנושיים מושתלים לעכברים חסרים חיסוניים. יש המודל שתואר במאמר זה יתרונות חשובים כי זה syngeneic והוא, לכן, מתאים ללימוד תפקידה של מערכת החיסון בגידול גרורות 3. מודל זה הוכיח את עצמו מאוד לשחזור לבידוד, culturing, ולומדים מתאי גידול במחזור קיימא 3. זה, ולכן, יש tremenפוטנציאל dous להערכת יישומים קליניים כמו הקרנה, אבחון, נבוי, ניטור טיפול וגילוי אסטרטגיות טיפוליות חדשניות. הגבלה של המתודולוגיה שתוארה לעיל היא שחלק משמעותי של תאי HCC עכבר A.7R.1 BNL 1ME מושתל לתוך העכברים יהיה מסוגל לשרוד ובכך רק חלק קטן מהתאים יהיה בת-קיימא ומיומן בהחדרת גידולים ב אתרים משניים 3. אנו מהווים מגבלה זו על ידי השתלה ראשונית של 5 × 10 6 תאי HCC עכבר BNL 1ME A.7R.1 לכל עכבר.
לסיכום, מודל זה orthotopic syngeneic עכבר של סרטן גרורתי איבר מוצק מספק פלטפורמה טובה להבהרת המנגנונים הביולוגיים העומדים בבסיס היכולת גרורתי תאים סרטניים במחזור בדמם של חולי סרטן 3. זה בתורו צפוי לשפוך תובנות רומן לתוך המנגנונים של גרורות סרטן בגלל גרורות הסרטן מתרחשת בעיקר באמצעות Hematogenous להפיץ 11-13. תובנות רומן זכו לכך במנגנונים של גרורות הסרטן תהיה קריטיות לפיתוח של יישומים קליניים מועילים רומן 3,14,15.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Micro Dissecting Tweezer | Roboz | (RS-5040) | Tip 0.20 x 0.12 mm |
| Graefe Micro Dissecting Forceps, serrated curved tip | Roboz | (RS-5111) | 1 X 2 teeth, curved tip width 0.6 mm |
| Micro Dissecting Retractor-Agricola (3 by 3 prongs) | Roboz | (RS-6501) | Blunt 3 X 3 prongs, depth 4 mm, spread 25 mm |
| Micro Dissecting Retractor-Goldstein (3 by 3 prongs) | Roboz | (RS-6503) | Blunt, 3 X 3 prongs, depth 4 mm, spread 19 mm |
| Jameson Caliper (Measures tumors) | Roboz | (RS-6466) | 80 mm/3 inch scale, chrome plated |
| Micro Dissecting Scissors, large ring sissors, straight and sharp | Roboz | (RS-5852) | 23 mm blades, length 4 inches, flat shanks and large rings |
| Scalpel with blades, for delicate dissecting procedures | Roboz | (RS-9861-36) | |
| Scalpel handle | Roboz | (RS-9884) | Solid |
| Littauer Stitch Sissors | Roboz | (RS-7074) | Length 4.5 inches |
| Brown needle holder, for easy suture tying | Roboz | (RS-7960) | Convex jaw, fine serrations |
| Reflex 7MM wound clips with reflex 7 clip applier | Roboz | (RS-9262) | safe, secure alternative method of wound closure |
| Instrument tray and lid | Roboz | RT-1350S | |
| Mini-clipper with detachable blade | Roboz | (RS-5903) | |
| Germinator 500 (the Germ Terminator) Dry Sterilizer | Roboz | Ds-400, Ds-401, DS-501 | For fast decontamination of micro-dissecting instruments. Instruments decontaminate within 15 sec. |
| Microinjection needles | VWR | BD305125 | 25G Needle |
References
- Sheng, W., et al. Capture, release and culture of circulating tumor cells from pancreatic cancer patients using an enhanced mixing chip. Lab on a Chip. 14, 89-98 (2014).
- Ogunwobi, O. O., Liu, C. Therapeutic and prognostic importance of epithelial-mesenchymal transition in liver cancers: insights from experimental models. Critical Reviews in Oncology/Hematology. 83, 319-328 (2012).
- Ogunwobi, O. O., Puszyk, W., Dong, H. J., Liu, C. Epigenetic upregulation of HGF and c-Met drives metastasis in hepatocellular carcinoma. PloS One. 8, e63765 (2013).
- Ogunwobi, O. O., Liu, C. Hepatocyte growth factor upregulation promotes carcinogenesis and epithelial-mesenchymal transition in hepatocellular carcinoma via Akt and COX-2 pathways. Clinical and Experimental Metastasis. 28, 721-731 (2011).
- Fujiwara, S., et al. A novel animal model for in vivo study of liver cancer metastasis. World Journal of Gastroenterology : WJG. 18, 3875-3882 (2012).
- Wirtz, D., Konstantopoulos, K., Searson, P. C. The physics of cancer: the role of physical interactions and mechanical forces in metastasis. Nature Reviews Cancer. 11, 512-522 (2011).
- Heindryckx, F., Colle, I., Van Vlierberghe, H. Experimental mouse models for hepatocellular carcinoma research. International Journal of Experimental Pathology. 90, 367-386 (2009).
- Zhang, L., et al. An in vivo mouse model of metastatic human thyroid cancer. Thyroid Official Journal of the American Thyroid Association. 24, 695-704 (2014).
- Menezes, M. E., et al. Genetically engineered mice as experimental tools to dissect the critical events in breast cancer. Advances in Cancer Research. 121, 331-382 (2014).
- Ogunwobi, O. O., Wang, T., Zhang, L., Liu, C. Cyclooxygenase-2 and Akt mediate multiple growth-factor-induced epithelial-mesenchymal transition in human hepatocellular carcinoma. Journal of Gastroenterology and Hepatology. 27, 566-578 (2012).
- Hanahan, D., Weinberg, R. A. The hallmarks of cancer. Cell. 100, 57-70 (2000).
- Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites. Nature Reviews Cancer. 2, 563-572 (2002).
- Kim, M. Y., et al. Tumor self-seeding by circulating cancer cells. Cell. 139, 1315-1326 (2009).
- Stolpe, A., Pantel, K., Sleijfer, S., Terstappen, L. W., den Toonder, J. M. Circulating tumor cell isolation and diagnostics: toward routine clinical use. Cancer Research. 71, 5955-5960 (2011).
- Saad, F., Pantel, K. The current role of circulating tumor cells in the diagnosis and management of bone metastases in advanced prostate cancer. Future Oncology. 8, 321-331 (2012).
