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Neuroscience

Denver Protocole Papilles pour analyse objective des papilles fongiformes

doi: 10.3791/52860 Published: June 8, 2015

Summary

Ici, nous présentons un protocole pour mesurer la densité de la papille fongiformes à partir de photographies numériques. Cette méthode construit des priorités et des mesures caractéristiques objectives dans le travail descriptif original sur fongiformes papilles par Miller & Reedy (1990).

Abstract

L'objectif du Protocole de Papilles Denver est d'utiliser une clé dichotomique pour définir et prioriser les caractéristiques des papilles fongiformes (FP) pour assurer notation cohérente entre les correcteurs. Ce protocole table sur un besoin qui a surgi dans les deux dernières décennies de recherche de goût en utilisant FP comme un proxy pour la densité goût des pores. Densité FP a historiquement été analysées en utilisant 1990 caractérisations de Miller & Reedy de leur morphologie: rond, taché plus léger, grande et élevée. Dans ce travail, les auteurs ont prévenu que les définitions plus strictes de FP morphologie nécessaire pour être exposées. Malgré cet appel à l'action, de la littérature suivi ont été rares, la plupart des études poursuivies à citer le travail original de Miller & Reedy. Par conséquent, les rapports de densité PF ont été très variable et, combiné avec de petits échantillons, peut contribuer à des conclusions divergentes sur le rôle de la PF dans la sensibilité gustative. La génétique du Goût Lab exploré cette apparente inconcohérence dans le comptage et a constaté que les buteurs ont été individuellement priorisent l'importance de ces caractéristiques différemment et avait aucune indication pour quand une papille avait certains, mais pas tous, des qualités signalés de FP. Le résultat de cette subjectivité est comptages FP très variables de la même image de la langue. Le Protocole Papilles Denver a été développé pour remédier à cette conséquence par l'utilisation d'une clé dichotomique qui définit plus précisément et hiérarchise l'importance des caractéristiques mises en avant par Miller & Reedy. La méthode proposée pourrait aider à créer un moyen standard pour quantifier FP pour les chercheurs dans le domaine du goût et des études nutritionnelles.

Introduction

Papilles sont les bosses visibles sur la surface de la langue. Il existe quatre types de papilles fongiformes: (FP), feuillages, caliciformes, et filiforme. Alors que papilles filiformes sont répartis sur la surface de la langue, caliciformes sont localisés uniquement sur le dos de la langue, et de feuillages se trouvent sur les côtés. En revanche, FP sont situés vers l'avant de la languette. FP, de feuillage et papilles caliciformes sont considérés gustative car ils ont le potentiel de contenir des papilles filiformes tout en ne le font pas. Les papilles gustatives sont des grappes de cellules responsables de la détection tastants chimiques et la transduction des stimuli en un signal gustatif dans le cerveau. molécules de salive et alimentaires entrent dans les papilles à travers les ouvertures appelés pores de goût où les molécules gustatives ont alors le potentiel d'activer des cellules gustatives.

Fait intéressant, il ya de grandes différences individuelles dans la densité des papilles, en tant que premier observée dans une étude histologique des languesà partir de 18 cadavres (Miller, 1988) 1. Les papilles gustatives se sont pas visibles sur la surface de la langue, cependant, pores gustatifs sont visibles lors de l'utilisation des techniques de grossissement, l'éclairage, et de coloration appropriées qui ont conduit Miller & Reedy (1990) de développer une méthode pour identifier les pores de goût et papilles fongiformes utilisant vidéomicroscopie dans la vie êtres humains 2. Un certain nombre de laboratoires ont modifié leur technique de vidéomicroscopie originale, utilisant la photographie encore et peu ou pas d'agrandissement. Cependant, depuis papilles fongiformes sont beaucoup plus faciles à visualiser que sont les pores en utilisant ces dernières techniques, les laboratoires se sont tournés vers compter papilles fongiformes en place des pores de goût. Ce faisant, il est supposé que la densité de la papille fongiformes est une mesure de remplacement raisonnable pour la densité goût des pores, même si beaucoup papilles fongiformes ne contiennent pas les pores de goût ou bourgeons 3; non seulement sont FP plus visible et plus accessible que caliciformes et les papilles foliées, mais leur capture d'image est moins time consumer que l'analyse goût des pores par la méthode alternative de vidéomicroscopie 2,4. En 1990, Miller & Reedy utilisé cette technique pour trouver ce goût densités de pores sont corrélés avec FP densités 3 qui a été corroboré dans Bartoshuk et al. 5 En plus de cette relation anatomique, Miller & Reedy ont également constaté que les 8 individus dans la partie supérieure moitié de la distribution de densité de pores de goût également vu attribuer le saccharose, le NaCl, et le propylthiouracile (PROP) comme significativement plus intense que l'ont fait les 8 autres personnes 3. Des travaux ultérieurs par Bartoshuk et al. (1994) a observé une corrélation entre supraliminaire intensité du goût de PROP et la densité de la papille fongiformes, ainsi que la densité goût des pores, dans 42 sujets 5. Cette méthode pratique conduit à des études influentes déclaré que les sujets dont les langues ont beaucoup papilles provoquent une réaction plus forte à de nombreuses substances sapides, y compris le tastants amère phenylthiocarbamide (PTC) et PROP 6,7.

PTC et PROP sont sapides bien documentés souvent utilisés en raison du lien évident entre la sensibilité gustative le phénotype d'une personne et leur génotype. Les études de population ont montré que les personnes qui ont le diplotype homozygote récessif du gène, TAS2R38, ont une sensibilité significativement plus faible pour soutenir que les transporteurs de la variante dominante ou hétérozygote du gène 8-10. Ce phénomène héréditaire a été signalée en 1932 quand Arthur L. Fox a annoncé sa découverte de «cécité du goût" à PTC 11. Parmi les personnes capables de goûter ces composés amers, l'intensité du goût rapporté peut varier de légèrement désagréable à atrocement amer 6. Pour tenir compte de la variance qui ne peut être expliquée par TAS2R38, la théorie a été mis en avant qu'il pourrait être attribuée à la densité de la PF sur la langue 4.

Comme la recherche du goût progressait, l'field a été divisé en deux écoles de pensée autour de cette théorie concernant le rôle de la PF et la sensibilité de goût amer. Bien que de nombreuses études ont corroboré la demande initiale que la densité FP est un facteur dans PROP sensibilités 4,6,12,13, il ya eu une petite, mais importante délégation qui a trouvé des preuves pour réfuter, déclarer une incapacité à répliquer le rôle 10, 14,15,16. Delwiche et al. (2001) a mis en garde que la tendance est très variable; Densité FP ne compte pas uniformément des différences de sensibilité de l'amertume dans toutes les disciplines, et était seulement démontrable pour les sujets avec au moins une sensibilité modérée à 7 Prop. En plus de l'utilisation de la méthode Miller & Reedy moins rigoureusement défini sur la façon de quantifier FP, il est important de noter qu'à l'exception de la Beaver Dam Offspring Study 15 menée par Fischer et al., La plupart de ces études avaient petit échantillon tailles qui peuvent également contribuer à des conclusions contradictoires surle rôle de la PF dans le goût.

En bref, dans Miller & Reedy de document de méthodologie séminal (1990), les auteurs colorées des langues bleues à quantifier parce FP FP rester rose tout papilles filiformes absorbent le colorant et deviennent bleus. Ils ont classé comme «FP structures roses arrondis d'environ 0,5 mm de diamètre" 2. Bien que les auteurs informés que avant d'utiliser cette méthode pour la poursuite des travaux d'analyse, les caractéristiques de PF devraient être plus strictement définies et ont conclu que la variation déjà noté dans la littérature "pourrait être attribuable aux populations de sujets différents, différentes méthodes et différents chercheurs» 2, leur recherche a conduit à des caractéristiques communément acceptées que FP sont ronds 17,18, grand 2, rose ou teinté léger 2, et élevé 4. Pris à leur valeur nominale, ces caractéristiques semblent très simple. Dans les Génétique du Goût Lab (GoT Lab ou Lab), l'utilisation de l'rencontréhod a été compliquée par des tentatives individuelles des buteurs à qualification et de hiérarchiser l'importance des caractéristiques ci-dessus lorsque certains, mais pas tous, les caractéristiques étaient présents. Ces complications incluses petites papilles qui semblait rose au milieu de beaucoup plus grande papilles; l'ensemble absorbant le colorant bleu éliminant ainsi classification basée sur la variation de couleur langue; papilles oblongue au lieu de ronde; et les langues ayant aucune variation d'altitude, qui a contribué à buteurs déclaré chiffres PF largement variées de la même image.

Ces variations dans l'analyse nous a conduit à revoir la littérature afin d'identifier la subjectivité, d'identifier les exceptions aux caractéristiques PF communément acceptées et finalement élaborer un protocole pour définir avec précision et objectivité et de marquer des FP.

Tout d'abord, la forme FP est décrit dans la littérature comme une forme arrondie, champignon comme la structure 17,18. Cependant, à l'exception notableions ont également été mentionnés. Miller a souligné que le terme "fungiform" est un terme impropre et que beaucoup ne sont pas FP-forme de champignon, mais peut varier considérablement en taille et la morphologie 18. Melis et al. (2013) décrit également plusieurs papilles qui ont été considérés comme «déformée», où le diamètre FP dans une direction était au moins deux écarts-types plus longtemps que dans une autre direction 19. En outre, Cheng et Robinson ont constaté que lorsque indiquant FP par coloration, ils allaient de sommet plat allongé à 20 en apparence. Notant les exceptions ci-dessus, la caractérisation d'un FP étant rond et apparaît en forme de champignon une définition trop étroite.

Deuxièmement, la couleur FP est décrit comme "cercles roses sur fond bleu" 7 après coloration la langue avec un colorant bleu. Bien que la coloration plus légère était le critère le plus cohérent de FP à travers la littérature, il était toujours pas un qualificatif uniforme. Cheng & ; Robinson a observé que FP ne sont pas toujours légèrement maculé, rendant l'identification difficile et incertain 20. Il apparaît alors que les langues absorbent colorant différemment et tandis que le contraste est apparent sur ​​de nombreuses langues, certains deviennent entièrement bleue sans distinction tandis que d'autres perdent immédiatement toute trace de colorant bleu 21.

La troisième caractéristique, la taille FP, était assez uniforme parmi les papiers, allant de 0,5 mm à 0,97 mm 6,18. Dans la littérature Miller a noté qu'il y avait deux plages de tailles de papilles sur la partie antérieure de la dorsale de la langue. Les papilles avec des diamètres plus grands sont principalement papilles fongiformes et conique, tandis que les papilles de plus petit diamètre sont principalement filiforme 18. Cependant, à l'exception de la Beaver Dam Offspring Study 21, la taille ne semble pas pour déterminer si une structure est un FP dans la littérature, mais a été fourni pour les papilles déjà classé comme "fungiform".

_content "> Enfin, l'élévation est répertorié comme la quatrième caractéristique FP 4 si Miller a souligné que la distinction entre filiformes et fongiformes papilles est difficile lorsque l'aide des critères près de la marge de la langue. Il a donné deux exemples de FP qui varient grandement en élévation, l'un étant de 0,8 mm de hauteur, tandis qu'un autre était inférieure à 0,1 mm de hauteur, mais avait encore deux pores de goût qui ont été clairement observés 18. Cette observation a également été suivie et confirmée par Shahbake et al. 4

Ces définitions et leurs exceptions signalées montrent que le champ de goût a depuis longtemps reconnu l'incohérence dans la caractérisation de la PF et les lacunes du protocole couramment utilisé de Miller & Reedy. En effet, Miller & Reedy exhorté le terrain pour définir les caractéristiques de FP 2. Nous avons supposé que les buteurs donnaient un poids différent à des caractéristiques et de hiérarchiser leur importance différemment quand papillae n'a pas réussi à répondre à tous les critères, comme quand une papille était grande et en forme de champignon, mais teinté bleu. Il a été estimé que les enquêteurs des études publiées antérieurement probablement fait la même qui, lorsqu'il est combiné avec de petits échantillons, peut expliquer les résultats variés provenant de l'utilisation de cette méthode.

Le GoT Lab adressée cette lacune dans la méthodologie FP en développant une ligne directrice qui définit chaque caractéristique en utilisant des mesures objectives et priorise les caractéristiques pour indiquer qui prévaut dans l'analyse. Cette méthode est le Protocole de Denver Papilles (DPP), une clé dichotomique avec des caractéristiques claires et distinctes de FP pour assurer des comptages précis et reproductibles à partir de photographies numériques de la langue. DPP est une méthode proposée pour normaliser la Miller & Reedy méthode précédemment utilisée, éliminant ainsi l'interprétation individuelle et d'assurer des résultats plus cohérents lors de l'analyse de la densité FP. Ce faisant, DPP peut être utilisé pour plus d'assurance déterminer le rôle de la PF dans le goût.

Les images prises de la langue des sujets ont été analysés par les scientifiques citoyens (de buteurs) de l'Atelier qui sont les véritables sujets de cette étude. Le noyau du laboratoire de scientifiques citoyens est composé de membres de la communauté dont l'âge (en années) de 16 à milieu des années 80. Un rapport d'évaluation sommative commandée par le Musée en 2012 décrit les citoyens scientifiques comme ayant un fort intérêt pour la science et les deux tiers ayant obtenu un diplôme d'études collégiales dans une discipline scientifique 22. citoyens scientifiques du candidat sont actuellement recrutés par le bouche à oreille, doivent compléter avec succès un processus d'entrevue avec les anciens combattants bénévoles du Musée, et se soumettre à une période d'essai dans l'exposition de la santé permanente du Musée, Expedition Santé, avant qu'ils aient la possibilité de postuler pour un poste dans Lab. Une fois accepté dans le laboratoire, les scientifiques de citoyens subissent une formation de 12 semaines pour devenir certifié pour inscrire sujet humains. Suite à cette certification, ils sont capables de suivre des modules de formation sur les différentes techniques dans le laboratoire (par exemple de comptage de papilles, l'extraction d'ADN) et suivants certifications supplémentaires et des mesures régulières de contrôle de la qualité, ces scientifiques citoyens ont la possibilité de participer activement à l'analyse des données. Les scientifiques citoyens donnent de leur temps et ne sont pas rémunérés pour leurs contributions au Musée.

Protocol

Les images marqués dans cette étude ont été recueillies dans le cadre d'une étude de plus grande goût menée sur la génétique du Goût Lab au Denver Museum of Nature & Science (le Musée) 10. Sujets de la plus grande étude étaient les visiteurs du musée (n = 1 195) âgés de 18 à 93. Bien que les sujets sont venus de six des sept continents, les participants étaient principalement d'origine européenne. Les données de chaque sujet a été recueilli en une seule session de laboratoire de 30 min. Le Western Institutional Review Board a approuvé le protocole, le consentement éclairé écrit a été donné, et les sujets ont donné de leur temps et ne sont pas rémunérés pour leur participation à l'étude.

1. Collecte de données

  1. Capture d'image
    1. Afficher soumet une photo de la façon de se poser (Figure 1) et ce que l'image capturée va ressembler.
      Figure 1 Figure 1: Image Capture Pose.
    2. Sujets directs sécher leur langue avec un papier essuie-mains et laissent langue tirée de leurs bouches.
    3. Appliquer environ 3 ml de colorant alimentaire bleu à une concentration 1:36 au sommet de la langue en utilisant un, rayonne applicateur stérile avec une pointe de 1 pouce. Ont sujets reviennent langue à leur bouche et avaler pour éliminer l'excès de colorant.
    4. Avoir sujets se posent comme le montre la figure 1, avec leur menton sur les mains et les coudes calés sur une table pour la stabilité. Sujets directs pour étendre leur langue une distance confortable et fixez-le doucement entre leurs dents.
    5. Adhérer un morceau de 2,5 cm de papier filtre d'un diamètre de 10 mm découpe circulaire percé dans à la pointe de la partie antérieure de la partie gauche de la langue à côté de la ligne médiane (voir Figure 1).
    6. Prenez au moins trois images en gros plan de la langue, capturing l'ensemble de 10 mm découpe circulaire pour assurer la visualisation de tous les FP dans cette zone. Utilisez le réglage macro d'un point et shoot appareil photo numérique de haute qualité sur un trépied pour plus de stabilité.
      1. Zoomez dans la mesure où l'ensemble de découpe est photographié tout en restant dans la plage de zoom recommandée de la caméra. Assurez-vous que le plan de la lentille de la caméra est parallèle au plan de la languette et en ce que la découpe circulaire apparaît dans l'image au lieu de rectangulaire. Revoir les photos pour vous assurer qu'ils sont de haute qualité et utile pour compter.
  2. Photo Sélection et Préparation
    1. Téléchargez les photos sur l'ordinateur.
    2. Sur les images prises de la langue du même sujet, choisir un seul pour une analyse approfondie basée sur une définition claire entre les structures sur la langue au plus haut zoom et l'angle moins déformée, la langue est large et plat vers la caméra.
    3. Ouvrez l'image brute sélectionné dans l'open source afinftware, ImageJ. Cliquez sur "Plugins" et dans le menu déroulant défilement pour "Analyser" et cliquez sur "compteur de cellules." Lorsque le compteur de cellules ouvre, cliquez sur "Initialisation" de lier l'image à la compteur de cellules.
      Remarque: Ici, utiliser ImageJ 1.45 sec avec 32-bit version Java 1.6.0_10.
      1. Utilisez un grossissement standard de 50% de la cohérence entre les correcteurs et pour une utilisation dans des étapes ultérieures de marquer FP. Déplacer cette image sur le côté gauche de l'écran à côté du compteur de cellules. Cette image sera appelée Copie A (voir la figure 2, côté gauche de l'écran).
  3. Ouvrez une deuxième copie de l'image brute (copie de B) pour mesurer les diamètres des papilles est quantifiée. Zoom avant et arrière selon les besoins pour la préférence du buteur individu tout au long du processus de notation. Déplacez cette copie sur le côté droit de l'écran de sorte que les deux copies ne sont pas accidentellement confus. (Voir Figure 2, côté droit deécran)
  4. Cliquez sur l'outil de ligne. Utilisation de la copie B, zoom autant que nécessaire d'établir avec précision un diamètre à travers le cercle de 10 mm interne du papier filtre à tout angle et cliquez sur "Analyser" et "régler l'échelle." Remplissez le "Distance connu« être »10 . "Vérifiez l'échelle est correcte en mesurant un autre angle et de veiller à la plage de diamètre est compris entre 9.8 à 10.2 mm. Si il est pas, répétez cette étape.

Figure 2
Figure 2: Copie A et B. Copie Copie A (à gauche) est liée à la fenêtre de compteur de cellules et reste à 50% grossissement pour la cohérence de buteur au buteur tandis que la copie B (à droite) peut être agrandie à la préférence de l'individu.

2. Utilisation de la notation FP Protocole dichotomique Key Denver Papilles

  1. Pour chaque candidat papillomela, utilisez la clé dichotomique suivante (étape 2,2-2,5) détaillant les critères pour déterminer si elle est un FP. Reportez-vous à la figure 3 pour un visuel de papilles qui sont classés comme FP et pour ceux qui sont rejetés à chaque étape du processus.
    Figure 3 Figure 3: FP vs Rejeté papilles. Figure 3a est une langue avec plusieurs qualifications FP tandis 3b-3e ont encerclé les zones qui violent chaque règle. (3b) zone est amorphe; (3c) papilles sont trop petites; 3d) papille est bleu par rapport à ceux qui l'entourent, (3e) papille est en retrait par rapport à ceux qui l'entourent.
  2. Forme
    1. Déterminer si la papille candidat est amorphe (informe). A 50% zoom voir si il ya une forme géométrique généralement reconnue (ovale, de forme parallélépipédique, rond).
    2. Si il est une forme géométrique (voir Figure 3a), passer à l'étape 2.3.
    3. Si there est sans forme géométrique (voir Figure 3b), allez à la fenêtre de compteur de cellules et cliquez sur "Type 1." Sur exemplaire A (50% zoom), cliquez sur la papille candidat pour le marquer comme amorphe et pas un FP. En cliquant sur les types 1-4 dans ce et les étapes ultérieures permet buteurs sachent qu'ils ont abordé toutes les papilles de candidat et catégorise la règle qui a été violé lorsque le rejet d'une structure qui facilitera la discussion à l'étape 2.7.2.
  3. Couleur
    1. Reportez-vous à copier A à 50% de zoom et de déterminer si il ya une différenciation de couleur sur la surface de la langue. Si oui, passez à la suivante 2.3.2. Si non, ne pas utiliser la couleur comme un facteur déterminant; passer à l'étape 2.4.
    2. Déterminer si la papille candidat est plus léger que le tissu qui l'entoure ou papilles (voir la figure 3a). Si une partie de la papille candidat est resté rose ou teinté léger, passer à l'étape 2.4.
    3. Si la papille candidat est bleu et les papilles environnantes sontplus léger (voir figure 3c), aller à la fenêtre de compteur de cellules et cliquez sur "Type 2" sur le compteur de cellules. Sur la copie A, cliquez sur le candidat pour marquer comme trop bleu et pas un FP.
  4. Taille
    1. Utilisation de la copie B, un zoom sur la distance où l'on peut confortablement voir le contour de la papille candidat.
    2. Cliquez sur l'outil de ligne et mesurez à travers la plus grande dimension de la papille candidat. Cliquez sur "Analyser" et "mesure". Si la longueur mesurée est de 0,5 mm ou plus (voir Figure 3a), passer à l'étape 2.5.
    3. Si la longueur mesurée est de 0,499 mm ou moins, de mesurer une fois de plus pour assurer l'exactitude. Si elle est toujours 0,499 mm ou moins (voir F igure 3d), cliquez sur "Type 3" sur la fenêtre de compteur de cellules et sur ​​la copie A, cliquez sur la papille candidat pour le marquer comme trop petite et pas un FP.
  5. Récession
    1. Utilisation de copie A, d'évaluer si la papille candidat est soit uniforme qu'ilight avec le reste de la langue ou élevée. Si la papille se trouve dans une crevasse, déterminer sa hauteur par rapport aux autres structures dans la fente, et non la surface de la langue. Si la papille est plus faible que les papilles qui l'entoure (voir Figure 3e), utiliser "Type 4" et sur ​​la copie A, cliquez sur la papille candidat pour le marquer comme en retrait et non pas un FP.
    2. Si la papille candidat est soit de taille uniforme avec le reste de la langue ou élevé (voir Figure 3a), utiliser "Type 5" à cliquer dessus et de marquer que cette est un FP. Ce type 5 total est le score brut FP. Ne fermez pas les copies à ce stade que ImageJ ne sauvegarde pas les scores sur le compteur de cellules, ni les marques colorées de types 1-5 sur la copie A.
  6. Saving Copie A
    1. Notez dans le cahier premières notes FP.
    2. Sur la fenêtre de compteur de cellules, cliquez sur "Exporter l'image." Enregistrer avec le système de nommage souhaitée du laboratoire. Cela permettra à l'ouverture de flicA y à l'avenir de conserver les marques colorées de types 1-5. Il ne sera pas enregistrer le score brut FP.
  7. Contrôle de la qualité
    1. Note chaque photo en deux buteurs individuels et comparez 7.
    2. Si le supérieur FP score brut est à moins de 10% de la plus faible FP score brut, la moyenne des deux notes ensemble pour un score consensus de FP. Si les deux scores bruts PF diffèrent de plus de 10%, tirez les deux marqués les photos sur l'écran.
      1. Utilisez types de compteurs 1-4 pour aider à la discussion concernant les divergences et de conférer à un score final de consensus. Si aucun consensus ne peut être atteint au cours de la discussion, prendre une pause de notation. À un stade ultérieur, de noter à nouveau l'image et de discuter. Si un consensus ne peut toujours pas être atteint, tirez dans une troisième meilleur buteur. Demandez-leur de marquer l'image et le dialogue avec les deux autres.

3. Buteurs formation pour utiliser DPP

  1. Contexte sur la formation
    1. Avoir deux buteurs compter une variété d'images,marquant individuellement et conférant régulièrement pour assurer qu'ils utilisent les mêmes critères. Seulement lorsque les numérations individuelles étaient toujours dans les 10% de l'autre pour chaque des images lorsque marqué était la méthode (finalisé ci-dessus) considéré comme acceptable et appelé DPP.
    2. Choisissez 15 images officielles et 15 images de formation (Figures supplémentaire 2-17) dans un ordre séquentiel de marquer. Si une image a été jugé non dénombrable lors de la sélection, passez l'image et choisissez prochaine image séquentielle.
      Remarque: Ces images varient en qualité et la taille comme ils ont été choisis tandis que le laboratoire était encore maîtrise de la technique de la photographie correcte. Une des images sélectionnées a été jugée non dénombrable à travers ce processus de comptage primaire, mais a été laissé pour veiller à ce que les buteurs étaient en mesure de faire cet appel en cas de besoin. Il ya donc 16 images données aux stagiaires mais seulement 15 ont marqué images.
    3. Utilisation de DPP, les buteurs ont mentionnés ci-dessus compter les 15 images de formation et de créer un consensusmarquer pour chacun.
    4. Donnez stagiaires les 15 images officielles et demander de marquer à l'aide Miller & Reedy pour créer une base de référence. scores record. Mener une formation de groupe qui a suivi l'étape 3.2. Une fois l'étape 3.2 a été achevée, avoir les buteurs marquent les 15 images officielles de nouveau et d'enregistrer leurs scores.
  2. Formation Buteurs ultérieures sur DPP
    1. Donnez buteurs de formation de la première image de la formation et de démontrer DPP pour quelques papilles sur cette image. Discutez raisonnement pour sélectionner ou de rejeter chaque papille comme un FP. Permettre aux stagiaires de continuer à pratiquer le ballon pour le reste de cette photo et confèrent avec le numéro de consensus (pour le numéro de consensus du GoT Lab et le type 1-5 marqueurs, voir Figure 1 supplémentaire). Pour cette photo de discuter des divergences indépendamment des 10% pour assurer la compréhension de la DPP.
    2. Donnez buteurs ultérieures la seconde image de la formation et de les marquer à l'aide DPP.
    3. Si le stagiaire premières notes FP est dans les dixpour cent du consensus établi compter de la section 3.1.3., stagiaire permet de passer à l'image suivante et répétez les étapes.
    4. Si le score est hors de la plage de dix pour cent, utiliser les marques du stagiaire colorés représentant des types 1-5 pour comprendre et identifier l'incohérence et ensuite aborder la compréhension discordants de la DPP.
    5. Donnez le stagiaire l'occasion de noter de nouveau l'image et vérifier la nouvelle partition une fois de plus. En cas de succès, stagiaire se déplace sur l'image suivante jusqu'à ce que toutes les images sont terminées.

Representative Results

Voici une photographie représentative marqué par deux buteurs individuels lors de l'utilisation de la méthodologie Miller & Reedy couramment utilisé pour l'identification FP sur la base des normes sur le terrain de ronde, grande, rose ou teint plus léger, et élevée, puis la même photographie marqué par deux buteurs utilisant DPP. Les chiffres présentés sont représentatifs de la variance élevée observée en utilisant la méthode originale par rapport à la variance inférieure en utilisant DPP.

Figure 4

Figure 4:. Miller & Reedy quantification vs DPP Quantification L'image sur la gauche est représentatif des comtes de deux buteurs en utilisant la méthode Miller & Reedy. L'image sur la droite représente deux chefs 'buteurs utilisant DPP. Rouge est buteur 1, Jaune est buteur 2, Green est buteurs 1 & 2.

La fiabilité statistique de DPP a déjà été étudié en utilisant un modèle linéaire mixte pour évaluer la variabilité 10. En bref, pour générer des données pour évaluer le rôle DPP joue dans la cohérence des scores, les images ont été quinze marqué deux fois. Dans le premier lot de scores, DPP buteurs naïfs utilisés Miller & Reedy la méthode 2. Les buteurs ont ensuite été formés pour utiliser DPP et les images ont été réévaluées individuellement sans l'étape de consensus final décrit à la section 2.7 détaillant de contrôle de la qualité (Figure 5). L'ensemble de données de score FP a ensuite été utilisé dans le modèle mixte pour évaluer les différences combinées de protocole (Figure 6), la variabilité intra-marque et l'interaction entre les deux. Ce modèle a montré une différence significative dans le ballon pour l'utilisation de la méthode de Miller et Reedy rapport à DPP (valeur p <1 x 10 -6) avec DPP qui conduit à un nombre plus élevé de 6,99 (ET = 0,99); 5,2% de la variabilité dans le score était due à la formation, de 25,9% en raison de buteur, et le restant dûà la variabilité spécifique à l'image 10. Ensuite, pour générer des données pour déterminer la variabilité intra-buteur, une série de trente images dans un ordre aléatoire ont été marqués par 11 personnes. À l'insu de buteurs, cette série d'images inclus trois images qui ont été répétées. Nous avons observé une différence radicale dans le score variabilité comparant des images distinctes versusrepeated images.

Figure 5
Figure 5:. DPP-Naïve vs Poster DPP Formation panneaux fournissent boxplots de partitions des voyageurs pour 15 images pré et post formation Denver Protocole papilles. Pour chaque boîte à moustaches, un rempli dans le cercle indique la moyenne alors un cercle ouvert indiquer une valeur aberrante.

Figure 6
Figure 6:. Changement de buteur Variance Le gris représente til variance pour buteurs individuels préalables à la formation DPP. Le noir est le même poste de buteur formation DPP.

Discussion

Utilisation DPP, la variance au sein d'image compte dans buteurs indépendants et les chefs de l'intérieur-buteur diminué de manière significative. Bien que cette méthode permet l'analyse visuelle de la densité FP sans vidéomicroscopie moins subjective, il convient de noter que cette méthode ne scores FP. DPP ne peut garantir que les structures classées comme FP ont des pores de goût et sont donc les papilles gustatives, ni que les chiffres sont le reflet de la densité de bourgeon du goût réel 20,23 .La nature de cette méthode est qu'elle établit la fiabilité grâce à la cohérence et la précision; cependant, il peut être biaise des résultats dans une direction constante. Pour tester la précision par rapport à d'autres méthodes en utilisant une véritable mesure de la densité de bourgeon du goût (par exemple, vidéomicroscopie) irait au-delà de la portée de cette study.However, en caractérisant la morphologie de FP plus rigoureuse et la création d'une clé dichotomique, cette méthode traite Miller & la charge de Reedy au champ que plus caractérisation de FPqui doit être fait afin d'avoir un consensus sur leur morphologie et la quantification 2. En outre, ils ont indiqué que cette caractérisation pourrait «clarifier quelques-unes des différences entre les sujets et expliquer certains des résultats disparates entre les enquêteurs 2." En fournissant une méthode uniforme de quantification, beaucoup de divergences sur le rôle de la PF dans le goût et nutrition- recherche liée peut être rectifiée.

La clé dichotomique peut être ajusté pour les différentes techniques de capture d'image. La distance connue de l'échelle de mesure peut facilement être réglé au diamètre utilisé dans chaque laboratoire et de la récession peut être réduit si une pellicule ou en verre ont été placés sur la langue pour la capture d'image. Dans le GoT Lab, il a été constaté que la langue neutre fourni la meilleure définition de papilles. Cela peut être dû à la quantité de lumière dans le laboratoire qui a causé une pellicule saran ou en verre pour réfléchir la lumière dans l'appareil photo créant un regard qui fait ânessment difficile. Certains laboratoires ont dit qu'ils trouvent le colorant plus difficile de compter, mais le gouvernement tanzanien Lab trouvé un colorant alimentaire bleu dilué à une concentration de 1h36 à condition que le contraste idéal entre fongiformes papilles filiformes et sur la majorité des langues.

La création d'une clé dichotomique pour FP caractérisation permettra aux chercheurs de différents laboratoires, en utilisant une variété de méthodes de capture d'image, d'analyser systématiquement les structures sur la langue et avoir confiance dans la déclaration de leurs résultats. Enfin, l'utilisation d'une clé dichotomique peut avoir des objectifs dans d'autres domaines de la méthodologie scientifique où les qualités de structures ou objets sont incompatibles fournissent les numéros d'une étude à.

Disclosures

Les auteurs déclarent qu'ils ont aucun intérêt financier concurrentes.

Acknowledgments

Ce travail a été financé en partie par Science Award Education Partnership (SEPA) R25 RR025066 2008-2012 des Instituts nationaux de la santé et le National Center for Research Resources. Merci aux collègues dans le domaine de goût pour la discussion réfléchie de la littérature, de nos résultats et des commentaires sur l'utilisation de DPP dans divers scénarios de laboratoire: John Hayes, Sue Coldwell, Paul Breslin, Carla Schubert. Merci aussi au leadership au Denver Museum of Nature & Science et le personnel à l'appui de la science citoyenne dans les Génétique du Goût Lab au sein Expedition santé. Enfin, merci à tous nos citoyens scientifiques bénévoles pour leur temps et leur dévouement au développement et à l'utilisation de ce protocole, y compris: Ours Aragon, Mike Archer, Su Ataman, Michael Bagley, A'nette Bertrand, Diana Boyles, Wendy Covert, Sasha Dooley , Patty Drever, Jessica Ern, Laura Harmacek, Sean Hibbard, Joyce Hutchens, Matt Joo, Leta Keane, Willem Leenhouts, Stephania Lukjan, Ashley Matthews, Mike Mauser, Stephanie Miller, Hallie Morgan-Rodriguez, Griffin Scherma, Alyssa Schickedanz, Terri Simon, Dylan Thomas, Rudy Torres, Tyler Wilson, Diane Woltkamp.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Image J National Institutes of Health http://rsb.info.nih.gov/ij
Food dye, Deep Blue Shade Esco http://escofoods.com/blue-food-coloring.html
Sterile Rayon Tipped OB/GYN Applicators Puritan 25-808 1PR
Grade 1 Filter Paper Whatman Whatman No.: 1001-325
Coolpix P100 (10.3 megapixels) and P500 (12.1 megapixels) Nikon http://imaging.nikon.com/lineup/coolpix/ neither model appears to be available on the website any longer
Paper Hand Towels Kleenex https://www.kleenex.com/HandTowelsDetail.aspx

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References

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Denver Protocole Papilles pour analyse objective des papilles fongiformes
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Nuessle, T. M., Garneau, N. L., Sloan, M. M., Santorico, S. A. Denver Papillae Protocol for Objective Analysis of Fungiform Papillae. J. Vis. Exp. (100), e52860, doi:10.3791/52860 (2015).More

Nuessle, T. M., Garneau, N. L., Sloan, M. M., Santorico, S. A. Denver Papillae Protocol for Objective Analysis of Fungiform Papillae. J. Vis. Exp. (100), e52860, doi:10.3791/52860 (2015).

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