Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Neuroscience

Fungiform 용의자 객관적인 분석을위한 덴버 유두 프로토콜

doi: 10.3791/52860 Published: June 8, 2015

Summary

여기에서 우리는 디지털 사진에서 fungiform 유두 밀도를 측정하기위한 프로토콜을 제시한다. 이 방법은 밀러 & 리디 (1990)에 의해 fungiform 용의자의 원래 설명 작업에 우선 순위 및 목표 특성 통계를 작성합니다.

Abstract

덴버 유두 의정서의 목표는 득점 사이의 일관된 득점을 보장하기 위해 fungiform 용의자 (FP)의 특성을 정의하고 우선 순위를 이분법 키를 사용하는 것입니다. 이 프로토콜은 맛 기공 밀도 프록시로 FP를 사용하여 맛이 연구의 지난 20 년에서 생겨났다 필요 떨어져 구축합니다. 라운드 라이터, 큰, 그리고 높은 스테인드 : FP 밀도는 역사적으로 밀러 & 리디 1990 년 자신의 형태의 특성화를 사용하여 분석하고있다. 이 연구에서 저자들은 필요 FP 형태의 엄격한 정의가 설명 할 수 있음을 미리 경고. 행동이 호출에도 불구하고, 후속 문헌 밀러 & 리디의 오리지널 작품을 인용 계속 대부분의 연구로, 부족했다. 따라서, FP 밀도 리포트 맛 감도 FP의 역할에 일관 결론에 기여할 수 있고, 작은 크기의 샘플과 결합 된 매우 다양하고있다. 맛 연구소의 유전학이 명백한 incon을 탐구계수의 특성 레이아웃 및 FP의보고 자질의 전부는 아니지만, 득점 개별적으로 다르​​게 이러한 특성의 중요성을 우선 순위 사실을 발견하고 유두 일부를했을 때에 대한 지침이 없었다. 이 주관성의 결과는 동일한 설부 화상의 매우 가변적 FP 카운트이다. 덴버 유두 의정서는 더 정의하고 밀러 & 리디 내놓은 특성의 중요성을 우선 순위를하는 이분법 키의 사용을 통해이 결과를 해결하기 위해 개발되었다. 제안 된 방법은 맛과 영양 연구 분야의 연구자 FP를 정량화하는 표준 방식을 만들 수 있었다.

Introduction

용의자는 혀의 표면에 볼 범프 있습니다. fungiform (FP), 잎 모양, circumvallate 및 사상 : 용의자의 네 가지 유형이 있습니다. 사상 용의자는 혀의 표면에 분산되어 있지만, circumvallate은 혀 뒤쪽에 지역화 및 잎 모양은 양면에 발견된다. 대조적으로, FP는 혀의 앞쪽으로 위치한다. 그들은 사상은하지 않지만 입맛을 포함 할 수있는 잠재력을 가지고 있기 때문에 FP, 잎 모양, 및 circumvallate 용의자는 미각 간주됩니다. 입맛은 화학 tastants를 감지하고 뇌의 미각 신호로 자극을 열 변환에 대한 책임 세포의 클러스터입니다. 침과 음식 분자 맛 분자는 다음 맛 세포를 활성화하는 잠재력을 가지고 맛 모공라는 구멍을 통해 입맛에 입력합니다.

먼저 혀의 조직 학적 연구에서 관찰 흥미롭게도, 맛 봉오리 밀도의 큰 개인차가 있습니다18 시체 (밀러, 1988) 1. 생활에 videomicroscopy 사용하여 맛 모공 fungiform 용의자를 식별하는 방법을 개발하기 위해 밀러 & 리디 (1990)을 주도 적절한 배율, 조명 및 염색 기술을 사용할 때 자신이 혀의 표면에 표시되지 않습니다 입맛 그러나, 맛 모공 볼 수 있습니다 인간이. 실험실의 수는 여전히 사진과 거의 또는 전혀 배율을 사용하여, 원래 videomicroscopy 기술을 수정했습니다. fungiform 용의자가보다 시각적으로 훨씬 쉽게 때문에,이 후자의 기술을 사용하여 모공은, 실험실 맛 모공 대신에 fungiform 용의자를 계산으로 향했다. 이 과정에서, 그것은 fungiform 유두 밀도가 많은 fungiform 용의자가 맛 기공을 포함하거나 싹 3을 맛을하지 않더라도, 맛 기공 밀도에 대한 합리적인 프록시 측정한다고 가정한다; 뿐만 아니라 FP 더 볼과 circumvallate과 잎 모양의 유두보다 액세스 할 수 있습니다,하지만 자신의 이미지 캡처 이하 TI이다나 videomicroscopy 2,4의 다른 방법을 통해 맛 기공 분석보다 소비. 1990 년, 밀러 & 리디는 기공 밀도가 더이 해부학 적 관계뿐만 아니라 Bartoshuk 등. 5 뒷받침 된 FP 밀도 3 상관 관계가 그 맛을 찾기 위해이 기술을 사용, 밀러 & 리디도 발견 상단에있는 8 개인 맛 기공 밀도 분포의 절반은 자당, 염화나트륨, 그리고 훨씬 더 강렬한 기타 (8) 개인 3보다 propylthiouracil (법안을) 평가. Bartoshuk 등에 의한 후속 작업. (1994) 42 과목 (5)에 초과 임계 법안 맛의 강도와 fungiform 유두 밀도 사이의 상관 관계뿐만 아니라 맛 기공 밀도를 관찰했다. 이 편리한 방법은 그 방언 많은 용의자가 주체가 쓴 tastants의 phenylthiocarbamide 등 많은 tastants에 강한 반응을 이끌어내는 것을보고 영향력있는 연구되었다 (PTC) 및 법안 6,7.

PTC 및 법안은 자주 사람의 맛이 감도 표현형과 유전자형 사이의 명확한 링크로 인해 사용 잘 연구 tastants 있습니다. 인구 연구는 유전자 TAS2R38의 동형 접합 열성 diplotype을 가진 사람이, 유전자 8-10의 지배적 인 또는 이형 변형의 항공사보다 소유 할 수있는 상당히 낮은 감도를 가지고 있음을 보여 주었다. 아서 L. 폭스 PTC (11)에 "맛 실명"자신의 발견을 발표 할 때 유전 현상은 1932 년에 처음보고되었다. 이 쓴 화합물을 맛볼 수 사람들 중, 맛의 강도는 극심한 쓴 6 어디서나 약간 불쾌한 다를 수 있습니다보고했다. TAS2R38 의해 설명 할 수없는 변화를 고려하기 위해, 이론이 혀 4 FP의 밀도에 기인 할 수 있다고 기재 넣었다.

맛 연구가 진행됨에 따라, 한 느낌D는 FP와 쓴 맛 감도의 역할에 관한이 이론 주위에 생각의 두 학교로 분할되었다. 많은 연구가 FP 밀도가 법안에 영향을 미치는 요인은 4,6,12,13를 감도이라는 원래의 주장을 뒷받침하지만, 역할 (10)를 복제 할 수 없음을보고, 증거를 반박 발견했다 작지만 중요한 비상이 있었다, 14,15,16. Delwiche 등. (2001) 추세가 매우 다양하다 경고; FP 밀도는 과목에 걸쳐 쓴 감도의 차이를하지 균일 계정을 수행하고, 7 소품 적어도 적당한 감도 과목 만 입증했다. FP를 정량화하는 방법에 대한 덜 엄격한 정의 밀러 및 리디 방법의 사용 또한, 피셔 실시한 비버 댐 자손 공부 (15)의 예외와 함께 외., 전술 한 대부분의 연구는 작은 샘플을 한 것으로 유의해야 도에 일치하지 않는 결과에 기여할 수있다 크기맛 FP의 역할.

간단히, 밀러 & 리디의 독창적 인 방법론 용지 (1990)에서, 저자는 사상 용의자는 염료를 흡수하고 파란색으로하면서 FP 핑크 남아 있기 때문에 FP를 정량화하기 블루 방언 스테인드. 그들은 "둥근 분홍색 구조 직경이 약 0.5 mm의"2로 FP를 분류. 저자는 변화가 이미 문헌에 언급하는 것이 추가 분석 작업을 위해이 방법을 사용하기 전에, FP 특성이 더 엄격하게 정의되어야한다고 권고하고 결론을하는 동안 2, "다른 대상 집단, 다른 방법, 다른 연구자에 기인 할 수있다"자신 연구는 FP가 17, 18 라운드 있습니다 일반적으로 받아 들여지는 특성, 대형 2, 핑크 주도 또는 2 라이터, 4 높은 스테인드했다. 얼굴 값에서 찍은, 이러한 특성은 매우 정직하고 나타납니다. 맛 연구소의 유전학, 만족의 사용 (실험실이나 연구소를 당함)특성 HOD의 존재는 모든 적격에 득점 '개별 시도 복잡하고 상기 일부 특성의 중요성을 우선 순위 화되​​었지만. 이러한 합병증은 훨씬 더 큰 유두의 중간에 분홍색 나타났다 작은 유두를 포함; 따라서 색상 변화에 기초하여 분류를 제거 청색 흡수 색소 전체 텅; 대신 둥근 직사각형 용의자; 방언은 동일한 이미지의 널리 다양한 FP 수를보고 득점에 기여 모두 상승에는 변화를 갖는 없습니다.

분석에서 이러한 변화는 정확하고 객관적으로 FP를 정의하고 점수 프로토콜을 주관를 정확하게 일반적으로 받아 들여지는 FP 특성에 예외를 식별하고 궁극적으로 고안하기 위해 문헌을 검토하라고했다.

우선, FP 모양 둥근 버섯 형상 구조 (17, 18)로서 문헌에 기재되어있다. 제외 그러나 주목할만한이온도 언급했다. 밀러는 용어 "fungiform는"버섯 모양되지 않는 잘못된하고 많은 FP하지만 크기와 형태 (18)에 다양 할 수 있음을 강조했다. 멜리 등. 일방향 FP 직경이 다른 방향 (19)보다 적어도 두 개의 표준 편차 이상 어디에 (2013)은 또한 "왜곡"여겨졌다 여러 용의자를 설명. 또한, 쳉 & 로빈슨은 염색으로 FP를 표시 할 때, 그들은에서 등장 20 년 연장에 평면 얹어였다 것으로 나타났습니다. 위의 예외를 주목하는 것은, 라운드 인 FP의 특성과 버섯 모양이 나타납니다은 정의를 좁힐 너무.

둘째, FP 색상은 파란색 염료와 혀를 염색 후 7 "파란색 배경에 분홍색 동그라미"로 설명되어 있습니다. 라이터를 염색하는 것은 문헌을 통해 FP의 가장 일관된 기준 이었지만 여전히 균일 한 규정하지 않았다. 쳉 & ; 로빈슨 식별이 곤란 20 불확실하게 FP 항상 가볍게 염색하지 않은 것을 관찰 하였다. 그것은 방언이 다른 염료를 흡수하고 콘트라스트가 많은 방언에 명백한 동안 다른 사람들이 바로 파란색 염료 (21)의 흔적을 상실하면서, 일부는 구별로 완전히 파란색이 될 것을 다음에 나타납니다.

세 번째 특성, FP 크기는 0.5 mm에서 0.97 mm 6,18에 이르기까지, 논문 중에서 상당히 일치했다. 문헌에서 밀러는 혀의 지느러미 앞쪽에 용의자의 두 크기 범위가 있다고 지적했다. 작은 직경과 유두는 대부분 사상 (18) 동안 더 큰 직경의 유두는 주로 fungiform과 원뿔 유두했다. 그러나, 비버 댐 자손 공부 (21)의 예외와 함께, 크기 구조 문헌 FP인지 확인 나타나지 않았지만, 이미 "fungiform"로 분류 유두 제공 하였다.

밀러는 사상과 fungiform 용의자 사이의 차이를 지적하지만 혀의 가장자리 근처에이 기준을 사용하는 경우 _content "> 마지막으로, 높이가 4 특성 네 번째 FP로 어렵다 나열됩니다. 그는 상승에 크게 변화 FP의 두 가지 예를 준 다른 높이가 0.1 mm 이었지만, 여전히 명확 18 개의 관찰 맛 기공을 가지는 동안, 높이 0.8 mm 인 하나. 이러한 관찰은 또한 추적 및 Shahbake 등에 의해 확인되었다. (4)

이러한 정의와 그보고 예외는 맛 필드가 긴 FP와 밀러 & 리디에서 일반적으로 사용되는 프로토콜의 단점을 특징으로 불일치를 인식하고 있음을 보여준다. 실제로, 밀러 & 리디 더 FP 2의 기능을 정의하는 필드를 권고했다. 우리는 득점이 특성에 다른 가중치를주는 경우 아빠 다르게 중요성의 우선 순위 있다고 가정illae는 유두 모양의 크고 버섯 때 등 모든 기준을 충족하는 데 실패,하지만 파란 스테인드. 그것은 이전에 발표 된 연구의 연구자 가능성, 작은 샘플 크기와 결합 될 때, 다양한 결과이 방법의 사용에서 오는을 설명 할 수있는 동일한했다는 것을 추론했다.

GOT 랩은 객관적인 측정을 사용하여 각각의 특성을 정의하고 분석에 우선하는 표시하기 위해 특성을 우선 순위 가이드 라인을 개발하여 FP 방법론에서이 격차를 해결. 이 방법은 덴버 유두 프로토콜 (DPP), 혀의 디지털 사진에서 정확하고 반복 횟수를 보장하기 위해 FP의 명확하고 뚜렷한 특성을 가진 이분법의 핵심입니다. DPP는 이전에 사용 된 밀러 & 리디 방법, 따라서 각각의 해석을 제거하고 FP 밀도를 분석 할 때보다 일관된 결과를 보장하는 표준화 제안 된 방법이다. 그렇게함으로써, DPP는 D 더 자신있게하는 데 사용할 수 있습니다맛 FP의 역할을 etermine.

피사체의 촬영 혀의 이미지는 본 연구의 진정한 주체 인 연구소의 시민 과학자 (득점)에 의해 분석 하였다. 시민 과학자의 실험실의 핵심은 80 년대 중반에 16 세에 이르기까지 사회의 구성원 (년)으로 구성되어 있습니다. 2012 년 박물관의 의뢰 총괄 평가 보고서는 과학에 강한 관심을 갖는 것으로하고 3 분의 2가 과학 분야 (22)의 대학 학위를 취득하는 데에 시민 과학자를 설명합니다. 후보 시민 과학자들은 현재 성공적으로 박물관에서 베테랑 자원 봉사자들과의 인터뷰 과정을 완료하고, 박물관의 영구 보건 전시회, 원정대 건강에 시험 기간을 거쳐야합니다, 입소문을 통해 모집 그들은 위치에 적용 할 수있는 기회를 갖게하기 ​​전에 연구소. 연구소에 접수되면, 시민 과학자들이 12 주간의 훈련을 받아야하는 것은 인간의 주제를 등록 인증이 될의. 이 인증 후, 그들은 실험실에서 다양한 기술 (예를 들면 용의자 계산, DNA 추출) 및 추가 인증 및 정기적 인 품질 관리 대책을 다음에 훈련 모듈을 취할 수 있으며, 이러한 시민 과학자들은 적극적으로 데이터 분석에 참여할 수있는 기회를 가질 수있다. 시민 과학자들은 자신의 시간을 자원 봉사 및 박물관에 자신의 기여에 대한 보상되지 않습니다.

Protocol

이 연구에서 득점 이미지는 자연 & 과학 (박물관) (10)의 덴버 박물관에서 맛 연구소의 유전학에서 수행 더 큰 맛이 연구의 일환으로 수집 하였다. 더 큰 연구의 주제는 18-93 세에 이르기까지 (N = 1,195) 박물관 방문자했다. 주제는 일곱 대륙의 육에서 온 동안, 참가자들은 주로 유럽의 후손이었다. 각 피험자의 데이터는 하나의 30 분 랩 세션에서 수집 하였다. 서양 윤리 심의위원회는 프로토콜 정보를 서면 동의가 주어진을 승인하고, 주제는 자신의 시간을 자원 봉사 및 연구에 참여 보상되지 않았다.

1. 데이터 수집

  1. 이미지 캡처
    1. 쇼는 자신을 제기하는 방법의 사진 (그림 1) 무엇을 캡처 한 이미지의 모양이 주제.
      그림 1 그림 1 : 이미지 캡처 포즈.
    2. 직접 주제는 종이 손 수건으로 자신의 혀를 건조하고 입에서 튀어 나온 혀를 떠나.
    3. 1 인치의 멸균 팁, 레이온 어플리케이터를 이용하여 혀의 정점에 1:36 농도 푸른 식품 색소의 약 3 ㎖를 적용. 환자가 자신의 입에 혀를 반환하고 초과 염료를 제거 삼킬 수 있습니다.
    4. 손과 안정성을 위해 테이블에 누워 팔꿈치 그들의 턱과,도 1에 도시 한 바와 같이 피험자 스스로 자세를 보게한다. 직접 환자는 자신의 혀를 편안한 거리를 확장하고 자신의 치아 사이에 부드럽게를 고정합니다.
    5. 정중선 옆 혀의 좌측 전방의 선단에 펀칭 10mm 직경의 원형 절개와 여과지 2.5 cm 조각 부착 (도 1 참조).
    6. 혀, 캘리포니아의 적어도 세 확대 이미지를 가지고전체 10mm 원형 컷 아웃을 pturing하면 해당 지역 내의 모든 FP의 시각화를 보장합니다. 안정성을 위해 삼각대에 부착 된 고품질 디지털 포인트 및 촬영 카메라의 매크로 설정을 사용합니다.
      1. 스틸 카메라의 줌 권장 범위 내의하면서 전체 컷 아웃을 촬영하는 범위를 확대. 카메라 렌즈의 비행기가 혀의 평면에 평행 있는지 확인하고, 컷 아웃 직사각형 대신 사진의 원형을 나타납니다. 그들은 높은 품질과 계산에 유용하기 위해 사진을 검토합니다.
  2. 이미지 선택 및 준비
    1. 컴퓨터에 사진을 업로드 할 수 있습니다.
    2. 혀가 카메라를 향해 넓고 평평한 그래서 동일한 주제의 혀의 촬영 이미지의 가장 높은 줌의 혀와 최소한의 왜곡 된 각도에 구조 사이의 명확한 정의를 기반으로 추가 분석을 위해 하나를 선택합니다.
    3. 오픈 소스에 선택된 원시 이미지를 엽니 다 그렇게ftware, ImageJ에. "분석"을 클릭합니다 "플러그인"을하고 드롭 다운 메뉴 스크롤을 클릭 "셀 카운터를."셀 카운터가 열리면, 셀 카운터에 이미지를 연결 "초기화"버튼을 클릭하세요.
      참고 : 여기에, 32 비트 자바 1.6.0_10 버전 ImageJ에 1.45 초를 사용합니다.
      1. 득점 사이 FP 점을 다음 단계에 사용하기 위해 일관성을 위해 50 %의 표준 배율을 사용합니다. 다음 셀 카운터에 화면의 왼쪽에이 이미지를 이동합니다. 이 이미지는 복사 (화면의도 2 좌측 참조)로 지칭 될 것이다.
  3. 유두의 직경을 측정하는 원시 이미지 (복사 B)의 두 번째 복사본을 열고하는 정량화된다. 및 채점 과정 전반에 걸쳐 개인 득점의 기호에 필요에 따라 확대 및 축소. 그래서 두 개의 복사본이 아닌 실수로 혼동 화면의 오른쪽이 옮기. (그림 2, 오른쪽을 참조하십시오화면)
  4. 선 도구를 클릭합니다. 정확히 어떤 각도에서 여과지의 10mm 내부 원에서 직경을 그리고 클릭 "분석"하고 필요한만큼의 복사 (B), 줌을 사용 "규모를 설정합니다." "알려진 거리"를 입력하면 "10으로 . "규모가 다른 각도를 측정하여 정확한지 확인하고 직경 범위는 9.8-10.2 mm로되어 있는지 확인합니다. 그렇지 않으면이 단계를 반복한다.

그림 2
그림 2 : 복사하고 복사 나 복사 (왼쪽) 셀 카운터 창에 링크 및 사본 (B)가 (오른쪽) 개인의 취향에 확대 될 수 있지만 득점자에 득점에서 일관성을 위해 50 %의 배율로 유지됩니다.

덴버 유두 프로토콜 이분법 키를 사용하여 2 득점 FP

  1. 각 후보 papil 들어라, 그것은 FP가 있는지 확인하기 위해 기준을 자세히 다음과 같은 이분법 키 (단계 2.2-2.5)를 사용합니다. FP로 분류되는 용의자의 시각과 프로세스의 각 단계에서 거부 된 사람 3을 참조하십시오.
    그림 3 그림 3 : 유두 거부 FP 대. 도 3a는 3B-3E는 각 규칙을 위반하는 영역을 선회 한 동안 여러 자격 FP와 혀이다. (3B) 지역은 비정질이다 (3C) 용의자는 너무 작아서; 3D) 유두는 주변에 비해 파란색, (3E) 유두가 함몰 주위와 비교된다.
  2. 모양
    1. 후보 유두가 (볼품) 비정질입니다 있는지 확인합니다. 일반적으로 인정 된 기하학적 형태 (타원형, 입방, 라운드)이 있으면 50 %의 줌에서 참조하십시오.
    2. 기하학적 모양 (그림 3a 참조)가있는 경우 2.3 단계로 이동합니다.
    3. THER 경우전자가 더 기하학적 인 모양입니다, 복사 (50 % 줌)에서 "유형 1."셀 카운터 창으로 이동을 클릭합니다 (그림은 (b) 참조),이 같은 비정질 아닌 FP 표시 후보 유두를 클릭합니다. 이 이후 단계의 종류 1-4를 클릭하면 득점 그들은 모든 후보 용의자를 해결 단계 2.7.2에서 토론에 도움이 될 구조를 거부하는 경우 위반 된 규칙 분류 한 알 수 있습니다.
    1. 50 %를 크게 복사 혀의 표면에 임의의 색 분화가 있는지 결정하기 위해 참조. 그렇다면, 다음 2.3.2를 계속합니다. 그렇지 않은 경우, 결정 요소로서 색을 사용하지 않는다; 2.4 단계로 이동합니다.
    2. 후보가 유두 조직 또는 그것을 둘러싼 용의자보다 밝은 경우 (도 3a 참조)를 결정한다. 후보 유두의 일부가 분홍색 남아거나 밝게 염색 한 경우, 2.4 단계로 이동합니다.
    3. 후보 유두 파란색이며 주변 유두가 있다면(도 3c 참조) 가볍고, 셀 카운터에 "유형 2"셀 카운터 창으로 이동을 클릭합니다. 복사에서 너무 파란색이 아닌 FP를 표시하는 후보를 클릭합니다.
  3. 크기
    1. 복사 B를 사용하여, 하나 편안 후보 유두의 윤곽을 볼 수있는 거리를 확대.
    2. 선 도구를 클릭하고 후보 유두의 가장 긴 차원에 걸쳐 측정한다. 클릭 한 다음 "측정을." "분석"과 측정 된 길이가 0.5 mm 이상 (그림 3a 참조)의 경우, 2.5 단계로 이동합니다.
    3. 측정 된 길이가 0.​​499 mm 이하인 경우, 정확도를 보장하기 위해 다시 한 번 측정한다. 여전히 0.499 mm 이하의 경우 (F의 igure 3 차원 참조), 셀 카운터 창 및 복사에 "유형 3"를 클릭이 너무 작고하지 FP 표시 후보 유두를 클릭합니다.
  4. 경기 후퇴
    1. 후보 유두 균일 중이면 복사를 사용하여 평가하고 그혀 또는 상승의 나머지 ight. 유두가 틈새에있는 경우, 틈새 아닌 혀의 표면에 다른 구조에 비하여 그 높이를 결정한다. 유두는 주변의 유두보다 낮은 경우, (그림 3E 참조) FP를 함몰되지로 표시하는 '유형 4 "및 복사를 클릭 후보 유두를 사용합니다.
    2. 후보 유두는 혀의 나머지 부분과 균일 한 높이를하거나 (그림 3a 참조) 상승하는 경우, 사용 "형식 5"을 클릭하고이 FP 있음을 표시합니다. 이 유형 5 총 원시 FP 점수입니다. ImageJ에 복사 A에 유형 1-5에서 셀 카운터에 점수 나 색 마크를 저장하지 않는 한이 시점에서 사본을 닫지 마십시오
  5. 저장 복사
    1. 노트북 원시 FP 점수에 기록합니다.
    2. 셀 카운터 창에서 "이미지 내보내기"를 클릭하십시오. 실험실의 원하는 네이밍 시스템에 저장합니다. 이는 경찰의 개방을 허용합니다미래의 Y는 유형 1-5에서 컬러 표시를 유지한다. 그것은 원시 FP 점수를 저장하지 않습니다.
  6. 품질 관리
    1. 두 개의 개별 득점으로 각 사진 점수 7을 비교한다.
    2. 높은 FP 원시 점수가 낮은 FP 원시 점수의 10 % 이내 인 경우, 합의 FP 점수 함께 두 점수를 평균. 두 FP 원시 점수가 10 % 이상 차이가있는 경우, 화면에 모두 득점 사진을 당깁니다.
      1. 최종 합의 점수 차이의 논의에 도움과 협의하는 카운터 유형 1-4을 사용합니다. 합의 토론 중에 도달 할 수없는 경우, 점수에서 휴식을 취할. 나중에에서 이미지를 채점하고 토론한다. 아직 합의에 도달 할 수없는 경우, 세 번째 득점에 당깁니다. 다른 두와 이미지와의 대화 점을 물어보세요.

3. 교육 득점자는 DPP를 사용하는

  1. 교육에 대한 배경
    1. 이 득점이 다양한 이미지를 계산,개별적 처치 그들이 동일한 기준을 사용 하였다되도록 정기적 부여. 득점 할 때 개별 카운트 각 이미지에 대한 서로의 10 % 내에서 일관했다 경우에만 (위 확정) 방법이 허용 고려 DPP로 명명했다.
    2. 15 공식 이미지와 점수 순서대로 15 교육 이미지 (보충이 2-17도)를 선택합니다. 이미지를 선택하는 동안 셀 수없는 것으로 간주 된 경우, 이미지를 건너 뛰고 다음 순서의 이미지를 선택합니다.
      참고 : 실험실은 아직 정확한 촬영 기술을 마스터하는 동안 그들이 선택되었다 이러한 이미지 품질과 크기에 따라 다릅니다. 선택된 이미지 중 하나는이 차 계산 과정을 통해 셀 수없는 것으로 간주했지만 득점이 필요할 때 그 전화를 걸 수 있었다 있도록에서 방치 하였다. 따라서 15 이미지를 득점하지만 연수생에게 주어진 16 이미지가 있습니다.
    3. 15 교육 이미지를 계산하고 합의를 생성, DPP을 상기 득점 한 사용각 점수.
    4. 연수생에게 15 공식 이미지를 지정하고 기준을 만들 밀러 & 리디를 사용하여 점수를 부탁드립니다. 기록을 기록했다. 3.2 단계를 따라 그룹 교육을 실시한다. 단계 3.2이 완료되면, 득점이 다시 15 공식 이미지 점수와 자신의 점수를 기록 할 수 있습니다.
  2. DPP에 후속 채점자 훈련
    1. 교육 득점에게 첫 훈련 이미지를주고이 이미지에 약간의 용의자에 대한 DPP을 보여줍니다. 선택하거나 FP 각 유두를 거부에 대한 이유를 토론한다. 연수생은 그 사진의 나머지 부분에 대한 점수를 연습 계속 합의 번호 부여 (GOT 랩의 합의 번호와 1-5 마커를 입력 보충 그림 1 참조) 할 수 있습니다. 이 사진은 DPP의 이해를 보장하기 위해 관계없이 10 %의 차이에 대해 설명합니다.
    2. 이후 득점에게 두 번째 훈련 이미지를주고 그들이 DPP를 사용하여 점수를 가지고있다.
    3. 연수생 원시 FP 점수 10를 내에있는 경우설립 합의 %는. 섹션 3.1.3에서 계산 연수생은 다음 이미지로 이동 단계를 반복 할 수 있습니다.
    4. 스코어가 10 %의 범위를 벗어나면, 이해하고 불일치를 식별하고 이해 DPP의 모순을 해결하기 위해 유형 1-5를 나타내는 훈련자의 컬러 표시를 사용한다.
    5. 연수생에게 이미지를 재 채점 한 번 더 새로운 점수를 확인 할 수있는 기회를 제공합니다. 성공하면 모든 이미지가 완료 될 때까지, 훈련생은 다음 이미지로 이동한다.

Representative Results

여기서는 대표 사진 둥근 큰 분홍색 분야 표준을 기반 FP 식별을위한 일반적으로 사용되는 밀러 및 리디 방법론을 사용하는 경우 두 개의 개별 득점으로 얻었거나 밝게 염색 및 상승하고 동일한 사진 두 채​​점자가 채점 DPP를 사용하여. 도시 카운트 DPP를 사용하여 하부에 비해 분산 방법을 이용하여 원래의 높은 분산이 관찰 대표.

그림 4

그림 4 :. 밀러 & 리디 정량화가 DPP 정량화 대 왼쪽의 이미지가 밀러 & 리디 방법을 사용하여 두 개의 득점 '카운트의 대표입니다. 오른쪽 이미지는 DPP를 사용하여 두 개의 득점 '수를 나타냅니다. 레드 득점 1, 노란색 득점 2, 녹색 득점 1 & 2입니다.

(DP)의 통계 신뢰성P는 이전 10 가변성을 평가하기 위해 혼합 된 선형 모델을 이용하여 연구 하였다. 간단히, DPP는 점수의 일관성에서의 역할을 평가하기위한 데이터를 생성, 십오 이미지가 두 골되었다. 점수의 첫번째 배치에서, DPP 순진한 득점은 밀러 & 리디 방법 2를 사용했다. 채점자는 DPP를 사용하도록 훈련시키고 이미지 개별적 품질 관리 (도 5) 2.7 절에 상세하게 설명 합의 최종 단계없이 점수를 새로 하였다. FP 스코어 데이터 세트는 다음 인해 프로토콜 (도 6), 스코어러 내의 변동과 둘 사이의 상호 작용에 대한 결합의 차이를 평가하기 위해 혼합 모델에 사용 하였다. 6.99 (SE = 0.99)에 의해 더 높은 카운트 선도 DPP와 DPP (p 값 <1 × 10-6)와 비교하여 밀러 및 리디 법을 이용하는 경우에는 득점이 모델에서 유의 한 차이를 나타내었다; 점수의 변동의 5.2 %는 나머지 인해 득점에 25.9 %로 인해 교육에 의한, 그리고이미지 (10)에 고유 한 변동. 다음에, 내 스코어러 변동을 결정하는 데이터를 생성하기 위해, 임의의 순서로 서른 일련의 이미지 (11)는 개인에 의해 획득 하였다. 득점 미지는 이미지의이 시리즈는 반복 세 가지 이미지를 포함했다. 우리는 서로 다른 이미지를 비교 점수 변동성의 급격한 차이가 이미지를 versusrepeated 관찰했다.

그림 5
그림 5 :. DPP-나이브 후 대 DPP 교육 패널 (15) 이미지에 대한 검토 점수의 상자 그림이 전후 덴버 유두 프로토콜 훈련을 제공한다. 열린 원 아웃 라이어를 나타내는 반면, 각각의 상자 그림의 경우, 원 채워은 평균을 나타냅니다.

그림 6
그림 6 :. 득점 왕 분산의 변화는 회색 T를 나타냅니다그는 DPP 훈련에 앞서 개인 득점에 대한 분산. 블랙 같은 득점 포스트 DPP 훈련이다.

Discussion

DPP를 사용하여 이미지 내의 분산은 독립적 득점 걸쳐 카운트 내의 스코어러의 수는 현저하게 감소 하였다. 이 방법은 덜 videomicroscopy 않고 주관적인 시각적 FP 밀도 분석을 기울이고 있으나, 그 방법이 단지 점수 FP를 주목해야한다. DPP가 FP로 분류 구조는 맛 모공이 때문에 미각 유두 있습니다도 카운트가 진짜 맛 봉오리 밀도의 반사 것을 보장 할 수 없습니다 20,23이 방법의 국지적 인 성격이 일관성과 정확성을 통해 신뢰성을 설정이다; 그러나, 그것은 일관된 방향으로 결과를 바이어 싱 될 수있다. 더 엄격하게 FP의 형태를 특성화하고 이분법 키를 만들어이 study.However의 범위를 넘어 확장 할 미뢰 밀도 (예를 들어, videomicroscopy)의 진정한 척도를 사용하여 다른 방법으로 정확도 상대를 테스트하려면이 방법은 주소 밀러 & FP의 많은 특성이 분야에 갈대의 충전자신의 형태와 정량 2에 대한 합의를하기 위해 수행해야합니다. 또한, 그들은이 특성은 "주체들 사이의 차이점을 명확히하고 연구자 2 중 서로 다른 결과의 일부를 설명합니다."수 있음을 표시 맛과 영양 -에서 FP의 역할에 대한 불일치의 많은 정량의 균일 한 방법을 제공함으로써 관련 연구는 수리 할 수​​ 있습니다.

이분법 키는 상이한 이미지 캡처 기법에 대해 조정될 수있다. 측정 비율에 대한 공지 거리는 쉽게 사란 랩 또는 유리가 촬상 용 혀 위에 배치 된 경우 할인 될 수있는 각각의 랩과 침체에 사용되는 직경으로 설정 될 수있다. GOT 연구소에서는 중립 혀 유두의 가장 좋은 정의를 한 것으로 밝혀졌습니다. 이는 엉덩이를 만든 눈부심을 만들어 다시 카메라에 빛을 반사하는 사란 랩 또는 유리의 원인이 된 연구소에서 빛의 양을 수있다sment 어렵다. 일부 실험실은 염료 더 도전 카운트 발견했다, 그러나 GOT 랩은 방언의 대부분에 fungiform과 사상 유두 사이의 이상적인 대비를 제공 1시 36분의 농도로 희석 푸른 식품 염료를 발견했다.

FP 특성에 대한 이분법 키의 생성은 지속적으로 혀에 구조를 분석하고 그 결과의보고에 대한 자신감을 가지고, 이미지 캡처 다양한 방법을 사용하여, 다른 실험실에서 연구자 수 있습니다. 마지막으로, 이분법 키의 사용은 구조 또는 객체의 특성이 연구에 연구에서 일치하지 않는 번호를 제공하고 과학적인 방법의 다른 영역에 목적을 가질 수있다.

Disclosures

저자는 그들이 더 경쟁 재정적 이익이 없다는 것을 선언합니다.

Acknowledgments

이 작품은 국립 보건원 (National Institutes of Health)과 연구 자원을위한 국립 센터에서 2008-2012 사이에 과학 교육 파트너 상 (SEPA) R25 RR025066에 의해 부분적으로 투자되었다. 존 헤이즈, 고소 콜드웰, 폴 브레슬린, 칼라 슈베르트 : 다양한 실험 시나리오에서 DPP의 사용에 대한 문헌, 우리의 결과와 피드백의 사려 깊은 논의 맛 필드에서 동료에게 감사합니다. 자연과 과학의 덴버 박물관에서 리더십과 탐험 건강 내 맛 연구소의 유전학 내 시민 과학을 지원하는 직원에게 또한 감사드립니다. 곰 아라곤, 마이크 아처, 스와 Ataman, 마이클 베이글, A'nette 버트 랜드, 다이아나 Boyles, 웬디 은밀한, 사샤 둘리 : 마지막으로, 포함, 개발하고이 프로토콜을 사용하여 자신의 시간과 헌신에 대한 우리의 자원 봉사 시민 과학자 모두에게 감사합니다 패티 Drever, 제시카 ERN, 로라 Harmacek, 숀 히 버드, 조이스 Hutchens, 매트 JOO, Leta 킨, 윌렘 Leenhouts, Stephania 루kjan, 애슐리 매튜스, 마이크 모 제르, 스테파니 밀러, 할리 모건 - 로드리게스, 그리핀 Scherma, 알리사 Schickedanz, 테리 사이먼, 딜런 토마스, 루디 토레스, 타일러 윌슨, 다이앤 Woltkamp.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Image J National Institutes of Health http://rsb.info.nih.gov/ij
Food dye, Deep Blue Shade Esco http://escofoods.com/blue-food-coloring.html
Sterile Rayon Tipped OB/GYN Applicators Puritan 25-808 1PR
Grade 1 Filter Paper Whatman Whatman No.: 1001-325
Coolpix P100 (10.3 megapixels) and P500 (12.1 megapixels) Nikon http://imaging.nikon.com/lineup/coolpix/ neither model appears to be available on the website any longer
Paper Hand Towels Kleenex https://www.kleenex.com/HandTowelsDetail.aspx

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Miller, I. J. Human taste bud density across adult age groups. J Gerontol. 43, (1), B26-B30 (1988).
  2. Miller, I. J. Jr, Reedy, F. E. Jr Quantification of fungiform papillae and taste pores in living human subjects. Chem Senses. 15, (3), 281-294 (1990).
  3. Miller, I. J. Jr, Reedy, F. E. Jr Variations in Human Taste Bud Density and Taste Intensity Perception. Physiol Behav. 47, (6), 1213-1219 (1990).
  4. Shahbake, M., Hutchinson, I., Laing, D. G., Jinks, A. L. Rapid quantitative assessment of fungiform papillae density in the human tongue. Brain Res. 1052, (2), 196-201 (2005).
  5. Bartoshuk, L. M., Duffy, V. B., Miller, I. J. PTC/PROP tasting: anatomy, psychophysics, and sex effects. Physiol Behav. 56, (6), 1165-1171 (1994).
  6. Essick, G. K., Chopra, A., Guest, S., McGlone, F. Lingual tactile acuity, taste perception, and the density and diameter of fungiform papillae in female subjects. Physiol Behav. 80, (2-3), 289-302 (2003).
  7. Delwiche, J. F., Buletic, Z., Breslin, P. A. Relationship of papillae number to bitter intensity of quinine and PROP within and between individuals. Physiol Behav. 74, (3), 329-337 (2001).
  8. Kim, U. K., Jorgenson, E., Coon, H., Leppert, M., Risch, N., Drayna, D. Positional cloning of the human quantitative trait locus underlying taste sensitivity to phenylthiocarbamide. Science. 299, (5610), 1221-1225 (2003).
  9. Hayes, J. E., Bartoshuk, L. M., Kidd, J. R., Duffy, V. B. Supertasting and PROP bitterness depends on more than the TAS2R38 gene. Chem Senses. 33, (3), 255-265 (2008).
  10. Garneau, N. L., et al. Crowdsourcing taste research: genetic and phenotypic predictors of bitter taste perception as a model. Front Integr Neurosci. 8, (33), (2014).
  11. Fox, A. L. The relationship between chemical constitution and taste. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 18, (1), 115-120 (1932).
  12. Tepper, B. J., Nurse, R. J. Fat Perception is related to PROP taster status. Physiol Behav. 61, (6), 949-954 (1997).
  13. Duffy, V. B., et al. Bitter receptor gene (TAS2R38.), 6-n.-Propylthiouracil (PROP) bitterness and alcohol intake. Alcohol Clin Exp Res. 28, (11), 1629-1637 (2004).
  14. Yackinous, C., Guinard, J. X. Relation between PROP taster status and fat perception, touch, and olfaction. Physiol Behav. 72, (3), 427-437 (2001).
  15. Fischer, M. E., et al. Factors related to fungiform papillae density: The Beaver Dam Offspring Study. Chem Senses. 38, (8), 669-677 (2013).
  16. Feeney, E. L., Hayes, J. E. Regional differences in suprathreshold intensity for bitter and umami stimuli. Chemosens Percept. 7, (3-4), 147-157 (2014).
  17. Saito, T., Narita, N., Yamada, T., Manabe, Y., Ito, T. Morphology of human fungiform papillae after severing chorda tympani nerve. Ann Otol Rhinol Laryngol. 120, (5), 300-306 (2011).
  18. Miller, I. J. Anatomy of the peripheral taste system. Handbook of Olfaction and Gustation. Doty, R. L. Marcel Dekker. New York. 521-547 (1995).
  19. Cheng, L. H. H., Robinson, P. P. The distribution of fungiform papillae and taste buds on the human tongue). Arch Oral Biol. 36, (8), 583-539 (1991).
  20. Cruickshanks, K. J., et al. Measuring taste impairment in epidemiologic studies-The Beaver Dam Offspring Study. Ann N Y Acad Sci. 1170, 543-552 (2009).
  21. McNamara, P. A. Genetics of Taste summative evaluation report prepared for Denver Museum of Nature & Science. Independent Evaluator. Chicago IL. (2012).
  22. Arvidson, K., Friberg, U. Human taste: Response and taste bud number in fungiform papillae. Science. 209, (4458), 807-808 (1980).
Fungiform 용의자 객관적인 분석을위한 덴버 유두 프로토콜
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Nuessle, T. M., Garneau, N. L., Sloan, M. M., Santorico, S. A. Denver Papillae Protocol for Objective Analysis of Fungiform Papillae. J. Vis. Exp. (100), e52860, doi:10.3791/52860 (2015).More

Nuessle, T. M., Garneau, N. L., Sloan, M. M., Santorico, S. A. Denver Papillae Protocol for Objective Analysis of Fungiform Papillae. J. Vis. Exp. (100), e52860, doi:10.3791/52860 (2015).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter