Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Neuroscience

Mantar şeklinde papilla Amaç Analizi Denver Papilla Protokolü

doi: 10.3791/52860 Published: June 8, 2015

Summary

Burada dijital fotoğraflardan mantarbiçim papilla yoğunluğu ölçmek için bir protokol mevcut. Bu yöntem, Miller & Reedy (1990) tarafından mantarbiçim papilla orijinal açıklayıcı çalışma içine önceliklendirme ve objektif karakteristik ölçümlerini oluşturur.

Abstract

Denver Papilla Protokolün çok gol atan oyuncuları arasında tutarlı puanlama sağlamak için mantarbiçim papilla (FP) özelliklerini tanımlamak ve öncelik bir iki seçenekli anahtarı kullanmaktır. Bu protokol tat gözenek yoğunluğu için bir proxy olarak FP kullanarak tat araştırma son yirmi kaynaklanan bir ihtiyaç kapalı oluşturur. , Yuvarlak hafif, geniş ve yüksek lekeli: FP yoğunluğu tarihsel Miller & Reedy 1990 kendi morfolojisi karakterizasyonlarını kullanılarak analiz edilmiştir. Bu çalışmada, yazarlar gerekli FP morfolojisinin sıkı tanımları ana hatlarıyla edilmesi forewarned. Eylem Bu çağrı rağmen, takip edebiyat Miller & Reedy orijinal çalışmalarına atıf devam çoğu çalışmalarla, kıt olmuştur. Sonuç olarak, FP yoğunluk raporları tat duyarlılık FP rolü çelişkili sonuçlara katkıda bulunabilir, küçük örneklem büyüklüğü ile birlikte, son derece değişken olmuştur ve. Tat Lab Genetik bu bariz INCON araştırdısayma tutarlılığı ve FP'nin bildirilen nitelikleri, ama hepsi değil, Gol ayrı farklı bu özelliklerin önemini öncelik olduğunu bulmuştur ve bir papilla bazı vardı hiçbir rehberlik vardı. Bu öznellik sonuç aynı dil görüntünün son derece değişken FP sayar olduğunu. Denver Papilla Protokolü başka tanımlar ve Miller & Reedy ortaya koyduğu özelliklerin önemini önceleyen bir iki seçenekli anahtarın kullanımı yoluyla bu sonucu gidermek için geliştirilmiştir. Önerilen yöntem tadı ve beslenme çalışmalar alanında araştırmacılar için FP ölçmek için standart bir yol oluşturmanıza yardımcı olabilir.

Introduction

Papil dilinin yüzeyinde görünür diken vardır. Mantarbiçim (FP), bol yapraklı, circumvallate ve filiform: papilla dört tipi vardır. Ipliksi papilla dil yüzeyi üzerine yayılır birlikte, circumvallate yalnızca dilin arkasında lokalize ve nebati tarafta bulunurlar. Bunun tersine, AP dilin ön kısmına doğru yer alır. Onlar ipliksi yok ederken damak tadınızı içerme potansiyeli var çünkü FP, bol yapraklı ve circumvallate papilla tat olarak kabul edilir. Tat tomurcukları, kimyasal tat yoğunluğu arttırıcı tespit etmek ve beyindeki tat sinyali halinde uyaranlara transdüklenmesinden sorumludur hücre kümeleridir. Tükürük ve gıda molekülleri tat molekülleri daha sonra tat hücrelerini aktive potansiyeline sahip tat gözenekleri denilen açıklıklardan damak tadınızı girmek.

İlk dillerin bir histolojik çalışmada görüldüğü gibi İlginçtir, tat tomurcuğu yoğunluğunda büyük bireysel farklılıklar vardır18 kadavra (Miller, 1988) 1. Yaşayan videomikroskopi kullanarak tat gözenekleri ve mantarbiçim papilla belirlemek için bir yöntem geliştirmeye Miller & Reedy (1990) liderliğindeki uygun büyütme, aydınlatma ve boyama tekniklerini kullanırken kendilerini dilinin yüzeyinde görünmez tat tomurcukları, ancak tat gözenekleri görünür insan 2. Laboratuarları bir dizi hala fotoğraf ve az ya da hiç büyütme kullanarak, orijinal videomikroskopi tekniği değiştirdiniz. Mantarbiçim papilla daha görselleştirmek için çok daha kolay Bununla birlikte, bu son teknikler kullanılarak gözenekler olan, laboratuvar tat gözeneklerin yerine mantarbiçim papilla sayımı döndü. Bunu yaparken, bu mantarbiçim papilla yoğunluğu birçok mantarbiçim papilla tat gözenekleri içeren veya tomurcukları 3. tadı yok olsa bile, tat gözenek yoğunluğu için makul bir vekil ölçüsüdür olduğu varsayılmaktadır; sadece FP daha görünür ve circumvallate ve yapraklı papillalar daha erişilebilir, ancak görüntü yakalama az ti olduğunuBana videomikroskopi 2,4 alternatif yöntemi ile tat gözenek analizi daha tüketen. 1990 yılında, Miller & Reedy gözenek yoğunlukları daha bu anatomik ilişkinin yanı sıra Bartoshuk ark. 5 teyit edildi FP yoğunlukları 3 ile ilişkili olduğunu tadı bulmak için bu tekniği kullanılır, Miller & Reedy da bulduğu üst 8 kişi tat gözenek yoğunluğu dağılımı yarısı da sükroz, NaCl ve önemli ölçüde daha yoğun, diğer 8 kişi 3 yaptım daha propiltiourasil (PROP) puan. Bartoshuk ve diğerleri tarafından daha sonraki çalışması. (1994) 42 konularda 5 bir eşik üstü PROP tat yoğunluğu ve mantarbiçim papilla yoğunluğu arasındaki korelasyonu, hem de lezzet gözenek yoğunluğu, gözlenen. Bu uygun yöntem olan dilleri birçok papilla olan konular acı tat yoğunluğu arttırıcı phenylthiocarbamide dahil olmak üzere birçok tat yoğunluğu arttırıcı, daha güçlü bir tepkiye olduğunu bildiren etkili çalışmalara yol açmıştır (PTC) ve PROP 6,7.

PTC ve PROP oft bir kişinin tat duyarlılığı fenotip ve genotip arasındaki açık bağlantıyı nedeniyle kullanılan iyi araştırılmış tat yoğunluğu arttırıcı vardır. Nüfus çalışmaları genin, TAS2R38 homozigot resesif diplotype kişiler, gen 8-10 baskın veya heterozigot varyantı taşıyıcılarının daha PROP için önemli ölçüde daha düşük duyarlılığa sahip olduğunu göstermiştir. Arthur L. Fox PTC 11 "tat körlüğü" onun keşfini duyurdu Bu kalıtsal fenomen ilk 1932 yılında rapor edilmiştir. Bu acı bileşiklerin tatmak mümkün insanlar arasında, tat yoğunluğu excruciatingly acı 6'ya yerde biraz tatsız değişebilir bildirdi. TAS2R38 tarafından izah edilemez varyans hesaba katmak için, teorisi dil 4 FP yoğunluğu isnat edilebileceği ortaya konulmuştur.

Tat araştırma ilerledikçe, field FP ve acı tadı duyarlılığı rolüne ilişkin bu teorinin etrafında düşünce iki okul bölündü. Birçok çalışma FP yoğunluk PROP bir faktör 4,6,12,13 hassaslıktır orijinal iddiasını teyit rağmen rolü 10 çoğaltmak için bir yetersizlik rapor, delil bunu çürütmek için bulduğu bir küçük ama önemli bir kontenjan olmuştur, 14,15,16. Delwiche ve diğ. (2001) eğilim oldukça değişkendir uyardı; FP yoğunluk konular arasında acılık duyarlılık farklılıkları değil eşit hesabını yapar ve 7 PROP için en az orta duyarlılığı olan kişilerde sadece gösterilebilir oldu. FP ölçmek için nasıl daha titiz bir şekilde tanımlanabilir Miller ve Reedy yönteminin kullanımına ek olarak, Fischer tarafından yapılan Beaver Dam Offspring Çalışma 15 dışında ve ark., Yukarıda çalışmaların çoğu küçük bir örnek olduğu dikkat etmek önemlidir Ayrıca tutarsız bulgular katkıda bulunabilir boyutlarıtat FP rolü.

Kısaca, Miller & Reedy seminal metodoloji kağıdı (1990), yazarlar ipliksi papillalar boya emer ve mavi açarken FP pembe kalması nedeniyle FP ölçmek için mavi dilleri lekeli. Onlar "yuvarlak pembe yapıları çapı yaklaşık 0,5 mm" 2 olarak sınıflandırılmış FP. Yazarlar varyasyon zaten literatürde kaydetti ileri analitik çalışma için bu yöntemi kullanmadan önce, FP özellikleri daha sıkı tanımlanması gerektiğini tavsiye ve sonucuna ederken 2, "farklı konu popülasyonlar, farklı yöntemler ve farklı araştırmacılara kaynaklanıyor olabilir" kendi Araştırma FP 17,18 yuvarlak genel kabul görmüş özelliklere, geniş 2, pembe yol ya da 2 hafif ve 4 yüksek lekeli. Nominal değeri alındığında, bu özellikler çok yalındır görünür. Tat Lab Genetik araya geldi kullanımını (Lab veya Lab GoT)özellikleri mevcut olan bir hod, tüm eleme de sayıları bireysel girişimleri ile komplike ve yukarıdaki özelliklerin bazıları önemini öncelik, fakat. Bu komplikasyonlar çok daha büyük papilla ortasında pembe çıktı küçük papilla dahil; böylece renk çeşitliliği dayalı sınıflandırma ortadan kaldırarak mavi boya emici tüm dil; yerine yuvarlak dikdörtgen papillalar; ve dilleri aynı görüntünün yaygın çeşitli FP sayılarını bildiren skorer katkıda hepsi yükselmesine hiçbir varyasyon sahip.

Analizde Bu varyasyonlar doğru ve objektif FP tanımlamak ve skor bir protokol, öznelliği belirlemekte yaygın kabul FP özelliklerine herhangi istisnaları belirlemek ve sonuçta hazırlamak amacıyla literatürü gözden götürdü.

İlk olarak, AP şekli yuvarlak, mantar benzeri bir yapı 17,18 literatürde tarif edilmektedir. Hariç Ancak, kayda değeriyonları da değinildi. Miller dönem "mantarbiçim" mantar biçimli olmayan bir yanlış isim ve birçok FP ama boyutu ve morfolojisi 18 büyük ölçüde değişebilir vurguladı. Melis ve diğ. Tek yönde FP çapı başka bir yöne 19 daha az iki standart sapma daha nerede (2013) da, "çarpıtılmış" kabul edildi birkaç papilla nitelendirdi. Ayrıca, Cheng & Robinson boyama ile FP belirten, onlar görünüş 20 uzatılmış düz yüzeyli değiştiğini gördüler. Yukarıdaki istisnalar belirterek, yuvarlak olmanın bir FP karakterizasyonu ve mantar şekilli görünür bir tanım dar da.

İkincisi, FP rengi mavi boya ile boyandıktan sonra dilini 7 "mavi arka plan üzerinde pembe çevrelerde" olarak tarif edilir. Hafif boyama literatürde FP en tutarlı kriter olmasına rağmen hala düzgün bir eleme değildi. Cheng & ; Robinson kimlik zor ve belirsiz hale 20, FP daima hafifçe lekeli olmadığını gözlemledik. Bu diller farklı boya emer ve kontrast birçok dilleriyle üzerinde belirgin iken, diğerleri hemen mavi boya 21 izine kaybederken, bazıları hiç ayrım tamamen mavi olmak o zaman görünür.

Üçüncü özellik, AP boyutu, 0.5 mm ila 0.97 mm 6,18 aralığında kağıtları arasında oldukça tutarlıdır. Literatürde Miller dilin dorsal anterior papilla iki boyutu aralıkları olduğunu kaydetti. küçük çaplı papilla çoğunlukla filiform 18 iken büyük çaplarda papilla, öncelikle mantarbiçim ve konik papilla idi. Ancak, Beaver Dam Offspring Çalışması 21 hariç, boyut bir yapı literatürde FP olup olmadığını belirlemek için görünmedi, ama zaten "mantarbiçim" olarak sınıflandırılan papilla sağlandı.

Miller filiform ve mantarbiçim papillaların arasındaki ayrım işaret olsa dilin marjı yakın bu kriterleri kullanarak zaman _content "> Son olarak, yükseklik 4 karakteristik dördüncü FP olarak zordur listelenir. O, yükseklik büyük farklılıklar FP iki örnek verdi Başka bir yükseklikte en az 0.1 mm, ancak yine de açık bir şekilde 18 gözlenmiştir iki tat gözenekleri vardı yüksekliği 0,8 mm olan, bir. Bu gözlem, aynı zamanda takip edilerek Shahbake ve arkadaşları tarafından teyit edilmiştir. 4

Bu tanımlar ve bunların rapor istisnalar tat alan uzun FP ve Miller & Reedy gelen sık kullanılan protokol eksiklikleri karakterize tutarsızlık kabul ettiğini gösteriyor. Nitekim Miller & Reedy daha FP 2 özelliklerini tanımlamak için alan öğütlenen. Biz puanlayıcılar özelliklerine farklı ağırlık vererek ve zaman pap farklı önemlerini öncelik olduğunu varsaydıkillae böyle bir papilla şeklinde geniş ve mantar iken olarak her kriter karşılamak için başarısız oldu, ama mavi boyanmış. Daha önce yayınlanmış çalışmaların araştırmacılar olasılıkla küçük örneklem büyüklüğü ile kombine edildiğinde, çeşitli sonuçlar bu yöntemin kullanılması gelen hesap olabilir aynı şeyi yaptı gerekçeli edildi.

Sakatlar Lab objektif ölçümler kullanarak her özelliğini tanımlar ve analiz önceliklidir hangi belirtmek için özelliklerini ön planda tutan bir rehber geliştirerek FP metodolojisinde bu boşluğu ele aldı. Bu yöntem, Denver Papilla Protokolü (DPP), dilin dijital fotoğraflardan doğru ve tekrarlanabilir sayar sağlamak için FP açık ve seçik özelliklere sahip bir dichotomous anahtarıdır. DPP önce kullanılan Miller & Reedy yöntemi, böylece bireysel yorumunu kaldırılması ve FP yoğunluğu analiz ederken daha tutarlı sonuçlar sağlanması standardize etmek için önerilen bir yöntemdir. Böyle yaparak, DPP d daha güvenle kullanılabilirtat FP rolünü etermine.

deneklerin alınan dil görüntüleri Bu çalışmanın gerçek konular Lab vatandaş bilim adamları (Gol) ile analiz edilmiştir. Vatandaş bilim adamları Lab çekirdek 80'li yılların ortalarında 16 ile yaş arasında değişen toplumun üyeleri (yıl) oluşmaktadır. 2012 yılında Müzesi tarafından yaptırılan bir özetleyici değerlendirme raporu bilime güçlü bir ilgi sahip olarak ve üçte ikisi bir bilimsel disiplin 22 üniversite diploması olan ile vatandaş bilim adamları açıklanır. Aday vatandaş bilim adamları şu anda başarıyla Müzesi'nde kıdemli gönüllülerle birlikte bir görüşme süreci tamamlamak ve Müzenin kalıcı sağlık sergi, Sefer Sağlık, bir deneme süresi geçmesi gerekir ağızdan ağıza yoluyla alınırlar bir pozisyonda için uygulamak için fırsat var önce Lab. Lab kabul kere, vatandaş bilim adamları 12 haftalık eğitimden insan konuyu kayıt sertifikalı hale gelmesines. Bu sertifika takiben, onlar Lab çeşitli tekniklerle (örn papilla sayma, DNA ekstraksiyon) ve ek sertifikalar ve düzenli kalite kontrol önlemleri aşağıdaki eğitim modüllerini almak mümkün, bu vatandaş bilim adamları aktif veri analizinde katılma şansına sahip. Vatandaş bilim adamları zaman gönüllü ve Müzesi'ne katkılarından dolayı tazmin edilmez.

Protocol

Bu çalışmada attı görüntüler Nature & Science (Müzesi) 10 Denver Müzesi'nde Tat Lab Genetik yapılan büyük bir tat çalışmanın parçası olarak toplanmıştır. Büyük Çalışmanın Konular 18-93 yaş arasında değişen (n = 1195) müze ziyaretçi vardı. Konular yedi kıtanın altıdan gelirken, katılımcılar öncelikle Avrupa kökenli idi. Her deneğin verileri tek 30 dakika laboratuarı oturumunda toplanmıştır. Batı Kurumsal Değerlendirme Kurulu protokolü, bilgilendirilmiş yazılı izin verildi onaylı ve konular onların zaman gönüllü ve çalışmaya katılımları için telafi değil.

1. Veri Toplama

  1. Görüntü Yakalama
    1. Show kendilerini poz nasıl fotoğrafı (Şekil 1) ve ne Yakalanan görüntü gibi görünür konular.
      Şekil 1 Şekil 1: Görüntü Yakalama Pose.
    2. Doğrudan konular kağıt el havlusu ile dilini kurulayın ve ağızlarına çıkıntılı dil bırakmak.
    3. 1-inç ucu ile steril, suni ipek aplikatör kullanarak dilin apeks bir 1:36 konsantrasyonda mavi gıda boyası yaklaşık 3 ml uygulayın. Denekler kendi ağzına dilini dönmek ve aşırı boya kaldırmak için yutmak zorunda.
    4. Ellerinde ve istikrar için bir tabloda sütyen dirsekler kendi çene, Şekil 1'de gösterildiği gibi konular kendilerini poz var. Doğrudan konular kendi dil, rahat bir mesafe uzatmak ve dişleri arasında yavaşça güvenceye alın.
    5. Orta hat yanında dil sol tarafında ön ucuna içinde açılmış bir 10 mm çapında dairesel bir kesme ile filtre kağıdı 2.5 cm'lik parça yapışır (bakınız Şekil 1).
    6. Dil, ca en az üç yakın çekim görüntülerini alınTüm 10 mm yuvarlak kesme pturing o alanı içindeki tüm FP görselleştirme sağlamak. Istikrar için bir tripod bağlı bir yüksek kaliteli dijital noktası ve çek kamera makro ayarını kullanın.
      1. Hala kameranın tavsiye edilen zoom aralığında iken, tüm kesme fotoğraflandı ölçüde yakınlaştırmak. Kamera lensinin düzlem dil düzlemine paralel olduğundan emin olun ve kesme dikdörtgen yerine fotoğraf genelgeyle görünür. Onlar yüksek kalite ve sayım için yararlıdır emin olmak için fotoğraf inceleyin.
  2. Görüntü Seçimi ve Hazırlama
    1. Fotoğrafları bilgisayara yükleyin.
    2. Dil kameraya doğru geniş ve düz yani aynı kişinin dilinin çekilen görüntülerin en yüksek yakınlaştırma dil ve en az çarpık açı yapıları arasındaki açık tanımına dayalı daha fazla analiz için sadece birini seçin.
    3. Açık kaynak seçilen ham görüntüyü açmak yüzdenftware, ImageJ. "Analiz" ve tıkla "Plugins" ve açılır menü kaydırma tıklayın "Hücre Sayıcı." Hücre sayacı açıldığında, hücre sayacı görüntüyü bağlamak için "Başlatma" butonuna tıklayınız.
      Not: Burada 32-bit Java 1.6.0_10 sürümü ile ImageJ 1.45 sn kullanın.
      1. Kralları ile FP skoru sonraki adımlarda kullanılmak üzere tutarlılığı için% 50, standart büyütme kullanın. Bir sonraki hücre sayaca ekranın sol tarafında bu görüntüyü taşıyın. Bu resim Kopyalama A (ekran Şekil 2, sol tarafı bakınız) olarak anılacaktır.
  3. Papilla çaplarını ölçmek için ham görüntü (kopya B) ikinci bir kopyasını açın sayısal ediliyor. Ve puanlama sürecinde bireysel golcü tercihine gerektiği gibi uzaklaştır. Böylece iki nüsha yanlışlıkla karışık olmayan ekranın sağ tarafında bu kopyayı taşıyın. (Şekil 2, sağ tarafında bakınekranı)
  4. Satırı aracı tıklayın. Doğru herhangi bir açıda filtre kağıdı 10 mm iç çemberin üzerinde bir çapa çekmek ve tıklayın "Analiz" ve gerektiği kadar kopyalama B, zoom kullanma "Ölçeği ayarlayın." "Bilinen uzaklığı" doldurun "10 olmak . "ölçek alternatif açı ölçerek doğru olduğunu doğrulayın ve çap aralığı 9,8-10,2 mm arasında olduğundan emin olun. Değilse, bu adımı tekrarlayın.

Şekil 2,
Şekil 2: Kopya A ve B Kopya Kopya A (sol), hücre sayıcı penceresine bağlı ve kopyalama B (sağ) bireyin tercihine uzaklaştırdınız olabilir iken golcü golcü gelen tutarlılık için% 50 büyütme kalır.

Denver Papilla Protokolü Dikotomöz Anahtarını kullanarak 2. Puanlama FP

  1. Her aday papil içinla, bir FP olup olmadığını belirlemek için kriterleri detaylandırma aşağıdaki dikotom anahtarı (adım 2.2-2.5) kullanın. FP olarak sınıflandırılır papilla görsel ve süreç içinde her aşamada reddedilen olanlar için Şekil 3'e bakınız.
    Şekil 3, Şekil 3: Papilla Reddedildi FP vs. Şekil 3a 3b-3e her kuralı ihlal alanları çember varken birkaç eleme FP ile bir dildir. (3b) alan, şekilsiz olduğu; (3c) papilla çok küçük; 3d) papilla çevresindeki kıyasla mavi, (3e), papilla girintili çevresinde kişilerce karşılaştırılır.
  2. Şekil
    1. Aday papilla (şekilsiz) amorf olup olmadığını belirleyin. Yaygın tanınan geometrik şekli (oval, kübik, yuvarlak) varsa% 50 yakınlaştırma bakın.
    2. Bir geometrik şekil (Şekil 3a) varsa, 2.3 adıma geçilir.
    3. Ther Eğere hiçbir geometrik şekli, kopya A (% 50 zoom) On "Tip 1" hücre sayıcı penceresine gidin ve tıklayın (Şekil 3b bakınız), o kadar şekilsiz ve bir FP işaretlemek için aday papilla tıklayın. Bu ve sonraki adımlarda türleri 1-4 tıklanması Gol hepsi aday papilla ele ve adım 2.7.2 tartışmaya yardımcı olacak bir yapıyı reddetme zaman ihlal edildiği kuralın sınıflandırır biliyorum sağlar.
  3. Renk
    1. A% 50 zoom kopyalamak ve dil yüzeyi üzerinde herhangi bir renk ayrımı olup olmadığını belirlemek için başvurun. Bu durumda, bir sonraki 2.3.2 devam edin. Değilse, belirleyici bir faktör olarak renk kullanmak gerekmez; 2.4 adıma geçin.
    2. Aday papilla doku veya onu çevreleyen papilla daha hafif olması durumunda (Şekil 3a bakınız) belirleyin. Aday papilla herhangi bir parçası pembe kalmış ya da hafif lekeli ise, 2.4 adıma geçin.
    3. Aday papilla mavi ve çevresindeki papillalar ise(Şekil 3c bakınız) çakmak, hücre tezgahın üzerine "Tip 2" hücre sayıcı penceresine gidin ve tıklayın. Kopya A gibi çok mavi ve bir FP işaretlemek için aday tıklayın.
  4. Boyut
    1. Kopya B kullanarak, tek rahatça aday papilla hatlarını görebilirsiniz mesafeye yakınlaştırmak.
    2. Satırı aracı tıklayın ve aday papilla uzun boyutu boyunca ölçün. Tıklatın ve sonra "ölçü". "Analiz" ve ölçülen uzunluğu 0,5 mm veya daha büyük (Şekil 3a bakınız) ise, 2.5 adıma geçin.
    3. Ölçülen uzunluk 0,499 mm ya da daha az ise, doğruluğunu sağlamak için bir kez daha ölçer. Hala 0.499 mm veya daha az ise (F ŞEKIL 3d bakınız), hücre sayıcı penceresinde ve kopyalama A "Tipi 3" a tıklayın o kadar çok küçük ve bir FP işaretlemek için aday papilla tıklayın.
  5. Durgunluk
    1. Aday papilla üniforma ya eğer kopya A kullanarak, değerlendirmek odil veya yüksek geri kalanı ile ight. Papilla bir çatlak varsa, çatlak değil, dilin yüzeyi diğer yapılara göre yüksekliğini belirler. Papilla onu çevreleyen papilla daha düşükse, (Şekil 3e bakınız) FP girintili ve olarak işaretlemek için "Tip 4" ve kopyalama A, tıklayın aday papilla kullanın.
    2. Aday papilla dil geri kalanı ile eşit yükseklikte iki ya da (Şekil 3a bakınız) yüksek olursa, kullanmak "Tip 5" tıklayın ve bu FP olduğunu işaretlemek için. Bu tip 5 toplam ham FP puanıdır. ImageJ kopya A'ya türlerinden 1-5 hücre tezgahın üzerine puanları ne renkli işaretleri kaydetmek yok gibi, bu noktada kopya kapatmayın
  6. Tasarruf Kopya A
    1. Notebook ham FP skorunda bir yere yazın.
    2. Hücre sayacı penceresinde, "İhracat Image" seçeneğine tıklayın. Laboratuara istenen adlandırma sistemi ile tasarruf edin. Bu polis açılmasını sağlayacakGelecekte y A türlerinden 1-5 dan renkli işaretleri korumak için. Çiğ FP puanı tasarruf olmaz.
  7. Kalite Kontrol
    1. İki ayrı skorer tarafından her fotoğrafı Puan ve 7 karşılaştırın.
    2. Yüksek FP ham puanı düşük FP ham puanı% 10 içinde ise, bir uzlaşma FP puanı birlikte iki puan ortalamasını. İki FP ham puanlar% 10'dan fazla fark varsa, ekrana hem attı fotoğrafları çekin.
      1. Son uzlaşma puanı tutarsızlıklar tartışma yardımcı ve görüşmek için sayaç türlerini 1-4 kullanın. Görüş birliği tartışma sırasında ulaşılabilir ise, puanlama bir mola. Bir sonraki noktada görüntüyü rescore ve tartışın. Hala bir görüş birliği edilemezse, üçüncü golcü çekin. Diğer iki görüntü ve diyalog puan isteyin.

3. Eğitim Golcü DPP Kullanılır

  1. Eğitimi Arkaplan
    1. İki Kralları sahip görüntülerin çeşitli saymak,bireysel puanlama ve aynı kriterler kullanılarak emin olmak için düzenli olarak görüşmek. Gol olduğunda bireysel sayımları her görüntüler için birbirlerine% 10 içinde tutarlı olduğu sadece (yukarıda sonlandırılmış) yöntemi kabul edilebilir ve DPP adlandırılan oldu.
    2. 15 resmi görüntüleri ve skoru sırayla 15 eğitim görüntüleri (Ek 2-17 Şekiller) seçin. Bir resim seçimi sırasında sayılamayan görüldü ise, görüntüyü atlayın ve bir sonraki sıralı resim seçin.
      Not: Lab hala doğru fotoğrafçılık tekniği mastering ise seçtikleri gibi Bu görüntüler kalite ve boyutu değişir. Seçilen görüntülerden biri bu birincil sayma sürecinde sayılamayan görüldü ancak Gol gerektiğinde bu çağrıyı yapmak başardık sağlamak için bırakılmıştır. Bu nedenle, sadece 15 görüntüleri attı ama kursiyerlere verilen 16 resim bulunmaktadır.
    3. 15 eğitim görüntüleri saymak ve bir konsensüs oluşturmak, DPP yukarıda belirtilen Gol var KullanmaHer adına skoru.
    4. Eğitilenlere 15 resmi görüntüler verin ve bir temel oluşturmak için Miller & Reedy kullanarak gol isteyin. Tutanak puanları. Adım 3.2 izledi grup eğitimi yapıyoruz. Adım 3.2 tamamlandıktan sonra, Gol yine 15 resmi görüntüler puan ve puanları kayıt var.
  2. DPP üzerinde sonraki Golcü Oyuncular Eğitim
    1. Eğitim Golcü İlk eğitim görüntü vermek ve bu görüntü üzerinde bir kaç papilaya DPP göstermektedir. Seçerek veya bir FP her papilla reddetme gerekçesini tartışır. Kursiyerlerin bu fotoğrafın geri kalanı için puanlama eğitime devam ve uzlaşma numarası ile görüşmek (var Lab konsensüs numarası ve 1-5 işaretçileri yazın tamamlayıcı Şekil 1) izin verin. Bu fotoğrafı için DPP anlaşılmasını sağlamak için ne olursa olsun% 10 uyuşmazlıkları tartışır.
    2. Sonraki Golcü ikinci eğitim görüntü vermek ve onları DPP kullanarak skor var.
    3. Stajyer ham FP puanı on içinde isekurulan uzlaşma yüzde. bölüm 3.1.3 saymak stajyer sonraki görüntü üzerine taşımak ve adımları tekrarlayın sağlar.
    4. Skor yüzde on aralığının dışında ise, anlamak ve tutarsızlık tespit ve sonra DPP çelişkili bir anlayış ele türlerini 1-5 temsil stajyerin renkli işaretleri kullanın.
    5. STAJYER görüntü rescore ve bir kez daha yeni bir puan doğrulamak için fırsat verin. Eğer başarılı olursa tüm görüntüleri tamamlanıncaya kadar, stajyer sonraki görüntü üzerine hareket eder.

Representative Results

Burada temsili fotoğraf yuvarlak, büyük, pembe alan standartlarına dayanan FP tanımlama için yaygın olarak kullanılan Miller & Reedy metodolojisini kullanarak, iki ayrı skorer tarafından atılırsa ya da hafif lekeli ve yüksek ve daha sonra aynı fotoğraf iki skorer tarafından atılırsa DPP kullanılmıştır. gösterilen sayıları DPP kullanarak alt Varyans karşılaştırıldığında orijinal yöntem kullanılarak gözlenen yüksek varyans temsilcisi vardır.

Şekil 4,

Şekil 4:. Miller & Reedy Kantifikasyon DPP Niceleme vs soldaki resim Miller & Reedy Yöntemi kullanılarak iki Kralları 'sayar temsilcisidir. Sağdaki resimde DPP kullanarak iki Kralları 'sayıları temsil eder. Kırmızı vuruşu 1, Sarı golcü 2, Yeşil Kralları 1 & 2.

DP İstatistik güvenilirlikP daha önce değişkenliği 10 değerlendirmek için bir karışık doğrusal modeli kullanılarak araştırıldı. Kısaca, DPP puanları kıvamında oynadığı rolü değerlendirmek için veri oluşturmak için, onbeş görüntüleri iki kez değerlendirildi. Skorları ilk parti olarak, DPP naif Gol Miller & Reedy yöntemi 2 kullanılır. Gol sonra DPP kullanmak için eğitilmiştir ve görüntüleri tek tek Kalite Kontrol (Şekil 5) detaylandıran bölüm 2.7 açıklanan nihai uzlaşma adımı olmadan tekrar skorlama yapıldı. FP puanı veri kümesi sonra nedeniyle protokolü (Şekil 6), içi atan değişkenliği ve ikisi arasındaki etkileşimi kombine farklılıkları değerlendirmek için karma model kullanılmıştır. 6.99 (SE = 0.99) daha yüksek bir sayıya lider DPP DPP (p-değeri <1 x 10 -6) ile karşılaştırıldığında Miller & Reedy yöntemini kullanarak bu model, puanlama anlamlı farklılık gösterdi; Skor değişkenliğin% 5.2 kalan nedeniyle hakemine% 25.9 nedeniyle eğitime bağlı olduğunu veGörüntünün 10 özel değişkenliği için. Ardından, içinde-skorer değişkenliği belirlemek için veri oluşturmak için, rasgele sırayla otuz görüntülerin bir dizi 11 kişi tarafından değerlendirildi. Kralları için habersizce, görüntülerin bu dizi tekrarlandı üç görüntüleri dahil. Biz farklı görüntüleri karşılaştırarak puan değişkenliği ciddi bir fark görüntüleri versusrepeated gözlendi.

Şekil 5,
Şekil 5:. DPP-Naif Mesaj vs DPP Eğitim paneller 15 görüntüler için gözden puanlarının kutudiyagramlar öncesi ve sonrası Denver Papilla Protokolü eğitimi sağlamaktadır. Açık bir daire, bir aykırı değer gösterir, oysa her Boxplot için, daire dolu bir ortalama olduğunu gösterir.

Şekil 6,
Şekil 6:. Golcüyü Varyans Değişim gri t temsilO DPP eğitimi öncesinde bireysel skorer için varyans. Siyah Aynı vuruşu sonrası DPP eğitimdir.

Discussion

DPP kullanarak görüntünün içinde varyans bağımsız Kralları arasında sayar ve içi hakem sayıları önemli ölçüde azalmıştır. Bu yöntem videomikroskopi olmadan daha az sübjektif görsel FP yoğunluk analizi yapar iken, bu yöntem yalnızca puanları FP dikkat edilmelidir. DPP FP olarak sınıflandırılan yapılar tat gözeneklere sahiptir ve bu nedenle tat papilla ne de sayar gerçek tat tomurcuğu yoğunluğunun yansıtıcı olduğunu garanti edemeyiz 20,23 Bu yöntemin .The doğası tutarlılık ve hassasiyet sayesinde güvenilirlik kurar olduğunu; Bununla birlikte, tutarlı bir yönde sonuç kutuplama olabilir. Daha sıkı FP morfolojisi karakterize bir iki seçenekli anahtarı oluşturarak bu study.However kapsamı dışındadır uzanacak tat tomurcuğu yoğunluğu (örneğin, videomikroskopi) gerçek bir ölçüsünü kullanarak diğer yöntemlere doğruluğu göreceli sınamak için, bu yöntem adresleri Miller & FP'nin daha karakterizasyonu bu alana Reedy şarjOnların morfolojisi ve miktar tayini 2 konusunda fikir birliğine sahip olmak için yapılması gereken. Ek olarak, bu karakterizasyonu "konular arasında bazı farklılıkları açıklamak ve müfettişler 2 arasında farklı sonuçların bazılarını açıklayabilir." Olabileceğini belirtti tat ve verilecek beslenme de FP rolüne ilişkin tutarsızlıklar birçok ölçümü üniform bir yöntem sağlayarak ilgili araştırma düzeltilmesi olabilir.

dikotom anahtar farklı görüntü yakalama teknikleri için ayarlanabilir. Ölçüm ölçeği tanınan mesafe kolayca saran wrap veya cam görüntü yakalamak için dil üzerine yerleştirildi ise iskonto edilebilir, her laboratuar ve durgunluk kullanılan çapa ayarlanabilir. GOT Lab, bu nötr dil papilla iyi tanımını sağladığı görülmüştür. Bunun nedeni eşek yapılmış bir parlama yaratarak geri kameraya ışığı yansıtmak için saran şal veya cam neden Lab ışık miktarına bağlı olabilirsment zor. Bazı laboratuvarlar da boya daha zorlu saymak buluyorum söylediler, ama var Lab dillerin çoğunluğu mantarbiçim ve filiform papillalar arasında ideal kontrast sağlanan 01:36 konsantrasyonunda seyreltilmiş mavi gıda boyası bulundu.

FP karakterizasyonu için bir iki seçenekli anahtarın oluşturulması sürekli dilde yapılarını analiz ve sonuçların raporlanması güven var, görüntü yakalama çeşitli yöntemler kullanarak, farklı laboratuvarlarda araştırmacılar için izin verecektir. Son olarak, bir dichotomous tuşunun kullanımı yapılarının veya nesnelerin nitelikleri çalışmadan çalışmaya tutarsız sayılar sağlıyoruz bilimsel metodolojinin diğer alanlarda amaçları olabilir.

Disclosures

Yazarlar hiçbir rakip mali çıkarlarını olduğunu beyan ederim.

Acknowledgments

Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri ve Ulusal Araştırma Kaynakları Merkezi'nden 2008-2012 arasında Fen Bilgisi Eğitimi Ortaklığı Ödülü (SEPA) R25 RR025066 tarafından kısmen finanse edildi. John Hayes, Sue Coldwell, Paul Breslin, Carla Schubert: çeşitli laboratuvar senaryolarda DPP kullanımı ile ilgili literatürde, bizim sonuçlarının ve geribildirim düşünceli tartışma tat alanında meslektaşlarına teşekkür ederiz. Nature & Science Denver Müzesi'nde liderlik ve Sefer Sağlık içinde Tat Lab Genetik dahilinde vatandaş bilimi destek personeline de teşekkür ederiz. Bear Aragon, Mike Archer, Su Ataman, Michael Bagley, A'nette Bertrand, Diana Boyles, Wendy Covert, Sasha Dooley: Son olarak, dahil, gelişmekte olan ve bu protokolü kullanarak kendi zaman ve özveri için gönüllü vatandaş bilim adamlarının tüm eyvallah Patty Drever, Jessica Ern, Laura Harmacek Sean Hibbard, Joyce Hutchens Matt Joo, Leta Keane, Willem Leenhouts, Stephania Lukjan, Ashley Matthews, Mike Mauser, Stephanie Miller, Hallie Morgan-Rodriguez, Griffin SCHERMA, Alyssa Schickedanz, Terri Simon, Dylan Thomas, Rudy Torres, Tyler Wilson, Diane Woltkamp.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Image J National Institutes of Health http://rsb.info.nih.gov/ij
Food dye, Deep Blue Shade Esco http://escofoods.com/blue-food-coloring.html
Sterile Rayon Tipped OB/GYN Applicators Puritan 25-808 1PR
Grade 1 Filter Paper Whatman Whatman No.: 1001-325
Coolpix P100 (10.3 megapixels) and P500 (12.1 megapixels) Nikon http://imaging.nikon.com/lineup/coolpix/ neither model appears to be available on the website any longer
Paper Hand Towels Kleenex https://www.kleenex.com/HandTowelsDetail.aspx

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Miller, I. J. Human taste bud density across adult age groups. J Gerontol. 43, (1), B26-B30 (1988).
  2. Miller, I. J. Jr, Reedy, F. E. Jr Quantification of fungiform papillae and taste pores in living human subjects. Chem Senses. 15, (3), 281-294 (1990).
  3. Miller, I. J. Jr, Reedy, F. E. Jr Variations in Human Taste Bud Density and Taste Intensity Perception. Physiol Behav. 47, (6), 1213-1219 (1990).
  4. Shahbake, M., Hutchinson, I., Laing, D. G., Jinks, A. L. Rapid quantitative assessment of fungiform papillae density in the human tongue. Brain Res. 1052, (2), 196-201 (2005).
  5. Bartoshuk, L. M., Duffy, V. B., Miller, I. J. PTC/PROP tasting: anatomy, psychophysics, and sex effects. Physiol Behav. 56, (6), 1165-1171 (1994).
  6. Essick, G. K., Chopra, A., Guest, S., McGlone, F. Lingual tactile acuity, taste perception, and the density and diameter of fungiform papillae in female subjects. Physiol Behav. 80, (2-3), 289-302 (2003).
  7. Delwiche, J. F., Buletic, Z., Breslin, P. A. Relationship of papillae number to bitter intensity of quinine and PROP within and between individuals. Physiol Behav. 74, (3), 329-337 (2001).
  8. Kim, U. K., Jorgenson, E., Coon, H., Leppert, M., Risch, N., Drayna, D. Positional cloning of the human quantitative trait locus underlying taste sensitivity to phenylthiocarbamide. Science. 299, (5610), 1221-1225 (2003).
  9. Hayes, J. E., Bartoshuk, L. M., Kidd, J. R., Duffy, V. B. Supertasting and PROP bitterness depends on more than the TAS2R38 gene. Chem Senses. 33, (3), 255-265 (2008).
  10. Garneau, N. L., et al. Crowdsourcing taste research: genetic and phenotypic predictors of bitter taste perception as a model. Front Integr Neurosci. 8, (33), (2014).
  11. Fox, A. L. The relationship between chemical constitution and taste. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 18, (1), 115-120 (1932).
  12. Tepper, B. J., Nurse, R. J. Fat Perception is related to PROP taster status. Physiol Behav. 61, (6), 949-954 (1997).
  13. Duffy, V. B., et al. Bitter receptor gene (TAS2R38.), 6-n.-Propylthiouracil (PROP) bitterness and alcohol intake. Alcohol Clin Exp Res. 28, (11), 1629-1637 (2004).
  14. Yackinous, C., Guinard, J. X. Relation between PROP taster status and fat perception, touch, and olfaction. Physiol Behav. 72, (3), 427-437 (2001).
  15. Fischer, M. E., et al. Factors related to fungiform papillae density: The Beaver Dam Offspring Study. Chem Senses. 38, (8), 669-677 (2013).
  16. Feeney, E. L., Hayes, J. E. Regional differences in suprathreshold intensity for bitter and umami stimuli. Chemosens Percept. 7, (3-4), 147-157 (2014).
  17. Saito, T., Narita, N., Yamada, T., Manabe, Y., Ito, T. Morphology of human fungiform papillae after severing chorda tympani nerve. Ann Otol Rhinol Laryngol. 120, (5), 300-306 (2011).
  18. Miller, I. J. Anatomy of the peripheral taste system. Handbook of Olfaction and Gustation. Doty, R. L. Marcel Dekker. New York. 521-547 (1995).
  19. Cheng, L. H. H., Robinson, P. P. The distribution of fungiform papillae and taste buds on the human tongue). Arch Oral Biol. 36, (8), 583-539 (1991).
  20. Cruickshanks, K. J., et al. Measuring taste impairment in epidemiologic studies-The Beaver Dam Offspring Study. Ann N Y Acad Sci. 1170, 543-552 (2009).
  21. McNamara, P. A. Genetics of Taste summative evaluation report prepared for Denver Museum of Nature & Science. Independent Evaluator. Chicago IL. (2012).
  22. Arvidson, K., Friberg, U. Human taste: Response and taste bud number in fungiform papillae. Science. 209, (4458), 807-808 (1980).
Mantar şeklinde papilla Amaç Analizi Denver Papilla Protokolü
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Nuessle, T. M., Garneau, N. L., Sloan, M. M., Santorico, S. A. Denver Papillae Protocol for Objective Analysis of Fungiform Papillae. J. Vis. Exp. (100), e52860, doi:10.3791/52860 (2015).More

Nuessle, T. M., Garneau, N. L., Sloan, M. M., Santorico, S. A. Denver Papillae Protocol for Objective Analysis of Fungiform Papillae. J. Vis. Exp. (100), e52860, doi:10.3791/52860 (2015).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter