Introduction
हृदय प्रत्यारोपण मॉडल अक्सर मैं / आर-चोट, allograft अस्वीकृति, पोस्ट-प्रत्यारोपण Vasculopathy और immunomodulating एजेंटों की दक्षता की जांच करने के लिए प्रयोग किया जाता है। माउस मॉडल में जाना जाता प्रतिरक्षात्मक और आनुवंशिक पृष्ठभूमि, कई जन्मजात और ट्रांसजेनिक तनाव और अपेक्षाकृत कम प्रयोगात्मक लागत की उपलब्धता जैसे कई फायदे गठबंधन।
1973 में, चूहों में पेट हृदय प्रत्यारोपण की एक तकनीक पहले Corry एट अल 1 से वर्णित किया गया था। इस मॉडल में ग्राफ्ट प्राप्तकर्ता के उदर महाधमनी के लिए और अवर रग Cava करने के लिए मुख्य फेफड़े के धमनी के आरोही महाधमनी के अंत करने के पक्ष anastomoses द्वारा revascularized कर रहे हैं। 1991 में, चूहों में गर्भाशय ग्रीवा के हृदय प्रत्यारोपण के लिए एक सिवनी तकनीक चेन एट अल 2 से वर्णित किया गया था। इस मॉडल में एक प्रतिगामी कोरोनरी धमनी छिड़काव जीआर के आरोही महाधमनी करने के लिए प्राप्तकर्ता के कैरोटिड धमनी के सम्मिलन द्वारा स्थापित हैपिछाड़ी। शिरापरक रक्त सही आलिंद, सही वेंट्रिकल में कोरोनरी साइनस के माध्यम से नालियों और प्राप्तकर्ता बाहरी गले की नस (चित्रा 1) में फेफड़े के धमनी के माध्यम से अलग हो जाता है। पेट भ्रष्टाचार दाखिल करने से इसकी तुलना में गर्भाशय ग्रीवा मॉडल कम आक्रामक है और भ्रष्टाचार के सतही स्थान अतिरिक्त अनुवर्ती परीक्षाओं (जैसे टटोलने का कार्य, इकोकार्डियोग्राफी, intravital प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी) 3,4 के लिए एक बहुत ही आसान पहुँच सक्षम बनाता है।
तकनीकी सुधार 5,6 के बावजूद, इस मॉडल की एक अधिक व्यापक उपयोग सम्मिलन रिसाव और घनास्त्रता के एक उच्च घटना के साथ छोटे जहाजों के sutured anastomoses प्रदर्शन करने के लिए तकनीकी कठिनाइयों के कारण सीमित किया गया है। 1991 में, Matsuura एट अल। पोत दीवार बहुत ग्रीवा हृदय प्रत्यारोपण 7 के मॉडल सुविधा है, जो एक कृत्रिम सिलेंडर, पर everted है जिसमें कफ तकनीक की शुरुआत की। तकनीक फू थाrther गुर्दे 8, अग्नाशय 9, अंग 10, यकृत 11,12, फेफड़ों 13,14 और नाड़ी प्रत्यारोपण 15 सहित विभिन्न प्रयोगात्मक प्रत्यारोपण मॉडल के लिए अपनाया। सिवनी तकनीक की तुलना आवश्यक anastomoses के लिए समय और, इस प्रकार, गर्म ischemia के समय कम है और में कफ तकनीक 16 का उपयोग काफी कम संवहनी उलझने हैं। इसके अलावा, यह एक उच्च सफलता दर के साथ कार्रवाई करने के लिए microsurgery में थोड़ा प्रशिक्षण के साथ सर्जनों सक्षम बनाता है। कफ तकनीक का एक नुकसान यह है कि मस्तिष्क छिड़काव बदल सकता है, जो आम मन्या धमनी की शर्त बंधाव है।
इस वीडियो को पत्र में हम चूहों में गर्भाशय ग्रीवा के हृदय प्रत्यारोपण के लिए एक बेहतर और सरल कफ तकनीक मौजूद है।
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Protocol
सभी प्रयोगों जर्मन हार्ट केंद्र म्यूनिख और बावरिया, जर्मनी (gz। 55.2-1-54-2532.3-17-13) सरकार द्वारा अनुमोदित किया गया। पशु एक विशिष्ट रोगज़नक़ मुक्त सुविधा में रखे और चिकित्सा अनुसंधान के लिए राष्ट्रीय सोसायटी और नेशनल एकेडमी द्वारा प्रदान की "प्रयोगशाला पशु की देखभाल और उपयोग के लिए गाइड" द्वारा तैयार "प्रयोगशाला पशु की देखभाल के सिद्धांतों" के अनुपालन में मानव देखभाल प्राप्त हुए थे विज्ञान के और राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (एनआईएच प्रकाशन नहीं। 86-23, 1985 में संशोधित) द्वारा प्रकाशित।
नोट: दो घुमावदार संदंश और पोत dilatators सहित बाँझ microsurgical उपकरणों का एक पूरा सेट, प्रक्रिया (चित्रा 2) के लिए आवश्यक है। Perioperative एंटीबायोटिक प्रोफिलैक्सिस नियमित तौर पर आवश्यक नहीं है, लेकिन प्रतिरक्षा पशुओं में संकेत दिया जा सकता है। पशु टर्मिनल isoflurane साँस लेना का उपयोग करते हुए बलिदान किया गया।
दाता तैयारी और भ्रष्टाचार हार्वेस्ट
<राजभाषा>2. प्राप्तकर्ता तैयारी
- तैयार करनाएक नंबर 11 छुरी या खुर्दबीन के नीचे एक कैंची के साथ polyimide ट्यूबिंग काटने से anastomoses के लिए कफ। कफ एक बेलनाकार शरीर और नाड़ी दबाना की नियुक्ति के लिए एक एक्सटेंशन (परिधि के 1/3), 1 मिमी (चित्रा 2 बी) की लंबाई में से प्रत्येक के होते हैं।
- पशु anesthetize और ऊपर वर्णित के रूप में शल्य सहिष्णुता की पुष्टि करें। द्रव को बदलने के लिए 0.25 मिलीलीटर गर्म खारा समाधान subcutaneously (सुप्रीम कोर्ट) इंजेक्षन।
- एक इलेक्ट्रिक शेवर का उपयोग सही ग्रीवा क्षेत्र के बालों को हटाने और एक गर्म पैड पर एक लापरवाह स्थिति में जानवरों की जगह। श्वसन समझौता कर सकते हैं इस रूप में सामने अंग overstretching से परहेज करते हुए टेप की किस्में के साथ पैर सुरक्षित। सूखापन को रोकने के लिए नेत्र मरहम का उपयोग आँखों को कवर किया। शल्य साइट chlorhexidine के साथ तीन बार कीटाणुरहित।
- कंठ पायदान के लिए सही जबड़े कोण से एक अनुप्रस्थ त्वचा चीरा।
- दो टूक एक्सटेंशन लामबंदernal गले नस। एक द्विध्रुवी संदंश के साथ पक्ष शाखाओं दाग़ना और उन्हें आड़ा काट।
- अवअधोहनुज ग्रंथि से नस के साथ संगम के स्तर पर संयुक्ताक्षर के बीच बाहरी गले नस फूट डालो।
- कफ के माध्यम से बाहरी गले की नस खींच और कफ के विस्तार पर एक नाड़ी दबाना रखकर proximally पोत रोक देना। संयुक्ताक्षर निकालें और 01:10 heparinized खारा के साथ पोत लुमेन सिंचाई।
- कफ से अधिक पोत दीवार एवर्ट और एक पूर्व निर्धारित परिधीय 8-0 रेशम संयुक्ताक्षर के साथ यह तय कर लो।
- Sternocleidomastoid मांसपेशी की ऊपरी हिस्सा निकालें।
- सही आम मन्या धमनी को जुटाने और मन्या विभाजन के नीचे संयुक्ताक्षर के बीच पोत आड़ा काट।
- कफ के माध्यम से कैरोटिड धमनी खींचो और कफ के विस्तार पर एक Yasargil दबाना रखकर proximally पोत रोक देना। संयुक्ताक्षर निकालें और 01:10 heparinized खारा के साथ पोत लुमेन सिंचाई।
- धीरे dilatई एक पोत dilatator साथ धमनी लुमेन, कफ से अधिक पोत दीवार एवर्ट और एक पूर्व निर्धारित परिधीय 8-0 रेशम संयुक्ताक्षर के साथ यह तय कर लो।
- भ्रष्टाचार के आरोपण के लिए पर्याप्त जगह हासिल करने के लिए, अवअधोहनुज ग्रंथि का सही पालि को हटा दें।
- आरोपण तक नम सहकारी क्षेत्र रखें।
3. भ्रष्टाचार आरोपण
- उल्टा मध्यवर्ती केंद्रित महाधमनी और पार्श्व फेफड़े के धमनी के साथ प्राप्तकर्ता ग्रीवा क्षेत्र में भ्रष्टाचार रखें।
- कैरोटिड धमनी के साथ कफ के ऊपर भ्रष्टाचार के महाधमनी खींचने के लिए और एक परिधीय 8-0 रेशम संयुक्ताक्षर साथ सम्मिलन सुरक्षित है।
- अपने पूर्वकाल पहलू पर फेफड़े ट्रंक काटकर अलग कर देना और बाहरी गले नस के साथ कफ के ऊपर खींच। फिर एक परिधीय 8-0 रेशम संयुक्ताक्षर साथ सम्मिलन सुरक्षित है।
- कैरोटिड धमनी के unclamping द्वारा निम्न, बाहरी गले की नस पर दबाना निकालें। दिल खून के साथ तुरंत भरता है। आर बढ़ाने के लिएeperfusion भ्रष्टाचार पर 37 डिग्री सेल्सियस गर्म नमकीन घोल ड्रॉप। आम तौर पर दिल एक मिनट के भीतर साइनस लय विकसित करता है। शिरापरक साइट पर कफ विस्तार निकालें।
- सही भ्रष्टाचार स्थिति सुनिश्चित, anastomoses मरोड़ बिना तनाव मुक्त और जहाजों होना चाहिए। इस के बाद से त्वचा की cauterized वाहिकाओं घाव भरने क्षीण हो सकता है क्या नहीं। आमतौर पर खून बह रहा अनायास बंद हो जाता है। एक भी 8-0 निरंतर सीवन के साथ त्वचा को बंद करें।
4. पश्चात की देखभाल
- द्रव को बदलने के लिए 0.25 मिलीलीटर गर्म नमकीन घोल सुप्रीम कोर्ट इंजेक्षन।
- नशीले पदार्थों naloxone (1.2 मिलीग्राम / किग्रा), Flumazenil (0.5 मिलीग्राम / किग्रा) और यह स्टर्नल लेटना बनाए रखने के लिए पर्याप्त होश आ गया है जब तक गर्म पैड पर पशु वाम सुप्रीम कोर्ट atipamezol (2.5 मिलीग्राम / किग्रा शरीर के वजन) इंजेक्षन नाराज। किसी भी असामान्य व्यवहार रजिस्टर करने के लिए कम से कम एक अतिरिक्त घंटे के लिए पशु पालन। पूरी तरह से recove जब तक अन्य जानवरों की कंपनी के लिए सर्जरी आया है कि एक जानवर वापस नहीं हैलाल।
- Buprenorphine साथ रिक्तिपूर्व एनलजेसिया प्रदान करें (0.05 मिलीग्राम / किलो सुप्रीम कोर्ट तीन दिन प्रति बार) या प्रक्रिया के बाद 72 घंटे की एक न्यूनतम अवधि के लिए एक स्थानीय संस्थागत प्रोटोकॉल के अनुसार एक वैकल्पिक एनलजेसिया।
- सर्जन और एक पशु चिकित्सक पशुओं को नियमित रूप से देखना चाहिए। वजन घटाने> 15%, उदासीनता, सूजन या शल्य चिकित्सा की ओर संक्रमण पशुओं के मामले में टर्मिनल isoflurane साँस लेना का उपयोग कर euthanized हैं।
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Representative Results
हमारी टीम को सफलतापूर्वक लगभग 20 प्रशिक्षण सर्जरी के बाद वर्णित तकनीक प्रदर्शन कर सकता है। सबसे चुनौतीपूर्ण हिस्सा है कि यह आसानी से वापस flips और अधिक प्रयासों के दीवार की फाड़ करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं, क्योंकि कफ खत्म कैरोटिड धमनी के पोत दीवार एवर्ट के लिए है। प्रशिक्षण अवधि के बाद, मतलब कुल ऑपरेटिव समय 60 ± 8 मिनट था। करीब 20 मिनट दाता फसल, गर्भाशय ग्रीवा वाहिकाओं और anastomoses और त्वचा बंद करने के लिए 15 मिनट की तैयारी के लिए 25 मिनट के लिए आवश्यक हैं।
मायोकार्डियल मैं / आर-चोट की जांच के लिए हम 92% की एक शल्य सफलता दर के साथ विभिन्न प्रयोगात्मक सेटिंग में syngeneic C57BL / 6 चूहों में 200 से अधिक ऑपरेशन किया। जल्दी मौत anastomoses प्रदर्शन करने में कठिनाइयों से (एन = 3), anastomotic रिसाव (एन = 2) के कारण होता है और हृदय की विफलता (एन = 10) था। एक जानवर की वजह से न्यूरोलॉजिकल हानि के लिए वसूली के बाद euthanized किया गया था। Perioperative बचे अलावा, भ्रष्टाचार के जीवित रहने पर> 95% थी7 दिन (चित्रा 4)। Syngeneic भ्रष्टाचार प्राप्तकर्ताओं की संख्या 3 महीने से अधिक समय के लिए जीवित रखा गया है। एंटीबायोटिक प्रोफिलैक्सिस का उपयोग नहीं होने के बावजूद, हम किसी भी संक्रामक जटिलताओं का पालन नहीं किया।
पहली बार एक श्रृंखला में, 12 syngeneic C57BL / 6 चूहों histopathological परीक्षा (चित्रा 3) के लिए प्रत्यारोपित किया गया। ग्राफ्ट आरोपण से पहले 4 डिग्री सेल्सियस पर बर्फ पर भंडारण से ठंड ischemia के 4 घंटा से अवगत कराया गया। प्रत्यारोपण reperfusion के 7 दिनों के बाद काटा और hematoxylin और eosin (एच एंड ई) और सीरियस लाल रंग में दाग रहे थे। Nontransplanted जानवरों (एन = 6) के नियंत्रण के रूप में कार्य किया। ऊतक सूजन, hyperemia, घुसपैठ ल्यूकोसाइट, microvascular रोड़ा है और एक मध्य फाइब्रोसिस के साथ एक मजबूत सूजन प्रतिक्रिया के लिए मैं / आर नेतृत्व। इस प्रारंभिक श्रृंखला में एक पशु ketamine / xylazine के एक दोहराया इंजेक्शन के बाद निधन हो गया। इस जटिलता आगे Midazolam, medetomodine और Fentanyl सहित एक पूरी तरह antagonizable संज्ञाहरण का उपयोग करने से बचा जा सकता है। < / P>
चित्रा 1: Heterotopic सरवाइकल हृदय प्रत्यारोपण में रक्त के प्रवाह की (ए) योजनाबद्ध चित्रण। प्राप्तकर्ता का कैरोटिड धमनी प्रवाह से रक्त हृदय भ्रष्टाचार छिड़कना आरोही महाधमनी में और कोरोनरी धमनियों में प्रतिगामी। कोरोनरी साइनस के माध्यम से सही आलिंद में शिरापरक रक्त नालियों, सही वेंट्रिकल भरता है और प्राप्तकर्ता के बाहरी गले नस में फेफड़े के धमनी के माध्यम से अलग हो जाता है। बाएं वेंट्रिकल पूरी तरह से नजरअंदाज कर रहा है। (ख) anastomoses की Intraoperative देखें। आरोही महाधमनी (2) कैरोटिड धमनी (1) और फेफड़े के ट्रंक के साथ कफ ऊपर खींच लिया जाता है (3) बाहरी गले नस के साथ कफ से अधिक (4)। तस्वीर में शिरापरक सम्मिलन अभी तक पूरा नहीं किया गया था।JPG "लक्ष्य =" _blank "> यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 2: (क) दो घुमावदार संदंश और दो पोत dilatators सहित बाँझ microsurgical उपकरणों का एक पूरा सेट की आवश्यकता है। एक विस्तार और microvascular clamps के साथ 19-24 जी से anastomoses कफ (बी) का इस्तेमाल किया जाता है।
चित्रा 3: मायोकार्डियल मैं / syngeneic C57BL / 6 चूहों में आर-चोट दिखाते ऊतकीय नमूने एच एंड 4 घंटा ठंड ischemia के बाद नियंत्रण जानवरों (क) से और जानवरों से दिल की ई धुंधला (20x बढ़ाई) और reperfusion के 7 दिनों के (ख)।। लम्बे समय तक मैं / आर ऊतक एड के साथ एक मजबूत सूजन प्रतिक्रिया में हुईईएमए, hyperemia, घुसपैठ ल्यूकोसाइट और microvascular रोड़ा। एक ही प्रयोगात्मक सेटिंग सीरियस लाल धुंधला (40x बढ़ाई) में मध्य कोलेजन बयान चिह्नित दिखाया बाद मैं / नियंत्रण समूह (ग) की तुलना में आर (घ)।
चित्रा 4:। Syngeneic C57BL / 6 चूहों में भ्रष्टाचार के अस्तित्व को प्रदर्शित कार्डिएक Allograft जीवन रक्षा कापलान-मायर साजिश है। पशु Histopathological परीक्षा के लिए पश्चात 7 दिन पर euthanized बर्तन।
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Discussion
हम विभिन्न प्रयोगात्मक सेटिंग में 90% से अधिक सफलता दर के साथ 200 से अधिक हृदय प्रत्यारोपण पूरा कर लिया है। यहाँ वर्णित तकनीक के साथ, पूरी प्रक्रिया को एक अनुभवी सर्जन से 60 मिनट के भीतर किया जा सकता है। अंग की खरीद से पहले ग्रीवा वाहिकाओं तैयारी करके, कुल भ्रष्टाचार ischemia के समय 20 मिनट तक ही सीमित किया जा सकता है। आरोपण (गर्म ischemia के समय) के लिए समय सिवनी तकनीक 16 की तुलना में कफ तकनीक का उपयोग काफी कम है।
इसके बजाय बस पहले से 5,17 वर्णित के रूप में दिल excising की, हम एक चिकित्सकीय इस्तेमाल cardioplegic समाधान के साथ और हाइपोथर्मिया से भ्रष्टाचार perfusing द्वारा हृदय की गिरफ्तारी के लिए प्रेरित। स्फटिकवत् Custodiol HTK समाधान 10 mmol / L पोटेशियम और सोडियम, कैल्शियम और मैग्नीशियम की कम मात्रा में होता है, और प्रभावी ढंग से दिल गिरफ्तारी। योजकों हिस्टिडीन, tryptophan और एक-ketoglutarate, एसिडोसिस को कम एटीपी प्रदान करते हैं और कोशिका झिल्ली du की रक्षारिंग ischemia। इस खुले दिल की सर्जरी के दौरान एक नियंत्रित हृदय की गिरफ्तारी के नैदानिक हालत जैसा दिखता है और मायोकार्डियल मैं / आर-चोट की जांच के लिए इस मॉडल आदर्श बनाता है। इसके अलावा, यह ठंड ischemia की शुरुआत में cardioplegic समाधान के भीतर औषधीय एजेंटों के आवेदन की अनुमति देता है। 0-4 डिग्री सेल्सियस पर ग्राफ्ट का भंडारण 4 घंटा की अधिकतम समय के अंतराल के लिए संभव है। एक लंबे समय तक ischemia के समय सही दिल कक्षों और रक्तस्राव के overextension से जटिल मायोकार्डियल hypocontractility को जन्म दे सकती है।
हमारे अनुभव में, कुछ महत्वपूर्ण कुंजी अंक सफल revascularization की सुविधा होगी। पूरा कैरोटिड धमनी की लामबंदी और सम्मिलन के लिए एक कम प्रोफ़ाइल Yasargil दबाना अधिकतम vassel लंबाई के उपयोग द्वारा संरक्षित किया जा सकता है। Vasospasm धमनी पर पतला 1:10 papaverine छोड़ने से बचा जा सकता है। स्नायविक हानि से बचने के लिए कैरोटिड धमनी के लिए टी जमानत के संचलन की रक्षा करने के विभाजन के नीचे ligated है वह आंतरिक मन्या धमनी। पोत लुमेन ध्यान से दीवार के फाड़ से परहेज करते हुए एक अति सूक्ष्म (0.2 मिमी) टिप के साथ एक पोत dilatator साथ फैली हुई है। हमारे अनुभव में पकड़े टांके के स्थान के रूप में पहले से 7 अनिवार्य नहीं है का वर्णन किया। कफ आकार का चयन सफल revascularization के लिए महत्वपूर्ण है। धमनी सम्मिलन के लिए आंतरिक कफ व्यास भ्रष्टाचार के बड़े आरोही महाधमनी के साथ बेमेल के लिए खाते में आम मन्या धमनी (250-300 माइक्रोन) के बाहर व्यास की तुलना में कुछ बड़ा होना चाहिए। बाहरी गले नस के लिए (0.724 से 0,912 मिमी के लिए कफ व्यास के अंदर) 19 से 21 जी के लिए कैरोटिड धमनी के लिए (0.510 से 0,643 मिमी के लिए कफ व्यास के अंदर) 22 से 24 जी को 20-25 ग्राम उपयोग कफ वजन चूहों और कफ के लिए । हम इस बाँध रही की सुविधा के रूप में polyfilament सिवनी सामग्री (रेशम) पसंद करते हैं। microvascular दबाना कफ के विस्तार पर रखा गया है। इस पोत immobilizes और दीवार के बहिर्वतन की सुविधा।
यह वसूली prolongs और perioperative मृत्यु दर का एक प्रमुख कारण है, क्योंकि "ove_content> हाइपोथर्मिया ध्यान से परहेज किया जाना चाहिए। Antagonizable neuroleptanalgesia Midazolam, medetomodine का उपयोग कर और Fentanyl ketamine / xylazine 18 की तुलना में वसूली अच्छा शल्य सहिष्णुता प्रदान करता है और fastens।ग्रीवा हृदय प्रत्यारोपण मॉडल एक गैर शारीरिक, गैर भरी हुई दिल मॉडल की वजह से intracardiac रक्त प्रवाह की अनूठी दिशात्मकता करने के लिए है, यह प्रयोगात्मक हृदय प्रत्यारोपण में एक अनिवार्य उपकरण है। इस वीडियो को समाचार पत्र में दिखाया तकनीकी जानकारी शोध उनके प्रयोगशालाओं में अपेक्षाकृत आसान इस मॉडल स्थापित करने की अनुमति होनी चाहिए।
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Forceps JFC-7.2 | S&T | P-00036 | Curved tip 0.20 mm |
| Vessel dilatator D-5a | S&T | S-00124 | |
| Adventita scissor | S&T | S-00102 | |
| Vascular clamp B-1V | S&T | S-00396 | |
| Yasargil Clip | Peter Lazic | 65,097 | 3.5 mm lenght |
| Bipolar forceps | Micromed | 148-100-011 | tip 0.25 mm |
| Polyimide tubes | River Tech Medical | 19-24 gauge | |
| 8.0 silk ligatures | Catgut | ||
| Custodiol HTK solution | Essential Pharmaceuticals |
References
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