Abstract
Один из важнейших процессов воспаления инфильтрации иммунных клеток из просвета кровеносного сосуда на окружающие ткани. Это происходит, когда эндотелиальные клетки, которые выстилают кровеносные сосуды, становится клей циркулирующих иммунных клеток, таких как моноциты. В пробирке измерение этой адгезионной не до сих пор было сделано путем количественной оценки общего числа моноцитов, которые прилипают к эндотелиальной слоя либо в виде прямого счета или путем косвенного измерения флуоресценции прикрепленных моноцитов. В то время как такие измерения действительно указывают среднюю адгезивность эндотелиальных клеток популяции, они смешиваются с помощью ряда факторов, таких как число клеток, и не раскрывают долю эндотелиальных клеток, которые на самом деле адгезив. Здесь мы описываем и продемонстрировать метод, который позволяет перечисление адгезивных клеток в тестируемой популяции эндотелиальных монослоя. Эндотелиальные клетки выращивают на покровных стеклах и после желанииЛечение ставятся моноцитов (которые могут быть помечены флуоресцентно). После инкубации, промывки процедуры, с участием нескольких раундов погружения и слива, клетки фиксируют. Клей эндотелиальные клетки, которые окружены моноцитов легко идентифицируются и перечислены, давая индекс адгезии, который показывает фактическую долю эндотелиальных клеток в популяции, которые клей.
Introduction
Проникновение иммунных клеток, таких как моноциты через эндотелиальный слой клеток, выстилающих кровеносные сосуды является важным шагом в процессе воспаления 1. Это позволяет самонаведения иммунных клеток (иммуноцитов) до места повреждения. В других случаях и местах, таких как коронарной артерии и сонной артерии, инфильтрацию моноцитов через эндотелиальный слой может привести к нежелательному долгосрочного проживания этих клеток в стенке артерии, что может привести к образованию бляшек 2. Во всех случаях иммуноцитов инфильтрации, первый этап включает в себя активацию эндотелиальных клеток в локализованной области кровеносного сосуда. Эндотелиальные клетки активируются провоспалительных цитокинов, таких как TNF-α и IL-6 для увеличения экспрессии белков клеточной поверхности, таких как VCAM, ICAM и Е-селектина, которые облегчают набор и прикрепление иммуноцитов на поверхности эндотелиальных клеток 3- 6.
7. Ограничения этого метода с точки зрения точности привело к использованию радиоактивно меченого лимфоцитов или моноцитов, с последующим количественным радиоактивного материала, который соответствует лимфоцитов или моноцитов адгезии 4. Этот метод был в конечном счете заменен методом флуоресцентной основе, в результате чего иммуноцитов, представляющие интерес, меченного флуоресцентной краской и подвергали той же процедуре, что и выше с той разницей, что вместо флуоресценции измеряют радиоактивность 8. В настоящее время этот метод возник как наиболее удобный и продается в разобранном виде несколькими коммерческими поставщиками. В то время как этот анализ может измерить относительные уровни адгезивности между контрольной и экспериментальных образцов, не раскрывает ли изменение в флуоресценции за счет равномерного изменения адгезионной по всей еndothelial клеточной популяции, или если изменение происходит из-за разницы адгезивности в субпопуляции клеток. Очевидно также, что строгость промывки оказывает глубокое влияние на результат, и что более важно, равномерность промывки от несвязанных моноциты между различными монослоев эндотелиальных клеток значительно повлиять на близость результатов от повторов и воспроизводимости результатов между образцами , Совсем недавно, несколько систем, которые качают моноциты в СМИ по эндотелиальных клеток монослоя были использованы для решения этой проблемы 9. Кроме того, эти системы потока и воспроизводят эффект силы сдвига на эндотелиальные клетки. Хотя преимущества таких систем являются четкими и очень привлекательным, важно также понимать, что в то время как эндотелиальные клетки адгезивность может быть значительно увеличена, так как это имеет место при остром воспалении, такие факторы, как ФНО, некоторых других активаторов, таких как ионизирующее излучение 10 вызывают изменения тшляпа не легко обнаружить в пробирке в экспериментальных временных рамок этих весьма жестких систем. В то время как такие путевки изменения эндотелия липкости клеток легко пропустили или уволены в пробирке, это не обязательно доброкачественные в естественных условиях, где такие небольшие изменения в пределах времени жизни, что характерно для хронического воспаления, может оказать весьма существенные результаты. Следовательно надежный, но чувствительный и специфичный метод для обнаружения и измерения эндотелия адгезия клеток необходим.
Здесь мы приводим метод измерения адгезионной способности эндотелиальных клеток непосредственно. Этот метод не зависит от измерений флуоресценции в качестве косвенного индикатора суррогатной эндотелиальной клеточной адгезионной. Это показывает, являются ли изменения в липкости за счет равномерного изменения во всех клетках или прикован к югу от населения. Кроме того, это позволяет совместным окрашиванием эндотелиальных клеток с маркерами, такими как стареющих связаны бета-галактозидазы, жизнеспособность клеток к царапаниюкег, Calcien утра и антитела против клеточной поверхности и внутриклеточных белков, позволяющих объединение отдельных клеевых эндотелиальных клеток к определенным государств клеток или экспрессии специфических белков.
Protocol
1. Подготовка покровные стекла
- Стерилизовать 12 мм в диаметре круглого покровные стекла путем замачивания их в 70% этаноле в течение не менее 10 мин при периодическом перемешивании, чтобы гарантировать полную экспозицию всех покровных в этаноле. Налейте покровные стекла и этанола в стерильный клеточной культуральной чашке (или 6 см или 10 см в диаметре).
- С парой стерильных мелких 5В щипцов, подобрать и разместить каждый индивидуальный покровного стекла в лунку 24-луночного кластера пластины. Позаботьтесь, чтобы убедиться, что покровные не касаясь стороны колодца и примерно в середине ямы.
- Оставьте непокрытыми 24 хорошо кластера пластину с покровные стекла, чтобы высушить в кабинете потока. Это займет около 10 мин
- В течение этого периода подготовки смеси для нанесения покрытия путем разбавления 10 мг / мл человеческого фибронектина в сбалансированном растворе Хэнка соль (HBSS) до 0,1 мг / мл.
- Когда покровные сухие, пипеток 100 мкл раствора для покрытия на каждой стеклянной COverslip поэтому решение охватывает только стекло без объединения вокруг внешней скважины. Поместите покрытый 24 хорошо кластера пластину в культуре клеток инкубаторе в течение по крайней мере час.
- Непосредственно перед использованием, удалить раствор для покрытия. То же покрывающий раствор может быть переносили в стерильную пробирку и использовали до трех раз без видимой потери эффективности.
2. Подготовка эндотелиальных клеток монослоя
- Культура человека коронарные артерии эндотелиальные клетки (EC) в среде при 37 ° С и 5% углекислого газа.
- Аспирируйте от питательных сред и промыть EC монослой с 10 мл HBSS
- Аспирируйте от ССРХ и добавить 2 мл 0,5% трипсина, 0,2% раствор ЭДТА. Выдержите при комнатной температуре в течение приблизительно 5 мин.
- При ЕС может быть смещена от крана к стороне колбы, добавляют 5 мл соевого ингибитора трипсина и пипетку шприц поверхность колбы для дальнейшего сместить клетки.
- Передача клеток в 15 мл пробирку центрифуги и трубкипри 200 х г в течение 5 мин.
- Аспирируйте от супернатанта и ресуспендируют осадок EC в 5 мл среды. Граф клеток с гемоцитометра и регулировать концентрацию клеток до 50000 ЕС на мл ЕС СМИ.
- Разливают по 1 мл клеточной суспензии в каждую лунку 24-луночного планшета, содержащего покрытием покровные стекла. Инкубируйте клетки O / N в культуре клеток инкубаторе при температуре 37 ° С плюс 5% углекислого газа.
- Клетки готовы к использованию в экспериментах, когда сливной монослоя, в течение 3 дней.
3. Получение моноцитов
- Передача HL-60 клетки, которые культивировали в среде RPMI с добавлением 10% эмбриональной телячьей сыворотки, в суспензионной культуре, в 15 мл пробирку. Центрифуга клетки при 200 х г в течение 5 мин.
- Удалить супернатант и ресуспендирования клеток в 5 мл среды и регулировать концентрацию клеток со средствами массовой информации до 2 млн клеток / мл. Если флуоресценции маркировка HL-60 желательно, ресуспендирования клеток в RPMI без сыворотки и прoceed, как описано в разделе 4.
- Добавить 0,5 мл HL-60 клеточной суспензии в каждую лунку 24-луночных планшет, содержащий кластера EC монослой и инкубируйте в инкубаторе для клеточных культур при 37 ° С и 5% углекислого газа для выбранного фиксированного периода времени от 1 до 3 ч. Небольшое различие наблюдается между 1 ч и 3 ч временной точке, где достигается насыщение связывания.
- Подготовка для мобильного стиральной / уборки: Заполните 120 мл трубку с 100 мл HBSS. Разливают по 1 мл формалина в каждую лунку свежей 24-луночного планшета.
- После инкубационного периода, использовать пару острых щипцов и забрать стекла покровное из скважины и провести покровное вертикали и промокните края покровного стекла на листе ткани на скамейке в течение 3 сек, стараясь не прикасаться к клеточной покрыта поверхность покровного стекла с тканью.
- Проведение покровное твердо с пинцета, замочить покровное в и из ССРХ пять раз.
- После пятого замочитьв HBSS, приложить к краю покровного стекла на ткани в течение 3 сек.
- Повторите процедуры макая и вытирая, описанные в 3.6 и 3.7, что в общей сложности три комплекта 5 макает с последующим прикосновением.
- Передача покровное в лунку, содержащую 10% формалине, чтобы зафиксировать клетки при комнатной температуре. Покровное готов к перечислению, для длительного хранения или подвергаться другим процедурам, описанным ниже.
4. Маркировка HL-60 клеток с клеточной Tracker (по желанию)
- Количество и передавать соответствующее количество HL-60 клеток (например, 10 млн) в 15 мл центрифужную пробирку. Центрифуга клеток HL-60 при 200 х г в течение 5 мин. Удалить супернатант.
- Ресуспендируют осадок клеток в клеточной Tracker в RPMI без сыворотки средах при концентрации 1000000 клеток / мл. Инкубируйте клетки в культуре клеток инкубаторе в течение 1 часа.
- Центрифуга клетки при 200 мкг в течение 5 мин и отбросить супернатант. Ресуспендируют осадок клеток в среде до концентрации 2000000 CELLS / мл.
- Добавить 0,5 мл клеточной трекер-меченого HL-60 в каждую лунку содержащих эндотелиальных клеток, выращенных на покровного стекла. Продолжить на 3,3.
5. Перечень Клей эндотелиальных клеток
- Гора покровные на слайды микроскопом с DAPI контр-пятно, чтобы идентифицировать отдельные клетки.
- Использование инвертированного микроскопа с 10-кратным или 4X цели, приобретают образы нескольких областях (например, 5 полей) и подсчитать наибольшее количество моноцитов, что совокупный по расследованию облученного эндотелиальных клеток (Это, как правило, должны быть 3-5).
- Установите дважды это число в качестве порога моноцитов на эндотелиальных клеток, которые должны быть определены в кластере. При необходимости, другой критерий может быть использован для определения кластера в зависимости от характера эксперимента.
- Подсчитайте количество кластеров и количество эндотелиальных клеток в области. Разделить бывший последним, чтобы получить процент адгезивных клеток эндотелия. Голмногочисленные поля для получения среднего и стандартного отклонения пунктам.
6. Counterstaining с антителами
- После адгезии анализа и клетки на покровное были зафиксированы в 10% формалине в течение 15 мин при комнатной температуре, при условии покровные на иммунофлуоресценции с использованием стандартной процедуры 10 и антитела выбора.
- Добавить и удалить различные решения очень осторожно, чтобы избежать выбивании моноциты, которые прикреплены к эндотелиальных клеток.
7. Counterstaining для стареющих связано Бета-галактозидазы
- После адгезии анализа и клетки на покровное были зафиксированы в формалине в течение 15 мин, пятен для стареющих связаны бета-галактозидазы, как описано в инструкции, которые сопровождают комплект окрашивания. Добавить и удалить различные решения очень осторожно, чтобы избежать выбивании моноциты, которые прикреплены к эндотелиальных клеток.
Representative Results
Этот метод позволяет выявить отдельных клеевых эндотелиальных клеток в популяции. Например, в то время как монослой не-облучении эндотелиальных клеток сохраняется несколько спорадических HL-60 моноциты следующие инкубации и промывки, эндотелиальной монослоя на 7 дней после облучения 10Gy до инкубации с моноцитов были связаны моноцитов в кластерах вокруг отдельных эндотелиальных клеток ( Фигура 1). Хотя это явление легко наблюдаемым под фазово-контрастной микроскопии, флуоресцентной микроскопии показывает еще более четкое изображение из моноцитов кластеров.
После выполнения описанной адгезии анализа, можно приступить к окрашиванию клеток для мембранной, цитоплазматической или ядерной (рисунок 2) белки, используя соответствующие антитела со стандартными методами иммунофлюоресценции. Кроме того, на основе ферментов, таких как анализ стареющих связаны бета-галактозидазы (фиг.3) также может быть реrformed.
Поскольку каждый кластер моноцитов соответствует отдельному эндотелиальных клеток, перечисление кластеров покажет фактическое число клеевых эндотелиальных клеток в монослое (фиг.4), и, следовательно, процент адгезивных эндотелиальных клеток в популяции (таблица 1, рисунок 6) , Это единственный способ на сегодняшний день, что позволяет такой количественной оценки эндотелиальной липкости клеток. Следует отметить, что эндотелиальные клетки, используемые в экспериментах здесь являются контакт-ингибируется и не увеличению числа после достижения слияния. Это исключает потенциальную сложность, создаваемую увеличением числа эндотелиальных клеток на более поздних временных точках. При желании, моноциты, прикрепленные к эндотелиальных монослоев могут быть смещены от 0,5% раствора трипсина-ЭДТА 0,2% (вместо фиксации в 3,9) и их флуоресценции измеряли с помощью планшет-ридера, как это имеет место в современных методах (рисунок 5). 
Рисунок 1. Адгезия моноцитов на монослой эндотелиальных клеток. На не облученный эндотелиальных клеток, моноцитов придерживались в виде отдельных клеток в спорадической и случайным образом (левая панель) и в кластерах на отдельных эндотелиальных клетках 7 дней после 10 Гр облученных монослой (правая панели). Нижние панели флуоресцентные изображения верхних панелей, подтверждающие, что мелкие и светлые клетки сферические видимые под фазового контраста действительно моноциты, которые были предварительно меченные с сотового-трекер Грин. Некоторые из моноцитов кластеров обозначены белыми стрелками. Изображения были приняты с использованием цели 10X. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2. Окрашивание для эндотелиальных клеток белки после адгезии анализа. После выполнения описанной адгезии анализа клетки на покровных стеклах подвергали иммунофлюоресценции для обнаружения (А) очистки мембранным белком (CD44), б) цитоплазматический белок (тубулина) или с) ядерный белок (γ-Н2АХ). Левые панели (А) и (В) (с 20-кратным видели цель) Показать моноциты предварительно меченных с сотового Tracker Грин и подобным же образом на правой панели выявить CD44 и микротрубочек (красный) и DAPI-окрашенных ядер (синий). Белые стрелки (в) указывают на облученных ядер эндотелиальных клеток, которые окрашивали антителами против γ-H2AX. Моноцитов ядер, которые окрашивали ярче синий с DAPI легко отличить от овальной формы ядер эндотелиальных клеток. Изображения были сделаны с 20-кратным цели. jove.com/files/ftp_upload/52924/52924fig2large.jpg "цель =" _ пустое "> Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 3. Старение-ассоциированные бета-галактозидазы окрашивание эндотелиальных клеток. После адгезии анализа клетки на покровных стеклах подвергали окрашиванию для стареющих связаны бета-галактозидазы, который вызывает лизосомах стареющих клетках, чтобы превратить синий, как это видно в эндотелиальных клеток, что селективно связаны многочисленные моноциты, которые легко определены из-за их малого размера и сферической формы. Сквозь 20-кратным цель изображения. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
2924 / 52924fig4.jpg "/>
Рисунок 4. Перечень моноцитов кластеров на отдельных эндотелиальных клеток. После адгезии анализа, изображения клеток были взяты из нескольких различных позиций и моноцитов кластеров, определенных и (обведено зеленым). Кластер определяется как агломерации 10 или более моноцитов на эндотелиальных клеток. Из моноцитов кластеров и число 12 дней после облученные клетки эндотелия (пунктирная красным) число на картинке были подсчитаны и процент адгезивных клеток эндотелия, рассчитанных, как показано на сделанные через 10X цели таблице 1. Изображение. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть крупная версия этой фигуры.
Рисунок 5. Количественная флуоресценции прикрепленных моноцитов. После адгезив Sion анализа клетки на покровных стеклах трипсинизировали и флуоресценцию моноцитов предварительно метили CellTracker Green измеряли, используя устройство считывания флуоресценции пластины, в качестве косвенного показателя адгезионной способности эндотелиальных монослоя. Результаты таких измерений в указанные дни после облучения были получены и свили на графике выше.
Рисунок 6. Представление баллов адгезии анализа из таблицы 1. Клей эндотелиальные клетки в пяти различных местах на трех покровных стеклах были забиты, как описано на рисунке 4, а результаты сведены в таблицу выше демонстрирует, что через 12 дней после облучения 10 Гр, от 8 до 10 процентов облученной эндотелиальные клетки стал клей.
| 3 "> Процент клея | |||
| Диск 1 | Диск 2 | Диск 3 | |
| Поле 1 | 8.65 | 8.29 | 8.21 |
| Поле 2 | 10.44 | 7,27 | 7.21 |
| Поле 3 | 9.63 | 9.05 | 8.33 |
| Поле 4 | 11.11 | 7,09 | 8.41 |
| Поле 5 | 10.55 | 9.4 | 11.61 |
| Средний | 10.07 | 8.22 | 8.75 |
Таблица 1. адгезии оценки анализа. Клей эндотелиальные клетки в пяти различных местах на трех покровных стеклах были забиты, как описано в Figure 4, а результаты сведены в таблицу выше демонстрирует, что через 12 дней после облучения 10 Гр, от 8 до 10 процентов облученных клеток эндотелия стал клей.
Discussion
Адгезию моноцитов анализ, описанный выше, успешно используется в экспериментах, направленных на изучение биологических эффектов ионизирующего излучения на эндотелиальных монослоев 10. Хотя это не единственный метод, доступный для оценки адгезивность эндотелиальных монослоя, что это единственный способ, который позволяет количественно определить доли или процента эндотелиальных клеток в монослое, который клей. Это важное различие в качестве глобального количественного изменения в адгезии моноцитов, как измерено с помощью других методов можно отнести либо к общему росту адгезионной всех клетках эндотелия монослоя или с увеличением адгезионной субпопуляции клеток эндотелия в монослое, как показано в приведенном выше примере. Значение этой информации иллюстрируется на то, что способность количественно процент эндотелиальных клеток, которые показали повышенную адгезионную после облучения привело к INESспособны вывод, что этот эффект не является следствием генетической мутации определенного гена как процент клеток, которые были адгезив в значительной степени были выше (более 1000 раз больше) того, что можно было бы ожидать от случайной мутации гена от рентгеновского излучения в этой дозе ,
Фактор, который обеспечивает хорошую воспроизводимость результатов стиральная режим. Как процедура промывки включает в себя погружение покровного стекла в буфер стирки с последующим вытирая на ткани, изменчивость в буферной турбулентности, которая неизбежно возникает от старого метода пипетки промывочного буфера в лунку избежать. Действительно это было наблюдение чрезмерной изменчивости между повторами, полученных с помощью метода пипетки, что заставило нас разработать процедуру промывки, что удалены изменчивости элемента из стадии промывки.
Следует признать, что ограниченность этого анализа лежат в необходимости проведения ручной подсчет моноцитов кластеров, которые пOT чтобы его можно было адаптировать для высокой пропускной анализов. Во-вторых, решение о том, как много моноциты составляют кластер должен быть определен полу-произвольно и уровень может быть слишком высокой и привести к исключению некоторых подлинных кластеров. Отсутствие силы сдвига в этом способе можно также рассматривать как ограничение в экспериментах, в которых грубо повышенная адгезия эндотелиальных клеток, индуцированных (например, ФНО) +. В других ситуациях, однако, отсутствие силы сдвига является преимуществом, так как он позволяет обнаруживать менее преувеличенной увеличения клейкости. Модест увеличение моноцитов липкости может быть особенно важным и актуальным. В естественных условиях, моноциты бы не (в типичной экспериментальной времени), как ожидается, приложить в больших количествах эндотелиальных клеток со скромным ростом липкости, во многом благодаря сдвигу силу. В момент, однако, некоторые моноциты, вероятно, будет, и это более вероятно, представляют собой среду хронического воспаления. Как таковой,Отсутствие силы сдвига может быть преимуществом, так как это дает возможность для небольших увеличивается в эндотелиальных клеток липкости быть выявлены в экспериментальных временных рамок, которые, как правило, короткие и, возможно, слишком мимолетным, чтобы скромное увеличение адгезионной наблюдаться при напряжении сдвига.
Способность подвергать клетки после этого анализа в других анализах, таких как увядания анализа и иммунофлуоресцентного увеличивает полезность этого метода, поскольку он позволяет ассоциацию адгезионной конкретных эндотелиальных клеток в частности клеточных белков или клеточных состояний, как показано выше, функцию, которая не доступен с более старыми адгезии анализов.
Этот метод был использован с est2-увековечил человека коронарных эндотелиальных клеток и Аналогичные результаты были получены с первичных человеческих эндотелиальных клеток коронарных 10, демонстрируя, что он не является специфичным для просто конкретной клеточной линии. Кроме того, шумаавтомеханик этого метода количественного определения адгезионной способности эндотелиальных клеток не исключает подвергая те же клетки в стандартном тесте адгезии, который измеряет флуоресценцию меченых иммуноцитов. Вместе, этот доклад показывает, что этот метод является универсальным, всеобъемлющим и предоставляет гораздо больше информации, чем стандартный адгезии анализа.
Disclosures
Авторы не имеют ничего раскрывать.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Hepes Buffered Saline Solution (HBSS) | Sigma | H6648 | |
| Glass coverslips Round 12 mm Diameter | Menzel-Glaser | CB00120RA1 | |
| 24-well cluster plate | Costar | 3526 | |
| Meso-Endo Cell media | Cell Applications | 212-500 | |
| Trypsin-EDTA | Sigma | T4174 | |
| Soybean trypsin inhibitor | Life Technologies | 17075-029 | |
| Cell Tracker Green | Life Technologies | C7025 | |
| RPMI | Sigma | R8758 | |
| Foetal Calf Serum | Life Technologies | 10500064 | |
| Beta glasctosidase Assay kit | CellSignaling | 9860 | |
| Fibronectin | Sigma | F0895 |
References
- Ortega-Gomez, A., Perretti, M., Soehnlein, O. Resolution of inflammation: an integrated view. EMBO Mol Med. 5 (5), 661-674 (2013).
- Libby, P. Inflammation and cardiovascular disease mechanisms. Am J Clin Nutr. 83 (2), 456S-460S (2006).
- Ikuta, S., Kirby, J. A., Shenton, B. K., Givan, A. L., Lennard, T. W. Human endothelial cells: effect of TNF-alpha on peripheral blood mononuclear cell adhesion. Immunology. 73 (1), 71-76 (1991).
- Watson, C., et al. IL-6 acts on endothelial cells to preferentially increase their adherence for lymphocytes. Clin Exp Immunol. 105 (1), 112-119 (1996).
- Sans, M., et al. VCAM-1 and ICAM-1 mediate leukocyte-endothelial cell adhesion in rat experimental colitis. Gastroenterology. 116 (4), 874-883 (1999).
- Su, Y., Lei, X., Wu, L., Liu, L. The role of endothelial cell adhesion molecules P-selectin, E-selectin and intercellular adhesion molecule-1 in leucocyte recruitment induced by exogenous methylglyoxal. Immunology. 137 (1), 65-79 (2012).
- Hallahan, D., Kuchibhotla, J., Wyble, C. Cell adhesion molecules mediate radiation-induced leukocyte adhesion to the vascular endothelium. Cancer Res. 56 (22), 5150-5155 (1996).
- Vaporciyan, A. A., Jones, M. L., Ward, P. A. Rapid analysis of leukocyte-endothelial adhesion. J Immunol Methods. 159 (1-2), 93-100 (1993).
- Prabhakarpandian, B., Shen, M. C., Pant, K., Kiani, M. F. Microfluidic devices for modeling cell-cell and particle-cell interactions in the microvasculature. Microvasc Res. 82, 210-220 (2011).
- Lowe, D., Raj, K. Premature aging induced by radiation exhibits pro-atherosclerotic effects mediated by epigenetic activation of CD44 expression. Aging Cell. 13 (5), 900-910 (2014).
