Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Kvantifiering av endotelceller Vidhäftnings Published: June 18, 2015 doi: 10.3791/52924

Abstract

En av kardinalprocesserna inflammation är infiltration av immunceller från lumen av blodkärlet till den omgivande vävnaden. Detta inträffar när endotelceller, vilka bekläder blodkärl, blir lim på cirkulerande immunceller såsom monocyter. In vitro-mätning av denna vidhäftningsförmåga har hittills gjorts genom att kvantifiera det totala antalet monocyter som vidhäftar till ett endotelskikt antingen som en direkt räkning eller genom indirekt mätning av fluorescensen av vidhäftande monocyter. Även om sådana mätningar gör indikerar den genomsnittliga vidhäftningsförmågan hos endotelceller befolkningen, de förväxlas med ett antal faktorer, såsom antalet celler, och inte avslöja hur stor andel av endotelceller som faktiskt lim. Här beskriver vi och demonstrera ett förfarande som möjliggör räkning av vidhäftande celler i en testad population av endoteliala monoskikt. Endotelceller odlas på täckglas och följande önskasbehandling utmanas med monocyter (som kan vara fluorescensmärkt). Efter inkubation en sköljförfarande, som innefattar multipla omgångar av nedsänkning och avledning, fixeras cellerna. Adhesiva endotelceller, som är omgivna av monocyter identifieras lätt och uppräknade, vilket ger en vidhäftningsindex som avslöjar den faktiska andelen endotelceller inom populationen som är adhesiv.

Introduction

Infiltrering av immunceller, såsom monocyter över endotelcellskikt som kantar blodkärlen är ett viktigt steg i processen av inflammation en. Detta gör att målsökande av immunceller (immunocyter) till en skadestället. I andra fall och platser såsom kranskärls och halspulsådern kan infiltration av monocyter genom endotelskiktet leda till oönskade långsiktiga bosättning av dessa celler i väggen i artären, vilket kan leda till bildandet av plack 2. I alla fall av immunocyt infiltration, innefattar det första steget av aktiveringen av endotelceller i ett lokaliserat område av blodkärlet. Endotelceller aktiveras av proinflammatoriska cytokiner såsom TNF-α och IL-6 för att öka expression av cellyteproteiner såsom VCAM, ICAM och E-selektin som underlättar rekrytering och fastsättning immunocyter på den endoteliala cellytan 3- 6.

7. Begränsningarna med denna metod när det gäller precision ledde till användning av radiomärkt lymfocyter eller monocyter, följt av kvantifiering av radioaktivt material som motsvarar lymfocyter eller monocyter vidhäftning 4. Denna metod så småningom ersatts av en fluorescensbaserad metod, varigenom immunocyter av intresse märktes med fluorescensfärgämne och utsattes för samma procedur som ovan med den skillnaden att fluorescens istället för radioaktivitet mätes 8. För närvarande denna metod har visat sig vara det mest bekväma och säljs i byggsats av flera kommersiella leverantörer. Även om denna analys kan mäta relativa nivåer av vidhäftning mellan kontroller och experimentprover, inte avslöja det om en förändring i fluorescens beror på en enhetlig förändring i vidhäftning över hela endothelial cellpopulation eller om ändringen beror på en skillnad på vidhäftnings inom en sub-population av celler. Det är också uppenbart att stringensen tvätt utövar en djupgående effekt på resultatet, och ännu viktigare, kommer enhetligheten att skölja av obundna monocyter mellan olika endotelceller cellmonoskikt påverkar i hög grad på hur nära resultaten från replikat och reproducerbarhet mellan proven . På senare tid har flera system som pumpar monocyter i media över en endotel encellsskiktet används för att ta itu med det här problemet 9. Dessutom är dessa flödessystem rekapitulera även effekten av skjuvkraften på endotelcellerna. Medan fördelarna med sådana system är tydliga och mycket attraktivt, är det också viktigt att inse att även om endotelcell vidhäftning i hög grad kan utökas, vilket är fallet vid akut inflammation, av faktorer såsom TNFa, vissa andra aktivatorer, såsom joniserande strålning 10 Elicit ändrar thatt är inte lätt detekteras inom in vitro experimentella tidsramar som dessa mycket stränga system. Även om sådana små förändringar av endotelceller vidhäftning är enkelt missat eller avfärdas in vitro, är det inte nödvändigtvis godartad in vivo, där sådana små förändringar i en livstid, som är karaktäristisk för kronisk inflammation, kan utöva mycket betydande resultat. Därför en robust, men ändå känslig och specifik metod för att detektera och mäta endotelceller vidhäftning behövs.

Här rapporterar vi en metod för att mäta vidhäftningsförmågan hos endotelceller direkt. Denna metod är inte beroende av fluorescensmätning som en indirekt surrogat indikator på endotelceller vidhäftning. Det visar om förändringar i vidhäftning beror på enhetliga förändring i alla celler eller begränsad till en delpopulation. Dessutom gör det co-färgning av endotelceller med markörer såsom åldrande associerade beta-galaktosidas, cellviabiliteten marker, Calcien AM och antikroppar mot cellytan och intracellulära proteiner, vilket gör att en sammanslutning av enskilda vidhäftande endotelceller till vissa celltillstånd eller uttryck av specifika proteiner.

Protocol

1. Framställning av täckglas

  1. Sterilisera 12 mm diameter rund täckglas genom att blötlägga dem i 70% etanol i åtminstone 10 minuter med tillfällig omröring för att säkerställa total exponering av alla täck till etanol. Häll glastäck och etanol i en steril cellodlingsskål (antingen 6 cm eller 10 cm i diameter).
  2. Med ett par av sterila fina 5B pincett, plocka upp och placera varje enskild täckglas i en brunn i en 24 väl klusterplatta. Var noga med att se till att täckglasen inte vidrör sidorna av brunnen och är ungefär i mitten av brunnen.
  3. Låt un-täckta 24 väl klusterplatta med täckglas för att torka i flödesskåpet. Detta tar ca 10 min
  4. Under denna period förbereda beläggningsblandningen genom att späda 10 mg / ml humant fibronektin i Hanks balanserade saltlösning (HBSS) till 0,1 mg / ml.
  5. När täckglasen är torra, pipett 100 pl av beläggningslösningen på varje glas coverslip så att lösningen täcker bara glaset utan att samla runt utsidan av brunnen. Placera den täckta 24 brunnars klusterplatta i en cellkultur inkubator i åtminstone en timme.
  6. Strax före användning, ta bort beläggningslösningen. Samma beläggningslösning kan överföras till ett sterilt rör och användes upp till tre gånger med någon synlig förlust av effektivitet.

2. Framställning av Endothelial encellsskiktet

  1. Kultur mänskliga Kranskärls endotelceller (EG) i medium vid 37 ° C och 5% koldioxid.
  2. Sug bort odlingsmedia och skölj EG monolager med 10 ml HBSS
  3. Sug bort HBSS och tillsätt 2 ml 0,5% trypsin, 0,2% EDTA-lösning. Inkubera vid rumstemperatur under approximativt 5 minuter.
  4. När EG kan rubbas av en kran vid sidan av kolven, tillsätt 5 ml sojaböntrypsininhibitor och med pipett sprutar ytan av kolven för att ytterligare rubba cellerna.
  5. Överför celler i ett 15 ml rör och centrifugera röretvid 200 xg under 5 minuter.
  6. Sug bort supernatanten och återsuspendera EG pelleten i 5 ml medium. Räkna celler med en hemocytometer och justera cellkoncentrationen till 50.000 EG per ml EG media.
  7. Dispensera 1 ml av cellsuspension i varje brunn i 24-brunnsplatta innehållande belagda täckglas av glas. Inkubera cellerna O / N i cellkultur inkubator vid 37 ° C plus 5% koldioxid.
  8. Cellerna är redo för användning i experiment när ett sammanflytande monoskikt bildas, inom 3 dagar.

3. Framställning av monocyter

  1. Överför HL-60-celler som är odlade i RPMI kompletterat med 10% fetalt kalvserum, såsom suspensionskultur, i ett 15 ml rör. Centrifugera cellerna vid 200 xg under 5 minuter.
  2. Avlägsna supernatanten och återsuspendera cellerna i 5 ml medium och justera cellkoncentrationen med media till 2.000.000 celler / ml. Om fluorescensmärkning av HL-60 önskas, resuspendera cellerna i RPMI utan serum och proceed som beskrivs i avsnitt 4.
  3. Lägg 0,5 ml HL-60 cellsuspension i varje brunn i 24 brunnars klusterplatta innehållande EG monoskikt och inkubera plattan i en cellkultur inkubator vid 37 ° C och 5% koldioxid under en vald fast tidsperiod mellan 1 och 3 h. Liten skillnad observeras mellan 1 timme och 3 timmar tidspunkt, där bindande mättnad uppnås.
  4. Förbered för cell tvätt / skörd: Fyll en 120 ml rör med 100 ml HBSS. Dispensera 1 ml formalin i varje brunn av en ny 24-brunnsplatta.
  5. Efter inkubationstiden, använda ett par vassa pincett och plocka upp glaset täck från brunnen och hålla täck vertikala och badda kanten av täck på en bit vävnad på bänken under 3 sekunder, noga med att inte röra celltäckta ytan av täckglas med vävnaden.
  6. Håll täck ordentligt med en pincett, dunk täckglas i och ut ur de HBSS fem gånger.
  7. Efter den femte dunki HBSS, DAB kanten på täckglaset på vävnaden i 3 sek.
  8. Upprepa dunking och dutta förfaranden som beskrivs i 3.6 och 3.7, vilket ger totalt tre uppsättningar av fem dunkar följt av en klick.
  9. Överför täckglas i en brunn innehållande 10% formalin för att fixera cellerna vid RT. Den täck är redo för räkning, för långtidslagring eller underkastas andra förfaranden som beskrivs nedan.

4. Märkning av HL-60-celler med cell Tracker (tillval)

  1. Räkna och överföra lämplig mängd av HL-60-celler (t.ex., 10 miljoner) till ett 15 ml centrifugrör. Centrifugera HL-60-celler vid 200 xg under 5 minuter. Avlägsna supernatanten.
  2. Resuspendera cellpelleten i Cell Tracker i RPMI-medium utan serum vid en koncentration av 1 miljon celler / ml. Inkubera cellerna i cellkultur inkubator under 1 timme.
  3. Centrifugera cellerna vid 200 xg under 5 minuter och kassera supernatanten. Resuspendera cellpelleten i medium till en koncentration av 2 miljoner cElls / ml.
  4. Tillsätt 0,5 ml cell Tracker-märkta HL-60 i varje brunn innehåller endotelceller odlas på glas täck. Fortsätt på 3,3.

5. Räkning av Adhesive endotelceller

  1. Mount täck på objektglas med DAPI motfärgning att identifiera enskilda celler.
  2. Använda ett inverterat mikroskop med en 4X eller 10X objektiv, hämta bilder från flera områden (t.ex. 5 fält) och räkna det högsta antalet monocyter som samlar på un-bestrålade endotelceller (Detta bör normalt vara 3-5).
  3. Set två gånger detta antal som tröskelnivå av monocyter på en endotelcell som skall den som definieras som ett kluster. Vid behov kan ett annat kriterium skall användas för att definiera ett kluster beroende på naturen av experimentet.
  4. Räkna antalet kluster och antalet endotelceller i fältet. Dividera den förra av den senare för att erhålla den procentuella andelen av vidhäftande endotelceller. Värderingmånga områden för att erhålla ett medelvärde och standardavvikelse av räknevärdena.

6. Motfärgning med antikroppar

  1. Efter adhesionsanalysen och celler på täckglaset har rättats i 10% formalin under 15 min vid RT, utsätta täckglasen till immunofluorescens med användning av standardförfarande 10 och antikroppar av valet.
  2. Lägg till och ta bort de olika lösningarna mycket försiktigt för att undvika att rubba monocyter som är knutna till endotelceller.

7. Motfärgning för Åldrande associerade beta-galaktosidasaktivitet

  1. Efter adhesionsanalysen och celler på täck har rättats i formalin under 15 minuter, bets för åldrande associerade beta-galaktosidasaktivitet som beskrivs i instruktionerna som medföljer färgningskit. Lägg till och ta bort de olika lösningarna mycket försiktigt för att undvika att rubba monocyter som är knutna till endotelceller.

Representative Results

Denna metod möjliggör detektering av individuella adhesiva endotelceller inom en population. Till exempel, medan en monolager av un-bestrålade endotelceller behållit några sporadiska HL-60 monocyter efter inkubation och tvätt, endothelial monolager vid 7 dagar efter 10Gy bestrålning före inkubation med monocyter bundna av monocyter i kluster kring enskilda endotelceller ( Figur 1). Även om detta fenomen är lätt observerbara enligt faskontrastmikroskopi, fluorescensmikroskopi avslöjar en ännu tydligare bild av monocyt kluster.

Efter att ha utfört den beskrivna vidhäftningsanalysen, är det möjligt att gå vidare till färgning av cellerna för membran, cytoplasmatiska eller nukleära (Figur 2) proteiner med användning av lämpliga antikroppar med standardimmunfluorescensmetoder. Vidare kan enzymbaserad analys såsom senescens-associerade beta-galaktosidas (Figur 3) även är performed.

Eftersom varje monocyt kluster motsvarar en enskild endotelcell, kommer räkning av klustren avslöja det verkliga antalet vidhäftande endotelceller i monoskiktet (fig 4), och följaktligen procentandelen vidhäftande endotelceller inom populationen (Tabell 1, Figur 6) . Detta är det enda sättet att datum som tillåter en sådan kvantifiering av endotelceller vidhäftning. Det är anmärkningsvärt att de endotelceller som används i experimenten här är kontakt hämmas och inte öka i antal efter att ha uppnått konfluens. Detta eliminerar potentiella komplexitet som orsakas av ökad endotelial cellantalet vid senare tidpunkter. Om så önskas kan monocyter fästa till endoteliala monoskikt rubbas med 0,5% trypsin-0,2% EDTA-lösning (i stället för fixering i 3,9) och deras fluorescens mättes med användning av en plattläsare, vilket är fallet i moderna metoder (Figur 5). Figur 1
Figur 1. Adhesion av monocyter på monoskikt av endotelceller. På un-bestrålade endotelceller, monocyter vidhäftade som individuella celler i en sporadisk och slumpmässigt sätt (vänster paneler) och i kluster om enskilda endotelceller hos de 7 dagar efter 10 Gy bestrålade monolager (höger sida). Lägre paneler är fluorescens bilder av de bästa paneler, bekräftar att de små och ljusa sfäriska celler synliga i faskontrast verkligen monocyter som pre-märkta med Cell-Tracker Green. Vissa av monocyt kluster indikeras med vita pilar. Bilder togs med hjälp av en 10X objektiv. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figur 2
Figur 2. Färgning av endotelceller för proteiner eftervidhäftningsanalys. Efter att ha utfört den beskrivna vidhäftningsanalysen, cellerna på täckglas av glas utsattes för immunfluorescens för detekteringen av (A) membranprotein (CD44), b) cytoplasmiskt protein (tubulin) eller c) nukleärt protein (γ-H2AX). Vänster paneler av (A) och (B) (sett med 20X objektiv) visar monocyter pre-märkt med Cell Tracker gröna och liknande bilden på höger sida visar CD44 och mikrotubuli (röd) och DAPI-färgade kärnor (blå). Vita pilar i (C) pekar på bestrålade endothelial cellkärnor som färgades med antikroppar mot γ-H2AX. Monocyt kärnor som är färgade en ljusare blå av DAPI lätt skiljas från de ovala formade kärnor endotelcellerna. Bilder togs med 20X objektiv. jove.com/files/ftp_upload/52924/52924fig2large.jpg "target =" _ blank "> Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figur 3
Figur 3. Åldrande associerade beta-galaktosidas-färgning av endotelceller. Efter vidhäftningsanalys, celler på täckglas utsattes för färgning för senescens-associerade beta-galaktosidas som orsakar lysosomer åldrande celler att bli blå, som är uppenbart i endotelcellen som selektivt bunden av talrika monocyter, som lätt identifieras på grund av deras ringa storlek och sfärisk form. Bild sedd genom 20X objektiv. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

2924 / 52924fig4.jpg "/>
Figur 4. Uppräkning av monocyt kluster på enskilda endotelceller. Efter adhesionsanalysen, bilder av cellerna togs från flera olika positioner och monocyt kluster identifierats och cirklade (i grönt). Ett kluster definierades som en anhopning av 10 eller fler monocyter på en endotelcell. Antalet monocyt kluster och antalet 12 dagar efter bestrålade endotelceller (prickade i rött) i bilden räknades och andelen vidhäftande endotelceller beräknas enligt tabell 1. Bild tagen genom 10X objektiv. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figur 5
Figur 5. Kvantifiering av fluorescens av vidhäftande monocyter. Efter adhE sionsanalys, celler på täckglas av glas trypsiniserades och fluorescensen av monocyter i förväg märkt med Celltracker Grön mättes, med användning av en fluorescensplattläsare, som en indirekt indikator på vidhäftningsförmågan hos endoteliala monoskiktet. Resultat från sådana mätningar på angivna dagar efter bestrålning erhölls och platted i diagrammet ovan.

Figur 6
Figur 6. Representation av adhesionsanalysen poäng från Tabell 1. Självhäftande endotelceller i fem olika platser på tre glastäck bedömdes som beskrivs i fig 4 och resultaten i tabellen ovan visar att 12 dagar efter 10 Gy strålning, 8 till 10 procent av bestrålat endotelceller blev adhesiv.

3 "> Procent av bindemedel
endotelceller
Skiva 1 Skiva 2 Skiva 3
Fält 1 8,65 8,29 8,21
Fält 2 10,44 7,27 7,21
Fält 3 9,63 9,05 8,33
Fält 4 11,11 7,09 8,41
Fält 5 10,55 9,4 11,61
Genomsnitt 10,07 8,22 8,75

Tabell 1. Vidhäftningsanalys betyg. Självhäftande endotelceller i fem olika platser på tre glastäck bedömdes som beskrivs i Figure 4 och resultaten i tabellen ovan visar att 12 dagar efter 10 Gy strålning, 8 till 10 procent av bestrålade endotelceller blev lim.

Discussion

Monocyt vidhäftning analys som beskrivs ovan användes framgångsrikt i experiment utformade för att studera de biologiska effekterna av joniserande strålning på endotel monolager 10. Även om detta inte är den enda metod som finns tillgänglig för att bedöma vidhäftningsförmågan hos en endotel monoskikt, är det den enda metod som tillåter kvantifiering av andelen eller procentandelen endotelceller inom ett monoskikt som är vidhäftande. Detta är en viktig skillnad som en global kvantitativ förändring i vidhäftning av monocyter, kan mätt med andra metoder tillskrivas antingen till en allmän ökning av vidhäftningsförmågan hos alla celler i endothelial monolager eller till ökningen vidhäftningsförmågan hos en undergrupp av endotelceller inom monolagret, såsom visas i exemplet ovan. Värdet av att ha denna information exemplifieras av det faktum att möjligheten att kvantifiera den andel av endotelceller som uppvisade förbättrad vidhäftningsförmåga efter bestrålning ledde till de ineskapabel slutsatsen att denna effekt inte beror på genetisk mutation av en viss gen som den procentuella andelen celler som var adhesiv var kraftigt ovan (mer än 1000 gånger mer) den som skulle förväntas från slumpmässig mutation av en gen av röntgenstrålning vid denna dos .

Den faktor som medger god reproducerbarhet av resultaten är tvätt regimen. Som tvättproceduren involverar nedsänkning av glastäckglas i tvättbuffert följt genom att badda på en vävnad, är variabiliteten i buffert turbulens som oundvikligen uppstår från den gamla metoden med pipettering av tvättbuffert i en brunn undvikas. I själva verket var det observation av överdriven variabilitet mellan replikat som erhållits med hjälp av pipetteringsmetod som tvingade oss att ta fram en tvättproceduren som bort variationen elementet från tvättningssteget.

Visserligen de begränsningar av denna analys ligger i behovet att utföra manuell räkning av monocyt kluster, som gör not att den kan anpassas för högeffektiv analys. För det andra har beslutet om hur många monocyter utgör ett kluster som skall fastställas halv godtyckligt och nivån kan ställas in för hög och resulterar i uteslutning av vissa äkta kluster. Avsaknaden av skjuvkraft i denna metod kan också ses som en begränsning i experiment där grovt förbättrad vidhäftning av endotelceller induceras (t.ex. + TNFa). I andra situationer dock bristen på skjuvkraft är en fördel eftersom det gör det möjligt att upptäcka mindre överdriven ökning av vidhäftning. Modest ökning av monocyt vidhäftning kan vara särskilt viktig och relevant. In vivo monocyter skulle inte (i en typisk experimentell tid) förväntas att fästa i stora skaror till endotelceller med blygsam ökning i vidhäftningsförmåga, till stor del på grund av tvärkraft. Med tiden dock vissa monocyter skulle förmodligen, och det är mer sannolikt att representera miljön av kronisk inflammation. Som sådan,avsaknad av tvärkraft kan vara en fördel, eftersom det ger möjlighet till små ökningar i endotelceller vidhäftnings att uppenbaras i experimentella tidsramar som är typiskt kort och möjligen alltför flyktig för att medge blygsam ökning av vidhäftnings att observeras under skjuvspänning.

Förmågan att utsätta cellerna efter denna analys till andra analyser såsom åldrande analys och immunofluorescensfärgning ökar användbarheten av denna metod eftersom den tillåter en sammanslutning av vidhäftning av specifika endotelceller till särskilda cellulära proteiner eller cellulära tillstånd som visats ovan, en funktion som är inte tillgängligt med äldre vidhäftningsanalyser.

Denna metod har använts med est2-immortaliserade humana koronara endotelceller och liknande resultat erhölls också med primära humana koronara endotelceller 10, vilket visar att det inte är specifikt för bara en viss cellinje. Även ADOption av denna metod för analys av vidhäftning av endotelceller utesluter inte utsätta samma celler med standardvidhäftningsanalys som mäter fluorescens av märkta immunocyter. Tillsammans visar denna rapport att denna metod är mångsidig, inkluderande och ger mycket mer information än standard adhesionsanalysen.

Disclosures

Författarna har ingenting att lämna ut.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Hepes Buffered Saline Solution (HBSS) Sigma H6648
Glass coverslips Round 12 mm Diameter Menzel-Glaser CB00120RA1
24-well cluster plate Costar 3526
Meso-Endo Cell media Cell Applications 212-500
Trypsin-EDTA Sigma T4174
Soybean trypsin inhibitor Life Technologies 17075-029
Cell Tracker Green Life Technologies C7025
RPMI Sigma R8758
Foetal Calf Serum Life Technologies 10500064
Beta glasctosidase Assay kit   CellSignaling 9860
Fibronectin Sigma F0895

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Ortega-Gomez, A., Perretti, M., Soehnlein, O. Resolution of inflammation: an integrated view. EMBO Mol Med. 5 (5), 661-674 (2013).
  2. Libby, P. Inflammation and cardiovascular disease mechanisms. Am J Clin Nutr. 83 (2), 456S-460S (2006).
  3. Ikuta, S., Kirby, J. A., Shenton, B. K., Givan, A. L., Lennard, T. W. Human endothelial cells: effect of TNF-alpha on peripheral blood mononuclear cell adhesion. Immunology. 73 (1), 71-76 (1991).
  4. Watson, C., et al. IL-6 acts on endothelial cells to preferentially increase their adherence for lymphocytes. Clin Exp Immunol. 105 (1), 112-119 (1996).
  5. Sans, M., et al. VCAM-1 and ICAM-1 mediate leukocyte-endothelial cell adhesion in rat experimental colitis. Gastroenterology. 116 (4), 874-883 (1999).
  6. Su, Y., Lei, X., Wu, L., Liu, L. The role of endothelial cell adhesion molecules P-selectin, E-selectin and intercellular adhesion molecule-1 in leucocyte recruitment induced by exogenous methylglyoxal. Immunology. 137 (1), 65-79 (2012).
  7. Hallahan, D., Kuchibhotla, J., Wyble, C. Cell adhesion molecules mediate radiation-induced leukocyte adhesion to the vascular endothelium. Cancer Res. 56 (22), 5150-5155 (1996).
  8. Vaporciyan, A. A., Jones, M. L., Ward, P. A. Rapid analysis of leukocyte-endothelial adhesion. J Immunol Methods. 159 (1-2), 93-100 (1993).
  9. Prabhakarpandian, B., Shen, M. C., Pant, K., Kiani, M. F. Microfluidic devices for modeling cell-cell and particle-cell interactions in the microvasculature. Microvasc Res. 82, 210-220 (2011).
  10. Lowe, D., Raj, K. Premature aging induced by radiation exhibits pro-atherosclerotic effects mediated by epigenetic activation of CD44 expression. Aging Cell. 13 (5), 900-910 (2014).

Tags

Cellulär Biology Utgåva 100 Atherosclerosis Endotelceller monocyter Adhesion inflammation vidhäftningsanalys
Kvantifiering av endotelceller Vidhäftnings<em&gt; In Vitro</em
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Lowe, D. J., Raj, K. Quantitation of More

Lowe, D. J., Raj, K. Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro. J. Vis. Exp. (100), e52924, doi:10.3791/52924 (2015).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter