Introduction
Polímeros de coordinación poroso (PCP) son compuestos de coordinación basado en centros metálicos unidos por ligandos orgánicos con la repetición de las entidades de coordinación que se extienden en 1, 2 o 3 dimensiones que pueden ser amorfo o cristalino 1-3. En los últimos años, esta clase de materiales porosos ha atraído una gran atención debido a su alta porosidad, tunability química de ancho, y su estabilidad. PCP se han explorado para una gama de aplicaciones, incluyendo el almacenamiento de gas, separación de gas, y la catálisis 3-6, y muy recientemente, las primeras aplicaciones analíticas de los PCP se han descrito 7.
Debido a su mayor funcionalidad química y alta porosidad PCP han sido blanco por su enorme potencial para la mejora de los procesos de purificación y separaciones cromatográficas, y una serie de informes sobre este tema se han publicado 7-13. Sin embargo, el rendimiento de los PCP no se encuentra actualmente en un Equivalenivel nt con materiales cromatográficos existentes probablemente debido a la rápida difusión a través de grandes huecos entre partículas en lechos de relleno de estos sólidos debido a sus morfologías normalmente de forma irregular de sus partículas o cristales. Este embalaje distribuida irregularmente conduce a un rendimiento menor de lo esperado, así como contrapresiones alta columna e indeseables morfologías forma de pico 14,15.
Con el fin de resolver el problema de la rápida difusión a través de los huecos entre las partículas y concomitantemente mejorar el rendimiento de los PCP para aplicaciones analíticas, el desarrollo de un material híbrido basado en un monolito de polímero macroporoso 16 que contiene el PCP en la superficie de los macroporos haría ser deseable. Monolitos de polímeros son materiales de una sola pieza que puedan sostener el flujo convectivo a través de sus poros, lo que los convierte en una de las alternativas más eficientes para cordón de envases y se han comercializado con éxito por varios c autónomo as empresas 17,18. Monolitos polímero poroso se basan generalmente en la polimerización de un monómero y un reticulante en presencia de porógenos, que son típicamente mezclas binarias de solventes orgánicos. Los materiales monolíticos obtenidos tienen una estructura microglobular y una alta porosidad y el flujo de permeabilidad.
Un enfoque simple para unificar estos materiales para preparar un monolito de polímero que contiene un PCP se basa en la adición directa de los PCP tal como se sintetizan en la mezcla de polimerización del monolito. Este enfoque dio lugar a los PCP enterrado en su mayoría dentro de un esqueleto de polímero, y no ser activo para la aplicación ulterior del material final 14,15. Un enfoque sintético diferente es claramente necesario con el fin de, por ejemplo, desarrollar películas uniformes de PCP, o marcos de metal-orgánicos cristalinos (MOF) donde la mayoría de los poros contenidos en el cristal son accesibles desde los macroporos del monolito de polímero.
t "> Aquí nos presenta un protocolo simple para la preparación de un material híbrido de metal-polímero orgánico (MSP), basado en un soporte de polímero macroporoso con grupos funcionales adecuados para la unión de PCP, que pueden ser implementados fácilmente como un auto-contenida sola monolito de polímero -piece en un formato de columna con propiedades óptimas para aplicaciones de flujo continuo. El procedimiento de síntesis de polímeros es seguido por una solución basada en la temperatura ambiente sencillo método para hacer crecer un recubrimiento de PCP en la superficie interna de los poros de la monolito 19-20. Como el primer ejemplo, se describe la preparación de un hierro (III) benzenetricarboxylate (FeBTC) película de polímero de coordinación dentro de un poli macroporoso (ácido estireno-divinilbenceno-metacrílico) monolito. Este método es eficaz para la preparación de polvos a granel, así como columnas capilares y el protocolo descrito es fácilmente implementable a otros PCP. Como un ejemplo del potencial de MOPHs como materiales funcionales para el flujo-throuaplicaciones gh, que aplican los países desarrollados FeBTC Ministerio de Salud Pública, que contiene una capa densa de Fe (III) centros para enriquecer fosfopéptidos de mezclas de proteínas digeridas explotan la afinidad de unión de fosfopéptidos a Fe (III). El protocolo desarrollado 21 se compone de tres partes principales: Preparación del soporte monolito de polímero orgánico macroporoso; el crecimiento del revestimiento PCP en la superficie de los poros de la monolito; aplicación para el enriquecimiento de fosfopéptidos.Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
NOTA: Antes de comenzar, compruebe todas las hojas de datos de materiales pertinentes (MSDS). Varios de los productos químicos utilizados en los procedimientos de síntesis y de aplicación son tóxicos. Siga todas las prácticas de seguridad apropiadas y utilizar el equipo adecuado de protección (bata, pantalones largos, zapatos cerrados, gafas de seguridad, guantes). Utilice todo el equipo de protección personal al manipular criogénica de nitrógeno líquido para las medidas de adsorción de nitrógeno (guantes aislantes, careta).
1. poroso polímero Preparación Monolito a Granel y Formato de columna capilar
- Bulk Polymer Monolith para la caracterización
- Purificar estireno, divinilbenceno y ácido metacrílico a través de una columna de alúmina básica, con el fin de eliminar los inhibidores de la polimerización. Colocar 10 g de alúmina básica en un ml jeringa de plástico desechable 25 con una torunda de lana de vidrio de envasado en la punta de la jeringa. Hacer pasar aproximadamente 10 ml de monómero a través de la columna.
- Cargar los monómeros (50 mg estireno, divinilbenceno 100 mg y 50 mg de ácido metacrílico) y los agentes formadores de poros (300 mg de tolueno y 300 mg isooctano) en un vial de vidrio de 1 ml. Añadir el iniciador de la polimerización, 4 mg de 2,2'-azobisisobutironitrilo (AIBN, 1% con respecto a los monómeros).
- Homogeneizar por sonicación durante 10 min. Eliminar el oxígeno disuelto por burbujeo de nitrógeno a través del líquido durante 10 min. Sellar la tapa del frasco con la película de parafina y colocarlo en un baño de agua a 60 ° C durante 6 horas para polimerizar la mezcla.
- Enfriar a temperatura ambiente y romper el frasco con cuidado. Transferir el monolito de polímero en un dedal de extracción de celulosa. Colocar el cartucho de extracción en una cámara de extracción Soxhlet y ensamblar a un matraz de fondo redondo que contiene un volumen de metanol, que es al menos tres veces el volumen de la cámara de extracción. Montar un condensador a la parte superior de la cámara de extracción. Realizar la extracción Soxhlet por ebullición del metanoldurante 16 h, asegurando la eliminación completa de los monómeros sin reaccionar y agentes formadores de poros.
- Secar durante la noche en un horno de vacío a 60 ° C. Confirmar la presencia de grupos funcionales carboxílicos para unir el PCP por Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FT-IR). Medir el área de superficie por porosimetría de adsorción de nitrógeno.
- La funcionalización de sílice Capilares para la Preparación de columnas monolíticas
- Cortar 2 m de 100 micras Identificación del capilar de sílice fundida de poliamida recubierto. Conéctelo a una jeringa de vidrio desde 0,25 hasta 0,50 ml y lavar el capilar con acetona. Eliminar la acetona por aclarado el capilar con agua.
- Con el fin de activar el recubrimiento de sílice interna del capilar, utilizar una bomba de jeringa a fluir una solución 0,2 M acuosa de NaOH a 0,25 l / min durante 30 min. Enjuague con agua hasta que el efluente es neutral.
- Utilice tiras de papel de pH para comprobar el pH del efluente. Con el fin de protonar los grupos silanol del capilar, bombear un aqueo 0,2 Msolución de HCl nosotros a través del capilar a 0,25 l / min durante 30 min. Enjuague con agua hasta que el efluente es neutral. Enjuague con etanol.
- Bombear un 20% (w / w) solución de etanol de 3- (trimetoxisilil) propil metacrilato (pH 5 ajustado con ácido acético) en 0,25 l / min durante 1 hora. En este paso, el capilar de sílice está funcionalizado con grupos vinilo con el fin de fijar el monolito de polímero a la superficie interior capilar.
- Enjuague con acetona y seco, en una corriente de nitrógeno y dejar a temperatura ambiente durante la noche antes de su uso. Cortar el capilar en pedazos más cortos de longitud 20 cm.
- Preparación de columnas monolíticas capilares
- Preparar una mezcla de polimerización idénticas como para el monolito de polímero a granel (sección 1.1) en un vial de vidrio de 1 ml con un septo de caucho. Añadir iniciador AIBN 1% con respecto a los monómeros. Homogeneizar por sonicación durante 10 min.
- Purgar la mezcla de polimerización con nitrógeno mediante el acoplamiento de un capilar de sílice no funcionalizadoa una corriente de nitrógeno.
- Insertar el capilar corriente de nitrógeno a través del septo de caucho del vial y sumergirlo en la mezcla de polimerización de manera que el nitrógeno burbujas a través del líquido. Deje la tapa del frasco ligeramente suelto para evitar sobrepresiones. Purgar durante 10 min.
- Levantar el capilar corriente de nitrógeno de la mezcla de polimerización para el espacio de cabeza del vial, y cerrar herméticamente la tapa. Insertar un capilar funcionalizado a través del septo en la mezcla de polimerización. El exceso de presión generada en el capilar a través del nitrógeno inyectado en el espacio de cabeza bombea la mezcla de polimerización a través del capilar funcionalizado.
- Recoger varias gotas de mezcla de polimerización a partir del efluente del capilar para asegurarse de que está completamente lleno y cerrarlo con un tapón de caucho. Tome el capilar fuera del vial muy cuidadosamente y cerrar la entrada del capilar con un septum de goma.
- Polimerizar la mezclatura contenida en el capilar en un baño de agua a 60 ° C durante 6 horas. Enfriar a temperatura ambiente y cortar unos pocos milímetros de ambos extremos del capilar. Eliminar los monómeros sin reaccionar y agentes formadores de poros mediante el lavado de la columna con acetonitrilo utilizando una bomba de HPLC a 3 l / min durante 30 min. Compruebe contrapresión de la columna capilar.
2. Crecimiento del Hierro-benzenetrycarboxylate (FeBTC) PCP
- Crecimiento del FeBTC MSP en un polímero a granel Monolito para la caracterización
- Moler el monolito previamente secado utilizando un mortero.
- Sumergir 100 mg del polvo monolito en 5 ml de 2 mM FeCl 3 · 6H 2 O en etanol durante 15 min. Filtro de vacío usando un filtro de nylon (0,22 micras) y se lava el polvo con etanol. Sumergir el polvo monolito en 5 ml de 2 mM de ácido 1,3,5-bencenotricarboxílico (BTC) en etanol durante 15 min. Filtro de vacío usando un filtro de nylon (0,22 micras) y se lava el polvo con etanol.
- Repita el paso número 2 como se desee. El crecimiento de la capa de metal-orgánica final será definido por el número de ciclos aplicados. Típicamente, se realizan entre 10 y 30 ciclos. Confirmar la presencia de nuevos poros por porosimetría de adsorción de nitrógeno. Medir la cantidad de sitios de metal adicionales por análisis termogravimétrico (TGA).
- Crecimiento de la FeBTC Ministerio de Salud Pública en una columna monolítica capilar para el enriquecimiento de fosfopéptidos
- El uso de una bomba de jeringa. Enjuague el monolito capilar con 2 mM FeCl 3 · 6H 2 O en etanol durante 15 min a 2 l / min. Lavar con etanol durante 15 min a 2 l / min. Enjuague el monolito capilar con una mM BTC 2 en etanol durante 15 min a 2 l / min. Lavar con etanol durante 15 min a 2 l / min.
- Repita el paso 1 como se desee. El crecimiento de la capa de metal-orgánica final será definido por el número de ciclos realizados.
3. La proteína de digestión y Enrichment de Phosphopeptides
- La digestión de proteínas
- Disolver 0,5 ml de leche desnatada en 1 ml de agua y se divide en 200 l fracciones.
- Para la digestión de las proteínas añadir bicarbonato de amonio 160 l 1 M y ditiotreitol 50 l 45 mM de cada fracción, con el fin de escindir los enlaces disulfuro. Incubar a 50 ° C en un termomezclador durante 15 min.
- Añadir poco a poco 50 l de una solución acuosa de yodoacetamida 100 mM, mientras que la solución se enfrió a temperatura ambiente. Yodoacetamida evitará la formación de nuevos enlaces disulfuro.
- Incubar en la oscuridad durante 15 min a temperatura ambiente. Añadir 1 ml de agua desionizada. Añadir 2 g de tripsina y digerir las proteínas en un termomezclador a 37 ° C durante 14 horas.
- Terminar la digestión por acidificación con 10 l de ácido trifluoroacético al 1%, y colocándolo en el termomezclador durante 5 min a temperatura ambiente. Guarde las proteínas digeridas a -20 ° C.
- Enriquecimiento de fosfopéptidos utilizando una columna capilar Ministerio de Salud Pública.
- Lavar la columna con 100 l de una mezcla 4: 1 de acetonitrilo que contiene un ácido trifluoroacético al 0,1% durante 10 min a un caudal de 1 l / min. Bombear la digestión de la proteína a través de la columna a 2 l / min durante 30 min.
- Lavar los péptidos no fosforilados de nuevo con una mezcla 4: 1 de acetonitrilo que contiene un ácido trifluoroacético al 0,1% durante 10 min a un caudal de 1 l / min. Lavar con agua durante 10 min a un caudal de 1 l / min.
- Fosfopéptidos eluir utilizando una solución tampón de pH 7 de fosfato 250 mM bombeado a 1 l / min durante 15 min. Recoger el eluyente en un vial y desalar la solución utilizando un protocolo estándar 19. Preparar un ácido / ml de 2,5-dihidroxibenzoico 2 mg de utilizarlo como la matriz para la espectrometría de láser asistida por matriz de desorción / ionización tiempo de vuelo de masas (MALDI-TOF-MS). Dibujado 2 l de ácido 2,5-dihidroxibenzoico en la punta para eluir el phosphopeptides y detectar directamente sobre la placa de MALDI.
- Analizar las manchas por MALDI-TOF-MS y regenerar la columna mediante el lavado a fondo con agua y luego metanol.
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Representative Results
Una ilustración esquemática de la PCP crecimiento en la superficie de los poros del monolito de polímero orgánico se muestra en la Figura 1. En esta figura, se ilustra el inicial Fe (III) átomos retenidas en la superficie de los poros del monolito de polímero original, coordinado a grupos funcionales carboxílicos . Utilizando el protocolo descrito en el presente documento ligando orgánico adicional y Fe iones (III) se añaden a la superficie, la conformación de una red de coordinación poroso dentro del monolito de polímero. La figura 1 también muestra esquemáticamente el uso de la columna capilar Ministerio de Salud Pública el preparado como soporte de flujo pasante para el enriquecimiento de fosfopéptidos. Superficie y mediciones de la distribución de poros, una imagen de microscopía electrónica de barrido (SEM), FT-IR y TGA se recogieron para los materiales preparados (Figura 2). Estos experimentos de caracterización proporcionaron información valiosa acerca de la aparición de nuevos poros después de que el crecimiento de la FeBTC PCP (Figura 2). La morphology del material después de la modificación con el FeBTC PCP se muestra en la Figura 2B. Sobre la base de la simulación cristalográfica, el espesor de la capa de MOF cada individuo se estima en 3 y 5 Å, dependiendo de la orientación del cristal en crecimiento. Los espectros de FT-IR demuestran la presencia de grupos funcionales en el monolito de polímero tal como se sintetiza y sus homólogos modificados con diferentes números de ciclos FeBTC (Figura 2C). TGA muestra la estabilidad térmica y el aumento de los sitios de metal (Figura 2D) obtenidos después de la modificación del monolito de polímero inicial. El residuo a 600 ° C es α-Fe 2 O 3, según lo confirmado por polvo de difracción de rayos X. La presencia de hierro en el formato de columna capilar se detecta por espectroscopia de energía dispersiva de rayos X 21. La Figura 3 muestra un ejemplo de una aplicación de ejemplo real de material MSP desarrollado para el enriquecimiento de fosfopéptidos deuna digestión de la leche sin grasa.
Figura 1:. Esquema (A) Ilustración que muestra las principales etapas para la preparación de una columna capilar MSP para la extracción de fosfopéptidos. (B) Ilustración del procedimiento para la extracción de fosfopéptidos utilizando la columna preparada Ministerio de Salud Pública.
Figura 2: Bulk resultados de la caracterización FeBTC MSP (A) de distribución de tamaño de poro y adsorción de nitrógeno isotermas del monolito polímero orgánico original y el Ministerio de Salud Pública después de 30 ciclos de coordinación.. Imagen (B) SEM de la MSP después de 30 ciclos de coordinación. (C) los espectros de FT-IR del monolito de polímero original y el Ministerio de Salud Pública después de 10, 20 y 30 ciclos de coordinación. (D) TGA del monolito de polímero original después de un único lavado con la solución de precursor metálico, y después de 10, 20 y 30 ciclos de coordinación. (Adaptado de ref. 21 con permiso de John Wiley & Sons.)
Figura 3: El enriquecimiento de fosfopéptidos de leche utilizando un capilar FeBTC MSP columna de MALDI-TOF-MS espectros de una muestra de leche sin grasa digerida antes y después del enriquecimiento utilizando una columna capilar MSP después de 10 ciclos de coordinación FeBTC.. MS picos resultantes de fosfopéptidos se indican con asteriscos, mientras que los fragmentos desfosforilado se indican con hashes. Phosphopeptides fueron asignados utilizando referencias bibliográficas 23-27. (Tomado de ref. 21 con permiso de John Wiley & Sons.)
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Discussion
El monolito de polímero original contiene grupos funcionales carboxílicos capaces de unirse a los metales. La coordinación de los sitios de metal iniciales sobre el material original, somos capaces de hacer crecer una capa PCP (Figura 1), la incorporación de una serie de sitios de metales adicionales que configuran una red microporosa. Esto hace que los materiales presentados MSP atractivos para los procedimientos de extracción o purificación donde están involucrados especies metálicas, tales como la técnica de cromatografía de afinidad de iones metálicos inmovilizados (IMAC). El procedimiento general usando una columna capilar para el enriquecimiento de fosfopéptidos se muestra en la Figura 1B.
La preparación de los monolitos de polvo a granel activar la caracterización del material monolítico original y sus homólogos modificados. Medimos las isotermas de absorción de N 2 a 77 K (Figura 2), lo que demuestra que después de 30 ciclos de PCP la absorción de N 2 a baja P / P o en gran medidaaumentado, lo que indica la presencia de nuevos microporos en el material. La superficie de los aumentos monolito originales casi cuatro veces, de 106 m 2 / g a 389 m 2 / g. Sólo la realización de un pequeño número de ciclos (10 ciclos PCP) un aumento de la porosidad del material a una superficie de 156 m 2 / g se midió. La preparación de los materiales porosos utilizando el enfoque detallado no se limita sólo a los médicos de cabecera a base de Fe. Sustituyendo el Fe por Cu, se requirieron sólo 10 ciclos de la CuBTC recubrimiento resultante para aumentar el área de superficie de la MSP de 106 m 2 / g a 219 m 2 / g. Los nuevos poros presentes en el material modificado tienen un diámetro menor que 3 nm como se muestra en la distribución del tamaño de poro (Figura 2A). Se examinó la distribución de la PCP recubrimiento en la superficie del monolito de polímero usando SEM. Figura 2B, muestra un monolito después de ciclos 30 de PCP, que consta de una estructura porosa basado en una microglobular red, reteniendo así la morfología inicial del monolito de polímero inicial. Las grandes meso y macroporos permanecen intactos después de la modificación mantener las excelentes propiedades de flujo del monolito polímero orgánico. El uso de FT-IR se confirmó la incorporación inicial de grupos funcionales carboxílicos (banda a 1707 cm -1) para la fijación de la FeBTC PCP, así como vigilar el crecimiento del revestimiento por el aumento de las bandas de 1382, 1449, 1627 y 3400 cm - 1 (Figura 2C). Realización de TGA se midió el aumento de la cantidad de Fe (III) en el material (Figura 2D). Uso de polvo de difracción de rayos X se confirmó que el residuo TGA a 600 ° C se α-Fe 2 O 3, y sobre la base de la masa del residuo, se calcula el% en masa Fe en el monolito de polímero original y los MOPHs. Como un ejemplo indicativo, el% Fe inicial sobre el monolito original es 1,1%, y este valor aumentó a un 10,5% aespués de 30 ciclos de PCP.
La preparación de MOPHs es fácilmente adaptable a un formato de columna capilar para el desarrollo de flujo a través de las aplicaciones. En este caso, el Ministerio de Salud Pública preparado que contiene una alta abundancia de Fe (III) sitios en la superficie de los poros hace que sea un excelente candidatos para el enriquecimiento IMAC de fosfopéptidos abundantes bajas. Se observa un aumento gradual de la actuación del material cuando el soporte original con Fe inmovilizado (III), se compara a un soporte análogo después de 5 o 10 ciclos de 21 PCP. El paso crítico en la preparación de una columna capilar Ministerio de Salud Pública es asegurar que el número de ciclos de la FeBTC polímero de coordinación es apropiada para la aplicación adicional de la columna de la MSP. Como ejemplo, la Figura 3 muestra el resultado obtenido para el enriquecimiento de fosfopéptidos de leche sin grasa comercial digerido, utilizando una columna capilar Ministerio de Salud Pública. En este ejemplo, una columna de MSP después de 10 ciclos FeBTC exhibió unanotable selectividad para fosfopéptidos. Por el análisis directo de la muestra sin enriquecimiento, ninguno de los fosfopéptidos de baja abundancia se detectan. Después de enriquecer la misma muestra utilizando el material desarrollado MSP, 12 fosfopéptidos diferentes se extraen selectivamente permitiendo su detección satisfactoria. La capacidad de una columna capilar modificado con 30 ciclos FeBTC es 3,25 mol ATP / ml, que es superior a los geles de afinidad de hierro disponibles comercialmente a base de ácido nitriloacético 28. El Ministerio de Salud Pública basada en la Fe desarrollado puede ser potencialmente realizable para la extracción de otros organofosforados, como los pesticidas organofosforados y agentes nerviosos. La selectividad de la MSP hacia el enriquecimiento de las biomoléculas se puede ajustar mediante la selección de un metal con diferentes propiedades de unión para la preparación del polímero de coordinación.
Hemos demostrado un procedimiento sencillo para el crecimiento de recubrimientos PCP altamente porosas en un monolito de polímero poroso, quees el primer ejemplo de un soporte de flujo pasante que contiene un PCP funcional recubrir uniformemente los macroporos de polímero. Los MOPHs resultantes superar la limitación de transporte de masa por difusión asociada con el flujo a través de los huecos entre las partículas, así como la penetración en los poros pequeños de sólidos porosos cuando se envasa en un formato de columna o están incrustados en polímeros porosos. Hemos demostrado la utilidad de estos materiales para el enriquecimiento de fosfopéptidos por IMAC. El procedimiento descrito aquí se puede implementar utilizando numerosos PCP y materiales similares. La principal limitación de la técnica es la preparación manual laborioso del recubrimiento. Sin embargo, la investigación actual por los autores está enfocada hacia la automatización de esta metodología utilizando técnicas de flujo controladas por ordenador.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Polyimide-coated capillaries | Polymicro Technologies | TSP100375 | 100 μm i.d. |
| 3-(trimethoxysilyl)propyl methacrylate, 98% | Sigma-Aldrich | 440159 | |
| Styrene, 99% | Sigma-Aldrich | W323306 | Technical grade |
| Divinylbenzene, 80% | Sigma-Aldrich | 414565 | |
| Methacrylic acid, 98% | Mallinckrodt | MK150659 | |
| Toluene, ≥99.5% | EMD chemicals | MTX0735-6 | |
| Isooctane, ≥99.5% | Sigma-Aldrich | 650439 | |
| 2,2'-azobisisobutyronitrile, 98% | Sigma-Aldrich | 441090 | |
| Aluminium oxide (basic alumina) | Sigma-Aldrich | 199443 | |
| Iron (III) chloride hexahydrate, 97% | Sigma-Aldrich | 236489 | |
| 1,3,5-benzenetrycarboxylic acid, 95% | Sigma-Aldrich | 482749 | |
| Acetonitrile, ≥99.5% | Sigma-Aldrich | 360457 | |
| Ammonium bicarbonate, ≥99.5% | Sigma-Aldrich | 9830 | |
| Trifluoroacetic acid, ≥99% | Sigma-Aldrich | 302031 | |
| Ethanol, ≥99.8% | Sigma-Aldrich | 2854 | |
| Iodoacetamide, ≥99% | Sigma-Aldrich | I1149 | |
| Dithiothreitol, ≥99% | Sigma-Aldrich | 43819 | |
| Monobasic sodium phosphate dihydrate, ≥99% | Sigma-Aldrich | 71505 | |
| Dibasic sodium phosphate dihydrate, ≥99% | Sigma-Aldrich | 71643 | |
| Phosphoric acid, ≥85% | Sigma-Aldrich | 438081 | |
| 2,5-dihydroxybenzoic acid, ≥99% | Sigma-Aldrich | 85707 | |
| Trypsin | Sigma-Aldrich | T8003 | Bovine pancreas |
| β-casein | Sigma-Aldrich | C6905 | Bovine milk |
| ZipTip pipette tips | Merck Millipore | ZTC18S096 | C18 resin |
References
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