Abstract
Luktsinne är mycket konserverad mellan arter och krävs för reproduktion och överlevnad.
Hos människa är olfaction också en av sinnena som påverkas med åldrande och är en stark prediktor för neurodegenerativa sjukdomar. Sålunda olfaction testning användes som en icke-invasiv diagnostisk metod för att detektera neurologiska bortfall tidigt. För att förstå mekanismerna bakom lukt nätverk känslighet, har lukt forskning hos gnagare tog fart under det senaste decenniet.
Här presenterar vi en mycket enkel, tidseffektivt och reproducerbar lukt testmetod för medfödda lukt perception och känslighet hos möss utan behov av någon tidigare mat eller vatten begränsning. Testerna utförs i en bekant miljö till mössen, kräver endast dofter och en 2 min session luktämnen exponering. Analysen utförs, post hoc, med användning av datorstödd kommandon på ImageJ och kan därför vara, Genomförs från början till slut av en forskare.
Detta protokoll kräver ingen speciell hårdvara eller installation och är indicerat för alla laboratorier intresserad av att testa luktintrycket och känslighet.
Introduction
Olfaction är en av de mest utvecklade och viktiga sensoriska funktioner hos däggdjur. Eventuell nedskrivning i lukt aktivitet kan påverka födointag, socialt beteende och i värsta fall även överlevnad. Hos människa är doft försämring beroende 1 år och anses vara en stark prediktor för neurologiska sjukdomar 2-6. Lukt test för identifiering som utvecklats av University of Pennsylvania representerar idag en av de mest använda, icke-invasiva och mätbara, diagnostiska tester som kan bedöma tidiga neurologiska underskott 7 och förutsäga med hög sannolikhet utvecklingen av demens 8,9.
Tillgängligheten av luktsystemet och framträdande av olfaction hos gnagare, har utlöst en intensiv forskningslinje ta itu med de mekanismer som ligger bakom lukt funktioner 10. Vi har tidigare visat att förlust av funktion av signalerings recepteller Notch1 påverkar lukt undvikande 11. I detta protokoll använder vi möss som saknar signal ligand, Jagged1, i nervceller eller glia att studera lukt prestanda.
Innate luktsinne definieras av tre parametrar som perception, diskriminering mellan lukt och luktkänslighet 4. Olfactory testning i gnagare kan göras på en mängd olika sätt och några beteendestudier utnyttjar olfactometers, som ger doft till djuret vid ett specifikt ångkoncentrationer och i en exakt tidsram 12-14. Ändå är detta instrument dyrt och kan vara tillgängliga endast i särskilda anläggningar. I vårt arbete, ger vi en enkel, snabb och reproducerbar lukttestprotokoll, som genomförs med hjälp av flyktiga dofter. Testerna som beskrivs åtgärd uppfattning att en attraherande eller repellerande lukt och utvärdera diskriminering mellan doften och vatten 11,15,16. Med samma inställning, we kan också mäta känsligheten för en doft vid olika koncentrationer 16,17. Den post-hoc datorstödd video bearbetning, inspireras av arbetet Page och kollegor 18, erbjuder objektiva resultat utan behov av experimentell bländning och gör det möjligt för en enskild person att utföra hela experimentet.
Detta protokoll syftar till att ge en startpunkt för att studera lukt beteende hos möss.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alla djurförsök är i enlighet med EU: s direktiv 2010/63 / EU om skydd av djur som används för vetenskapliga ändamål och är godkända av den lokala Animal Care kommittén (Canton of Fribourg, Schweiz).
1. Animaliska Framställning
- Försöksdjur
- Utföra experiment på vuxna manliga vildtyp och transgena möss (C57BL / 6 bakgrund) av 3-5 månaders ålder. De tre grupperna av möss motsvarar vildtyp kull kontroller (grupp A, Jagged1 Flox / flox 19) och två villkorliga KO muslinjer (grupp B, Jagged1ncKO och C, Jagged1gcKO).
- Hus möss under standardlaboratorieförhållanden i en ventilerad rum, med en 12 h kontrollerad mörker / ljuscykel och skaffar mat och vatten ad libitum.
2. experimentuppställning
- Experimentell arenan
- För den experimentella arenan, använd en ren steriliserad mus bur (36 cm längd x 20,5 cm bredd x 13,5 cm höjd) (Figur 1A).
- Tilldela varje mus till en numrerad bur med nytt strö, 3 cm hög. Om burar återanvänds, som i luktkänslighet testet, vidta följande åtgärder för att undvika korskontaminering mellan lukt och möss.
- Markera vattensidan.
- Rengör de smalare väggarna hos de burar med två tissuepapper besprutas med 70% etanol, en för varje sida.
- Stapla upp burar enligt genotypen av mössen och lagra temporärt under ett laminärt huva.
- Kamera
- Montera en kamera på en anpassad stativ med målet på 58 cm från botten av buren (Figur 1A). Fastställa positionen för stativet och buren och avgränsa med märken för att möjliggöra för kameran att centreras på toppen av buren.
- Videoinspelning på 320 pixlar x 240 pixlar, 15,08 bildrutor per sekund som MOV-filer.
- Lukter
- Resuspendera scents, när så anges, i lösningsmedlet i vilket de är lösliga.
- För preferenstestanvändning jordnötssmör. Resuspendera jordnötssmör i jordnötsolja (10% vikt / volym).
- För undvikande testanvändning ren 2-metylsmörsyra (2-MB) syra (98%).
- För känslighetstest, använder kvinnliga urin från samma muskolonin och bakgrund (C57BL / 6).
- För bekvämlighets samla upp urinen 1-2 dagar före luktförmågan. Hindra och håll musen under huven med sin mage ovanför buren nätet. Enligt buren nätet placera en plastpetriskål att samla droppar urin.
- Samla upp urin från varje hona i ett 1,5 ml rör och blanda alla urinprov för att normalisera för variabilitet mellan djuren. Förvara vid -20 ° C fram till användning.
- På dagen för experimentet, tina urinen och utför fyra utspädningar i dubbeldestillerat vatten vid en utspädningsfaktor på 10 (1:10, 1: 100; 1: 1000; 1: 10000).
3. Olfactory Testning
Obs: I detta protokoll lukter har avsiktligt valt som uppfattas som starka lock (jordnötssmör och kvinnliga urin) eller stark repellent (2-MB-syra) 15. Det är viktigt att utföra preferens och känslighetstester för att angenäma lukter före undvikande test för att eliminera risken för eventuella störningar med den olfaktoriska beteende. Men för enkelhetens skull, i detta dokument, preferenser och undvikande testet kommer att både beskrivs under uppfattningen testet. Varje beteende session inleds med en tillvänjning fas.
- Tillvänjning Fas
- Placera djuret i ren tilldelade buren och låt det prospektera efter 5 minuter (Figur 1B). Eftersom miljön för den experimentella buren är bekant för hemmaburen, är denna korta tid nog att möjliggöra tillvänjning.
- Om känsligheten testet är avslutat en dag, utföra tillvänjning bara en gång innan TILLÄMPNINn av högsta utspädda lukt. Om känslighetstest utförs på olika dagar, varje dag behövs en tillvänjning fas på en ny ren bur.
- Perceptionstest
- Efter tillvänjning, aktivera kameran och omedelbart pipettera 60 ul av den behaglig doft (jordnötssmör) och 60 pl av den neutrala doft (kranvatten) på de motsatta väggarna i buren vid ca 10 cm från botten (Figur 1C).
- Låt musen utforska lukter under 2 minuter (Figur 1D). Därefter, stänga av kameran.
- Vid denna punkt, fortsätter med nästa musen från och med tillvänjning fasen. Utför undvikandetestet exakt på samma sätt genom att applicera 60 pl av den bortstötande lukt (2-MB syra) och 60 pl vatten.
- Allergitest
- Utvärdera attraktion tröskeln till hanmöss för ökande koncentrationer av kvinnlig urin i följande ordning: 1: 10000; 1: 1000; 1: 100; 1:10 och ren urin.
- Efter tillvänjning, utsätta varje mus till den högsta utspädningen pipett av försöksledaren som tidigare beskrivits i 3.2.1.
- Anteckna undersökande beteende av urin kontra vatten, inom en 2 min tidsram på en videokamera. Efter att alla möss kohorter testas för den högsta utspädningen (1: 10000), utsättas för en högre koncentration av urin, såsom angivits ovan.
4. Post-hoc Data Analysis
Obs! Alla beteendetester som beskrivs bearbetas i efterhand följa instruktionerna på dataanalys.
- Öppna MOV filer i ImageJ för Windows-system
- Installera Quick Time för Java genom att använda de anpassade inställningarna från http://www.apple.com/quicktime/download.
- Installera Quick Time plugin från ImageJ webbplats (http://rsb.info.nih.gov/ij/plugins/qt-capture.html).
- Importera QTJava.zip (C: Program Files QuickTime QTSystem) i biblioteket extensjon av ImageJ (.ImageJ jre lib ext).
- Kopiera också QTJava.zip i mappen plugins och döp om den som QTJava.jar.
- Montera sex manus kopplade i mappen makron (ImageJ plugins Macros).
- Öppna ImageJ och kompilera och köra Quick Time plugin, därefter nära ImageJ.
- Återöppna ImageJ och öppna MOV-fil med Arkiv> Import> med Quick Time.
- Video Adjustment
- När videofilen öppnas i ImageJ, klippa video för att få en konstant 2 min utforskning från den tidpunkt då försöksledaren har pipet de odörer i buren (T0). Identifiera ram som motsvarar T0 och ta bort de tidigare ramar med steg om 1 (ImageJ Bild Stacks ToolsSlice remover). Använd samma kommando för att ta bort alla bilder som överstiger 2 min prospektering.
- Se till att buren är centrerad och vid behov använda bilden> Omforma> Rotera kommando för att anpassa den.
- Video Behandling
Obs: Video behandlingen är helt datorstödd och använder makron kommandon som åtföljer detta dokument.- För att begränsa området på buren av en 127 pixlar x 218 pixlar storlek köra Steg 1 makro från Plugin> Makron> Kör kommando. Flytta den fasta rektangeln över buren (figur 2, steg 1).
- Beskära området av buren på regionen av intresse (ROI) med användning av Steg 2 makro (fig 2, steg 2).
- Använd Steg 3 makro för att extrahera musen bilden från bakgrunden genom att tilldela en tröskelsignal, ta bort fläckar och filtrering av signalen varians. De utmatade värdena i Z-axeln tomt indikerar medel gråvärden, som motsvarar intensiteten hos den mus skuggan rör sig inom ROI av "vattenkammaren" under två minuter prospektering. Kopiera resultaten i ett kalkylblad som heter enligt ROI i ett kalkylblad (Figur 2, steg 3).
- Använd Steg 4 makro tillextrahera de genomsnittliga gråvärden på musen i ROI "doft kammare". Kopiera resultaten i ett kalkylblad som heter enligt ROI i samma kalkylblad som i 4.3.3 (Figur 2, steg 4).
- För att ytterligare begränsa analysen av musrörelser i ROI "vatten omkrets" använda Steg 5 makro. Kopiera resultatet på kalkylbladet som heter enligt ROI i samma kalkylblad som i 4.3.3 (Figur 2, steg 5).
- För att begränsa analysen av musrörelser i ROI "lukt omkrets" använda Steg 6 makro. Kopiera resultatet på kalkylbladet som heter enligt ROI kalkylblad som i 4.3.3 (Figur 2, steg 6).
- Process alla videoklipp och kontrollera konsekvens av antalet bildrutor per djur. Här, registrera alla djur för 1810 ramar som motsvarar en 2 min prospektering session.
- För varje djur och för varje ROI slags ramar med en genomsnittlig grå values större än 0. Dividera antalet ramar med de värden som motsvarar 1 sekund och få sekunder tillbringade i varje ROI.
5. Statistisk analys
- För varje test kontrollera homogenitet av varians inom grupper / genotyper av Bartlett test med hjälp av formeln som finns på http://www.real-statistics.com/one-way-analysis-of-variance-anova/homogeneity-variances/.
- I attraktion och undvikandetestet, göra jämförelser mellan de tidpunkter bringade med vatten kontra lukt inom en grupp under användning av en icke-riktad t-test under antagande lika eller olika varianser beroende på resultaten av Bartletts test. Jämför tiderna spenderas med de lukter subtraherade med den tid som spenderas med vatten mellan genotyperna genom envägs ANOVA med Bonferroni post-hoc-testet.
- I känslighetstest analysera jämförelser av tiden med lukt subtraheras från den tid tillbringade med water bland grupper vid en specifik utspädningar av urin genom envägs ANOVA med Bonferroni post-hoc test. Jämför känsligheten bland grupper växande lukt koncentrationer av 2-vägs ANOVA med repetitioner med Bonferroni post-hoc test.
- Interaktion mellan genotyper och behandlingar i attraktion och undvikandetestet utreds av 2-vägs ANOVA med Bonferroni post-hoc-testet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Uppfattningen test mäter attraktion till jordnötssmör och undvikande till 2-MB syra. Tre grupper av möss testas och den tid som tillbringas i "lukt omkrets" kvantifieras jämfört med vatten. I preferenstestet, kontrollgruppen A visar signifikant preferens till odören jämfört med vatten (t 8 = 2,52, p <0,05). Å andra sidan, inte grupp B inte någon signifikant dragning till jordnötssmör och tillbringar mer tid med vatten (t 6 = 3,22, p <0,05). Således fungerar det annorlunda än kontrollgruppen A (F 1,7 = 26,39, p <0,005). Dessutom grupp C visar ingen diskriminering och spenderar ungefär samtidigt med vatten och jordnötssmör (t 8 = 0,78, p = 0,45). På det hela taget, de tre grupperna beter sig annorlunda (F 2,9 = 19,83, p <0,005) och det finns en signifikant interaktion mellan genotyp och behandling (jordnötssmör och vatten) (F 2,1 = 4,90, p <0,005) ( Som svar på 2-MB-syra visar kontrollgruppen ett undvikande reflex och som ett resultat spenderar mer tid med vatten (t 8 = 2,67, p <0,05). På liknande sätt, grupp B visar en uttalad undvikande reflexen att 2-MB-syra (t 6 = 3,71, p <0,01). Å andra sidan, inte grupp C inte diskriminera mellan de två lukter och tillbringar jämförbara gånger med 2-MB-syra och vatten (t 8 = 2,2, p = 0,6) (Figur 3B). På det hela taget, att jämföra undvikande svar de tre grupperna inte visa en signifikant skillnad beteende (F2, 9 = 0,76, p = 0,49) som ett resultat finns det ingen interaktion mellan behandling och genotyp (F 1, 2 = 0,52, p = 0,63). I lukt känslighet test för kvinnlig urin, visar kurvan preferensen för urin vid olika koncentrationer kontra vatten (preferens index = tid med urin subtraheras av tid med vatten). I thär testet, vi konstatera att kontrollgruppen A har en attraktion tröskel för urin vid en utspädning av 1: 1000 och visar ökande attraktion till urin med stigande koncentrationer. Grupp B och C visar en 100-faldigt högre tröskel till attraktion (01:10) jämfört med grupp A (F 2,9 = 4,78, p <0,05). Grupp B och C display jämförbara känslighetskurvor (F 1,19 = 0,36, p = 0,55). Jämföra känsligheten mellan grupper, verkar det som grupp A har högre känslighet för kvinnliga urin jämfört med grupp B och C (F 2,19 = 7,12, p <0,01) (Figur 4). 
Figur 1: Återgivning av installationen som används för att utföra de lukttest. (A) Kamera ovanför buren. (B) Möss placeras i en bur under en 5 minuters tillvänjningsperiod. (C) Den odoranger pipetteras på väggen av buren. (D) Den förberedande verksamhet ett luktämne kontra vatten testas i en 2 min fönster. 
Figur 2:.. Workflow av datorstödd videobearbetning med hjälp av makron kommandon i ImageJ Exemplet hänvisar till en mus från grupp A som utsätts för urin vid en spädning 1:10 Klicka här för att se en större version av denna siffra. 
Figur 3:. Representativa resultat av luktpreferens och undvikande test Mössen av de tre grupperna (n = 5 för grupp A, n = 4 för grupp B och n = 5 för grupp C) har utsatts för (A) jordnöt menter och (B) 2-MB-syra under en två minuters utforskning session. Den totala tiden utforska lukt (svarta cirklar) kontra vatten (grå cirklar) är representerade. Signifikanta skillnader i lukt beteende bland grupper anges med svarta horisontella barer och asterisker. Signifikanta skillnader i sniffa gånger mellan lukt och vatten inom grupper visas med grå horisontella barer och asterisker. * P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,01 (grå horisontella staplar, t-test, svart horisontellt streck, envägs ANOVA). Felstaplar är standardfel av medelvärdet (SEM). 
Figur 4:. Representativa resultat av känslighetsanalyser till ökande koncentrationer av kvinnliga urin Preferensindexkurvan, från prospektering tid med urin vid olika koncentrationer subtraheras av tid med vatten, visar att gruppA (n = 5) har den högsta känsligheten för urin jämfört med grupp B (n = 4) och C (n = 5). * P <0,05 (svarta horisontella staplar, envägs ANOVA). Felstaplar är SEM.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
De föreslagna i detta protokoll tester gör det möjligt att utvärdera olika aspekter av medfödda luktbeteende hos möss: uppfattning för lukter, diskriminering mellan lukter kontra vatten och känslighet för lukter. Detta protokoll kan tillämpas på alla lukt enligt önskemål och undvikande skala tidigare visats 15. Eftersom protokollet bygger på undersökande verksamhet är det viktigt att möss inte uppvisar någon motorisk försämring eller ångest som kan påverka deras rörelser och störa lukt prospektering. De tester som beskrivs är avsedda för vuxna hanmöss men de kan anpassas för att undersöka olfaction även hos vuxna kvinnor eller äldre möss.
Innan en sådan studie undersöker olfaction på möss är det viktigt att uppmärksamma följande aspekter: 1) utföra varje test med ett intervall på minst 3 dagar. Undvikande bör testas senast för att minimera störningar av luktminne 20; 2) utföra experiments på samma tid på dagen, företrädesvis i sen eftermiddag, när mössen är i deras aktiva cykel 21 och använda en nedtonad ljuskälla. Dessutom schemaläggning lukt testning vid definierade tider kontroller för eventuella dygnsrytm förändringar i luktfunktioner 22; 3) innan undvikandetestet, som använder avvisande luktämnen, såsom syror, ta en bur vid tiden i den experimentella svit och hålla bur under ett laminärt huva. Detta steg är viktigt för att undvika tillvänjning till luktämnet och erhålla en mer homogen respons i samma grupp; 4) temporärt separera möss som har testats tills alla möss av samma bur utsätts för luktämnet, för att minimera luktämnen kontaminering; 5) använda djur av samma stam, eftersom olika stammar kan uppträda på ett heterogent sätt, när de utsätts för ett luktämne 23; 6) försöksledaren ska bära skyddsrock vid alla tidpunkter och byta handskar mellan djur för att förhindra lukt blandning; 7)efter pipettering föraren bör gå långsamt bort från buren på ett avstånd av 1,3 meter för att förhindra confounding stimulans till mössen under lukt prospektering; 8) möss visar medel gråvärden endast i en kammare bör undantas från undersökningen, eftersom möss förväntas utforska båda kamrarna i olika grad.
Den beskrivna metoden har flera fördelar jämfört med andra protokoll: det är mycket enkel att installera, använder billiga material, det är snabbt färdigställande och drar nytta av öppen källkod, såsom ImageJ. Dessutom ger vi makron som är redo att installeras och som kan skräddarsys användas och anpassas till varje arena och mer än 2 lukt omkrets. Det bör noteras att endast tid i den tilldelade lukt omkrets är ett mått på lukt aktivitet. Den tid som tillbringas i varje kammare ger en avläsning av den undersökande aktiviteten hos mus och är bara en grov uppskattning av lukt beteende. Såsom med andra metoder, kan den statistiska styrkan vinnas genom att öka antalet djur per grupp.
Jämfört med lukt tester med olfactometers, som kan styra automatiskt för ångtryck och leveranstid 12-14, är det föreslagna protokollet mindre kontrollerade. Ändå är alla lukter tillämpas i lika volymer, på definierat avstånd och för samma tidsfönster. Således hålla dessa variabler konstanta, i detta test ett olfaktometer krävs inte. Det finns en annan potentiell begränsning till detta protokoll består i den tid som krävs för justeringen och kapning av varje video för att erhålla ett fast antal ramar. Ändå kan samma datorstödd analys även användas på mer avancerade inställningar med lukt portar leverera lukt på bestämda tider. I detta fall kan videoskär automatiskt.
Jämfört med andra protokoll med hjälp av kuddar bomull impregnated med lukt att testa attraktion och undvikande, ger det nuvarande protokollet en ytterligare information om lukt diskriminering mellan en ny doft och en neutral lukt (vatten) 15,16 i ett enda experimentella session. Heller protokollet inte kräver experimentell bländande och helt kan genomföras av en enda försöks med hjälp av opartisk datorstödd analys.
Dessa enkla tester kan användas för att övervaka utvecklingen av neurala underskott i Alzheimers eller Parkinsons sjukdomsmodeller mus och för att undersöka mekanismerna för luktöverföring.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Mouse cage | Italplast (Italy) | 1144B | 36 cm length x 20.5 cm width x 13.5 cm height |
| Chipped wood bedding | Abedd (Austria) | LTE E-001 | 3 cm high |
| Peanut butter | Migros (Switzerland) | NA | 1:10 |
| 2-Methylbutyric | Sigma Aldrich (Switzerland) | W269514 | Pure |
| Female urine from fertile females of same mouse strain | NA | NA | Dilution series |
| Camera | Olympus (US) | Camedia C-8080 | MOV files |
| Quicktime for Java (Windows) | Apple (USA) | NA | video plugin for visualizing MOV files |
| ImageJ for Windows | NIH (USA) | NA | Video Processing/Analysis |
References
- Doty, R. L., Kamath, V. The influences of age on olfaction: a review. Cognitive Science. 5, 20 (2014).
- Mesholam, R. I., Moberg, P. J., Mahr, R. N., Doty, R. L. Olfaction in neurodegenerative disease: a meta-analysis of olfactory functioning in Alzheimer’s and Parkinson’s diseases. Archives of Neurology. 55 (1), 84-90 (1998).
- Moberg, P. J., et al. Olfactory Dysfunction in Schizophrenia: A Qualitative and Quantitative Review. Neuropsychopharmacology. 21 (3), 325-340 (1999).
- Kovács, T. Mechanisms of olfactory dysfunction in aging and neurodegenerative disorders. Ageing Research Reviews. 3 (2), 215-232 (2004).
- Barrios, F. A., et al. Olfaction and neurodegeneration in HD. Neuroreport. 18 (1), 73-76 (2007).
- Doty, R. L. Olfaction in Parkinson’s disease and related disorders. Neurobiology of Disease. 46 (3), 527-552 (2012).
- Doty, R. L., Shaman, P., Dann, M. Development of the University of Pennsylvania Smell Identification Test: a standardized microencapsulated test of olfactory function. Physiology & Behavior. 32 (3), 489-502 (1984).
- Devanand, D. p, et al. Olfactory Deficits in Patients With Mild Cognitive Impairment Predict Alzheimer’s Disease at Follow-Up. American Journal of Psychiatry. 157 (9), 1399-1405 (2000).
- Conti, M. Z., et al. Odor Identification Deficit Predicts Clinical Conversion from Mild Cognitive Impairment to Dementia Due to Alzheimer’s Disease. Archives of Clinical Neuropsychology. 28 (5), 391-399 (2013).
- Keller, A., Vosshall, L. B. Better Smelling Through Genetics: Mammalian Odor Perception. Current opinion in neurobiology. 18 (4), 364-369 (2008).
- Brai, E., et al. Notch1 activity in the olfactory bulb is odour-dependent and contributes to olfactory behaviour. European Journal of Neuroscience. 40 (10), 3436-3449 (2014).
- Larson, J., Hoffman, J. S., Guidotti, A., Costa, E. Olfactory discrimination learning deficit in heterozygous reeler mice. Brain Research. 971 (1), 40-46 (2003).
- Alonso, M., et al. Olfactory Discrimination Learning Increases the Survival of Adult-Born Neurons in the Olfactory Bulb. The Journal of Neuroscience. 26 (41), 10508-10513 (2006).
- Wesson, D. W., Keller, M., Douhard, Q., Baum, M. J., Bakker, J. Enhanced urinary odor discrimination in female aromatase knockout (ArKO) mice. Hormones and behavior. 49 (5), 580-586 (2006).
- Kobayakawa, K., et al. Innate versus learned odour processing in the mouse olfactory bulb. Nature. 450 (7169), 503-508 (2007).
- Witt, R. M., Galligan, M. R., Despinoy, J., Segal, R. Olfactory Behavioral Testing in the Adult Mouse. Journal of Visualized Experiments JoVE. (23), (2009).
- Lee, A. W., Emsley, J. G., Brown, R. E., Hagg, T. Marked differences in olfactory sensitivity and apparent speed of forebrain neuroblast migration in three inbred strains of mice. Neuroscience. 118 (1), 263-270 (2003).
- Page, D. T., et al. Computerized assessment of social approach behavior in mouse. Frontiers in Behavioral Neuroscience. 3, 48 (2009).
- Nyfeler, Y., et al. Jagged1 signals in the postnatal subventricular zone are required for neural stem cell self-renewal. Embo J. 24 (19), Available from: http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=16163386" 3504-3515 (2005).
- Tong, M. T., Peace, S. T., Cleland, T. A. Properties and mechanisms of olfactory learning and memory. Frontiers in Behavioral Neuroscience. 8, (2014).
- Steinlechner, S. Chapter 2.12 - Biological Rhythms of the Mouse. The Laboratory Mouse (Second Edition). , Available from: http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780123820082000179 383-407 (2012).
- Corthell, J., Stathopoulos, A., Watson, C., Bertram, R., Trombley, P. Olfactory Bulb Monoamine Concentrations Vary with Time of Day. Neuroscience. 247, 234-241 (2013).
- Lehmkuhl, A. M., Dirr, E. R., Fleming, S. M. Olfactory assays for mouse models of neurodegenerative disease. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (90), e51804 (2014).
