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Neuroscience

कृन्तकों में ऐक्रेलिक राल मोल्डिंग आधारित सिर निर्धारण तकनीक

Published: January 12, 2016 doi: 10.3791/53064

Introduction

हेड निर्धारण या सिर निरोधक कठोर clamping के लिए खोपड़ी पर एक फ्रेम या प्लेट संलग्न द्वारा पशु के सिर immobilizing की एक तकनीक है। तकनीक सटीक संवेदी उत्तेजना के साथ या जाग पशुओं 1-3 में तंत्रिका रिकॉर्डिंग के बिना और नींद जगा चक्र 4 के दौरान juxtacellular लेबलिंग के लिए व्यवहार संवेदन के लिए अपनाया गया है। यह भी इन विवो ब्रेन इमेजिंग 5,6 के लिए प्रयोग किया जाता है। अब सिर निर्धारण तकनीक तंत्रिका विज्ञान और व्यवहार अनुसंधान के क्षेत्र में आमतौर पर इस्तेमाल किया उपकरण है।

असल में, पारंपरिक सिर निर्धारण खोपड़ी 6-8 के शीर्ष पर धातु सिर पदों की शल्य कुर्की की आवश्यकता है। अनुलग्नकों तो सिर के स्थिरीकरण, जिसके परिणामस्वरूप एक स्थिर मंच करने के लिए कर्फ्यू लगा दिया जाता है। इस तरह के तंत्रिका और / या ऑप्टिकल रिकॉर्डिंग, मस्तिष्क circuitry हस्तक्षेप के रूप में जाग पशुओं में neurophysiological अनुसंधान, ब्रेन इमेजिंग दंत acrylics का उपयोग कर आरोपण सर्जरी के साथ है। इसलिए,यह यह प्रयोगात्मक आवश्यक है जब उन प्रयोगशालाओं में सिर निर्धारण को लागू करने के लिए एक आसान काम लगता है। फ्रेम उनके घर पिंजरों में पशु की प्राकृतिक व्यवहार को परेशान करने के लिए नहीं हल्के वजन और काफी छोटा होने के लिए तैयार किया जाना चाहिए। स्थिर मंच करने के लिए कर्फ्यू लगा दिया है जब यह भी यांत्रिक कठोरता प्रदान करता है। इसे आगे भी प्रायोगिक उद्देश्यों के आधार पर biocompatibility है। इसलिए, यह डिजाइन और सामान्य प्रयोगशाला उपकरणों में इस तरह के सिर पदों के निर्माण के लिए तकनीकी रूप से कठिन है।

इस अध्ययन में, एक उपन्यास सिर निर्धारण विधि धातु सिर पदों का उपयोग किए बिना सुविधाजनक क्लेम्पिंग के माध्यम से यांत्रिक कठोरता प्रदान करने, वर्णित है। विधि का उपयोग करके, सिर निर्धारण आरोपण सर्जरी आम तौर पर मस्तिष्क के अध्ययन के लिए कृन्तकों में किया जाता है जहां सामान्य प्रयोगशाला परिस्थितियों के तहत किया जा सकता है। धातु सिर पदों implan दौरान किया जाता है एक कस्टम बनाया सिर निर्धारण बार और मोल्डिंग प्रक्रिया के द्वारा आंशिक रूप से ढाला ऐक्रेलिक राल सीमेंट के साथ प्रतिस्थापित कर रहे हैंtation सर्जरी। निर्धारण बार इस तरह के तंत्रिका रिकॉर्डिंग जांच, उत्तेजना इलेक्ट्रोड के रूप में अन्य प्रत्यारोपण, के साथ उच्च स्थानिक अनुकूलता प्रदान करता है। इसके अलावा यह पेंच-बन्धन को हटाने के द्वारा निर्धारण मंच पर पशु के सिर clamping के कदम को सरल। हम पिछले व्यवहार अध्ययन में इस विधि का इस्तेमाल किया है और हम इस विधि व्यावहारिक प्रयोग 9 में लागू करने के लिए आसान और सुविधाजनक है कि संपन्न हुआ।

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Protocol

नैतिकता कथन:
इस प्रयोग Kyungpook राष्ट्रीय विश्वविद्यालय संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था, और देखभाल और उपयोग प्रयोगशाला पशु की (स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान, 1996) के लिए गाइड के मुताबिक प्रदर्शन किया गया था। प्रयोग के बाद, जानवरों कार्बन डाइऑक्साइड इच्छामृत्यु के तहत बलिदान किया गया।

चूहों के लिए हेड-निर्धारण बार की 1. डिजाइन

नोट: यह कदम एक निर्धारण बार डिजाइन के लिए एक सामान्य दिशानिर्देश है। आयाम और सामग्री के बारे में कोई संशोधन जानवरों या प्रत्यारोपण के आधार पर संभव है। सीएडी सॉफ्टवेयर का उपयोग कर एक सिर-निर्धारण बार डिजाइनिंग की सिफारिश की है, लेकिन जरूरी नहीं है।

  1. एक निर्धारण बार डिजाइन करने के लिए सीएडी सॉफ्टवेयर का प्रयोग करें।
    1. एक आयताकार आकार (123 × 35 × 6 मिमी) (चित्रा 1 ए) के एक निर्धारण बार डिजाइन। निर्धारण पट्टी के बीच में, एक आयताकार पायदान (पोर्ट 16 × 20 मिमी) बनाओ। ढलानों या indentations जोड़ें जोएच (चित्रा 1 बी -arrows चित्रा 1 ए) बंदरगाह की सीमा पर एक गाइड रेल के रूप में काम करते हैं।
      नोट: बंदरगाह के क्षेत्र में एक craniotomy के माध्यम से मस्तिष्क क्षेत्रों के अधिकांश के लिए एक stereotaxic जोड़तोड़ का उपयोग खड़ी पहुंच की अनुमति देने के दिमाग पर चूहे की खोपड़ी के अनुमानित आयत को शामिल किया गया है कि सुनिश्चित करें।
    2. निर्धारण बार के दोनों किनारों पर दो लम्बी प्रस्तोता छेद के साथ (50 × 20 × 6 मिमी) प्लेटों संलग्न। इन छेद 6 मिमी व्यास (चित्रा 1 ए-डी) का शिकंजा पारित सुनिश्चित करें। एक ताला लगा हुक (चित्रा 1 ए-बी) के लिए बंदरगाह के सामने व्यास 3 मिमी की एक छेद बनाओ।
    3. एक बॉक्स एक मंजिल (135 × 305 मिमी) और पक्ष दीवारों (305 × 76 मिमी) होने बनाओ। चित्रा 1 ए (इनसेट) में दिखाया गया के रूप में दो 6 मिमी व्यास छेद ड्रिल। निर्धारण बार (चित्रा 1 ए-ई) पर समर्थन दीवारों जोड़ें।
  2. डिजाइन किए पट्टी निर्माण और बॉक्स और के रूप में cyanoacrylate का उपयोग करते हुए उनमें से प्रत्येक को इकट्ठाचित्रा 1 ए (इनसेट) में दिखाया गया है। 6 मिमी व्यास का शिकंजा का उपयोग बॉक्स पर बार इकट्ठे। Ergonomic सिर निर्धारण (चित्रा 1 ए-इनसेट) के लिए इस बार का पेंच स्थिति का समायोजन करके ढलान लागू करें।
    नोट: चूहों के लिए, निर्धारण बार के आयाम (2 मिमी मोटी एक्रिलिक पैनल के दो परतों से मिलकर) 60 × 20 × 4 मिमी है। पोर्ट 8 मिमी चौड़ाई (ऊपरी) और चित्रा 1C में दिखाया गया के रूप में 9 x 10 मिमी (कम) के वर्ग है। एंकरिंग प्लेटों चूहों 'का एक ही आकार के होते हैं। बॉक्स प्लेट और पक्ष दीवारों क्रमश: 100 × 72 मिमी और 100 × 50 मिमी, कर रहे हैं।

आरोपण सर्जरी के दौरान 2. सिर मढ़ाईकार निर्माण

चेतावनी: दंत एक्रिलिक राल के साथ व्यवहार करते समय सतर्क रहें। तरल त्वचा में जलन पैदा कर सकता है। एक मुखौटा पर रखो और दस्ताने पहनते हैं। एक अच्छी तरह हवादार क्षेत्र में काम करते हैं।

  1. सर्जरी से पहले तैयारी
    1. कसकर निर्धारण पट्टी का उपयोग एपी के बंदरगाह की सीमा को कपड़े में लपेटकरपट्टी करने के लिए आवेदन किया है ऐक्रेलिक राल के आसंजन को रोकने के लिए araffin फिल्म (चित्रा 1 बी और चित्रा 2A देखें)। कोट ऐक्रेलिक राल की एक पतली परत के साथ आयल फिल्म द्वारा कवर बंदरगाह के आवासी।
    2. निष्फल सर्जिकल उपकरणों का प्रयोग करें। अच्छी तरह से stereotaxic फ्रेम कीटाणुरहित और इसकी 70% एथिल अल्कोहल का उपयोग कर आसपास।
  2. Stereotaxic आरोपण सर्जरी प्रदर्शन
    1. Intraperitoneal ketamine 10 मिलीलीटर की एक कॉकटेल मिश्रण के इंजेक्शन (2 मिलीग्राम / किग्रा) (50 मिलीग्राम / एमएल), xylazine हाइड्रोक्लोराइड 1.5 मिलीलीटर (23.32 मिलीग्राम / एमएल), और खारा 2.5 मिलीलीटर द्वारा एक पशु anesthetize। जानवर पूरी तरह से anesthetized और पूंछ और पैर के अंगूठे चुटकी का जवाब नहीं है कि की पुष्टि करें। जब आवश्यक सर्जरी के दौरान 1 मिलीग्राम / किलो का कॉकटेल मिश्रण इंजेक्षन।
    2. Stereotaxic तंत्र के लिए पशु को ठीक करें। सर्जरी के दौरान सूखापन को रोकने के लिए आंखों पर नेत्र मरहम लागू करें। दाढ़ी और 70% इथेनॉल के साथ खोपड़ी को साफ। 2% lidocaine के चमड़े के नीचे इंजेक्शन दे और एससीए काटकर अलग कर देनाखोपड़ी के midline के साथ एल.पी.। पूरी तरह से periosteum परिमार्जन। खारा के साथ कई बार कुल्ला।
    3. खोपड़ी के रिम के पास गड़गड़ाहट छेद ड्रिलिंग करें। प्रत्यारोपण शिकंजा खोपड़ी की सतह से 4-5 से बदल जाता है (1 मिमी के लिए गहराई) ड्यूरा मेटर का उल्लंघन रोकने के लिए। पेंच आरोपण के बाद खोपड़ी की सतह पर सीएसएफ और रक्त का यकीन है कि कोई रिसाव बनाओ। नमक के साथ कुल्ला और विशेष रूप से शिकंजा चारों ओर, एयर कश का उपयोग कर खोपड़ी की सतह सूखी।
    4. "दंत चिपकने वाला (सुपर-बॉन्ड सी और बी)" की एक पतली परत के साथ कोट खोपड़ी की सतह। पूरी तरह से अतिरिक्त इलेक्ट्रोड आरोपण के लिए निर्धारित है, तो पर्वबिन्दु सहित खोपड़ी की सतह को कवर नहीं है। Craniotomy निर्देशांक अंकन के लिए पर्वबिन्दु का प्रयोग करें। प्रत्यारोपण इलेक्ट्रोड और / या microdrive और उसके चारों ओर ऐक्रेलिक राल लगाने से खोपड़ी पर यह तय कर लो।
    5. दंत सीमेंट के शीर्ष पर अतिरिक्त ऐक्रेलिक राल लागू करें। बार-लेपित राल एक के बीच पर्याप्त भरण-बाहर जगह छोड़ने के लिए एक्रिलिक राल की उचित मात्रा में प्रयोग करेंडी प्रारंभिक बढ़ते राल शिकंजा और / या इलेक्ट्रोड (2A चित्रा) fixating जब।
  3. सिर-निर्धारण बार खोपड़ी की सतह से ऊपर 5 मिमी या उससे अधिक जगह है और इसके केंद्र (2A चित्रा वाम) पंक्ति में।
  4. खोपड़ी के आधार और प्रारंभिक बढ़ते रेजिन के बीच की खाई में ऐक्रेलिक राल लागू करें। (2A चित्रा -Center)। मुश्किल हो राल तक प्रतीक्षा करें।
  5. कान बार निकालें और निर्धारण बार बंदरगाह के बाहर ढाला मढ़ाईकार खींच। (2A चित्रा -Right)। ध्यान से ढाला मढ़ाईकार यदि आवश्यक के किनारे पटरियों के आसपास अतिरिक्त ऐक्रेलिक राल लागू होते हैं।
  6. बाँझ खारा के साथ खोपड़ी के घाव सतह कुल्ला। सर्जरी के बाद तुरंत एक एंटीबायोटिक (Enrofloxacin, 5 मिलीग्राम / किग्रा एससी) और एक एनाल्जेसिक (butorphanol टारट्रेट, 2 मिलीग्राम / किलो सुप्रीम कोर्ट) इंजेक्षन। एक भी पिंजरे में व्यक्तिगत रूप से पशु हाउस।

3. Habituating पशु सिर-निर्धारण करने के लिए

नोट: यह कदम डेलेखक 'अनुभव से सफल आकलन पर आधारित आदी होना शेड्यूल तो शास्त्री। सिर-निर्धारण के लिए आदी होना प्रक्रिया के अवलोकन के लिए, Schwartz के 10 या गुओ के 11 काम देखते हैं।

  1. पशुओं के लिए पर्याप्त वसूली की अवधि (एक सप्ताह या उससे अधिक) दीजिए। 1 दिन पर, अक्सर विभाजित कम सत्रों पर जानवरों संभाल लेना।
  2. अगले दिन (2 दिन) पर, निर्धारण पर्यावरण (बॉक्स) के लिए पशु का पर्दाफाश। निर्धारण बार के बंदरगाह में उनके सिर मढ़ाईकार सम्मिलित नहीं करें। पर्यावरण के आदी हो जानवरों को छोड़ दें। सुरक्षित रूप से 1-2 सेकंड के लिए हाथ का उपयोग कर सिर मढ़ाईकार हड़पने के लिए और इसे तुरंत जारी। हाथ पकड़ो कई बार द्वारा अल्पावधि निर्धारण दोहराएँ।
  3. 3 दिन, सिर-निर्धारण करने के लिए जानवरों की आदत डालना।
    1. घर पिंजरों से पशुओं को लाने और निर्धारण बार के बंदरगाह की ओर सिर निर्देशन उन्हें बॉक्स में बसा। सिर मढ़ाईकार पकड़ो और निर्धारण बार के बंदरगाह में डालें।
    2. जानवर के (मढ़ाईकार बाँधएक रबर बैंड का उपयोग कर निर्धारण बार की लॉकिंग हुक करने के लिए सिर)। 5 मिनट के लिए खड़े हो जाओ।
      नोट: चीख़ और जानवर के तनाव में वृद्धि के लिए संघर्ष करने के लिए पशु होता है, जो निर्धारण के बाद जानवर है, ट्रंक या पूंछ मत छुओ। पशु से अधिक 1 मिनट के लिए संघर्ष जारी है, जब इसे जारी है और बाद में प्रयास करें। निर्धारण सिर से अवगत कराया, लेकिन यह धीरे धीरे आदी होना आय के रूप में कम हो जाता है, जब भी इस कदम से, जानवरों मूत्र और मल उत्सर्जन दिखा।
    3. लॉकिंग रबर बैंड निकालते हैं और बंदरगाह के बाहर मढ़ाईकार बाहर निकालें। घर वापस पिंजरे में जानवरों रखो और अनाज का एक टुकड़ा या एक इनाम के रूप में घर के पिंजरे में एक सूरजमुखी के बीज प्रदान करते हैं। अगले परीक्षण 30 मिनट में शुरू होता है। एक दिन के भीतर 3.4.1 पांच 3.4.4 करने के लिए या अधिक दोहराएँ।
  4. 7 को 4 दिन पर, प्रोटोकॉल 3.4 में वर्णित के रूप में निर्धारण सिर करने के लिए पशु का पर्दाफाश। धीरे-धीरे (10 मिनट, 20 मिनट, 30 मिनट, और आदी होना आय के रूप में 50 मिनट) सिर निर्धारण की अवधि में वृद्धि।
    नोट: जानवरों करते हैं कोईटी यह तनाव का एक उच्च स्तर का संकेत हो सकता है, खाद्य इनाम खिलाओ। निर्धारण के समय में वृद्धि नहीं करते। जानवरों के व्यवहार संघर्ष दोहराया दिखाने के लिए, एक लंबी अवधि के लिए उन्हें आदत डालना।
  5. दैनिक जानवर के शरीर के वजन की जाँच करें। शरीर के वजन कम हो रही है जब असफल आदी होना पर विचार करें। सफल आदी होना के बाद सिर निर्धारण के साथ व्यवहार कार्य करने के लिए आगे बढ़ें।
    नोट: सफल आदी होना बाद में व्यवहार प्रशिक्षण (3E चित्रा और एफ) की सुविधा।

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Representative Results

यह सिर निर्धारण विधि चूहों और चूहों दोनों के लिए लागू है। कुल आठ चूहों औसत दर्जे का अग्रमस्तिष्क बंडल में उत्तेजक इलेक्ट्रोड की द्विपक्षीय आरोपण प्राप्त किया। उनमें से चार के लिए, अनुकूलित तार टंगस्टन इलेक्ट्रोड (microdrives) इसके अतिरिक्त एम 1 forelimb क्षेत्र (चित्रा -2) में प्रत्यारोपित किया गया। चूहों के लिए (एन = 2), चार स्टेनलेस स्टील के तार इलेक्ट्रोड ललाट / पश्चकपाल cortical क्षेत्रों में प्रत्यारोपित किया गया। सर्जरी से ठीक होने के बाद प्रोटोकॉल धारा 2 में वर्णन के रूप में शल्य चिकित्सा के दौरान, सिर mounters, चूहों और चूहों दोनों में सिर निर्धारण के लिए ढाला रहे थे, वे आदी होना या व्यवहार कार्य के लिए या तो सिर निर्धारण के दैनिक सत्र से अवगत कराया गया। ढाला सिर mounters प्रयोग के अंत के माध्यम से रुके (40.5 ± 1.73 (चूहों के लिए एसडी) दिनों ± मतलब है और ± 5.66 81 (सर्जरी के बाद चूहों के लिए एसडी) दिनों ± मतलब है)। चूहे व्यवहार कार्य के दौरान दैनिक 40 सिर निर्धारण 60 मिनट के लिए खुल गए थे; चूहों होना के 40 मिनट के लिए दैनिक 20 अवगत कराया गयाhavior कार्य।

पहले हम चूहों धक्का ट्रेन और सिर निर्धारण के तहत एक लीवर खींचने के लिए इस तकनीक का इस्तेमाल किया। इनाम औसत दर्जे का अग्रमस्तिष्क बंडल के प्रत्यक्ष बिजली की उत्तेजना थी। यह अतिरंजित हरकत व्यवहार elicits हालांकि, सिर निर्धारण मजबूती से आकस्मिक मढ़ाईकार जुदाई के बिना बनाए रखा गया था।

आदी होना के बाद निर्धारण बार के बंदरगाह में सिर मढ़ाईकार डॉकिंग हुक करने के लिए रबर बैंड बंद करके कुछ सेकंड में पूरा किया गया। पहले सिर निर्धारण करने के लिए शुरू की, जानवरों जैसे उनके पैर (चित्रा 3 ए और बी) को सीधा जगह में चलाने के रूप में व्यवहार संघर्ष कर प्रस्तुत करता है। हालांकि, इस तरह के व्यवहार आदी होना के साथ कम हो। सफल आदी होना सिर (चित्रा -3 सी और डी) तय करते हुए पशुओं को कोई अधिक संघर्ष व्यवहार चलता है कि इस बात की पुष्टि की जा सकती है।

आकृति 1
सिर-निर्धारण बार चित्रा 1. डिजाइन।
(ए) सिर निर्धारण बार के घटक के नाम। क) पोर्ट; ख) हुक ताला लगा; ग) निर्धारण बार शरीर; घ) छेद प्रस्तोता; ई) दीवार समर्थन; च) प्रस्तोता थाली। नियतन बॉक्स के डिजाइन इनसेट में दिखाया गया है। ओर दीवार के दो छेद ergonomically निर्धारण बार स्थिति के लिए उपयोग किया जाता है। चूहों के लिए डिज़ाइन किया गया सिर निर्धारण बार (बी) परिप्रेक्ष्य को ध्यान। काला तीर आयल फिल्मों को कवर की सीमा से संकेत मिलता है। (सी) चूहों में सिर निर्धारण के लिए बंदरगाह के डिजाइन। (रोह एट अल। 9 चित्रा 1 से संशोधित) यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2
सर्जरी के दौरान मढ़ाईकार मोल्डिंग 2. निर्माण चित्रा।
(ए) समालोचक अल सिर मढ़ाईकार मोल्डिंग कदम। (बाएं) शिकंजा (काले रंग में टी आकार) खोपड़ी (ग्रे) सतह पर सीधा प्रत्यारोपित किया जाना चाहिए। दंत चिपकने वाला राल सीमेंट (हरा) की एक पतली परत शिकंजा और खोपड़ी की सतह को शामिल किया गया। प्रायोगिक उद्देश्यों के आधार पर आरोपण के बाद (बीच में), अतिरिक्त ऐक्रेलिक रेजिन (नारंगी) खोपड़ी की सतह के बंदरगाह और आधार रेजिन पर लेपित प्रारंभिक राल के बीच के अंतर में भर जाता है और सिर मढ़ाईकार का एक हिस्सा बन जाते हैं। जोड़ा ऐक्रेलिक रेजिन मुश्किल सेट कर रहे हैं (सही) के बाद, सिर मढ़ाईकार बंदरगाह के बाहर फिसलने से जारी किया जा सकता है। ठोस काले लाइनों आयल फिल्मों का संकेत मिलता है। चूहों में (बी) के निर्माण के सिर मढ़ाईकार (रोह एट अल। 9 चित्रा 1 से संशोधित) (ए-केंद्र के कदम के बाद) जारी करने के लिए तैयार है। (सीडी) ढाला एक सिर मढ़ाईकार के रूप में सेवारत एक्रिलिक रेजिन। सर्जरी के बाद, अब भी संज्ञाहरण के तहत, जानवरों निर्धारण पट्टी से जारी कर रहे हैं। काला तीर बंदरगाह के आकार के मिलान गाइड रेल संकेत मिलता है। पुनश्च: //www.jove.com/files/ftp_upload/53064/53064fig2large.jpg "लक्ष्य =" _blank "> यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र तीन
चित्रा 3. चूहा और माउस सिर तय की।
जानवरों के शुरू में नियतन सिर करने के लिए सामने आ रहे हैं (एबी), वे व्यवहार संघर्ष कर फेंकना। आदी होना रूप में आय (सीडी), जानवरों कम संघर्ष व्यवहार दिखाने के लिए और आम तौर पर स्थिर मंच के फर्श पर बैठ जाओ। सफल (ई) से व्यवहार कार्य प्रदर्शन के (एफई) के परिणाम और सिर निर्धारण पर्यावरण की असफल (एफ) आदी होना (रोह की चित्रा 3 एट अल। 9 से संशोधित)। इनाम संख्या (उद्देश्यों को आकार देने के लिए) स्वतंत्र और आकस्मिक लीवर खींच दोनों को गले लगाती है। दोनों सत्रों में अपर्याप्त आदी चूहे केवल आकस्मिक लीवर द्वारा गैर आकस्मिक व्यवहार से खींचती पुरस्कृत साथ खराब प्रदर्शन से पता चलता है।= "Https://www.jove.com/files/ftp_upload/53064/53064fig3large.jpg" लक्ष्य = "_blank"> यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
Dental acrylic resin Lang Dental Manufacturing Ortho-Jet to make molded mounter
Paraffin film Bemis Parafilm to prevent adhesion of acrylic resin to the bar
Dental adhesive Sun Medical Super-Bond C&B to bond between acrylic resin and skull
Plexglass or other acrylic plate to make fixation bar and box platform
Cyanoacrylate to bond acrylic plates

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References

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Roh, M., Lee, K., Jang, I. S., Suk,More

Roh, M., Lee, K., Jang, I. S., Suk, K., Lee, M. G. Acrylic Resin Molding Based Head Fixation Technique in Rodents. J. Vis. Exp. (107), e53064, doi:10.3791/53064 (2016).

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