Introduction
على عكس الثقافات 2D القياسية، زراعة الخلايا 3D نماذج بديلة تسمح لدراسة سلوك الخلايا الظهارية في سياق ذي صلة من الناحية الفسيولوجية، واحدة تشبه الأنسجة. ساعدت الثقافات 3D من الغدة الثديية توضيح العديد من جوانب التنمية الغدة الثديية والأورام. ومع ذلك، فإن معظم نماذج الثقافة 3D المتاحة حاليا هي غير مناسب لدراسة عمل الهرمونات لأن خطوط الخلايا الظهارية البشرية المستخدمة للقيام بهذه المهمة وتفتقر مستقبلات هرمون التعبير 6،7،9.
هنا، نحن تصف نموذج الثقافة 3D من ظهارة الثدي الإنسان التي هي مناسبة لدراسة عمل الهرمونات 12. يستخدم هذا النموذج متاح تجاريا خط هرمون استجابة البشري الثدي الظهارية خلية، T47D 3،11،13، والتي كانت مستمدة في الأصل من الانصباب الجنبي تم الحصول عليها من مريضة 54 عاما مع سرطان الأقنية التسلل من الثدي. نحن نستخدم ذيل فأر الكولاجين من النوع 1 في شكل مصفوفة. هذه الطائفة 3Dنموذج لدى عودتهم مناسب لدراسة عمل الهرمونات الرئيسية الثلاثة موجه الثدي (استراديول، promegestone (التناظرية من هرمون البروجسترون)، والبرولاكتين) في خلايا الثدي الظهارية البشرية. التي يسببها هرمون التشكل الظهارية يمكن تقييم كمي بمرور الوقت عن طريق تحليل المورفومترية 12.
تسمح كثافة البذر المناسبة هذه الثقافات 3D لأن تبقى لمدة 2 أسابيع. من خلال هذه الساعة، وتطوير الهياكل كافية لتقييم كمي القوي للعمل الهرمونات على التشكل الظهارية. ويمكن أيضا أن تحصد المواد الهلامية في نقطة زمنية سابقة لتكاثر الخلايا وتحليل التعبير الجيني. بالإضافة إلى ذلك، هذا النموذج هو مناسبة لاختبار آثار العلاج الهرموني متتابعة. على سبيل المثال، بعد العلاج مع استراديول خلال الأسبوع الأول واستبدال مع غيرها من هرمون / مزيج من الهرمونات خلال الأسبوع التالي. تأثير المركبات وantiestrogens استروجين، مثل العهد الدولي مع العراق 182780، كما يمكن ستوتوفي استخدام هذا النموذج الثقافة 3D 12.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. إعداد الكواشف
- حل promegestone الاصطناعية progestagen (R5020) و 17 β استراديول (E2) في الإيثانول لجعل 10 -3 الحلول الأسهم M. حل البرولاكتين في الماء منزوع الأيونات المقطر لجعل 1 ملغ / مل محلول المخزون. حل مضاد الإستروجين ICI 182780 في DMSO لجعل M حل الأوراق المالية 10 -2. تخزين هذه الحلول في -20 درجة مئوية لمدة تصل إلى 6 أشهر.
- الفحم ديكستران (CD) تجريد المصل وCDFBS المتوسطة:
- للحرارة على تعطيل الجنين المصل البقري (FBS) في حمام مائي 57 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
ملحوظة: استخدام الأواني الزجاجية حمض غسلها فقط للفترة المتبقية من هذا البروتوكول. - حساب كمية الفحم اللازمة. باستخدام 10٪ أكثر حجم من كمية الدم للتعويض عن النزوح الناجم عن الفحم، وتزن 5٪ بالوزن / المجلد تنشيط مسحوق الفحم.
- غسل الفحم مرتين مع الماء منزوع الأيونات البارد المقطر باستخدام نفس وحدة التخزين ك كمية من المصل. لكل غسل جentrifuge في 50 x ج لمدة 2 دقيقة لتكوير الفحم. إزالة المياه بين يغسل. إضافة 0.5٪ بالوزن / المجلد ديكستران T-70 إلى الماضي الفحم بيليه. إعادة تعليق مع المقطر والماء منزوع الأيونات وأجهزة الطرد المركزي في 100 x ج لمدة 5 دقائق. نضح الماء.
- إضافة الحجم المناسب من المصل لبيليه وإعادة تعليق بيليه الفحم ديكستران في مصل الدم. احتضان، في حين المتداول (6 دورة في الدقيقة)، في 37 درجة مئوية لمدة 60 دقيقة. أجهزة الطرد المركزي في 2000 x ج لمدة 20 دقيقة. إذا ظهر طاف غائم، كرر الطرد المركزي. ومع ذلك، قد لا يكون المصل واضحا تماما في هذا الوقت ولكن سيتم مسح خلال الترشيح.
- تصفية من خلال مرشح 0.80 ميكرون، ثم مرة أخرى من خلال مرشح 0.45 ميكرون لإزالة أكبر الجسيمات. وأخيرا، وتصفية تعقيم مع فلتر 0.20 ميكرون. متجر تصفية CDFBS في أنابيب زجاجية أو T-25 قوارير الثقافة في -20 درجة مئوية.
- الفحم ديكستران جردت الجنين البقري التي تحتوي على وسائل الإعلام (وسائل الإعلام CDFBS): خلط 375 مل من الفينول الحمراء الخالية DMEM و 125 مل من DMEM/ F-12. إزالة 37.5 مل واستبدالها مع نفس حجم الفحم ديكستران عاري مصل الجنين البقري. إضافة 10 6 U / مل البنسلين ولام الجلوتامين إلى التركيز النهائي 2 مم. وسائل الإعلام الناتج هو 75٪ DMEM، و 25٪ DMEM / F-12، و 7.5٪ فحم ديكستران جردت FBS، 2mm و L-الجلوتامين، و 10 6 U / البنسلين مل.
- للحرارة على تعطيل الجنين المصل البقري (FBS) في حمام مائي 57 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
- إعداد 10X برنامج تلفزيوني، 1N هيدروكسيد الصوديوم والماء منزوع الأيونات المقطر. إعداد حجم ما يكفي من كل وفقا لحجم محلول الكولاجين اللازمة. تعقيم جميع الحلول عن طريق التصفية. تخزين 10X برنامج تلفزيوني والمعقم منزوع الأيونات الماء المقطر عند 4 درجة مئوية لمدة تصل إلى 1 في الشهر. لا تخزن الحل 1N هيدروكسيد الصوديوم.
- يعد حل الكولاجين في 1 ملغ / مل تركيز النهائي وفقا لبروتوكول ل "الإجراءات دبق البديل لالكولاجين الأول، الجرذ الذيل" المقدمة من قبل الشركة المصنعة. ويتكون كل هلام من 1.5 مل من محلول الكولاجين. على سبيل المثال، وإعداد 18.5 مل (0.5 مل لحساب خسارة خلال pipetting ل) من حل الكولاجين لإعداد12 الهلام. استخدام الحل الكولاجين مباشرة أو عقد على الجليد لمدة تصل إلى 2-3 ساعة.
- اللون القرمزي الشب صبغ:
- الجمع بين 1 غرام كارمين و 2.5 جم كبريتات الألمنيوم والبوتاسيوم في 500 مل من الماء المقطر. يغلي مع التحريك لمدة 20 دقيقة. مشاهدة بعناية لتجنب يغلي. ضبط الحجم النهائي إلى 500 مل بالماء المقطر إضافية.
- إضافة الكريستال من الثيمول للنشاط مضاد للميكروبات، وتغطي زجاجة مع رقائق الألومنيوم للحماية من الضوء. تصفية من خلال ورقة ترشيح الصف المختبر قبل كل استعمال. إعادة استخدام الحل اللون القرمزي لمدة تصل إلى ثلاثة أشهر. متجر في RT، محمية من الضوء.
- حل كولاجيناز: حل كولاجيناز في DMEM / F12 المتوسطة في تركيز 0.125٪ ث / ت. لا تقم بتخزين هذا الحل.
2. الثقافة 3D من T47D الخلايا في الفئران الذيل الكولاجين من النوع 1 هلام وهرمون العلاج
ملاحظة: الحفاظ على ماصات المصلية العقيمة ونصائح ماصة في 4 درجات مئوية.
- استعداداتإعادة تعليق وحيدة الخلية وإجراء تعداد خلايا. مزارع الخلايا الانقسام T47D قبل أن تصل إلى 70٪ التقاء. أجهزة الطرد المركزي لوحدة التخزين التي تحتوي على كمية من الخلايا اللازمة. ترى أن جل ينبغي لأحد أن تحتوي على نحو 75،000 T47D الخلايا.
- باستخدام ماصة الباردة، وإعادة تعليق بيليه خلية في حجم مناسب من الكولاجين. نعتبر أن يرصد كل هلام تصل من 1.5 مل من الكولاجين. مزيج من الخلايا والكولاجين بلطف لتجنب إدخال فقاعات.
- لمنع تأثير الكهرباء الساكنة على توزيع الخلية، فرشاة الحدود، العلوي والسفلي من لوحة 12-جيدا بفرشاة الحد الساكنة بعد إزالة التغليف لوحة. لتجنب تراكم ثابت مقابل خلال اتصال مع سطح العمل من غطاء محرك السيارة، ووضع هذه اللوحة على رأس وحة أخرى 12-جيدا (لوحة فارغة)، كان قد نحى مع brush.Gently الحد من ساكنة، صب 1.5 مل مزيج في كل بئر من لوحة 12-جيدا.
- وضع لوحة في حاضنة عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. إزالة عشرلوحة البريد من الحاضنة وضعه مرة أخرى في غطاء محرك السيارة.
- باستخدام طرف العقيمة P200، فصل بعناية الجل في حركة دائرية لطيفة من الحدود من البئر. يجب أن جل أيضا فصل من قاع البئر.
- تمييع الهرمونات في وسائل الإعلام CDFBS تضاف إلى الآبار. استخدام E2 وR5020 بتركيز نهائي 10 -10 م والبرولاكتين في في 10 -7 التركيز النهائي M. كما السيطرة، واستخدام وسائل الإعلام CDFBS دون الهرمونات وأضاف ولكن لا تزال تحتوي على اعلى حجم للDMSO مساويا لأسهم هرمون المستخدمة. تأكد من أن كل تتضمن كذلك 1.5 مل من وسائل الاعلام. ضع الثقافات 3D داخل 37 درجة مئوية، و 5٪ CO 2، 100٪ الرطوبة الأنسجة الثقافة الحاضنة. الحفاظ على الثقافات ل1 أو 2 أسابيع، وتغيير وسائل الاعلام كل يوم 2.
3. تجهيز جل ليتصاعد الجامع
- إزالة وسائل الإعلام والثقافة، وإضافة 1.5 مل من برنامج تلفزيوني على كل جانب.
- نقل الجل إلى شريحة. قطع هلام في نصف باستخدام منحنىشفرة جراحية د. متابعة المعالجة مع نصف وحفظ النصف الآخر للتحليل النسيجي.
- نقل هلام نصف لجبل بأكمله إلى شريحة. السماح هلام الجافة لمدة 5 دقائق، ثم نقل الشريحة إلى جرة coplin التي تحتوي على 10٪ من الفورمالين.
ملاحظة: يجب أن تتم جميع حضانات في RT. - إصلاح المواد الهلامية في جرة coplin على شاكر O / N.
- غسل الشرائح مرتين مع برنامج تلفزيوني لمدة 10 دقيقة كل يوم شاكر. نقل الشرائح إلى 70٪ ETOH. احتضان لمدة 1 ساعة على شاكر. الشرائح نقل إلى كارمين الشب O / N.
- في اليوم التالي، يذوى الشرائح على شاكر في 70 في المائة ETOH، 95٪ ETOH، و 100٪ لمدة 1 ساعة ETOH لكل منهما. نقل الشرائح حتى الزيلين مرتين لمدة 1 ساعة لكل والحفاظ على شاكر. استخدام المتوسطة المتزايدة على أساس التولوين إلى تركيب المواد الهلامية و1.5 ملم coverslips سميكة.
- دراسة يتصاعد كلها تحت الضوء العادي (المجهر أو المجسام). للاطلاع على تحليل أكثر تفصيلا لشكل والتجويف استخدام المجهر متحد البؤر وتصور كارمين صبغ مع الحنة 633 نانومتر ليزر.
4. معالجة جل لتجهيز لتحليل الأنسجة
- نقل النصف المتبقي من هلام لقارورة زجاجية 20 مل تحتوي على 10٪ من الفورمالين وإصلاح على شاكر O / N.
- غسل المواد الهلامية مرتين مع برنامج تلفزيوني لمدة 10 دقيقة كل يوم شاكر. مكان المواد الهلامية في أشرطة تجهيز لتضمين البارافين.
- المواد الهلامية نقل 70٪ ETOH، احتضان لمدة 1 ساعة ومتابعة مع 95٪ ETOH لمدة 1 ساعة، وتغيير لالعذبة 95٪ ETOH لمدة 1 ساعة، و 100٪ ETOH لمدة 1 ساعة، وتتغير إلى الطازج 100٪ ETOH لمدة 1 ساعة. عند هذه النقطة، قد يتم تخزين المواد الهلامية في 100٪ ETOH O / N في RT أو حضنت مع الزيلين لمدة 1 ساعة ثم مرة أخرى في زيلين جديدة لمدة 1 ساعة.
- أشرطة نقل إلى برافين لمدة 1 ساعة على 60 درجة مئوية في الحاضنة فراغ، كرر مع البارافين الطازج مرتين أكثر من ذلك.
- ملء قوالب البلاستيك مع البارافين نظيفة. فتح الكاسيت، وإزالة الجل ووضعه في قالب من البلاستيك يحتوي على البارافين. ملء مع البارافين وإضافة رأس الكاسيت التي تحتوي على التسمية على رأس والسماح كتلة باردة.
- إزالة بلاستجيم العفن وقسم كتلة باستخدام مشراح. الحصول على 5 أم أبواب سميكة لسعادة تلطيخ ومناعية.
5. استخراج الخلايا من الخلايا من المواد الهلامية عن طريق كولاجيناز العلاج
- إزالة هلام من البئر ونقلها إلى طبق بتري تحتوي على برنامج تلفزيوني. شطف هلام لفترة وجيزة.
- نقل الجل على أنبوب 15 مل تحتوي على 2 مل من 0.125٪ كولاجيناز. ماصة صعودا وهبوطا 4-5 مرات من أجل كسر هلام الى قطع صغيرة.
- احتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 25 دقيقة (حتى يذوب جل والخلايا في تعليق)
- إضافة 2 مل من مصل تستكمل ثقافة المتوسط. جمع الخلايا بواسطة الطرد المركزي (1000 x ج، 5 دقائق)، طاف نبذ، اعادة تعليق الخلايا والعد.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
ويلخص الشكل 1 إجراءات إعداد الثقافات 3D حساسة لهرمون. لوحظ الهياكل الظهارية في يتصاعد كاملة من المواد الهلامية تربيتها لمدة 2 أسابيع في وجود E2 حده، وبالاشتراك مع هرمونات أخرى. خلايا فقط واحدة أو مجموعة من 2-3 خلايا موجودة عند إضافة أي الهرمونات إلى مستنبت (CDFBS المتوسطة) (الشكل 2). تخدم هذه الحالة كوسيلة لمراقبة سلبية.
الخلايا في الهياكل شكل ثقافة 3D التي تختلف في الشكل والحجم، وجود التجويف. توزيع الهياكل في هلام هو عادة غير متجانسة. كما هو موضح سابقا، وهناك المزيد عموما الهياكل على طول الحدود من هلام مما ظهر في مركز (4). وبسبب هذا التباين المكاني، وينبغي أن يقتصر مقارنات بين العينات إلى المناطق المقابلة عبر العينات.
الأنواع من الذي تم اشتقاق نوع الكولاجين 1 التأثيرات على النمط الظاهري لالثانية نوعية الهياكل الظهارية الناجمة 5. ذيل فأر الكولاجين من النوع 1، وتستخدم هنا، وقد اختير منذ البذر في الأبقار نوع الكولاجين 1 أسفرت عن تشكيل مجموعات الخلايا غير منظمة (الشكل 3).
تحليل مفصل للهياكل الظهارية يمكن تحقيقه باستخدام المجهر متحد البؤر (الشكل 4). نتائج العلاج E2 في الهياكل مدورة ومستطيلة الشكل (4A). وجود E2 والنتائج البرولاكتين في هياكل أكثر في مهدها (الشكل 4B)، في حين وجود E2 والنتائج promegestone في هياكل غير النظامية مع توقعات الخلوية تذكرنا الجانب المتفرعة (الشكل 4C). E2 حده وE2 بالإضافة إلى البرولاكتين رشاقته هياكل الأنسجة عند قياسه من نمو ض الاتجاه، وبالمقارنة مع تلك التي لوحظت في E2 بالإضافة إلى promegestone.
من أجل تحديد عدد الخلايا بعد العلاج الهرموني، الخلايا extracte د من الجل باستخدام العلاج كولاجيناز. على سبيل المثال، باستخدام هذه الطريقة يمكن أن ندرس كيف الإستروجين ICI 182780 يحول دون تأثير من E2 على تكاثر الخلايا في الثقافات 3D (الشكل 5).
الشكل 1. الإجراءات لإعداد الثقافات 3D حساسة لهرمون. باختصار، يتم خلط تعليق خلية واحدة من الخلايا T47D مع ذيل فأر نوع الكولاجين 1 وتدفقت الآبار من لوحة ال 12 أيضا. يسمح المواد الهلامية إلى تحجر لمدة 30 دقيقة في 37 ° C / 5 حاضنة٪ CO2. وأضاف مستنبت ويتم فصل المواد الهلامية من البئر. الثقافات يمكن أن تحصد بعد 1 أو 2 أسابيع وفقا لنقطة النهاية. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
. في غضون الصفحات = "1"> 
يشار الشكل 2. يتصاعد كامل من الثقافات 3D بعد تلطيخ مع كارمين الشب صبغ (A) كامل جبل نصف هلام ملطخة اللون القرمزي الشب لتصور هياكل الظهارية، مثال العائد على الاستثمار لتحليل مورفولوجيا من قبل مربع؛ WM الثقافات 3D نمت لمدة 2 أسابيع في الفقرة (ب) CDFBS وسائل الإعلام (أي الهرمونات المضافة) و (C) CDFBS وسائل الإعلام تستكمل مع E2 والبرولاكتين. الحانات هي مقياس 5000 ميكرون (A) و 500 ميكرون (B & C). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3. مقارنة بين المصفوفات المستخدمة في الثقافة 3D. (A) بوفي ولاحظ شمال شرق نوع الكولاجين 1 النتائج في مجموعات غير منظمة من الخلايا، خلافا لهياكل المنظمة (ب) عند استخدام ذيل فأر نوع الكولاجين شريط 1. الحجم: 100 ميكرون الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 4. الصور متحد البؤر هياكل T47D لوحظ في 3-D المواد الهلامية الكولاجين بعد 2 أسابيع. المعاملة مع (A) E2، (ب) E2 + البرولاكتين و (C) E2 + R5020. تشير الأسهم لتوقعات هيولية. وكان سمك الهياكل الظهارية 24 و 40 و 20 ميكرون على التوالي. مقياس شريط: 40 ميكرومتر الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الصورة = "jove_content" FO: المحافظة على together.within الصفحات = "1"> 
الرقم 5. الثقافات 3D تعامل مع أي E2 وحدها أو E2 بالإضافة إلى ICI 182780 ل1 أسبوع. عدد الخلايا بعد استخراج الخلايا باستخدام العلاج كولاجيناز. (A) CDFBS المتوسطة، (ب) CDFBS المتوسطة بالإضافة إلى E2 في 1X10 -10 م، (ج) العهد الدولي مع العراق 182780 في 1X10 -8 M بالإضافة إلى E2 في 1X10 -10 م و (D) ICI 182780 في 1X 10-7 M بالإضافة إلى E2 في 1X10 -10 م. القضبان: SEM الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
نحن نقدر المساهمات التحريرية التي كتبها شيريل Schaeberle. وأيد هذا البحث من قبل آفون المنح # 02-2009-093 و02-2011-095، ومعهد علوم الصحة البيئية / المعاهد الوطنية للصحة ES 08314 لهيئة علماء المسلمين. المحتوى هو فقط من مسؤولية الكتاب ولا تمثل بالضرورة وجهة النظر الرسمية للمعهد الوطني لعلوم الصحة البيئية أو المعاهد الوطنية للصحة.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 12-well Tissue Culture Plates (Falcon) | Fisher Scientific | 08-772-29 | |
| 15 ml polystyrene conical Tubes | Fisher Scientific | 14-959-49D | |
| Activated Charcoal | Sigma | C-5510 | |
| Carmine Alum | Sigma | C1022-100G | |
| Collagenase, Type 3 | Worthington | S0C11784 | |
| Confocal Microscope | Zeiss | LSM510 | Equiped with HeNe 633nm laser |
| Dextran T-70 | Abersham/Pharmacia | 17-0280-01 | |
| DMEM/F-12, HEPES, no phenol red | Life Technologies | 11339-021 | Phenol red-free media for hormone use |
| DMEM, low glucose, pyruvate, no glutamine, no phenol red | Life Technologies | 11054-020 | Phenol red-free media for hormone use |
| 17-β-Estradiol | EMD Millipore | 3301 | Dissolved in Ethanol |
| Ethanol | Koptec | V1001 | |
| Fetal Bovine Serum | Hyclone | SH30070.03 | For use with hormones, must be Charcoal Dextran stripped |
| Filters (115 ml) | Nalgene | 380-0080, 245-0045, 120-0020 | 0.88, 0.45, 0.20 micron, respectively |
| Formalin, 10% | Fisher Scientific | SF93-20 | |
| L-Glutamine (200 mM) | Life Technologies | 25030-081 | |
| ICI 182,780 (fulvestrant) | Sigma Aldrich | I4409-25MG | Dissolved in DMSO |
| Microtome | Leica | RM2155 | |
| Tissue embedding media | McCormick Scientific | 39502004 | |
| Penicillin | Sigma | 7794-10MU | Dissolved in 10 ml of distilled deionized water |
| Permount | Fisher Scientific | SP15-500 | |
| Phosphate Buffered Saline pH 7.4 | Sigma Aldrich | P3813-10PAK | |
| Prolactin | Sigma Aldrich | L4021-50UG | Dissolved in distilled deionized water |
| Promegestone | Perkin Elmer | NLP004005MG | Dissolved in Ethanol |
| Rat-Tail Collagen | Corning | 354236 | Lots may contain varying concentrations, note accordingly |
| Scalpel | Miltex | 4311 | |
| Semi-enclosed Benchtop Tissue Processor | Leica | TP1020 | |
| Sodium Hydroxide | Sigma Aldrich | S5881 | Prepare 1N NaOH stock |
| StaticMaster Anti-static brush | Amstat | C3500 | |
| Stripette Serological Pipettes | Corning | 4101 | |
| T-25 flasks | Corning | 430168 | |
| Tissue Cassettes | Fisher Scientific | 15-200-403E | |
| Wheaton Vials, Glass, 20 ml | Fisher Scientific | 03-341-25D | |
| Xylene | VWR | 95057-822 |
References
- Barnes, C., et al. From single cells to tissues: interactions between the matrix and human breast cells in real time. PLoS ONE. 9, e93325 (2014).
- Berthois, Y., Katzenellenbogen, J. A., Katzenellenbogen, B. S. Phenol red in tissue culture is a weak estrogen: implications concerning the study of estrogen responsive cells in culture. Proc.Nat.Acad.Sci.USA. 83, 2496-2500 (1986).
- Chalbos, D., Vignon, F., Keydar, I., Rochefort, H. Estrogens stimulate cell proliferation and induce secretory proteins in a human breast cancer cell line (T47D). J.Clin.Endocrinol.Metab. 55, 276-283 (1982).
- Dhimolea, E., Maffini, M. V., Soto, A. M., Sonnenschein, C. The role of collagen reorganization on mammary epithelial morphogenesis in a 3D culture model. Biomaterials. 31, 3622-3630 (2010).
- Dhimolea, E., Soto, A. M., Sonnenschein, C. Breast epithelial tissue morphology is affected in 3D cultures by species-specific collagen-based extracellular matrix. J.Biomed.Mat.Res.A. 100, 2905-2912 (2012).
- Krause, S., et al. Dual regulation of breast tubulogenesis using extracellular matrix composition and stromal cells. Tissue Eng Part A. 18, 520-532 (2012).
- Krause, S., Maffini, M. V., Soto, A. M., Sonnenschein, C. A novel 3D in vitro. culture model to study stromal-epithelial interactions in the mammary gland. Tissue Eng.Part C Methods. 14, 261-271 (2008).
- Krause, S., Maffini, M. V., Soto, A. M., Sonnenschein, C. The microenvironment determines the breast cancer cells' phenotype: organization of MCF7 cells in 3D cultures. BMC Cancer. 10, 263-275 (2010).
- Lee, G. Y., Kenny, P. A., Lee, E. H., Bissell, M. J. Three-dimensional culture models of normal and malignant breast epithelial cells. Nat.Methods. 4, 359-365 (2007).
- Martinson, H. A., Jindal, S., Durand-Rougely, C., Borges, V. F., Schedin, P. Wound healing-like immune program facilitates postpartum mammary gland involution and tumor progression. Int.J.Cancer. , (2014).
- Soto, A. M., Murai, J. T., Siiteri, P. K., Sonnenschein, C. Control of cell proliferation: evidence for negative control on estrogen-sensitive T47D human breast cancer cells. Cancer Res. 46, 2271-2275 (1986).
- Speroni, L., et al. Hormonal regulation of epithelial organization in a 3D breast tissue culture model. Tissue Eng.Part C Methods. 20, 42-51 (2014).
- Vignon, F., Bardon, S., Chalbos, D., Rochefort, H. Antiestrogenic effect of R5020, a synthetic progestin in human breast cancer cells in culture. J.Clin.Endocrinol.Metab. 56, 1124-1130 (1983).
