Summary
Este artigo descreve o protocolo detalhado e equipamentos necessários para o mapeamento de óptica dupla de transmembrana potencial (V m) e livre intra-retículo sarcoplasmático (RS) Ca2 + no coração de coelho Langendorff-perfundidos. Este método permite a observação direta e quantificação de V m e SR Ca2 + dinâmica no coração intacto.
Protocol
Todos os procedimentos que envolvem animais foram aprovados pelo Comitê de Cuidado e Uso da Universidade da Califórnia, Davis Animal, e aderiu ao Manual sobre Cuidados e Uso de Animais de Laboratório publicado pelo National Institutes of Health.
1. Preparação
- Prepare dois concentrados (25X) As provisões de solução modificada de Tyrode com antecedência e armazenar a 4 ° C: (1) Stock I (em mM: NaCl 3205, CaCl2 32,5, KCl 117,5, NaH 2 PO 4 29.75, MgCl2 26.25) e (2) Stock II (em mM: NaHCO 3 500).
- Recentemente preparar a solução de 2 L de Tyrode com a seguinte composição (em mM): NaCl 128,2, CaCl2 1,3, KCl 4,7, MgCl2 1,05, NaH 2 PO 4 1,19, NaHCO3 20 e glucose 11,1 por combinação de 1840 ml de água desionizada (DI) água, 80 ml da I, 80 ml de da II e 4 g de glicose. Não misture diretamente da I e da II; Adicione om 1.840 ml DI para evitar a precipitação.
- Preparar a solução estoque do desacoplador excitação-contracção blebbistatin a 10 mg / ml em di-metilsulfóxido anidro (DMSO) com antecedência e armazenar a solução estoque a 4 ° C.
- Preparar soluções de estoque de corantes fluorescentes: (1) RH237 tensão-sensível corante (1 mg / ml em DMSO) e (2) indicador de baixa afinidade cálcio Fluo-5N AM (2 mg / ml em DMSO) de acordo com as recomendações do fabricante. Use os preparativos imediatamente para evitar a decomposição com a subsequente perda de capacidade de carga.
- Primeiro o sistema de perfusão de Langendorff com recirculação oxigenada (95% de O 2, CO 2 5%) de solução de Tyrode. Ajustar o fluxo de O2 / CO2 para manter o pH da solução de Tyrode a 7,4 ± 0,05. Utilizar um filtro de rede em linha de nylon tecida (tamanho de poro: 11 | iM) para filtrar continuamente o perfusado.
- Primeiro o sistema de perfusão à temperatura ambiente, como loadi subsequenteng de Fluo-5N AM é realizada à temperatura ambiente. Para Fluo-5N AM carregamento, utilize um pequeno volume de recirculação perfusato (~ 150 mL). Depois de corante de carregamento, utilizar um volume maior de perfusato (1 - 2 G, ver Figura 1C).
- Ligue sistema de aquisição de dados e se preparar para a monitoração contínua de ECG e pressão de perfusão. Prepare o sistema de monitoramento de pressão-: Conecte um transdutor de pressão à linha de perfusão e monitorar a pressão de perfusão com um amplificador transbridge. Ajuste da pressão de perfusão de base a 0 mmHg, quando o coração não está ligado ao sistema de perfusão.
- Alinhe as câmeras mapeamento óptico para garantir o alinhamento espacial entre o V m e SR Ca 2 + sinais.
- Primeiro, o foco das câmeras, colocando uma régua ou um objeto com texto no prato de perfusão. Vire as câmeras de mapeamento em um modo de visualização ao vivo e ajustar o foco até que o texto é nítido e claro. Adquirir um fotograma único de cada câmera.
- Overlayestas imagens e ajustar a transparência da imagem de topo para que ambas as imagens são visíveis. O texto nas imagens devem se sobrepor exatamente. Se não perfeitamente alinhados, ajustar o ângulo do espelho dicróico ou a posição de cada câmara até que as duas imagens são alinhados.
2. A colheita, Perfusão, e Dye-carregamento de coelho coração
- Prenda o coelho em um limitador de coelho aprovado. Profundamente anestesiar através de uma injecção intravenosa (veia marginal da orelha) de pentobarbital de sódio (50 mg / kg) e heparina (1000 UI).
- Quando o Coelho exibe falta de reflexos nociceptivos, fazer uma incisão na pele da linha média para expor o esterno e costelas. Cortar o esterno com uma tesoura cirúrgica de ponta romba do xifóide ao manubrium. Tome cuidado para não danificar o coração, enquanto a abertura do esterno. Espalhar a nervuras para expor o coração.
- Excisar rapidamente todo o bloco coração-pulmão por um rápido corte de todos os navios e do tecido conjuntivo. Immediately colocar o bloco coração-pulmão em solução gelada de Tyrode.
- Localize a aorta para a perfusão retrógrada. Corte a aorta ascendente proximal apenas para os três ramos do arco aórtico. Canular a aorta para uma cânula 8 L ligado ao sistema de perfusão. Utilizar um pedaço de fio de sutura USP 0 seda para fixar a aorta para a cânula.
- Dissecar cuidadosamente a traqueia, pulmões e gordura epicárdica do coração. Com uma pinça e tesouras afiadas de dissecação, localize a válvula mitral e cuidadosamente danificar ou remover um folheto para evitar o congestionamento solução no ventrículo esquerdo.
- Submerge o coração na câmara de perfusão encamisado de vidro horizontalmente, com a superfície anterior do coração virado para cima para a imagiologia. Segurar a cânula a um pedaço de Sylgard com pinos em forma de U para o fundo do prato de silicone para impedir o movimento do coração durante o mapeamento (Figura 1D). Se desejado, inserir um pequeno pino de insectos no vértice do coração para STAbilização.
- Posição electrocardiograma (ECG) eléctrodos no banho no lado direito e esquerdo do coração. Totalmente submergir os eléctrodos no banho e garantir que eles não estão em contacto com a superfície do coração para proporcionar uma ECG conduzida volume análogo a uma configuração de eléctrodos eu. Verifique a ligação morfologia I ECG normal. Ajustar o fluxo (25 - 35 ml / min) para assegurar que a pressão aórtica é mantida a 60 - 70 mmHg.
- Desligue as luzes da sala e adicionar 0,3 - 0,6 ml da solução de blebbistatin (passo 1.2) ao perfusato (concentração final de 10 - 20 m).
- Desligue as luzes de quarto para evitar fotoinativação de blebbistatin. Se necessário, uma pequena holofote farol ou pode ser usado para fornecer a iluminação da tarefa.
Nota: blebbistatin é um inibidor da ATPase da miosina e um desacoplador excitação-contração. Porque Fluo-5N carregamento exige (60 min) RT (hipotermia) condições prolongados (ver passos 2.8 - 2.10), a produção de energia cardíaca podem ser comprometidos. ºerefore, além de blebbistatin no perfusato antes de tingir o carregamento pode reduzir a demanda de energia 16 e eliminar os artefatos de movimento durante as gravações ópticas posteriores 17.
- Desligue as luzes de quarto para evitar fotoinativação de blebbistatin. Se necessário, uma pequena holofote farol ou pode ser usado para fornecer a iluminação da tarefa.
- Quando contração do coração cessou (10-15 min, verificado na gravação da pressão aórtica), mude para o pequeno volume sistema de recirculação de perfusão (ver passo 1.4.1).
- Preparar e colocar solução de carga Fluo-5N AM: Adicionar 0,25 ml da solução de Fluo-5N AM (passo 1.3) para 0,25 ml quente 20% Pluronic F127. Adicionar 0,5 ml de solução de Tyrode quente para a mistura, misturar bem e adicionar ao pequeno volume do sistema de recirculação-perfusão.
- Monitorar continuamente a pressão de perfusão e ECG e ajustar o fluxo, se necessário. Corante demora cerca de 1 hora à temperatura ambiente. 45 minutos após a carga ter começado, ligar o banho de água circulante para iniciar o aquecimento do sistema de perfusão e perfusado a 37 ° C.
- Após 60 min de Fluo-5N AM carregamento, switch a perfusão do maior volume sistema de recirculação de perfusão (ver passo 1.4).
- Dilui-se 50 ul da solução de corante sensível RH237 tensão (passo 1.3) em 1 ml de solução de Tyrode quente e adiciona-se lentamente (ao longo de 5 min ~) num proximal porta de injecção para a cânula.
3. Mapeamento óptica
- Durante os momentos finais de corante de carga, posicione o coração e concentrar as câmeras ópticas de mapeamento para garantir o campo apropriado de vista para o experimento.
- Se desejado, colocar um eléctrodo bipolar de estimulação sobre a superfície do epicárdio do coração para a estimulação.
- Colocar uma tampa de plástico ou de vidro de deslizamento sobre a superfície da câmara de perfusão para reduzir o movimento artefacto na superfície do líquido, que pode estar presente devido à recirculação da solução de perfusão.
Nota: Como uma alternativa para uma lamela, use um 50 milímetros tampa de plástico limpo placa de Petri. - Concentre-se as guias de luz para iluminar uniformemente a superfície do coração e comluz xcitation. Use azul diodo emissor de luz (LED) fontes de luz e filtrar a luz com um 475-495 nm filtro passa-banda (Figura 1A).
- Recolhe fluorescência emitida com um macroscópio e dois de metal-óxido-semicondutor (CMOS) complementares câmaras mapeamento óptico. Dividir a luz emitida com um espelho dicróico a 545 nm.
- -Passe longo filtrar a porção de comprimento de onda mais longo, contendo o sinal de V m, a 700 nm. Passa-banda do filtro de comprimento de onda mais curto porção, contendo o sinal de SR de Ca2 +, a partir de 502 - 534 nm (Figura 1A). Defina a frequência de aquisição de dados ópticos para 0,5-1 kHz.
- Para cada gravação óptica, primeiro iniciar o protocolo de estimulação desejado, ligar a luz de excitação, e recolher 1-4 sec de dados. Se desejar, sincronizar a protocolos de estimulação e aquisição de dados.
Nota: Não é possível voltar a carregar o Fluo-5N AM, por conseguinte, a relação sinal-para-ruído (SNR) será reduse durante todo o experimento devido a tingir fuga do SR. Limitar protocolo experimental para 1-2 horas para assegurar altos valores de SNR. - Após a experiência, lavar o sistema de perfusão na sequência de água desionizada, 70% de álcool reagente, e novamente com água DI.
- Filtrar cada conjunto de dados com um filtro gaussiano espacial (raio de 3 pixels) utilizando os pacotes de software comercialmente disponíveis de acordo com o protocolo do fabricante.
- Se necessário, espacialmente alinhar o V m e SR de Ca2 + conjuntos de dados. Tal como no passo 1.6, sobrepor imagens de cada câmera e verifique se as estruturas anatômicas do coração (ie., Vasculatura coronária, arestas dos átrios ou ventrículos) ou outros itens no campo de visão (ou seja, de uma cânula, a estimulação do eletrodo) exatamente sobreposição. Se não, o alinhamento espacial dos conjuntos de dados é necessária.
- Deslocar a imagem transparente no topo do xe y-direção até sobreposição exata é conseguido, fazendo notar o número de pixelsa imagem deve ser deslocado em cada direcção. O conjunto de dados de toda a imagem que corresponde ao topo (ou V m ou SR Ca 2+) deve então ser deslocado por o número de pixels determinados em cada direcção para assegurar o alinhamento preciso entre o V m e SR de Ca2 + conjuntos de dados.
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Representative Results
A Figura 1A mostra um diagrama esquemático da configuração óptica para dual V m e SR Ca2 + mapeamento. Com esta configuração, não há separação espectral completa do V m e SR sinais de Ca2 + (Figura 1B). Um diagrama do sistema de perfusão de circuito duplo usado para Fluo-5N corante de carga está ilustrado na Figura 1C. A Figura 1D mostra a orientação horizontal do coração no prato de perfusão. Representante V m e Ca 2+ traços ópticas SR durante a estimulação contínua de diferentes locais sobre a superfície do epicárdio do coração são mostrados na Figura 2A. O campo de vista óptico com esta configuração é de 31 mm x 31 mm e a orientação do coração no interior do campo de visão é mostrado na Figura 2B. Mapas de activação são também mostrados na Figura 2B e são construídas seleccionando o tempo de activação de cada pixel e ploteamento esse valor em um mapa isócrono (note o atraso típico de ~ 8 - 10 ms entre o V m e SR Ca2 + mapas de ativação). Importante, potenciais de acção chave (AP) propriedades tais como o AP tempo de subida (de 10% a 90% da amplitude [trise]), e duração do PA a 80% de repolarização (APD 80), não são estatisticamente diferentes entre corações carregados com RH237 e Fluo-5N em comparação com aqueles carregado com RH237 e Rhod-2 (trise: 14,9 mseg ± 1,9 vs. 14,2 ms ms ± 1,2 ms e APD 80: 155.3 ± 5,8 ms ms vs. 156,9 ± 5,7 ms ms para Fluo-5N e Rhod-2, respectivamente, p> 0,05 para ambos;. n = 8 / grupo), indicando um efeito mínimo de Fluo-5N ou corante de carga sobre o AP Figura 2C mostra a capacidade de observar e quantificar as alterações relativas na diastólica SR Ca2 + carga e Ca 2+ liberação sistólica SR amplitudes em vários comprimentos de ciclo de estimulação. Apenas as alterações relativas na estes parâmetros podem ser quantified, calibração como absoluto ([Ca 2+] SR) do sinal no coração intacto não é possível.
Esta abordagem é particularmente útil para caracterizar e quantificar patológico SR manipulação de Ca2 +, como é mostrado na Figura 3. Após a aplicação do agonista do receptor adrenérgico isoproterenol β-(100 nM), clara diastólica de Ca2 + a partir do vazamento SR é observada ( setas vermelhas, Figura 3A). Se a fuga for grande o suficiente, Ca 2+ mediada por actividade provocada pode ocorrer (Figura 3B).
Figura 1. Configuração do sistema para mapeamento dual de V m e SR Ca2 +. (A) Diagrama da configuração óptica, incluindo filtros necessários e espelho dicróico para separação espectral adequada. (B) Imagem de corações colocado com Fluo-5N única (i) ou RH237 única (ii) indica a separação espectral completa do V m e SR de Ca2 + sinais fluorescentes. Ex: excitação, Em:. Emissão (C) Esquema do sistema de perfusão dual-circuito para perfusão normal e Fluo-5N corante de carregamento (D) A imagem de um coração e de ECG canulados eletrodos no prato de perfusão.. Painéis A e B reproduzido com permissão de Wang et al. 15. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2. V m e SR Ca2 + Traços ópticas durante a estimulação contínua e não-contínua. (A) Representante V m e SR Ca2 + optical traça durante a estimulação contínua a um comprimento de ciclo de 300 mseg. Os sinais são mostrados a partir das localizações individuais indicados em (B). Nota o atraso de ~ 8 - 10 ms entre o V m e SR de Ca2 + tempos de activação como é típico para o acoplamento de excitação-contracção normais. (B) A imagem de um coração dentro do campo de mapeamento de vista (seta branca indica estimulação eletrodos) e mapas de ativação de V m e SR Ca2 +. (C) Ca2 + vestígios ópticos SR demonstrando alterações na diastólica SR Ca 2+ carga ea amplitude de SR Ca2 + libertação após mudanças bruscas na frequência de estimulação. Todos os traços começar com estimulação à CL = 300 ms. Frequência de estimulação é então abruptamente mudou para CL = 500 ms (i), CL = 400 ms (II), ou CL = 250 ms (iii). Quando CLs mais longas são iniciadas (i - ii), uma versão maior SR Ca2 + ocorrer primeiro (devido ao intervalo maior diastólica e recuperação de RyRs) ea diastólica SR Ca2+ carga diminui ligeiramente para um novo estado de equilíbrio (linha horizontal a tracejado). Quando um CL mais curto é iniciada, no entanto, ocorre uma menor amplitude de Ca2 + SR libertação (devido à recuperação mais curto intervalo diastólico e incompleto de RyRs) e diastólica SR Ca2 carga aumenta para um novo estado de equilíbrio (linha horizontal a tracejado) . SR alternância de Ca2 + amplitude lançamento também ocorre em CL = 250 ms. S: amplitude liberação pequeno, L: amplitude lançamento grande. (CL: a duração do ciclo) Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3. diastólica SR Ca 2+ vazar e subsequente atividade deflagrada. (A) ECG, V m, e SR Ca2 + vestígios durante basal (esquerda) e apóstratamento com 100 nM isoproterenol (ISO, à direita). Com Iso, significativa SR Ca 2+ diastólica vazamento é observado (setas vermelhas). SR Ca 2+ amplitudes de sinal foram normalizados antes e depois da Iso. O nó sino-atrial foi ablated para permitir a estimulação CL = 300 ms em ambos os casos. (B) Se SR Ca 2+ vazamento é grande o suficiente, pode desencadear atividade focal (complexos ventriculares prematuros, PVCs). Neste exemplo, PVCs estão interrompendo o ritmo sinusal normal. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
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Discussion
As chaves para o sucesso de Fluo-5N corante de carga são o pequeno volume de configuração de recirculação de perfusão, que permite uma elevada concentração de Fluo-5N sem a necessidade de grandes quantidades de corante, o período de tempo de carregamento (1 hr), e executar o carregamento à TA. Se o carregamento é realizado a temperaturas fisiológicas, actividade enzimática celular cliva rapidamente o tag -AM quando o corante atravessa a membrana da célula, prendendo as moléculas de corante no citosol e não permitindo-lhes atravessar a membrana SR. À RT, no entanto, a actividade enzimática é retardado e uma quantidade suficiente de corante pode atravessar tanto a membrana celular e a membrana SR antes da tag -AM é clivado, aprisionando o corante na SR.
Mesmo com as condições de carregamento óptimas, no entanto, as amplitudes de sinal e alterações de fluorescência fraccionada (Af / F) com esta abordagem será menor do que com o mapeamento óptico tradicional de V m e Ca2 + intracelular com corantes de alta afinidade. Por exemplo, com a configuração óptica usado aqui que consiste em LED de luz de excitação, objectivos macroscópicas, grandes filtros e espelho dicróico (5 cm x 5 cm), e câmaras de CMOS, alterações de fluorescência fraccionada (Af / F) são da ordem de 1 - 2% para o sinal de Fluo-5N e 2 - 3% para o sinal de 15 RH237. A fluorescência fraccionada irá, claro, depender da configuração específica óptica, fonte de luz, e as câmaras de uma configuração particular, mas, mesmo em condições ideais o sinal de Fluo-5N é significativamente menor do que o que é tipicamente observado para as gravações de Ca2 + intracelular com corantes de alta afinidade. Por exemplo, na mesma configuração, Af / F é da ordem de 20-30% para Rhod-2 quando verde (545 nm) luz de excitação é utilizada 18. A luz de excitação é verde também mais perto do pico de excitação de RH237, assim, a Af / F de RH237 é também maior neste caso, cerca de 4 - 5%. Assim, para os laboratórios já realizando mapeamento óptico dupla de V m Ca2 + intracelular, deve ser tomado cuidado para optimizar todos os componentes da configuração óptica máxima para garantir Af / F para o sinal de Fluo-5N.
Com essa abordagem, os investigadores podem sondar precisamente SR Ca 2+ dinâmica e seu impacto sobre a V m de maneiras que não são possíveis com as abordagens existentes. Por exemplo, medições quantitativas de Ca2 + SR vazamento (como na Figura 3A) e a constante de Ca2 + SR recuperação (medida tau -a de Ca 2+ SR -ATPase [SERCA] actividade) tempo preciso pode ser realizada. Utilizando as abordagens existentes para mapeamento óptico de Ca2 + intracelular com corantes de alta afinidade, estas medidas podem ser "contaminado" com transmembranar fluxo de Ca2 + (ie., Contribuições de L-tipo canais de Ca2 + e do Na + -Ca 2 + trocador). Além disso, de alta afinidade Ca 2+ indicadores têm naturalmente mais lento kinetics do que indicadores de baixa afinidade 5, portanto, são esperados sinais Fluo-5N para informar sobre precisos SR Ca 2+ movimentos com alta fidelidade e essencialmente nenhum atraso de tempo entre Ca 2+ mudanças reais e as alterações correspondentes em fluorescência.
A capacidade para investigar os mecanismos pelos quais detalhados SR libertação de Ca2 + e da recaptação contribuem para fenómenos arritmogénica é outra vantagem desta abordagem. Por exemplo, usando essa metodologia, informou recentemente como refractoriness de SR Ca 2+ liberação contribui para o aparecimento de Ca 2+ alternans e que durante a fibrilação ventricular, SR Ca 2+ liberação permanece quase continuamente refratária 15. Este foi o primeiro relatório da SR Ca2 + dinâmica durante atrial e destaca a vantagem chave do SR Ca2 + imagiologia no coração intacto: fenómenos espacialmente distintas e complexas, tais como a alternância espacialmente discordantes e fibrillation pode ser estudada. Infelizmente, este tipo de informação não pode ser adquirida a partir de células isoladas, onde atrial não é possível, ou de métodos que só gravar a partir de uma única localização no coração intacta 12.
Além disso, o mapeamento óptico simultânea de V m e SR livre de Ca2 + no coração intacto pode proporcionar uma nova ferramenta para avaliar Ca 2+ anormal manipulação em condições patológicas, incluindo insuficiência cardíaca. As anormalidades na SR Ca 2+ regulação, incluindo ativação e rescisão de SR Ca2 + lançamento, diastólica SR Ca 2+ vazamento, e SR Ca2 + captação - todos os principais passos no Ca 2+ ciclismo e todos potencialmente alterado na insuficiência cardíaca - pode ser estudada directamente. Além disso, esta metodologia também poderia ser uma ferramenta útil para avaliar os efeitos de intervenções terapêuticas, tais como RyR estabilização 19 e 20 SERCA modulação.
SR 2+ [ca]. Infelizmente, a variabilidade na carga de corante, não uniforme de excitação e de emissão de luz, devido à superfície curva do coração, e foto-branqueamento e fuga de tinta do SR ao longo do curso do experimento tornam extremamente difícil de calibrar os sinais de Fluo-5N exata [Ca 2+] SR no coração intacto. Estudos in vitro anteriores em soluções tampão fisiológicas e miócitos isolados permeabilizadas relataram tais calibrações e indicaram que mudanças na Fluo-5N fluorescência são proporcionais às mudanças na [Ca 2+] SR e não se espera que a fluorescência para saturar a fisiológica [Ca 2 +] níveis SR 11. Assim, os investigadores devem escolher o método de Ca 2+ mapping (corante de baixa ou de alta afinidade) com base nos seus objectivos específicos experimentais e investigações fisiológicas.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| NaCl | Fisher Scientific | S271-1 | Component of Tyrode's solution |
| CaCl2 (2H2O) | Fisher Scientific | C79-500 | Component of Tyrode's solution |
| KCl | Fisher Scientific | S217-500 | Component of Tyrode's solution |
| MgCl2 (6H2O) | Fisher Scientific | M33-500 | Component of Tyrode's solution |
| NaH2PO4 (H2O) | Fisher Scientific | S369-500 | Component of Tyrode's solution |
| NaHCO3 | Fisher Scientific | S233-3 | Component of Tyrode's solution |
| D-Glucose | Fisher Scientific | D16-1 | Component of Tyrode's solution |
| 95% O2 5% CO2 | AirGas | carbogen | For oxygenation and pH of Tyrode's solution |
| Blebbistatin | Tocris Bioscience | 1760 | Excitation-contraction uncoupler |
| RH237 | Biotium | 61018 | Voltage-sensitive dye |
| Fluo-5N AM | Invitrogen | F-26915 | Low-affinity Ca2+ indicator; Alternative: Invitrogen F-14204; Loading must be performed at room temperature |
| Pluronic F127 | Biotium | 59004 | For Ca2+ indicator loading; Warm until the solution is clear before use |
| Dimethyl sulphoxide (DMSO) | Sigma-Aldrich | D2650 | For dissolving blebbistatin and dyes |
| Filter | EMD Millipore | NY1104700 | 11 μm in-line filter |
| Pressure Transducer | WPI | BLPR2 | For measuring perfusion pressure |
| Transbridge Transducer Amplifier | WPI | SYS-TBM4M | For transducing/amplifing pressure signal; PowerLab may also be used with appropriate BioAmp |
| PowerLab 26T | ADInstruments | For continuous recording of pressure and ECG signals | |
| THT Macroscope | SciMedia | Macroscopic optical setup. Details: 0.63X objective (NA = 0.31), 2X condensing objective, resultant field of view = 3.1 cm x 3.1 cm, depth of focus = ~ 1.5 mm | |
| MiCam Ultima-L CMOS | SciMedia | Optical mapping cameras | |
| Precision LED Spot Light | Mightex | PLS-0470-030-15-S | LED light source |
References
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