Summary
En este artículo se describe el protocolo detallado y equipos necesarios para el mapeo óptico dual de potencial transmembrana (V m) y libre retículo intra-sarcoplásmico (SR) Ca 2+ en el corazón de conejo perfundidos Langendorff. Este método permite la observación directa y la cuantificación de V m y SR Ca 2+ dinámica en el corazón intacto.
Protocol
Todos los procedimientos con animales fueron aprobados por el Comité de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de California, Davis, y se adhirieron a la Guía para el Cuidado y Uso de Animales de Laboratorio publicado por los Institutos Nacionales de Salud.
1. Preparación
- Prepare dos concentrados (25X) los stocks de solución de Tyrode modificada por adelantado y se almacena a 4 ° C: (1) de la I (en mM: NaCl 3205, CaCl2 32,5, KCl 117.5, NaH 2 PO 4 29.75, MgCl2 26.25) y (2) de la II (en mM: NaHCO3 500).
- Recién preparar la solución de 2 L Tyrode de la siguiente composición (en mM): NaCl 128,2, CaCl 2 1,3, KCl 4,7, MgCl 2 1,05, NaH 2 PO 4 1,19, NaHCO3 20 y glucosa 11,1 mediante la combinación de 1840 ml de agua desionizada (DI) agua, 80 ml Stock I, 80 ml de Stock II, y 4 g de glucosa. No mezclar directamente de la I y II de la; añadir elm a 1840 ml DI para evitar la precipitación.
- Preparar la solución madre del desacoplador blebbistatin excitación-contracción en 10 mg / ml en anhidro di-metilsulfóxido (DMSO) con antelación y almacenar la solución madre a 4 ° C.
- Preparar soluciones madre de colorantes fluorescentes: (1) RH237 sensibles al voltaje colorante (1 mg / ml en DMSO) y (2) indicador de calcio de baja afinidad Fluo-5N AM (2 mg / ml en DMSO) de acuerdo con las recomendaciones del fabricante. Utilice los preparativos de inmediato para evitar la descomposición, con la consiguiente pérdida de capacidad de carga.
- Cebe la recirculación sistema de perfusión Langendorff con oxigenada (95% O 2, 2 5% de CO) solución de Tyrode. Ajustar el flujo de O 2 / CO 2 para mantener el pH de la solución de Tyrode a 7,4 ± 0,05. Utilice un filtro de red en línea de nylon tejido (tamaño de poro: 11 micras) para filtrar continuamente el líquido de perfusión.
- Cebe el sistema de perfusión a temperatura ambiente, como la posterior loading de Fluo-5N AM se lleva a cabo a temperatura ambiente. Para Fluo-5N AM carga, utilice un pequeño volumen de líquido de perfusión de recirculación (~ 150 ml). Después de colorante de carga, utilizar un volumen mayor de líquido de perfusión (1 - 2 L, véase la Figura 1C).
- Encienda el sistema de adquisición de datos y prepararse para la monitorización continua de la presión de ECG y la perfusión. Prepara sistema de presión-vigilancia: Conecte un transductor de presión a la línea de perfusión y monitorear la presión de perfusión con un amplificador transbridge. Ajuste la presión de perfusión basal a 0 mmHg cuando el corazón no está conectado al sistema de perfusión.
- Alinear las cámaras de mapeo óptico para asegurar la alineación espacial entre el V my SR Ca 2 + señales.
- En primer lugar, se centran las cámaras mediante la colocación de un gobernante o un objeto con el texto en el plato de la perfusión. A su vez las cámaras de mapeo en un modo de visualización en directo y ajustar el enfoque hasta que el texto es nítido y claro. Adquirir una sola imagen Marco de cada cámara.
- Superposiciónestas imágenes y ajustar la transparencia de la imagen de arriba, así que ambas imágenes son visibles. El texto en las imágenes debe superponerse con exactitud. Si no perfectamente alineados, ajustar el ángulo del espejo dicroico o la posición de cada cámara hasta que se alinean las dos imágenes.
2. La recolección, perfusión y tinte de carga del corazón de conejo
- Asegure el conejo en un retenedor de conejo aprobado. Profundamente anestesiar a través de una inyección intravenosa (vena marginal de la oreja) de pentobarbital sódico (50 mg / kg) y heparina (1000 IU).
- Cuando los conejos pantallas carecen de reflejos nociceptivos, hacer una incisión en la piel en la línea media para exponer el esternón y las costillas. Corte a través del esternón con-contundentes punta tijeras quirúrgicas desde el xifoides al manubrio. Tenga cuidado de no dañar el corazón al abrir el esternón. Difundir las costillas para exponer el corazón.
- Extirpar rápidamente todo el bloque corazón-pulmón cortando rápidamente todos los vasos y tejido conectivo. Immediatamente colocar el bloque corazón-pulmón en solución enfriada con hielo de Tyrode.
- Localice la aorta para la perfusión retrógrada. Cortar la aorta ascendente proximal a las tres ramas del cayado aórtico. Canular la aorta a una cánula de 8 G conectado al sistema de perfusión. Use un pedazo de sutura USP 0 seda para asegurar la aorta en la cánula.
- Diseccionar cuidadosamente la tráquea, los pulmones y la grasa epicárdica del corazón. Con un fuerte pinzas y tijeras de disección, localizar la válvula mitral y cuidadosamente dañar o quitar un folleto para evitar la congestión de la solución en el ventrículo izquierdo.
- Sumergir el corazón en la cámara de perfusión con camisa de vidrio horizontalmente con la superficie anterior del corazón hacia arriba para formación de imágenes. Fije la cánula a una pieza de Sylgard con los pernos en forma de U en la parte inferior del plato de silicio para evitar el movimiento del corazón durante el mapeo (Figura 1D). Si lo desea, inserte un alfiler pequeño insecto en el ápice del corazón por stabilización.
- Posición electrocardiograma (ECG) electrodos en el baño en el lado derecho e izquierdo del corazón. Sumergir totalmente los electrodos en el baño y asegurarse de que no están en contacto con la superficie del corazón para proporcionar un ECG volumen realizado análoga a una configuración de derivación I. Verifique un plomo normal, me ECG morfología. Ajuste el flujo (25 - 35 ml / min) para asegurar que la presión aórtica se mantiene a 60 - 70 mmHg.
- Apague las luces de la sala y añadir 0,3 a 0,6 ml de solución madre blebbistatin (paso 1.2) a la perfusión (concentración final 10 a 20 M).
- Apague las luces de las habitaciones para evitar fotoinactivación de blebbistatin. Si es necesario, un pequeño proyector o faro se pueden usar para proporcionar iluminación de la tarea.
Nota: blebbistatin es un inhibidor de la ATPasa de la miosina y un desacoplador excitación-contracción. Debido Fluo-5N carga requiere condiciones prolongados (60 min) RT (hipotermia) (consulte los pasos 2,8 - 2,10), la producción de energía cardiaca podría estar comprometida. Therefore, la adición de blebbistatin en el perfundido antes de colorante de carga puede reducir la demanda de energía 16 y eliminar los artefactos de movimiento durante las grabaciones ópticas posteriores 17.
- Apague las luces de las habitaciones para evitar fotoinactivación de blebbistatin. Si es necesario, un pequeño proyector o faro se pueden usar para proporcionar iluminación de la tarea.
- Cuando la contracción del corazón ha cesado (10 - 15 min, verificado en el registro de la presión aórtica), cambiar al sistema de perfusión de recirculación de pequeño volumen (vea el paso 1.4.1).
- Preparar y cargar solución de carga Fluo-5N AM: Añadir 0,25 ml de Fluo-5N AM solución madre (paso 1.3) a 0,25 ml cálida 20% F127 Pluronic. Añadir 0,5 ml de solución caliente de Tyrode a la mezcla, mezclar bien y agregar al sistema de perfusión de recirculación de pequeño volumen.
- Monitorear continuamente la presión de perfusión y ECG y ajustar el flujo si es necesario. Colorante de carga dura aproximadamente 1 hora a temperatura ambiente. 45 min después de la carga ha comenzado, encienda el baño de agua circulante para comenzar a calentar el sistema de perfusión y la perfusión a 37 ° C.
- Después de 60 minutos de Fluo-5N AM carga, switch la perfusión para el sistema de perfusión recirculante volumen más grande (véase el paso 1.4).
- Diluir 50 l de solución de colorante sensible al voltaje de la RH237 (etapa 1.3) en 1 ml de solución caliente de Tyrode y se añade lentamente (más de ~ 5 min) en un puerto de inyección proximal a la cánula.
3. Mapeo óptico
- Durante los momentos finales de colorante de carga, coloque el corazón y el enfoque de las cámaras de mapeo óptico para asegurar el campo apropiado de vista para el experimento.
- Si lo desea, coloque un electrodo de estimulación bipolar en la superficie epicárdica del corazón para la estimulación.
- Coloque un plástico o de vidrio cubierta de resbalón en la superficie de la cámara de perfusión para reducir los artefactos de movimiento en la superficie del líquido que puede estar presente debido a la recirculación del líquido de perfusión.
Nota: Como alternativa a una hoja de cubierta, utilice una cubierta de plástico de cocina limpio 50 mm Petri. - Centrarse las guías de luz para iluminar uniformemente la superficie del corazón con el correoluz xcitation. Utilice azul diodo emisor de luz (LED) fuentes de luz y filtrar aún más la luz con un 475 a 495 nm filtro de banda (Figura 1).
- Recoger fluorescencia emitida con un macroscopio y dos de metal-óxido-semiconductor (CMOS) cámaras de mapeo óptico complementarias. Dividir la luz emitida con un espejo dicroico a 545 nm.
- -Pass largo filtrar la fracción de longitud de onda más larga, que contiene la señal m V, a 700 nm. De paso de banda filtrar la fracción de longitud de onda más corta, que contiene la señal SR Ca 2 +, 502 a 534 nm (Figura 1A). Ajuste la frecuencia de adquisición de datos ópticos de 0,5 a 1 kHz.
- Para cada grabación óptica, primero iniciar el protocolo de estimulación deseada, encender la luz de excitación, y recoger 1-4 seg de datos. Si lo desea, sincronizar el protocolos de estimulación y adquisición de datos.
Nota: No es posible volver a cargar el Fluo-5N AM, por lo tanto la relación señal a ruido (SNR) se decreaSE lo largo del experimento debido a teñir fuga de la SR. Limite protocolo experimental a 1 - 2 horas para asegurar altos valores de SNR. - Tras el experimento, lavar el sistema de perfusión en la secuencia de agua DI, 70% de alcohol reactivo, y nuevamente con agua DI.
- Filtra cada conjunto de datos con un filtro gaussiano espacial (radio de 3 píxeles) utilizando paquetes de software disponibles comercialmente de acuerdo con el protocolo del fabricante.
- Si es necesario, espacialmente alinear el V my SR conjuntos de datos Ca 2+. Como en el paso 1.6, superponer imágenes de cada cámara y verificar que las estructuras anatómicas del corazón (es decir., Vasculatura coronaria, bordes de las aurículas o ventrículos) u otros artículos en el campo de visión (es decir, la cánula, el electrodo de estimulación) exactamente solapamiento. Si no, la alineación espacial de los conjuntos de datos es necesario.
- Cambie la imagen transparente superior se logra en las direcciones x e y-dirección hasta que la superposición exacta, tomando nota del número de píxelesla imagen debe ser desplazado en cada dirección. Todo el conjunto de datos correspondiente a la parte superior de la imagen (ya sea V m o SR Ca 2+) debe entonces ser desplazado por el número determinado de píxeles en cada dirección para asegurar la alineación precisa entre el V y m SR Ca 2+ conjuntos de datos.
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Representative Results
La figura 1A muestra un diagrama esquemático de la configuración óptica para la doble V m y SR Ca 2+ mapeo. Con esta configuración, no hay separación espectral completa de la V my SR Ca 2 + señales (Figura 1B). Un diagrama del sistema de perfusión de doble bucle utilizado para Fluo-5N colorante de carga se ilustra en la Figura 1C. Figura 1D muestra la orientación horizontal del corazón en el plato de perfusión. Representante V m y SR Ca 2+ trazas óptico durante la estimulación continua desde diferentes ubicaciones en la superficie epicárdica del corazón se muestran en la Figura 2A. El campo óptico de vista con esta configuración es de 31 mm x 31 mm y la orientación del corazón dentro del campo de visión se muestra en la Figura 2B. Mapas de activación también se muestran en la Figura 2B y se construyen mediante la selección del tiempo de activación de cada píxel y pHacer lote este valor en un mapa de isócrono (tenga en cuenta la demora típica de ~ 8 - 10 ms entre la V my SR mapas de activación Ca 2+). Es importante destacar que, potencial de acción clave (AP) propiedades tales como AP tiempo de subida (de 10% a 90% de la amplitud [Taumento]), y la duración AP a 80% de repolarización (APD 80), no son estadísticamente diferentes entre los corazones cargados con RH237 y Fluo-5N en comparación con aquellos cargados con RH237 y Rhod-2 (Taumento: 14.9 ms ± 1,9 ms vs. 14,2 ms ± 1,2 ms y APD 80: 155,3 ms ± 5,8 ms vs. 156,9 ms ± 5,7 ms para Fluo-5N y Rhod-2, respectivamente; p> 0,05 para ambos;. n = 8 / grupo), lo que indica un efecto mínimo de Fluo-5N o colorante de carga en el AP Figura 2C demuestra la capacidad de observar y cuantificar los cambios relativos en la diastólica SR Ca 2+ carga y SR Ca 2 + liberación sistólica amplitudes en diferentes longitudes de ciclo de estimulación. Sólo los cambios relativos en estos parámetros pueden ser Quantified, la calibración absoluta como ([Ca2 +] SR) de la señal en el corazón intacto no es posible.
Este enfoque es particularmente útil para caracterizar y cuantificar patológica SR Ca 2+ manipulación, como se muestra en la Figura 3. Después de la aplicación del agonista del receptor adrenérgico isoproterenol-β (100 nM), claro diastólica Ca 2+ fuga de la SR se observa ( flechas rojas, Figura 3a). Si la fuga es lo suficientemente grande, Ca 2 + mediada por actividad desencadenada puede ocurrir (Figura 3B).
Figura 1. Configuración del sistema para Dual Cartografía de V my SR Ca2 +. (A) Esquema de la configuración óptica, incluyendo filtros necesarios y espejo dicroico de separación espectral adecuada. (B) Obtención de imágenes de corazones cargados, ya sea con Fluo-5N solamente (i) o RH237 solamente (ii) indica separación espectral completa de la V y Ca 2+ m señales fluorescentes SR. Ejemplo: excitación, Em:. De emisiones (C) Diagrama del sistema de perfusión de doble bucle para la perfusión normal y Fluo-5N colorante de carga (D) Imagen de un corazón y ECG canulados electrodos en el plato de la perfusión.. Los paneles A y B reproducen con permiso de Wang et al. 15. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 2. V my SR Ca 2+ huellas óptico durante la estimulación continua y no continua. (A) Representante V my SR Ca2 + Optical traza durante la estimulación continua a una longitud de ciclo de 300 ms. Las señales se muestran a partir de las ubicaciones individuales indicados en (B). Tenga en cuenta el retraso de ~ 8 - 10 ms entre la V my SR Ca2 + tiempos de activación como es típico para el acoplamiento normal de excitación-contracción. (B) Imagen de un corazón dentro del campo de la cartografía de vista (punta de flecha blanca indica el ritmo electrodos) y mapas de activación de V my SR Ca2 +. (C) SR Ca 2+ huellas ópticas que demuestran cambios en la diastólica SR Ca2 + carga y la amplitud de la liberación SR Ca2 + tras los cambios bruscos en la frecuencia de estimulación. Todos los rastros comienzan con estimulación a CL = 300 ms. Frecuencia de estimulación a continuación se cambia bruscamente a la CL = 500 ms (i), CL = 400 ms (ii), o CL = 250 ms (iii). Cuando se inician CLs más largos (I - II), un SR de liberación más grande de Ca 2+ que ocurra primero (debido al intervalo más largo diastólica y recuperación de RyRs) y la diastólica SR Ca2 + carga disminuye ligeramente a un nuevo estado de equilibrio (línea discontinua horizontal). Cuando se inicia una CL más corto, sin embargo, un SR Ca 2+ amplitud menor liberación se produce (debido a la recuperación intervalo más corto diastólica e incompleta de RyRs) y diastólica SR Ca 2+ aumenta la carga a una nueva (línea horizontal de trazos) en estado estacionario . Alternando SR Ca2 + amplitud versión también se produce en CL = 250 ms. S: pequeña amplitud lanzamiento, L: gran amplitud de liberación. (CL: la duración del ciclo) Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 3. diastólica SR 2+ Ca fugas y actividad desencadenada posterior. (A) en el ECG, V m, y la SR Ca2 + rastros durante la línea base (izquierda) y despuéstratamiento con 100 nM isoproterenol (Iso, derecha). Con Iso, fuga significativa diastólica SR Ca2 + se observa (flechas rojas). Amplitudes de señal SR Ca 2+ se han normalizado antes y después de Iso. El nodo sinoauricular fue la ablación para permitir la estimulación CL = 300 ms en ambos casos. (B) Si SR Ca2 + fuga es lo suficientemente grande, puede desencadenar la actividad focal (complejos ventriculares prematuros, PVC). En este ejemplo, PVC están interrumpiendo el ritmo sinusal normal. Por favor haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
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Discussion
Las claves del éxito Fluo-5N colorante de carga son la configuración de perfusión de recirculación de pequeño volumen, lo que permite una alta concentración Fluo-5N sin la necesidad de grandes cantidades de colorante, la longitud de tiempo de carga (1 hr), y la realización de la carga a TA. Si la carga se realiza a temperaturas fisiológicas, la actividad enzimática celular rápidamente escinde la etiqueta -AM cuando el colorante atraviesa la membrana celular, atrapando las moléculas de colorante en el citosol y no lo que les permite cruzar la membrana SR. A RT, sin embargo, la actividad enzimática se hace más lenta y una cantidad suficiente de colorante puede cruzar tanto la membrana celular y la membrana SR antes de la etiqueta -AM se escinde, atrapando el colorante en la SR.
Incluso con las condiciones de carga óptimas, sin embargo, las amplitudes de señal y cambios de fluorescencia fraccionarios (Df / F) con este enfoque serán menores que con la cartografía tradicional óptica de V my Ca2 + intracelular con tintes de alta afinidad. Por ejemplo, con la configuración óptica usada aquí, que consiste en la luz LED de excitación, objetivos macroscópicas, filtros grandes y el espejo dicroico (5 cm x 5 cm), y cámaras CMOS, cambios de fluorescencia fraccionarios (Df / F) son del orden de 1 - 2% para la señal de Fluo-5N y 2 - 3% para la señal RH237 15. La fluorescencia fraccionada será, por supuesto, depende de la configuración específica óptica, fuente de luz, y las cámaras de una configuración particular, pero incluso en condiciones óptimas la señal de Fluo-5N es significativamente menor que lo que se observa típicamente para las grabaciones de Ca2 + intracelular con tintes de alta afinidad. Por ejemplo, en la misma instalación, Df / F es del orden de 20 - 30% para Rhod-2 cuando está verde (545 nm) de luz de excitación se utiliza 18. La luz de excitación verde es también más cerca del pico de excitación de RH237, así el Delta F / F de RH237 también es mayor en este caso, alrededor del 4 - 5%. Por lo tanto, para los laboratorios ya la realización de la cartografía óptica dual de V m Ca2 + intracelular, se debe tener cuidado para optimizar todos los componentes de la configuración óptica para garantizar la máxima Df / F para la señal de Fluo-5N.
Con este enfoque, los investigadores pueden investigar precisamente SR Ca 2+ dinámica y su impacto en V m en formas que no son posibles con los enfoques existentes. Por ejemplo, las mediciones cuantitativas de la SR Ca2 + de fugas (como en la figura 3A) y la constante de tiempo preciso de SR 2+ recuperación Ca (medida -a tau de SR 2+ -ATPasa [SERCA] actividad Ca) se pueden realizar. El uso de los enfoques existentes para el mapeo óptico del Ca2 + intracelular con tintes de alta afinidad, estas medidas pueden ser "contaminados" con transmembrana de Ca2 + flujo (es decir., Contribuciones de tipo L de Ca 2 + canales y el Na + -ca 2 + intercambiador). Por otra parte, de alta afinidad Ca 2+ indicadores tienen k inherentemente más lentapor lo tanto se espera que los indicadores inetics baja afinidad 5, señales Fluo-5N para informar sobre precisos SR Ca 2+ movimientos con alta fidelidad y esencialmente ningún retardo de tiempo entre los cambios reales Ca 2+ y los cambios correspondientes en la fluorescencia.
La capacidad para investigar los mecanismos detallados por el cual SR Ca 2 + liberación y recaptación contribuyen a fenómenos arritmogénica es otra ventaja de este enfoque. Por ejemplo, el uso de esta metodología, recientemente informó de cómo la refractariedad de la SR Ca 2 + liberación contribuye a la aparición de Ca 2+ alternancia y que durante la fibrilación ventricular, SR Ca 2 + liberación permanece casi continuamente refractaria 15. Este fue el primer informe de la SR Ca2 + dinámica durante la fibrilación y pone de relieve la ventaja clave de las imágenes SR Ca2 + en el corazón intacto: fenómenos espacialmente distintas y complejas como la alternancia espacialmente discordantes y fibrillation se pueden estudiar. Por desgracia, este tipo de información no se puede extraer de las células aisladas, donde la fibrilación no es posible, o de métodos que sólo registran desde una única ubicación en el corazón intacto 12.
Por otra parte, la cartografía óptica simultánea de V m y libre SR Ca2 + en el corazón intacto puede proporcionar una nueva herramienta para la evaluación de Ca 2+ anormal manipulación en condiciones patológicas, incluyendo insuficiencia cardíaca. Las anomalías en la SR Ca2 + regulación, incluyendo la activación y la terminación de la SR Ca 2 + en libertad, diastólica SR Ca2 + fuga, y SR Ca 2 + captación - todos los pasos principales en Ca 2+ ciclismo y todos potencialmente alterada en la insuficiencia cardíaca - se puede estudiar directamente. Además, esta metodología también podría ser una herramienta útil para evaluar los efectos de las intervenciones terapéuticas, como RyR estabilización 19 y SERCA modulación 20.
[Ca 2 +] concentraciones SR. Por desgracia, la variabilidad en la carga de tinte, la excitación no uniforme y la luz de emisiones debido a la superficie curva del corazón, y foto-blanqueo y de fugas de tinte de la SR durante todo el transcurso del experimento hacen que sea extremadamente difícil de calibrar las señales Fluo-5N a exacta [Ca 2 +] SR en el corazón intacto. Estudios previos in vitro en soluciones tampón fisiológicas y miocitos aislados permeabilizada han informado dichas calibraciones y han indicado que los cambios en Fluo-5N fluorescencia son proporcionales a los cambios en la [Ca 2 +] SR y no se espera que la fluorescencia para saturar al fisiológica [Ca 2 +] niveles SR 11. Por lo tanto, los investigadores deben elegir el método de Ca 2+ mapping (tinte de afinidad alta o baja) en base a sus objetivos experimentales específicas e investigaciones fisiológicas.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| NaCl | Fisher Scientific | S271-1 | Component of Tyrode's solution |
| CaCl2 (2H2O) | Fisher Scientific | C79-500 | Component of Tyrode's solution |
| KCl | Fisher Scientific | S217-500 | Component of Tyrode's solution |
| MgCl2 (6H2O) | Fisher Scientific | M33-500 | Component of Tyrode's solution |
| NaH2PO4 (H2O) | Fisher Scientific | S369-500 | Component of Tyrode's solution |
| NaHCO3 | Fisher Scientific | S233-3 | Component of Tyrode's solution |
| D-Glucose | Fisher Scientific | D16-1 | Component of Tyrode's solution |
| 95% O2 5% CO2 | AirGas | carbogen | For oxygenation and pH of Tyrode's solution |
| Blebbistatin | Tocris Bioscience | 1760 | Excitation-contraction uncoupler |
| RH237 | Biotium | 61018 | Voltage-sensitive dye |
| Fluo-5N AM | Invitrogen | F-26915 | Low-affinity Ca2+ indicator; Alternative: Invitrogen F-14204; Loading must be performed at room temperature |
| Pluronic F127 | Biotium | 59004 | For Ca2+ indicator loading; Warm until the solution is clear before use |
| Dimethyl sulphoxide (DMSO) | Sigma-Aldrich | D2650 | For dissolving blebbistatin and dyes |
| Filter | EMD Millipore | NY1104700 | 11 μm in-line filter |
| Pressure Transducer | WPI | BLPR2 | For measuring perfusion pressure |
| Transbridge Transducer Amplifier | WPI | SYS-TBM4M | For transducing/amplifing pressure signal; PowerLab may also be used with appropriate BioAmp |
| PowerLab 26T | ADInstruments | For continuous recording of pressure and ECG signals | |
| THT Macroscope | SciMedia | Macroscopic optical setup. Details: 0.63X objective (NA = 0.31), 2X condensing objective, resultant field of view = 3.1 cm x 3.1 cm, depth of focus = ~ 1.5 mm | |
| MiCam Ultima-L CMOS | SciMedia | Optical mapping cameras | |
| Precision LED Spot Light | Mightex | PLS-0470-030-15-S | LED light source |
References
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