Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

جيل من سرطان البروستاتا المريض المشتقة نماذج طعم أجنبي من تعميم الخلايا السرطانية

Published: October 20, 2015 doi: 10.3791/53182

ERRATUM NOTICE

Introduction

المريض xenografts المشتقة هي نماذج تجريبية شعبية متزايدة المستخدمة لأبحاث السرطان. أنها يمكن أن تستخدم لتوصيف المؤشرات الحيوية والمسارات البيولوجية، وتقييم ما قبل السريرية من فعالية الدواء، وخلق الآلهة لعلاجات السرطان شخصية 1،2. سابقا، وقد وضعت مجموعات بحثية أخرى نماذج PDX إما عن طريق زرع أو حقن واحدة تعليق خلية الورم أو إإكسبلنتس الورم كله في المناعة الفئران 1. هذه PDX نماذج تتطلب جمع الجراحي للورم صلب جديد، استسقاء الخبيثة أو الانصباب الجنبي من مريض يخضع لعملية جراحية والتي هي على حد سواء مكلفة ويعرض المريض لخطر متزايد من الإصابة بالأمراض علاجي المنشأ.

ومن التطورات الهامة التي حدثت مؤخرا في أبحاث السرطان والكشف والعزلة وتوصيف تعميم الخلايا السرطانية. هذه الخلايا السرطانية الهروب من كتلة الورم الابتدائية وتدخل الدورة الدمويةحيث أنها تلعب دورا حاسما في الانبثاث والانتكاس، والسبب الأكثر شيوعا من سرطان الوفيات 3 ذات الصلة. وقد وفرت تقييم وتوصيف CTCs من عدة أنواع الأورام الصلبة المعلومات السريرية لتشخيص، تشخيص ومراقبة المرض المتبقي 3. مجموعة متنوعة من الأساليب المستخدمة حاليا الاعتماد على أي من الخصائص الفيزيائية والتعبير عن المؤشرات الحيوية، أو الخصائص الوظيفية CTCs يمكن استخدامها لعزل بكفاءة CTCs 4. وتشمل macroscale أساليب العزل CTC القائمة الكثافة الطرد المركزي التدرج، والترشيح البدني مع المسام مرشح والانفصال ضد جزيئات السطح. وتستند الأكثر استخداما على نطاق واسع منهجيات العزلة CTC على القبض على الأضداد من CTCs. كلا اختيار الإيجابية والسلبية للعلامات سطح الخلية يمكن أن تستخدم لعزل CTCs من الدم المحيطي. اختيار إيجابية للCTCs في الدورة الدموية الطرفية يستخدم عادة علامات الظهارية (على سبيل المثال، EpCAM) التي لإعادة أعرب عن CTCs لكن الخلايا المكونة للدم لا. وعيب هذه الطريقة هو أن CTCs مع إمكانية المنتشر كثيرا ما خضع الظهارية-إلى-الوسيطة الانتقالية (EMT)، التي downregulates علامات سطح الظهارية 3. من أجل عزل CTCs مع إمكانية النقيلي، منهجية اختيار السلبية التي توظف علامة السطحية المكونة للدم، CD45، إلى أن تستنفد السكان الخلية العادية من الكريات البيض يمكن استخدام 5.

سرطان البروستات هو السرطان الاكثر تشخيصا وسببا رئيسيا من أسباب الوفيات المرتبطة بالسرطان بين الرجال 6. آليات تطور الورم والعدوانية ليست مفهومة تماما، وبالتالي توليد وتوصيف النماذج التجريبية التي ألخص عدم التجانس الجزيئي للسرطان البروستات ذات أهمية كبيرة. وكانت نماذج PDX من سرطان البروستاتا ولدت من قبل engraftment من خلايا سرطان البروستاتا البشرية إلى immunocomالفئران وعد 7،8. ومع ذلك الجيل من هذه النماذج أعاقتها معدل engraftment منخفض للسرطان البروستاتا في الفئران المناعة، وهو ما يرجع في المقام الأول إلى طبيعة كسلان من المرض. في الآونة الأخيرة، وقد استخدمت CTCs لتوليد سرطان الثدي 9 وسرطان الرئة وسرطان البروستاتا 10 11 نماذج PDX. أدخلت هذه إثبات صحة مفهوم الدراسات إمكانية توليد PDX نماذج مستقلة عن الحاجة لجمع العينات الجراحية. في هذه المقالة وصفنا بالتفصيل طريقة لتوليد هذا النموذج التجريبي الرواية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

وقد أجرى هذا البروتوكول في مؤسستنا مع موافقة من مجلس أخلاقيات البحث المؤسسي ومتوافق مع جميع المبادئ التوجيهية المؤسسية والوطنية، والدولية من أجل رفاهية الإنسان.

1. جمع الدم المحيطي من المرضى الذين يعانون من سرطان البروستاتا المتقدم

ملاحظة: يتم اختيار المرضى الذين يعانون من سرطان البروستاتا النقيلي. الحصول على موافقة المريض الخطية وتسجيل الخصائص السريرية للمرضى، بما في ذلك السن في العزل والعلاج الكيميائي السابق والعلاجات الهرمونية. والمرضى الذين يعانون من المرض المنتشر يحتمل أن يكون أعلى تركيز من CTCs في الدم المحيطي.

  1. جمع عينات الدم بعد الموافقة المسبقة وتحت وافق على مجلس المراجعة المؤسسية المناسبة البروتوكول. ارتداء القفازات المطاطية ومعطف مختبر في جميع أنحاء الداخلي.
  2. ربط 25 G فراشة إبرة والأنابيب لحامل الإبرة. استخدام مسحة الكحول لتنظيف المنطقة منالوريد أمام المرفق بين العضله ذات الرأسين والساعد، ثم تطبيق وقف النزف لذراع المريض العلوي.
  3. إدراج فراشة إبرة في الوريد أمام المرفق، ودفع أنبوب جمع الدم إلى حامل إبرة لبدء تجميع. جمع حوالي 10 مل من الدم في أنابيب جمع التي تحتوي على ثنائي أمين الإيثيلين رباعي حمض الخل (EDTA) لمنع تخثر الدم.
  4. إزالة فراشة إبرة من مريض والضغط مع معقمة الشاش على موقع الوريد ثقب لمدة 1 دقيقة. موقع غطاء مع ضمادة معقمة.

2. عزل الخلايا وحيدة النواة

ملاحظة: إن الدم التي تم جمعها من الخطوة 1 تحتوي على خلايا الدم وحيدات النوى المحيطية (PBMCs) (على سبيل المثال، الخلايا اللمفية وحيدات) بالإضافة إلى CTCs وحيدات النوى.

  1. ماصة الدم كله إلى 50 مل البوليسترين أنبوب مخروطي مع 5 مل ماصة المصلية وإضافة هانكس محلول الملح المتوازن (HBSS) في نسبة 1: 1. بلطف خليط ماصة للالتجانس.
  2. إضافة 15 مل من محلول استعداد تجاريا (Ficoll-Paque) لفصل مكونات الدم عن طريق سرعة منخفضة الكثافة التدرج الطرد المركزي إلى فارغة 50 مل البوليسترين أنبوب مخروطي.
  3. ماصة بلطف الدم الكامل وHBSS الخليط، من الخطوة 2.1، في أنبوب البوليسترين من الخطوة 2.2، لتشكيل الطبقة العليا متميزة. ماصة تعيين إلى أدنى الإعداد لتقليل الاختلاط من الحلول، وهذا سيضمن الفصل كفاءة.
  4. أجهزة الطرد المركزي في 400 x ج لمدة 30 دقيقة في RT (25 ° C). تعيين التباطؤ إلى أدنى الإعداد لمنع اختلاط حلول بعد الانفصال. قد يتم تعيين تسارع إلى أي سرعة.
  5. بعد الطرد المركزي، وتحديد شريط أبيض رمادي رقيقة من طبقة PBMCs وCTCs تقع بين البلازما على رأس والانفصال حل في الجزء السفلي من الأنبوب.
  6. جمع الخلايا من الشريط الأبيض الرمادي في الخطوة 2.5 إلى 50 مل البوليسترين أنبوب نقل باستخدام ماصة بلاستيكية.
  7. إضافة HBSS إلى 50 مل البوليسترين أنبوب مخروطي مع PBMCs وCTCs وجentrifuge مرة أخرى في 400 x ج لمدة 10 دقيقة RT لغسل.
  8. صب السائل وبيليه resuspend في 50 مل من HBSS وأجهزة الطرد المركزي مرة أخرى في 400 x ج لمدة 3 دقائق على RT لغسل.
  9. تجاهل طاف، resuspend الكرية المتبقية مع 5 مل من خلايا الدم الحمراء تحلل العازلة واحتضان الحل لمدة 5 دقائق على RT.
  10. إزالة خلايا الدم الحمراء تحلل عازلة بواسطة الطرد المركزي في 400 x ج لمدة 3 دقائق على RT.
  11. تجاهل طاف و resuspend بيليه في 1 مل PBS 1X تستكمل مع المصل 10٪ بقري جنيني (FBS) لمنع قبل تلوين الأجسام المضادة.

3. خلايا وحيدة النواة تلطيخ مع CD45-FITC الأجسام المضادة لالإسفار خلية المنشط الفرز (FACS)

  1. تحديد عدد خلايا قابلة للحياة (التريبان الزرقاء سلبية) (من الخطوة 2.11) باستخدام عدادة الكريات أو خلية مكافحة الآلي. إعداد 1 × 10 6 خلية / مل تعليق (في برنامج تلفزيوني 1X مع 10٪ FBS) ووضعه على الجليد لمدة 1 ساعة.
  2. توزيع كمياتعليق الخلية من الخطوة السابقة إلى أنبوبين. أنابيب التسمية، والتحكم وCD45 تلطيخ.
  3. في أنبوب السيطرة، إضافة IgG1κ-FITC (2.5 ميكروغرام / مل) في التخفيف من 1: 250. في CD45 أنبوب تلوين، إضافة CD45 FITC (2.5 ميكروغرام / مل) الأجسام المضادة الأولية مترافق في التخفيف من 1: 250 واحتضان الايقاف الخلية على الجليد لمدة 30 دقيقة. يستخدم CD45 وضع العلامات مستضد لاستبعاد الخلايا المكونة للدم.
  4. الطرد المركزي الخلايا في 400 x ج لمدة 3 دقائق في 4 درجات مئوية، وتجاهل طاف.
  5. غسل الخلايا مرتين، من خلال تعليق كل بيليه مع معقم 1 × PBS تستكمل مع 10٪ FBS تليها الطرد المركزي في 400 x ج لمدة 3 دقائق في 4 درجات مئوية.
  6. resuspend الخلايا في محلول 1 مل من برنامج تلفزيوني 1X تحتوي على 4، 6-diamidino-2-phenylindole (دابي) بتركيز 10 ميكروغرام / مل.
  7. تصفية الحل النهائي خلال 35 ميكرون قبعات مصفاة إلى 12 مم أنابيب البوليسترين × 75 مم.

4. عزل البروستاتا CTCs من قبلFACS

ملاحظة: الاستفادة من تدفق عداد الكريات لجمع الحية CD45 CTCs السلبية.

  1. وضع ضوابط التعويض باستخدام خلايا من الأنبوب المسمى، "تحكم".
  2. إنشاء البوابات التي تستبعد الحطام ومجموعات من الخلايا باستخدام الأمام مبعثر والجانب مبعثر المعلمات المناسبة.
  3. إنشاء بوابات FITC باستخدام تعليق خلية من الأنبوب المسمى "CD45-FITC".
  4. بوابة قابلة للحياة الخلايا (دابي سلبي) باستخدام باسيفيك بلو-A القناة.
  5. جمع CD45 السكان السلبية في العقيمة 15 مل البوليسترين المخروطية أنبوب يحتوي على 2 مل من معهد روزويل بارك التذكاري (RPMI) 1640 تستكمل مع 10٪ FBS.
  6. الطرد المركزي البروستاتا تعليق خلية الورم مرتبة في 400 x ج لمدة 3 دقائق، ثم resuspend وبيليه في 200-500 ميكرولتر من RPMI تستكمل مع 10٪ FBS.

5. حقن CTCs في الفئران ورصد النمو طعم أجنبي

ملاحظة:إجراء كافة الإجراءات الحيوانية وفقا للبروتوكولات التي وافقت عليها لجنة رعاية الحيوان المؤسسية. وقد أجريت هذا البروتوكول في مؤسستنا تحت معين بروتوكول استخدام الحيوان التي وافقت عليها لجنتنا رعاية الحيوان وفقا والامتثال لجميع وكالات واللوائح والمبادئ التوجيهية والتنظيمية والمؤسسية ذات الصلة.

  1. مزيج البروستاتا تعليق خلية الورم فرزها مع المصفوفة خارج الخلية في نسبة 1: 1 ومكان على الجليد.
  2. تخدير الماوس قبل الزرع تحت الجلد في غرفة توريد 5٪ (ت / ت) استنشاقه الأيزوفلورين في 1 لتر / دقيقة من الأكسجين. ضمان التخدير المناسب عن طريق التحقق من فقدان منعكس القرنية وأخمص القدمين في الماوس.
  3. باستخدام إبرة G 25 وحقنة 1 مل، وضخ 250 ميكرولتر من الخلايا السرطانية في البروستاتا والمصفوفة خارج الخلية تعليق خلية تحت الجلد في كلا الجناحين العليا من العوز المناعي الذكور 8-10 اسبوع الماوس. ضخ 250 ميكرولتر بغض النظر عن تركيز لجنة مكافحة الإرهاب حيث بلغ حجم الحقن هو أناقيمة mportant. إدارة SQ القصوى في الماوس لا يزيد عن 1 ملم.  
  4. مراقبة الفئران عن طريق إجراء الجس الأسبوعي للمواقع الحقن الماوس لنمو الكثافة عقيدية تحت الجلد وذلك عن طريق قياس وزن الفئران مرتين في الأسبوع.
  5. الموت ببطء الفئران عن طريق غاز ثاني أكسيد الكربون الاختناق تليها خلع عنق الرحم والحصاد تحت الجلد البروستاتا البشرية xenografts السرطان عند حجم الورم أكثر من 0.5 سم وأقل من 1 سم في أكبر قطر لضمان ما يكفي من نسيج الورم عن التحليلات الجزيئية ومرور التسلسلي. الموت ببطء الفئران مع وجود علامات الضيق أو فقدان الوزن بنسبة 15٪ على الرغم من عدم الورم هو واضح.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

وهذا البروتوكول يؤدي إلى توليد نماذج PDX من معزولة CD45 البروستاتا السلبية CTCs السرطان. استنادا إلى أسلوب الاختيار السلبي المستخدمة في بروتوكول لدينا من الضروري استبعاد الخلايا الميتة باستخدام دابي وصمة عار. النسبة المئوية للخلايا السلبية CD45 الكشف عنها بواسطة التدفق الخلوي هو متغير ويعتمد على عبء الورم للمريض (الشكل 1A). مناعي تلطيخ الخلايا التي لم يتم فرزها باستخدام CD45 ودابي (لتحديد نواة الخلية) يكشف عن خلايا CD45 السلبية، كما يتبين من السهام البيضاء (الشكل 1B). في الشكل 1C، يمكن أن ينظر الكثافة عقيدية تحت الجلد على كلا الجناحين من الفأرة. تمثل كل كثافة عقيدية النمو طعم أجنبي، ويمكن أن يكون محل تقدير تمييزا لها عن الأنسجة السليمة كما يبرز من العضلات الظهرية للفأرة وهي أكثر حزما في الملمس. الفاصل الزمني بين غرس وتنمية طعم أجنبي قد تختلف اختلافا كبيرا تبعا لعبء CTC من patieعينة الإقليم الشمالي، وعدد من الخلايا المزروعة والعدوانية البيولوجية للCTCs. PDX البروستاتا ولدت من CTCs ألخص الورم في البروستاتا البشري كما يراها الهيماتوكسيلين ويوزين تلطيخ، والمناعية للعلامات البروستات محددة الخلوية، مثل مستقبلات الاندروجين (AR) والبروستات محددة مستضد غشاء (PSMA) (1D الشكل).

الشكل 1
الشكل 1. جيل من سرطان البروستاتا PDX نماذج من البروستاتا البشرية السرطان CTCs. (A) التدفق الخلوي مؤامرة توضح السكان الخلية CD45 تلطيخ محددة من الدم المحيطي للمريض مع سرطان البروستاتا. . الخلايا مع إيجابية وصمة عار دابي لقوا حتفهم واستثنت من قبل المعزولة لضمان خلايا قابلة للحياة فقط معزولة (B) CD45 المناعي تلطيخ من السكان التي لم يتم فرزها يؤكد وجود CD45 - الخلايا (السهام البيضاء) (C) في الجسم الحي وبعد الحصاد الورم (D) تحليل CTC نماذج PDX باستخدام الهيماتوكسيلين التقليدية ويوزين وعلامات البروستات محددة؛ مستقبلات الاندروجين (AR) والبروستات محددة غشاء المستضد (PSMA). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

تصف هذه المخطوطة طريقة لتوليد سرطان البروستاتا نماذج PDX من CTCs. استخدام CTCs لتوليد PDX نماذج لديها العديد من المزايا الهامة المحتملة بالمقارنة مع الطرق القائمة. أولا، جمع الوصول إليها من CTCs من الدم المحيطي يتيح توليد نماذج تجريبية من نفس المريض في مراحل المرض المختلفة. ثانيا، جمع الدم يمثل طريقة أكثر أمنا وغير مكلفة لعزل الخلايا السرطانية بالمقارنة مع المنهجيات الحالية التي تتطلب عمليات جراحية لجمع الخلايا السرطانية.

وقد وصفت وسائل متعددة لتخصيب CTC لكن الكثير منها لا يمكن الوصول إلى كل المختبرات بسبب قيود التمويل والموارد. سعينا إلى تطوير فحص في المختبر لدينا يمكن أن تستفيد في استخدام نظام مراقبة الأصول الميدانية، وهي منهجية مريحة وبأسعار معقولة ويمكن الوصول إليها عن العديد من المختبرات. وجود قيود المحتمل لهذه المنهجية هوحساسية كافية للكشف عن الخلايا النادرة التي يمكن أن تحد من استخدام هذا البروتوكول إلى المرضى الذين يعانون من عبء الورم عالية. العديد من التقنيات الإضافية التي تستخدم الخواص الفيزيائية أو البيولوجية للخلايا الظهارية يمكن استخدامها للتخفيف على هذا القيد وزيادة الكشف وعزل هذه الفئة من السكان خلية نادر 4. طريقة لتخصيب CTC الموصوفة في هذا البروتوكول يستخدم اختيار السلبية؛ يتم تجاهل CD45 + الكريات البيض وCD45 - يتم الاحتفاظ CTCs. من المهم أن إزالة يحتمل تلويث CD45 - عناصر من الايقاف الخلية عندما يكون الترتيب بواسطة التدفق الخلوي (مثل الخلايا غير قابلة للحياة). على وجه الخصوص، واستخدام خلايا الدم الحمراء تحلل العازلة وإغفال خلايا nonviable التي كتبها دابي تلطيخ اعتبارات حاسمة. في حين أن هذه التدابير قد لا يضمن أن العناصر غير CTC-لا تلوث CD45 - السكان، وتشير دراساتنا السابقة أن ص الخلية المطلوبةغير المخصب opulation بما فيه الكفاية مع هذه الأساليب 11. فمن الممكن أن نقاء السكان CTC يمكن تحسينها من خلال اختيار إيجابية، وذلك باستخدام الأجسام المضادة لعلامات سطح الخلية فريدة من نوعها لخلايا سرطان البروستاتا 3. بالإضافة إلى ذلك، CTC عدم التجانس وعدد من الخلايا الطلائية الموجودة في العينة يمكن اختبار باستخدام EpCAM أو البقع الأخرى المناسبة. ومع ذلك معالجة إضافية من العينة الدموية المحيطية قد تزيد في نهاية المطاف النقاء بينما تتناقص العائد الكلي.

في هذا البروتوكول أجرينا حقن تحت الجلد CTCs معزولة الذي يسمح لسهولة غرس ورصد الورم النامية. ومع ذلك، نماذج تحت الجلد لديها عدم كفاية إمدادات التغذية يمكن أن تكون ضارة engraftment الورم وفقدان القطعان الخلايا السرطانية. مواقع الحقن بديلة مثل البروستاتا الماوس (المتعامدة التغاير)، الأمر الذي يعزز من المكروية البروستاتا، وحقن كبسولة subrenal، مما يعزز SUCCengraftment essful ويحافظ على الورم عدم التجانس، لا يمكن أن يؤديها على أساس تفضيل محقق 1،2. على النحو الأمثل، يجب استخدام NOD / SCID / IL2λ مستقبلات فارغة (مجموعة موردي المواد النووية) نماذج الماوس لزيادة معدل طعم أجنبي engraftment 12، ومع ذلك سلالات أخرى من الفئران المناعة (NOD / SCID أو عارية، SCID / بيج) قد استخدمت أيضا بنجاح في توليد الأورام الصلبة المستمدة نماذج PDX 1. نماذج PDX المتولدة يمكن passaged متسلسل والاستقرار من خصائص الورم الأصلي رصدها باستخدام أساليب الوراثية التي أنشئت 9-11،13.

انتعاش أعداد كبيرة من سرطان البروستاتا قابلة للحياة CTCs يعتمد على مرحلة المرض. ومن الأفضل أكد الجيل الناجح لنماذج PDX عندما يتم عزل CTCs من دم المرضى الذين يعانون من عبء المنتشر عالية. لقد ولدت بنجاح نماذج PDX من عينات الدم مع مجموعة من 100 إلى 10000 CTCs. في تجربتنا، فمن الضروري للعمالة مدربة تدريبا جيداأفراد atory لأداء البروتوكول في كثير من الأحيان من أجل ضمان العزلة الناجحة لCTCs البروستاتا من عينات الدم. من المستحسن أن العاملين في المختبرات أن تدريب في البداية في هذا البروتوكول باستخدام عينات دم من أشخاص أصحاء العادي ارتفعت مع خلايا من خطوط الخلايا السرطانية. غياب أو قلة عدد CTCs في سرطان البروستاتا الأساسي قد تحد من استخدام هذه المنهجية لسرطان البروستاتا النقيلي.

طريقة لتوليد CTC اشتقاق نماذج PDX الموصوفة في هذا البروتوكول يمكن استخدامها بعد ذلك في العديد من التطبيقات البحثية بما في ذلك التوصيف الجزيئي لسرطان البروستاتا، وفحص المخدرات، ورصد استجابة العلاج، وتطوير العلامات البيولوجية، والتقدم الأخرى في علاجات السرطان شخصية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Gibco Life Technologies 11875-093
Fetal Bovine Serum (FBS) Gibco Life Technologies 10437-028
Penicillin Streptomycin Gibco Life Technologies 15140-122
Phosphate Buffered Saline (PBS) Corning Cell Gro 21-031-CM
35 µm Cell Strainer BD Falcon 352340
50 ml polystyrene conical tube Crystalgen 23-2263
Red blood cell lysing buffer Sigma R7757
DAPI Invitrogen d3571
Ficoll-Paque Plus GE Healthcare 17-1440
12 mm x 75 mm Polystyrene tubes with cell strainer cap BD Falcon 352235
BD Vacutainer Lavender Blood Collection Tubes with EDTA
BD Winged Blood Collection Set with Push Button Retract Needle 23 gauge
BD Vacutainer One Use Needle Holder
Disposable Latex Tourniquet
Latex or non-latex gloves
alcohol swabs
2 x 2 cotton gauze pads
Adhesive bandage
25 G needle
1 ml syringe

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Hidalgo, M., et al. Patient-derived xenograft models: an emerging platform for translational cancer research. Cancer discovery. 4, 998-1013 (2014).
  2. Siolas, D., Hannon, G. J. Patient-derived tumor xenografts: transforming clinical samples into mouse models. Cancer research. 73, 5315-5319 (2013).
  3. Joosse, S. A., Gorges, T. M., Pantel, K. Biology, detection, and clinical implications of circulating tumor cells. EMBO molecular medicine. 1, 1-11 (2014).
  4. Yu, M., Stott, S., Toner, M., Maheswaran, S., Haber, D. A. Circulating tumor cells: approaches to isolation and characterization. The Journal of cell biology. 192, 373-382 (2011).
  5. Liu, Z., et al. Negative enrichment by immunomagnetic nanobeads for unbiased characterization of circulating tumor cells from peripheral blood of cancer patients. Journal of translational medicine. 9, 1-9 (2011).
  6. Siegel, R., Naishadham, D., Jemal, A. Cancer statistics , 2013. CA: a cancer journal for clinicians. 63, 11-30 (2013).
  7. Domingo-Domenech, J., et al. Suppression of acquired docetaxel resistance in prostate cancer through depletion of notch- and hedgehog-dependent tumor-initiating cells. Cancer cell. 22, 373-388 (2012).
  8. Klein, K. A., et al. Progression of metastatic human prostate cancer to androgen independence in immunodeficient SCID mice. Nature Medicine. 3, 402-408 (1997).
  9. Yu, M., et al. Cancer therapy. Ex vivo culture of circulating breast tumor cells for individualized testing of drug susceptibility. Science. 345, 216-220 (2014).
  10. Hodgkinson, C. L., et al. Tumorigenicity and genetic profiling of circulating tumor cells in small-cell lung cancer. Nature medicine. 20, 897-903 (2014).
  11. Vidal, S., et al. A Targetable GATA2-IGF2 Axis Confers Aggressiveness in Lethal Prostate Cancer. Cancer cell. 27, 223-239 (2015).
  12. Quintana, E., et al. Efficient tumour formation by single human melanoma cells. Nature. 456, 593-598 (2008).
  13. DeRose, Y. S., et al. Tumor grafts derived from women with breast cancer authentically reflect tumor pathology, growth, metastasis and disease outcomes. Nature. 17, 1514-1520 (2011).

Tags

الطب، العدد 104، سرطان البروستاتا، المريض المستمدة طعم أجنبي، وتعميم الخلايا السرطانية، عدم التجانس intratumoral، نماذج ما قبل السريرية، وعينات الأنسجة البشرية

Erratum

Formal Correction: Erratum: Generation of Prostate Cancer Patient Derived Xenograft Models from Circulating Tumor Cells
Posted by JoVE Editors on 12/01/2015. Citeable Link.

A correction was made to Generation of Prostate Cancer Patient Derived Xenograft Models from Circulating Tumor Cells. There was a spelling error in one of the authors' surname. The author's name was corrected from:

Veronica Rodriquez-Bravo

to:

Veronica Rodriguez-Bravo

جيل من سرطان البروستاتا المريض المشتقة نماذج طعم أجنبي من تعميم الخلايا السرطانية
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Williams, E. S., Rodriguez-Bravo,More

Williams, E. S., Rodriguez-Bravo, V., Chippada-Venkata, U., De Ia Iglesia-Vicente, J., Gong, Y., Galsky, M., Oh, W., Cordon-Cardo, C., Domingo-Domenech, J. Generation of Prostate Cancer Patient Derived Xenograft Models from Circulating Tumor Cells. J. Vis. Exp. (104), e53182, doi:10.3791/53182 (2015).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter