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Medicine

आसमाटिक का उपयोग करते हुए चमड़े के नीचे Angiotensin द्वितीय आसव चूहे में लाती महाधमनी aneurysms पंप्स

Published: September 28, 2015 doi: 10.3791/53191
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1, 2, 1
1Saha Cardiovascular Research Center, University of Kentucky, 2Department of Pharmacology and Nutritional Sciences, University of Kentucky

Summary

आसमाटिक पंप के चमड़े के नीचे आरोपण यौगिकों के लंबे समय तक और लगातार वितरण के लिए एक सुविधाजनक तरीका प्रदान करता है। यह दृष्टिकोण चूहों में पेट और वक्ष महाधमनी aneurysms दोनों का अध्ययन करने के लिए बड़े पैमाने पर इस्तेमाल किया गया है।

Introduction

महाधमनी aneurysms मौत की ओर जाता है आमतौर पर टूटना पूर्वसूचक और कहा कि महाधमनी के स्थायी ल्यूमिनल विस्तार दिखा रहे हैं। यह रोग क्रमश उदर महाधमनी aneurysms (AAAS) और वक्ष महाधमनी aneurysms (तास), के रूप में कहा जाता है, जो पेट और वक्ष महाधमनी क्षेत्रों, दोनों में होता है। कारण आणविक तंत्र और pathophysiologic प्रक्रियाओं की एक अधूरी समझ के लिए, महाधमनी aneurysms के किसी भी प्रकार के विस्तार या टूटना रोका जा सकता है कि कोई सिद्ध चिकित्सा उपचार नहीं है। यह रोगी के नमूने हासिल करने और AAAs के तंत्र को परिभाषित करने पर ध्यान केंद्रित कर, सीधे मानव में अनुसंधान प्रयोगों प्रदर्शन करने के लिए मुश्किल है, इसलिए अक्सर पशु मॉडल से extrapolated किया गया है। आमतौर पर इस्तेमाल किया पशु मॉडल चूहों में एंजियोटेनसिन द्वितीय (AngII) के चमड़े के नीचे जान फूंकना है। ऐसे इंट्रा-महाधमनी elastase छिड़काव या laparotomy 1,2 की आवश्यकता है कि कैल्शियम क्लोराइड की पेरी महाधमनी आवेदन, इस metho के रूप में चूहों में AAAs उत्प्रेरण के लिए अन्य शल्य दृष्टिकोण की तुलनाडी शरीर गुहा में प्रवेश की आवश्यकता होती है और कम से कम शल्य विशेषज्ञता 3,4 की आवश्यकता नहीं है।

AAAs प्रेरित करने के लिए आसमाटिक पंप के माध्यम से AngII के चमड़े के नीचे जान फूंकना शुरू में कम घनत्व वाले लिपोप्रोटीन (एलडीएल) रिसेप्टर में बताया गया था - / - चूहों ApoE में बाद में एक संतृप्त वसा में समृद्ध आहार 3 खिलाया, और - / - चूहों एक सामान्य प्रयोगशाला आहार 4 खिलाया। हाल ही में कई अध्ययनों से यह भी AngII normolipidemic चूहों 5-7 में AAAs लाती है कि प्रदर्शन किया है। infusing AngII के दृष्टिकोण AAAs प्रेरित और इस मॉडल मानव AAAs में मनाया कई सुविधाओं का स्मरण दिलाता है के बाद से आणविक तंत्र के साथ ही (जैसे, 5-15) संभावित चिकित्सीय रणनीतियों के विकास का पता लगाने के लिए लागू किया गया है। उदाहरण के लिए, जैसे धूम्रपान, बुढ़ापे और पुरुष लिंग के रूप में मानव AAAs के जोखिम कारकों को भी चूहों 16,17 में AngII प्रेरित AAAs बढ़ाने। मानव में AAAs साथ hypercholesterolemia के सहयोग से स्पष्टीकरण की आवश्यकता। हालांकि, यह हो गया हैलगातार एन hypercholesterolemia चूहों 18 में AAAs AngII प्रेरित augments कि। चूहों में AngII प्रेरित AAAs की विकृतियों अत्यधिक heterogenous हैं और गहरा बृहतभक्षककोशिका घुसपैठ, कोलेजन गिरावट, थ्रोम्बोटिक गठन और संकल्प, और neovascularization 19-21 की विशेषता है। मानव में AAAs का सबसे आम अधोमूत्र पिंडीय महाधमनी स्थान के विपरीत, चूहों में AAAs suprarenal महाधमनी क्षेत्र में पाए जाते हैं AngII प्रेरित। AngII प्रेरित AAAs की एक और सर्वव्यापी सुविधा transmural घनास्त्रता के लिए अग्रणी, transmural औसत दर्जे का तोड़ रहा है। यह मानव में AAAs के रोग के विकास को विशेष रूप से की वजह से पहले चरण से एन्यूरिज़्म ऊतकों की कमी के कारण अध्ययन नहीं किया गया क्योंकि transmural इलास्टिन टूटना इंसानों में होता है, चाहे वह स्पष्ट नहीं है।

चूहों में AngII अर्क भी मुख्य रूप से सबसे आम क्षेत्र मनुष्यों में तास के लिए है जो आरोही महाधमनी के लिए प्रतिबंधित है कि वक्ष महाधमनी क्षेत्र का गहरा विस्तार की ओर जाता है 25 के कई सुविधाओं पुनरावृत्ति AngII अर्क के दौरान प्रेरित किया। हालांकि, AngII प्रेरित AAAs के विपरीत, AngII प्रेरित तास hypercholesterolemia के साथ संबद्ध नहीं हैं और लिंग भेद नहीं है।

चूहों में चमड़े के नीचे AngII अर्क के समग्र लक्ष्य रोग सुविधाओं और AAAs और तास के आणविक तंत्र का अध्ययन करने के लिए है।

Protocol

आचार कथन: माउस अध्ययन केंटकी संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति (2006-0009 IACUC प्रोटोकॉल संख्या) विश्वविद्यालय के अनुमोदन के साथ प्रदर्शन कर रहे हैं। चूहे ketamine (~ 210 मिलीग्राम / किग्रा) और xylazine की एक ज्यादा कॉकटेल (~ 30 मिलीग्राम / किग्रा) का उपयोग समाप्ति पर euthanized हैं।

AngII राशि 1. गणना

नोट: इस प्रोटोकॉल 4 पुरुष एलडीएल रिसेप्टर में 4 सप्ताह के लिए AngII (1000 एनजी / किग्रा / मिनट) के अर्क का उदाहरण का उपयोग करता है - / - चूहों एक संतृप्त वसा में समृद्ध आहार खिलाया।

  1. अर्क के लिए आवश्यक AngII की राशि की गणना से पहले चूहों का अध्ययन वजन।
  2. प्रयोग के लिए आवश्यक AngII द्रव्यमान की गणना करने के लिए टेम्पलेट (तालिका 1) का प्रयोग करें। टेम्पलेट के चरण 4 में "पंप दर" के रूप में पंप के निर्देश में संकेत "पंप मतलब दर" का प्रयोग करें। मैन्युअल 5, और कदम 6 - - टेम्पलेट में, रिकॉर्ड 1 कदम 10 स्वचालित रूप से गणना कर रहे हैं।
    1. टेम्पलेट में, मान लेते हैं किचूहों 4 सप्ताह के लिए AngII 1000 एनजी / किग्रा / मिनट के अर्क के दौरान शरीर के वजन के 1 ग्राम हासिल करेंगे।
      नोट: प्रत्येक माउस ऐसे माउस तनाव और आहार के रूप में कई चर, इस पर निर्भर करेगा कि बहुत अलग शरीर के वजन हो सकता है। हम नियमित रूप से पिछले अध्ययनों से हमारे अपने अनुभव के आधार पर "0" या "1 जी" का उपयोग करें।
    2. प्रत्येक पंप लगभग 250 μl की आवश्यकता है, क्योंकि प्रत्येक माउस के लिए AngII समाधान की 300 μl कुल मात्रा की गणना।

AngII 2. विघटन

  1. स्टोर -20 डिग्री सेल्सियस पर AngII शीशियों lyophilized। उद्घाटन से पहले आरटी AngII शीशियों संतुलित करना।
  2. एक बाँझ प्लास्टिक ट्यूब में गणना की AngII द्रव्यमान (तालिका 1 में दिखाया गया है 7.3 मिलीग्राम) वजन।
    नोट: AngII का एक जलीय समाधान कांच के लिए बाध्य करने के लिए एक मजबूत संबंध है, क्योंकि प्रति मर्क सूचकांक, विघटन के लिए ग्लास ट्यूब का उपयोग नहीं करते।
  3. (1,200 μ बाँझ खारा की गणना की मात्रा में जोड़ेंlyophilized AngII, टोपी युक्त प्लास्टिक ट्यूब में एल), और समाधान स्पष्ट है जब तक उलटा द्वारा मिश्रण अच्छी तरह से।
  4. लेबल माउस संख्या # 1, # 2, # 3, और टोपी के साथ अलग-अलग बाँझ प्लास्टिक ट्यूब पर # 4 (0.5-1.5 एमएल)। चरण 1.2 और 1 टेबल में गणना के रूप में शरीर के वजन के आधार पर प्रत्येक माउस के लिए एक लामिना हुड के तहत AngII समाधान तैयार है।
    1. उदाहरण के लिए, ट्यूब # 1, तब 296.4 μl AngII समाधान, में पिपेट 3.6 μl बाँझ खारा और नीचे धीरे से ऊपर pipetting और से अच्छी तरह मिक्स।
  5. (; बाँझ 4 मिलीलीटर) टोपी के साथ प्लास्टिक की ट्यूब पर लेबल माउस नंबर। ये 3.13 कदम के रूप में वर्णित पंप incubating के लिए इस्तेमाल किया जाएगा।

3. आसमाटिक पंप भरने

  1. पंप के मुख्य शरीर और प्रवाह मॉडरेटर चित्रा (1): दो अलग-अलग हिस्सों में पंप प्राप्त करते हैं। प्रत्येक बॉक्स में व्यक्तिगत रूप से लिपटे रहे हैं कि 10 पंप निकायों और प्रवाह मध्यस्थों है। बहुत संख्या रिकॉर्ड।
    नोट: हमेशा पहननादस्ताने पंप के बाहरी आवरण के लिए हाथ से स्थानांतरित तेलों पर प्रतिकूल समारोह पम्पिंग को प्रभावित करेगा। प्रत्यारोपण से संक्रमण के जोखिम से बचने के लिए, बाँझ दस्ताने, धुंध, ट्यूब, भरने सुई का प्रयोग करें, और पंप तैयार करने के लिए नावों का वजन।
  2. इन बार खोला जमा नहीं किया जा सकता है, अध्ययन के लिए आवश्यक पंप निकायों और प्रवाह मध्यस्थों के ही नंबर खोलें। 10 से अधिक पंप की जरूरत है, अलग अलग बहुत कुछ नंबरों से पंप मतलब कुछ और भरण मात्रा और पम्प दर के बाद से पंपों की बहुत संख्या, एक अध्ययन के लिए ही कर रहे हैं कि यह सुनिश्चित करें।
  3. (मुख्य शरीर और मध्यस्थ प्रवाह दोनों सहित) प्रत्येक पंप वजन, और 4 दशमलव स्थानों के लिए वजन पर ध्यान दें (जैसे, माउस # की 1.1443 जी 1)। टेम्पलेट (तालिका 1) में "पम्प भार खाली" करार दिया इस वजन, भरा अनुपात की गणना करने के लिए इस्तेमाल किया जाएगा।
  4. एक 1 सीसी बाँझ सिरिंज पंप भरने सुई देते हैं और ध्यान से उचित रूप से AngII समाधान के साथ सिरिंज भरनेगिने प्लास्टिक ट्यूब। यह सिरिंज में हवा से बचने के लिए महत्वपूर्ण है।
  5. सुई नीचे की ओर तैनात है, जबकि सिरिंज से ध्यान से सभी हवाई बुलबुले निकालें। पंप में बुलबुले की शुरूआत को रोकने के लिए इस स्थिति में सुई / सिरिंज रखें।
  6. धीरे पंप शरीर में भरने सुई डालें। पंप में सुई की नोक अग्रिम। कसकर पंप के तल पर सुई की नोक आराम नहीं करते।
  7. AngII समाधान के साथ पंप को भरने के लिए धीरे-धीरे सिरिंज सवार धक्का। पंप के अंदर एक अंधेरा छाया भरने के स्तर को दर्शाता है। भरने की मात्रा निर्देश के अनुसार, लगभग 246 μl है।
  8. पंप भरने से रोकने और तरल पदार्थ का मनका पंप के बाहर के रूप में उगता ध्यान से जैसे ही सुई को हटा दें।
  9. कोई अंतर प्रवाह मॉडरेटर के सिर और शरीर पंप के शीर्ष (चित्रा 1) के बीच देखा जाता है जब तक पंप शरीर के शीर्ष पर छेद के माध्यम से पंप में प्रवाह मॉडरेटर डालें।
  10. Moderat की प्रविष्टिया पंप शरीर में प्रवाह मॉडरेटर के उद्घाटन से कुछ तरल पदार्थ लीक हो जाती है। ध्यान से मध्यस्थों की नियुक्ति के दौरान लीक हो सकता है कि सभी अतिरिक्त तरल पदार्थ दाग।
  11. भरा पंप वजन। टेम्पलेट में "भरा पंप वजन 'के तहत वजन रिकॉर्ड।
  12. भरने अनुपात (%) = ("भरा" पम्प वजन - "खाली") की गणना 1000 / मात्रा x 100 भरने मतलब x।
    1. अनुपात भरने बराबर या 100% से अधिक होना चाहिए, तालिका 1 आदर्श रूप में संकेत के रूप अनुपात भरने की गणना। भरने अनुपात है, तो फिर से भरना पंप <95% (कि हवा के बुलबुले पंप में मौजूद हो सकता है फंसाने)।
  13. मॉडरेटर सिर ऊपर की ओर का सामना करना पड़ के साथ लेबल 4 मिलीलीटर ट्यूब (2.5 कदम) में भरा पंप रखें। पंप कवर करने के लिए बाँझ खारा की पर्याप्त मात्रा में जोड़ें। आरोपण तक खारा की ट्यूब में पंप रखें।
  14. एक 37 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेटर में रखें ट्यूबों। सेते आंशिक भड़काना अनुमति देते हैं, और उसके बाद चूहों में समाविष्ट करने के लिए हे / एन (कम से कम 12 घंटा) पंप। पंपAngII की आईएनजी चूहों सर्जरी से पूर्व AngII अर्क के दौरान उत्पन्न होने वाली किसी भी संभावित तनाव को ठीक करने के लिए अनुमति देता है जो आरोपण के बाद लगभग 24 घंटा, शुरू होता है।

पम्प आरोपण के लिए 4. तैयारी

  1. आटोक्लेव (गुरुत्वाकर्षण मोड, सूखा चक्र, 15 मिनट) धुंध, कपास swabs और कैंची, hemostat, संदंश, स्टेपल सहित सर्जिकल उपकरण, और स्टेपलर कम से कम 1 दिन सर्जरी से पहले।
  2. एक प्रक्रिया के कमरे में, isoflurane का उपयोग संज्ञाहरण के लिए vaporizer तैयार करते हैं। एक लामिना का प्रवाह हुड में बाँझ पर्दे खोलो, और isoflurane संज्ञाहरण के लिए नाक शंकु जगह है। एक लामिना हुड में betadine, 70% इथेनॉल, बाँझ पानी, मनका बनानेवाला पदार्थ, एंटीसेप्टिक handrub, swabs, धुंध, और भरे पंप रखें।
  3. डॉन एक मुखौटा और गाउन, तो साफ हाथों से एक लामिना हुड में एक बाहरी टांगना खुला। बाँझ दस्ताने पर रखो और बाँझ अंदर पैक खुला।

पम्प आरोपण की 5. सर्जिकल प्रक्रिया

  1. एक प्रेरण चाम में जगह माउस2% - 1.5 के प्रवाह की दर पर isoflurane की आमद के साथ बेर। लेटना के बाद 3 मिनट - एक अतिरिक्त 2 के लिए माउस की निगरानी करें। बाईं या दाईं कंधे पर, एक तिमाही के आकार के बारे में एक क्षेत्र दाढ़ी।
  2. Isoflurane बहिर्वाह (2A चित्रा) से जुड़े एक शंकु के साथ फ्लश अपनी नाक के साथ, एक लामिना हुड में माउस रखें। सर्जन के प्रमुख हाथ की ओर माउस के सिर पर रखें। संज्ञाहरण के तहत जबकि सूखापन को रोकने के लिए माउस की आँखों पर पशु चिकित्सक मरहम का प्रयोग करें। माउस सर्जरी से पहले दर्द की उत्तेजना को कोई जवाब नहीं है कि सुनिश्चित करें। उदाहरण के लिए, पेडल प्रतिक्रिया दर्द के लिए एक अच्छा संकेत है।
  3. झाड़ू और 70% इथेनॉल के साथ तीन पोंछे द्वारा पीछा betadine के साथ मुंडा क्षेत्र पोंछे। डॉन या बाँझ दस्ताने बदल जाते हैं।
  4. सामने पैर के कंधे ब्लेड पर कान के पीछे एक ~ 1 सेमी चीरा बनाने के लिए एक शल्य छुरी का प्रयोग करें। यह चीरा पूंछ के लिए खड़ा होना चाहिए। केवल त्वचा और नहीं अंतर्निहित ऊतकों में कटौती करने के लिए ध्यान का प्रयोग करें।
  5. पकड़ो forcएक हाथ में ईपीएस चीरा खुला, और एक hemostat (चित्रा 2 बी) का उपयोग त्वचा के नीचे एक चमड़े के नीचे सुरंग बनाने के लिए दूसरे हाथ का उपयोग करने के लिए।
  6. पूंछ की ओर hemostat टिप अग्रिम, और पंप के लिए एक जेब पैदा करते हैं। यह ध्यान से एक थैली खोलने के लिए त्वचा के नीचे hemostat के जबड़े खोलने के द्वारा पूरा किया है। चीरा से hemostat वापस ले लें।
  7. माउस (चित्रा -2) के पीछे करने के लिए तैनात मॉडरेटर सिर के साथ चीरा में पंप डालें। धीरे जेब में पूरी तरह से पंप धक्का। कोई तनाव या त्वचा के खींचने के साथ घाव को बंद करने के लिए पर्याप्त खाली स्थान नहीं होना चाहिए।
  8. एक पंप डाला गया है, मजबूती से इतनी किनारों से मिलने सीधे, चीरा के दोनों पक्षों चुटकी, और (चित्रा 2 डी) बंद करने के लिए 1 या 2 घाव क्लिप जगह है। घाव का पूरा बंद नहीं है कि यह सुनिश्चित करने के लिए चीरा साइट का निरीक्षण किया, और पंप साइट पर सीधे दबाने नहीं है।
  9. सामयिक lidocaine क्रीम लगाओनाक शंकु से एक साफ सूती swab.Remove माउस के साथ (4% भार / डब्ल्यूटी), और यह होश आता है, जब तक एक हीटिंग पैड पर जगह है। उबरने के बाद, माउस अपने पिंजरे में लौट रहा है।
  10. चूहों के बीच 10 सेकंड के लिए एक मनका अजीवाणु में शल्य चिकित्सा उपकरणों रखें। उपकरणों का उपयोग करने से पहले शांत करने के लिए अनुमति दें। चूहों के बीच एंटीसेप्टिक handrub के साथ स्वच्छ दस्ताने। पूरी वसूली हासिल की है, जब तक सभी चूहों की निगरानी करें।
  11. बारीकी से सर्जरी के बाद चूहों की निगरानी करें। एक माउस संकट, निर्जलीकरण या स्पष्ट वजन घटाने के संकेत से पता चलता है - (0.3 मिलीलीटर 0.2) subcutaneously बाँझ खारा की एक सांस में इंजेक्षन। पहले 10 दिनों के दौरान कम से कम दो बार एक दिन में चूहों का निरीक्षण, और बाद में कम से कम एक बार हर दिन है। किसी भी चूहों AngII अर्क के दौरान मरने तुरंत अगर एक शव-परीक्षा प्रदर्शन। सर्जरी के बाद 14 दिन - 7 के बीच घाव क्लिप निकालें।

6. कटाई, फिक्सिंग, साफ सफाई, और Aortas की इमेजिंग

  1. Ope में कटौती, पेट के बल माउस वक्ष और उदर गुहाओं खोलने के कटएन सही आलिंद, महाधमनी में रक्त को दूर करने के लिए दिल के बाएं वेंट्रिकल के माध्यम से नमक के साथ छिड़कना, और फिर महाधमनी 27 फसल।
  2. 48 घंटा 27 - 24 के लिए 4% paraformaldehyde या 10% निष्पक्षता से बफर formalin के कम से कम 3 मिलीग्राम से युक्त प्लास्टिक की नलियों में काटा aortas रखें।
  3. ध्यान से adventitial ऊतकों निकालें। पिन के साथ काले रंग की मोम पर पिन महाधमनी। एक ही बढ़ाई साथ महाधमनी छवियों मोल। 3 चित्र में दिखाया गया है, जांच के लिए प्रत्येक छवि में एक शासक को शामिल करें।

Aortas 7. एन चेहरे इमेजिंग

  1. महाधमनी चाप के बाहर और भीतर वक्रता के माध्यम से अनुलंबीय खुला महाधमनी में कटौती, और अनामी, बाईं मन्या धमनी, और बाईं अवजत्रुकी धमनी सहित खुला प्रमुख शाखाओं में कटौती। बाहरी adventitial काले मोम से सटे बिछाने के साथ फ्लैट पिन महाधमनी।
  2. एक ही बढ़ाई महाधमनी के intimal सतह के चेहरे चित्र एन मोल। शो के रूप में, जांच के लिए प्रत्येक छवि में एक शासक को शामिल करेंचित्रा 4 में एन।

Representative Results

4 पुरुष एलडीएल रिसेप्टर - / - प्रोटोकॉल अनुभाग में वर्णित चूहों AngII अर्क के 4 हफ्तों के बाद euthanized थे। Aortas, काटा साफ है, और महाधमनी dilations कल्पना करने के लिए imaged थे। (चित्रा 3 ए AAAS), आरोही क्षेत्र के विस्तार (तास, चित्रा 3 बी), या दोनों क्षेत्रों के विस्तार (AAAS और तास दोनों की उपस्थिति; 3 चित्र में दिखाया गया है, aortas suprarenal क्षेत्र के विस्तार सहित कई अलग विशेषताएं हैं चित्रा 3 सी), आकृति विज्ञान, जबकि एक माउस में) चित्रा 3 डी (मोटे तौर पर सामान्य था। चित्रा 3 ए में लाल रेखा के रूप में रेखांकित उदर महाधमनी का फैलाव, suprarenal क्षेत्र के पूर्व vivo अधिक से अधिक चौड़ाई को मापने के द्वारा मात्रा निर्धारित है। चित्रा 4 में दिखाया गया है महाधमनी फैलाव आरोही मापने के लिए, aortas खुले में कटौती और टिकी थे। Intimal सतह क्षेत्र वें से घिरा आरोही महाधमनी क्षेत्र (क्षेत्र में मापा गया थाचित्रा -4 ए) में ई लाल लाइनों तास quantitate करने के लिए। एक शासक दोनों आंकड़े 3 और 4 में दिखाया गया है, माप के मानकीकरण के लिए प्रत्येक छवि में शामिल किया गया था।

चित्र 1
। एक मुख्य शरीर और एक प्रवाह मॉडरेटर: भरे आसमाटिक पंप के चित्रा 1. प्रतिनिधि छवि प्रत्येक पंप दो अलग-अलग भागों में शामिल है। AngII साथ पंप शरीर भरने के बाद, प्रवाह मॉडरेटर पंप सील करने के लिए डाला जाता है।

चित्र 2
पंप आरोपण सर्जरी की चित्रा 2. प्रक्रिया (ए) माउस isoflurane और ऑक्सीजन को रिहा लगातार है कि एक नाक शंकु के साथ एक लामिना हुड में रखा गया है। (बी) के एक सीधे hemostat के एक चमड़े के नीचे सुरंग बनाने के लिए त्वचा चीरा में डाला जाता है; (सी) पंप के माध्यम से डाला जाता है त्वचा चीरा धीरे; (डी) त्वचा चीरा पंप प्रविष्टि के बाद नत्थी है।

चित्र तीन
साथ संचार चूहों से चित्रा 3. महाधमनी छवियों (पूर्व vivo) AngII AngII 1000 एनजी / किग्रा / मिनट पुरुष एलडीएल रिसेप्टर में संचार किया गया था -। / - 28 दिनों के लिए चूहों। (ए) AAAs घनास्त्रता के साथ; रेड लाइन (2.05 मिमी) suprarenal क्षेत्र में अधिक से अधिक महाधमनी चौड़ाई की माप से पता चलता है। मोटे तौर पर सामान्य उदर महाधमनी के साथ महाधमनी फैलाव (TAA) आरोही (बी); (सी) आरोही और suprarenal महाधमनी क्षेत्रों (तास और AAAS) दोनों में गहरा dilations; (डी) आरोही या suprarenal महाधमनी क्षेत्र दोनों में से कोई स्पष्ट फैलाव के साथ निहायत सामान्य महाधमनी।

4.jpg "/>
चित्रा AngII AngII 1000 एनजी / किग्रा / मिनट पुरुष एलडीएल रिसेप्टर में संचार किया गया था, के साथ संचार चूहों से वक्ष महाधमनी क्षेत्रों के 4. एन चेहरे चित्र - 28 दिनों के लिए चूहों -। /। एक लाल रेखा द्वारा उल्लिखित भूतल क्षेत्र महाधमनी चाप का हिस्सा सहित आरोही महाधमनी क्षेत्र का प्रतिनिधित्व करता है।

1 खुराक की आवश्यकता 1000 एनजी / किग्रा / मिनट
2 शरीर के वजन (सबसे बड़ा माउस) शुरू 24.8 जी
3 कुल अनुमानित शरीर के वजन 1 जी
4 पम्पिंग दर 0.25 μl / घंटा
5 परमाणुचूहों के mber 4
6 पशुओं के लिए प्रति घंटे खुराक 1518 एनजी
7 सान्द्र जरूरत 6072 एनजी / μl
8 300 उल समाधान के लिए 1.82 मिलीग्राम / 300 μl
समाधान की जरूरत
9 कुल AngII (एमजी) 7.3 मिलीग्राम
10 खारा में भंग &# 160; 1,200 μl
माउस शरीर का वजन कमजोर पड़ने का कारक मात्रा (μl) पम्प वजन (छ) भरा अनुपात
# (छ) AngII खारा खाली भरा हुआ (%)
1 24.5 1.0 296.4 3.6 1.1443 1.3877 99
2 23.0 0.9 278.2 21.8 1.1677 1.4145 100
3 24.8 1.0 300.0 0.0 1.1438 1.3904 100
4 21.8 0.9 263.7 36.3 1.1438 1.3904 100
कमजोर पड़ने कारक = सबसे बड़ा माउस के माउस / शरीर के वजन के शरीर के वजन
माउस शरीर का वजन कमजोर पड़ने का कारक मात्रा (μl) पम्प वजन (छ) भरा अनुपात
# (छ) AngII खारा खाली भरा हुआ (%)
1 24.5 1.0 296.4 3.6 1.1443 1.3877 99
2 23.0 0.9 278.2 21.8 1.1677 1.4145 100
3 24.8 1.0 300.0 0.0 1.1438 1.3904 100
4 21.8 0.9 263.7 36.3 1.1438 1.3904 100

तालिका 1: आसमाटिक पंप के माध्यम से 28 दिन के निषेचन के लिए गणना।

Discussion

AngII subcutaneously पहुंचाने आसमाटिक पंप चूहों में महाधमनी aneurysms उत्प्रेरण के लिए एक नियमित दृष्टिकोण है। कई प्रयोगशालाओं से डेटा के आधार पर, इस AAAs 3,4 और चूहों में तास 22-26 दोनों का अध्ययन करने के लिए एक विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने की विधि है कि लगातार निष्कर्षों की गई है। इसलिए, इस माउस मॉडल मानव महाधमनी aneurysms के कई सुविधाओं का स्मरण दिलाता है और इन विनाशकारी रोगों में यंत्रवत अंतर्दृष्टि प्रदान करता है कि एक मॉडल माना जाता है।

उम्र बढ़ने के मनुष्यों में AAAs लिए एक जोखिम कारक है, यह योजनाबद्ध तरीके से चूहों में AngII प्रेरित AAAs के लिए अध्ययन नहीं किया गया। 48 सप्ताह 4,5,7 - हालांकि, यह घटना और AngII प्रेरित AAAs की गंभीरता को 8 साल की उम्र में चूहों में समान हैं प्रकट होता है। TAA गठन पर स्पष्ट उम्र से संबंधित मतभेदों को दिखाने के लिए नहीं किया है, जो 24 सप्ताह 22-26, - वर्तमान में, 8 साल की उम्र में चूहों में AngII प्रेरित तास रिपोर्टिंग केवल कुछ अध्ययन कर रहे हैं।

मादा चूहों AngII 4,28 के साथ संचार नर चूहों की तुलना में AAAs की एक बहुत कम भार है। यह AngII प्रेरित AAAs की घटनाओं में क्रमश: कम से कम 30% की तुलना में 50% से अधिक है, जो normo-cholesterolemic चूहों की तुलना में अति में बहुत अधिक है कि ध्यान देने लायक है। AngII अर्क के दौरान दोनों normo- और hypercholesterolemic चूहों में - (30% लगभग 10) इसके अतिरिक्त, महाधमनी टूटना अक्सर होता है। 1000 एनजी / किलो की दर से AngII का आसव / मिनट ऐसे एलडीएल रिसेप्टर के रूप में hypercholesterolemic चूहों में - / - चूहों एक पश्चिमी आहार या apolipoprotein (ApoE) तंग आ - / - चूहों एक सामान्य या पश्चिमी आहार खिलाया, एएए पर अधिक से अधिक प्रभाव है विकास 3,4,29। यह अर्क दर hypercholesterolemic चूहों में ब्याज की एक जीन में हेर-फेर AAAs कम करने की उम्मीद है, जिसमें एक अध्ययन के लिए इष्टतम है। Hypercholesterolemic चूहों में एक हेरफेर AAAs बढ़ाने के लिए आशा की जाती है, तो यह 500 एनजी / किग्रा / मिनट या 30 कम की दर से AngII तर करने के लिए सिफारिश की है। AAAs के विपरीत, कोई डेमो नहीं हैपुरुष लिंग या hypercholesterolemia और AngII प्रेरित तास 25 के बीच nstrated एसोसिएशन। ब्याज की एक जीन की हेरफेर तास को बढ़ाने के लिए उम्मीद है हालांकि, अगर इसी तरह AAAs करने के लिए, हम AngII निषेचन के लिए 1,000 एनजी / किग्रा / मिनट की तुलना में कम अर्क दर सलाह देते हैं।

यह AngII प्रेरित महाधमनी aneurysms की है कि घटना और गंभीरता व्यक्तिगत चूहों के बीच और पढ़ाई के बीच भिन्न पता करने के लिए भी महत्वपूर्ण है। चूहों महाधमनी aneurysms विकसित नहीं है, तो एक संभावित संभावना AngII सफलतापूर्वक चूहों में कर दिया गया है नहीं हो सकता है। AngII के एक उच्च अर्क दर के सत्यापन के लिए, इस तरह के रूप में 1000 एनजी / किग्रा / मिनट, रक्तचाप की माप के एक गैर इनवेसिव पूंछ-कफ विधि 31 का उपयोग करने से पहले, और AngII आसव, के दौरान की सिफारिश की है। 1000 एनजी / किलो की दर से AngII अर्क / मिनट चूहों में सिस्टोलिक रक्तचाप बढ़ जाता है। इसके अलावा, प्लाज्मा रेनिन सांद्रता AngII r पर एक नकारात्मक प्रतिक्रिया है, क्योंकि AngII अर्क के दौरान या समाप्ति पर मापा जा सकता हैENIN स्राव। इसलिए, AngII अर्क प्लाज्मा रेनिन सांद्रता में कटौती करने के लिए ले जाता है। AngII के साथ संचार के लिए एक माउस कोई स्पष्ट महाधमनी विकृतियों, रक्तचाप का कोई वृद्धि हुई है, और प्लाज्मा रेनिन एकाग्रता की कोई कमी है, तो यह AngII प्रत्यारोपित आसमाटिक मिनी पंप के माध्यम से कुशलता से वितरित नहीं किया गया है कि संकेत होगा। हम अध्ययन से इस माउस को हटाने की सिफारिश करेंगे। यह कुछ चूहों में वृद्धि हुई सिस्टोलिक रक्त दबाव के बावजूद महाधमनी aneurysms विकसित और प्लाज्मा रेनिन सांद्रता कम नहीं है कि नोट करने के लिए भी महत्वपूर्ण है। इन चूहों अध्ययन में रहना चाहिए।

सारांश में, AngII अर्क चूहों में महाधमनी aneurysms प्रेरित करने के लिए आसमाटिक पंपों का उपयोग चमड़े के नीचे आरोपण द्वारा हासिल की है। इस विधि AAAs और तास दोनों का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल कर रहे हैं कि नामित अवधि के लिए एक निर्धारित दर पर लगातार AngII बचाता है।

Disclosures

इस लेख के प्रकाशन Alzet द्वारा प्रायोजित है।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Angiotensin II Bachem H-1705 compound used to induce aortic aneurysms
Alzet Osmotic Pumps DURECT Corporation Alzet Model 2004 feasible for 28-day infusion in mice weighed > 20 g
Saturated fat-enriched diet Harlan Teklad TD.88137 42% calories/calories to stimulate hypercholesterolemia in LDL receptor -/- mice

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चिकित्सा अंक 103 आसमाटिक पंप चमड़े के नीचे आसव एंजियोटेनसिन उदर महाधमनी aneurysms माउस
आसमाटिक का उपयोग करते हुए चमड़े के नीचे Angiotensin द्वितीय आसव चूहे में लाती महाधमनी aneurysms पंप्स
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