Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

Subkutan Angiotensin II Infusion hjelp osmotiske pumper induserer aortaaneurismer i Mus

Published: September 28, 2015 doi: 10.3791/53191
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1, 2, 1
1Saha Cardiovascular Research Center, University of Kentucky, 2Department of Pharmacology and Nutritional Sciences, University of Kentucky

Summary

Subkutan implantasjon av osmotiske pumper gir en praktisk tilnærming for langvarig og konsekvent levering av forbindelser. Denne tilnærmingen har blitt brukt mye til å studere både buk og thorax aortaaneurisme hos mus.

Introduction

Aortaaneurisme utviser permanent luminal utvidelse av aorta som bebuder brudd og vanligvis fører til døden. Denne sykdommen forekommer i både buk og thorax aorta regioner, som betegnes som abdominale aortaaneurismer (AAAS) og thorax aortaaneurisme (TAA), henholdsvis. På grunn av en ufullstendig forståelse av molekylære mekanismer og patofysiologiske prosesser, det er ingen bevist medisinsk behandling som kan hindre utvidelse eller ruptur av begge typer aortaaneurisme. Siden det er vanskelig å skaffe pasientprøver og utføre forsøk hos mennesker direkte, forskning å fokusere på å definere mekanismer aaas har blitt hyppig ekstrapolert fra dyremodeller. En vanlig brukt dyremodell er subkutan infusjon av angiotensin II (AngII) i mus. Sammenlignet med andre kirurgiske metoder for å indusere aaas hos mus, for eksempel intra-aorta elastase perfusjon eller peri-aorta anvendelse av kalsiumklorid som krever laparotomi 1,2, denne method krever ikke trådt i kroppens hulrom og krever minimalt med kirurgisk ekspertise 3,4.

Subkutan infusjon av AngII gjennom osmotiske pumper for å indusere AAAS ble først rapportert i low density-lipoprotein (LDL) reseptoren - / - mus matet en mettet fett-beriket kosten tre, og senere i apoE - / - mus matet en normal laboratorium diett fire. Mange nyere studier har også vist at AngII induserer AAAS i normolipidemic mus 5-7. Tilnærming av infusjonen AngII har blitt brukt til å indusere AAAS og utforske molekylære mekanismer samt utvikling av potensielle terapeutiske strategier (for eksempel 5-15) siden denne modellen rekapitulerer mange funksjoner observert i humane AAAS. For eksempel, risikofaktorer for menneske AAAS som røyking, aldring og mannlige kjønn også forsterke AngII-indusert AAAS i mus 16,17. Foreningen av hyperkolesterolemi med AAAS hos mennesker krever avklaring. Det har imidlertid blien konsekvent at hyperkolesterolemi forsterker AngII-indusert AAAS i mus 18. Patologier AngII-indusert AAAS i mus er svært heterogen og er preget av dyp makrofag infiltrasjon, kollagen degradering, trombotisk dannelse og oppløsning, og neovascularization 19-21. I motsetning til de mest vanlige infrarenale aorta plassering av aaas hos mennesker, AngII-induserte aaas i mus oppstår i suprarenal aorta regionen. En annen utbredt trekk ved AngII-indusert AAAS er transmural medial pause, som fører til transmural trombose. Det er uklart om transmural elastin brudd forekommer hos mennesker, siden utviklingen av patologisk aaas hos mennesker har ikke blitt studert utelukkende på grunn av mangel på aneurismiske vev fra tidligere stadier.

AngII infusjon i mus fører også til dyp utvidelse av thorax aorta-regionen, som er hovedsakelig begrenset til den stigende aorta, som er den mest vanlige område for TAA i mennesker 25. Men i motsetning til AngII-indusert AAAS, AngII-indusert TAA er ikke forbundet med hyperkolesterolemi og ikke har kjønnsforskjeller.

Det overordnede målet for subkutan AngII infusjon i mus er å studere patologiske funksjoner og molekylære mekanismer av AAAS og TAA.

Protocol

Etikk Uttalelse: Muse studier er utført med godkjenning av University of Kentucky Institutional Animal Care og bruk Committee (IACUC protokollen nummer: 2006 til 0.009). Musene avlives ved terminering ved hjelp av en overdose blanding av ketamin (~ 210 mg / kg) og xylazin (~ 30 mg / kg).

1. Beregning av AngII Beløp

MERK: Denne protokollen bruker eksempelet med infusjon av AngII (1000 ng / kg / min) for 4 uker i fire mannlige LDL reseptoren - mus matet en mettet fett-beriket kosten - /.

  1. Veie studere mus før beregning av AngII nødvendig for infusjon.
  2. Bruke malen (tabell 1) for å beregne AngII massen er nødvendig for forsøket. Bruk "Mean pumperaten" angitt i instruksjons av pumper som "Pumping rate" i trinn 4 av malen. I malen, trinnene rekord 1-5 manuelt, og trinn 6-10 blir automatisk beregnet.
    1. I malen, anta atmus vil få en g kroppsvekt i løpet av infusjonen AngII 1000 ng / kg / min i 4 uker.
      MERK: Hver mus kan ha svært forskjellig vektøkning som vil avhenge av mange variabler, for eksempel mus belastning og kosthold. Vi bruker rutinemessig "0" eller "1 g", basert på vår egen erfaring fra tidligere studier.
    2. Beregne en 300 mL totalt volum på AngII løsning for hver mus siden hver pumpe krever omtrent 250 pl.

2. Oppløsning av AngII

  1. Butikken lyofilisert AngII ampuller ved -20 ° C. Stabil AngII ampuller til RT før åpning.
  2. Vei beregnet AngII massen (7,3 mg som vist i tabell 1) inn i et sterilt plastrør.
    MERK: Per Merck Index, ikke bruk glassrør for oppløsning siden en vandig løsning av AngII har en sterk affinitet for binding til glass.
  3. Legg det beregnede volum av steril saltløsning (1,200 μl) inn i plastrøret inneholdende den lyofiliserte AngII, hetten, og bland ved å snu opp inntil oppløsningen er klar.
  4. Etiketten muse tall # 1, # 2, # 3 og # 4 på individuelle sterile plastrør med caps (0,5 - 1,5 ml). Forbered AngII løsning under en laminær hette for hver mus basert på kroppsvekt som beregnet i trinn 1.2 og tabell 1.
    1. For eksempel, pipette 3,6 mL sterilt saltvann inn tube # 1, deretter 296,4 mL AngII løsning, og bland godt ved å pipettere opp og ned forsiktig.
  5. Etiketten muse tall på plastrør med caps (4 ml, sterilt). Disse vil bli brukt til å inkubere pumper som beskrevet i trinn 3,13.

3. osmotisk pumpe Fylling

  1. Oppnå pumper i to atskilte deler: hoveddelen av pumpen og strømmen moderator (figur 1). Hver boks har 10 pumpe organer og strømnings moderatorer som er pakket individuelt. Spill lot-nummer.
    MERK: Bruk alltidhansker fordi oljer som overføres fra hendene til den ytre casing av pumper vil påvirke pumping funksjon. Bruk sterile hansker, gasbind, rør, fylling nål, og veie båter til å forberede pumpene, for å unngå risiko for smitte fra implantatet.
  2. Åpne bare antall pumpe organer og strømnings moderatorer som trengs for studien, da disse kan ikke lagres en gang åpnet. Dersom mer enn 10 pumper er nødvendig, sørge for at partinummer for pumpene er de samme for en studie, ettersom pumper fra forskjellige partinumre har forskjellig Mean Fill Volum og Pump Rate.
  3. Veie hver pumpe (inkludert både hoveddelen og flyt moderator), og merke deg vekten til 4 desimaler (f.eks 1,1443 g av mus # 1). Denne vekt, betegnet "Pumpe Tomvekt" i malen (tabell 1), vil bli benyttet til å beregne den fylte forholdet.
  4. Fest pumpen fylling nål til en 1 cc steril sprøyte og omhyggelig fylle sprøyten med AngII løsning fra hensiktsmessignummerert plastrør. Det er viktig å unngå å trekke luft inn i sprøyten.
  5. Fjern alle luftbobler nøye fra sprøyten mens nålen er plassert nedover. Hold nålen / sprøyten i denne stilling for å hindre innføring av bobler inn i pumpen.
  6. Sett forsiktig fyllet nålen inn i pumpehuset. Advance tuppen av nålen inn i pumpen. Ikke hvil spissen av nålen fast på undersiden av pumpen.
  7. Skyv sprøytestempelet langsomt å fylle pumpen med AngII løsning. En mørk skygge inne i pumpen indikerer fyllingsnivået. Fyllet Volumet er ca 246 pl per Instructions.
  8. Slutt å fylle pumpen og fjern forsiktig kanylen så snart en vulst av væske stiger ut av pumpen.
  9. Sett strømnings moderator inn i pumpen gjennom hullet på toppen av pumpehuset inntil intet gap er sett mellom hodet av strømnings moderator og toppen av pumpehuset (figur 1).
  10. Innsetting av moderateller til pumpehuset fører til noe fluid lekker fra åpningen av strømnings moderator. Blot nøye all ekstra væske som kan ha lekket under plassering av moderatorer.
  11. Vei fylt pumpe. Spill vekten under "Pump Vekt Fylt" i malen.
  12. Beregn Fylling Ratio (%) = (Pump Weight "fylt" - "tom") x 1000 / bety fylle volum x 100.
    1. Beregne fyllingsgraden som angitt i tabell 1. Ideelt fyller forholdet bør være lik eller større enn 100%. Påfylling pumpen hvis fyllingsgraden er <95% (impliserer at luftbobler kan være til stede i pumpe).
  13. Plasser fylt pumpe i den merkede 4 ml tube (trinn 2.5) med moderator hodet vendt oppover. Tilsett tilstrekkelig volum sterilt saltvann for å dekke pumpen. Hold pumpen i tube av saltvann før implantasjon.
  14. Plasser rør i en 37 ºC inkubator. Inkuber pumper O / N (minst 12 timer) for å tillate delvis priming, og deretter implantatet i mus. Pumping av AngII starter ca 24 timer etter implantering, som lar musene å gjenopprette fra kirurgi før eventuelle stresset som oppstår under AngII infusjon.

4. Forberedelse til Pump Implantasjon

  1. Autoklav (gravitasjon modus, tørr syklus, 15 min) gasbind, bomullspinner og kirurgiske verktøy, inkludert saks, pinsetten, tang, stifter og stifte minst en dag før operasjonen.
  2. I en prosedyre rommet, forberede vaporizer for anestesi ved hjelp av isofluran. Åpne opp sterile forheng i en laminær hette, og plassere nesen membran for isoflurananestesi. Plasser betadine, 70% etanol, sterilt vann, perle sterilisator, antiseptisk handrub, vattpinner, gasbind, og fylt pumper i en laminær hette.
  3. Don en maske og kappe, og deretter åpne en ytre drape i en laminær hette med rene hender. Ta på sterile hansker og åpne sterile inni pakken.

5. Kirurgisk prosedyre av Pump Implantasjon

  1. Plasser musen i en induksjons chamBER med innstrømning av isofluran med en strømningshastighet på 1,5 - 2%. Overvåke musen for ytterligere 2 - 3 min etter recumbency. Barbere et område på størrelse med et kvartal, over venstre eller høyre skulder.
  2. Plasser musen i en laminær hette, med snuten i flukt med en kjegle koblet til isofluran strøm (Figur 2A). Plasser musen hode mot kirurgens dominerende hånd. Bruk dyrlege salve på mus øyne for å hindre tørrhet mens under anestesi. Kontroller at musen har ingen respons på stimulering av smerte før operasjonen. For eksempel, er pedalrespons en god indikator for smerte.
  3. Dott og tørk barberte området med betadine etterfulgt av tre våtservietter med 70% etanol. Don eller endre sterile hansker.
  4. Bruk en kirurgisk skalpell til å foreta en ~ 1 cm innsnitt bak øret over skulderblad av forfoten. Dette snittet bør være vinkelrett på halen. Utvis forsiktighet for å kutte bare huden og ikke underliggende vev.
  5. Hold forceps i den ene hånden for å åpne snitt, og bruk den andre hånden til å lage en subkutan tunnel under huden ved hjelp av en hemostat (figur 2B).
  6. Advance hemostat tips mot halen, og skape en lomme for pumpe. Dette oppnås ved nøye å åpne kjevene pinsetten under huden for å åpne en pose. Trekk pinsetten fra snittet.
  7. Sett pumpen inn i innsnitt med moderator hodet plassert på baksiden av mus (figur 2C). Skyv pumpen helt inn i lommen. Det bør være tilstrekkelig fri plass for å lukke såret uten spenning eller strekking av huden.
  8. Når en pumpe har satt fast klemme begge sider av snittet, rette slik at kantene møtes, og legg 1 eller 2 sår klipp for å lukke (figur 2D). Inspisere snittstedet for å sikre at det er fullstendig lukking av såret, og at pumpen ikke er å trykke direkte på stedet.
  9. Påfør aktuell lidokain krem(4% vekt / vekt) med en ren bomulls swab.Remove musen fra nesen membran, og legg den på en varmepute til det gjenvinner bevisstheten. Etter å utvinne, er musen returnert til buret.
  10. Plasser kirurgiske instrumenter til en perle sterilisator i 10 sekunder mellom mus. Tillat instrumenter avkjøles før bruk. Rene hansker med antiseptisk handrub mellom mus. Overvåke alle mus før full restitusjon oppnås.
  11. Overvåke mus tett etter operasjonen. Injisere en bolus sterilt saltvann (0,2 - 0,3 ml) subkutant hvis en mus viser tegn på stress, dehydrering eller tilsynelatende vekttap. Observere mus minst to ganger om dagen i løpet av de første 10 dagene, og minst en gang hver dag etterpå. Utfør en obduksjon umiddelbart dersom noen mus dør under AngII infusjon. Fjern sår klipp mellom 7 - 14 dager etter operasjonen.

6. Høsting, Reparasjon, rengjøring, og Imaging av Aorta

  1. Skjær åpne musen thorax og bukhulen ventralt, kuttet open høyre atrium, perfuse med saltvann gjennom venstre ventrikkel i hjertet til å fjerne blod i aorta, og deretter høste aorta 27.
  2. Plasser høstet Aorta i plastrør inneholdende minst 3 ml av 4% paraformaldehyd eller 10% nøytralt bufret formalin i 24 - 48 timer 27.
  3. Fjern adventitia vev nøye. Pin aorta på svart voks med pinner. Erverve aorta bilder med samme forstørrelse. Ta med en linjal i hvert bilde for kalibrering, som vist i Figur 3.

7. En face Imaging av Aorta

  1. Klipp opp aorta lengderetningen gjennom den ytre og indre krumning av aortabuen, og kutte åpne store grener inkludert innominate, venstre halspulsåren og venstre subclavia. Pin aorta flat med ytre adventitia legging ved siden av svart voks.
  2. Erverve en face bilde av den indre overflate av aorta ved samme forstørrelse. Ta med en linjal i hvert bilde for kalibrering, som visern i Figur 4.

Representative Results

De fire mannlige LDL reseptor - / - mus som er beskrevet i protokollen delen ble avlivet etter 4 uker med AngII infusjon. Aorta ble høstet, renset, og avbildes å visual aorta dilations. Som vist i figur 3, Aorta har flere forskjellige egenskaper inkludert utvidelsen av suprarenal region (aaas, figur 3A), ekspansjon av stigende område (TAA, figur 3B), eller utvidelse av begge regioner (tilstedeværelse av både aaas og TAA, figur 3C), mens morfologi i en mus var grovt normalt (figur 3D). Utvidelse av den abdominale aorta er kvantifisert ved å måle ex vivo maksimal bredde på suprarenal region, som illustrert ved den røde linje i figur 3A. For å måle stigende aorta-dilatasjon, ble Aorta skåret opp og festet som vist i figur 4. Intimal overflatearealet ble målt i den stigende aorta området (område omgitt av the røde linjer i figur 4A) for å kvantifisere TAA. En linjal ble inkludert i hvert bilde for å standardisere målinger, som vist i begge figurene 3 og 4.

Figur 1
. Figur 1. Representative bilde av fylte osmotisk pumpe Hver pumpe består av to atskilte deler: et hovedlegeme og en strømnings moderator. Etter fylling av pumpehuset med AngII blir strømnings moderator satt inn for å tette pumpen.

Figur 2
Figur 2. Prosess av pumpe implantasjon kirurgi (A) Mus blir plassert i en laminær hette med en nesekonus som er kontinuerlig frigjøring isofluran og oksygen.; (B) En rett hemostat er satt inn i huden innsnitt for å lage en subkutan tunnel; (C) pumpe er satt inn gjennom den hud snitt forsiktig; (D) Huden innsnitt er stiftet etter pumpe innsetting.

Figur 3
Figur 3. Aorta bilder (ex vivo) fra mus infused med AngII AngII 1000 ng / kg / min ble tilført i mannlig LDL reseptor -. / - Mus i 28 dager. (A) AAAS ledsaget av trombose; Rød linje (2,05 mm) viser måling av maksimal aorta bredde i suprarenal regionen. (B) Stigende aorta dilatasjon (TAA) med grovt normal abdominal aorta; (C) Profound dilations i både stigende og suprarenale aorta regioner (TAA og AAAS); (D) grovt normal aorta med ingen åpen utvidelse av enten stigende eller suprarenal aortic regionen.

4.jpg "/>
Figur 4. En Face bilder av thorax aorta regioner fra mus infused med AngII AngII 1000 ng / kg / min ble tilført i mannlig LDL reseptor -. / - Mus i 28 dager. Flateareal skissert av en rød linje representerer den stigende aortic regionen, inkludert en del av aortabuen.

1 Dosen som kreves 1000 ng / kg / min
2 Begynn kroppsvekt (største mus) 24.8 g
3 Totalt anslås vektøkning 1 g
4 Pumping rente 0,25 mL / t
5 Number av mus 4
6 Dose per time for dyr 1518 ng
7 Kons nødvendig 6072 ng / mL
8 For 300 ul løsning 1,82 mg / 300 mL
LØSNING TRENGTE
9 Total AngII (mg) 7.3 mg
10 Oppløst i saltvann-# 160; 1200 ul
Mus Kroppsvekt Fortynningsfaktoren Volum (mL) Pump Vekt (g) Fylt Ratio
# (g) AngII Saline Tom Fylt (%)
1 24.5 1.0 296,4 3.6 1,1443 1,3877 99
2 23,0 0.9 278,2 21.8 1,1677 1,4145 100
3 24.8 1.0 300,0 0.0 1,1438 1,3904 100
4 21.8 0.9 263,7 36.3 1,1438 1,3904 100
Fortynningsfaktor = kroppsvekt av mus / kroppsvekt av de største mus
Mus Kroppsvekt Fortynningsfaktoren Volum (mL) Pump Vekt (g) Fylt Ratio
# (g) AngII Saline Tom Fylt (%)
1 24.5 1.0 296,4 3.6 1,1443 1,3877 99
2 23,0 0.9 278,2 21.8 1,1677 1,4145 100
3 24.8 1.0 300,0 0.0 1,1438 1,3904 100
4 21.8 0.9 263,7 36.3 1,1438 1,3904 100

Tabell 1: Beregning for 28-dagers infusjon via osmotiske pumper.

Discussion

Osmotiske pumper leverer AngII subkutant er en rutinemessig tilnærming til å indusere aortaaneurisme hos mus. Basert på data fra mange laboratorier, har det vært konsistente funnene at dette er en pålitelig og reproduserbar metode for å studere både AAAS 3,4 og TAA 22-26 i mus. Derfor er denne musen modellen betraktet som en modell som sammenfatter flere funksjoner på menneske aortaaneurisme og gir mekanistiske innsikt i disse ødeleggende sykdommer.

Mens aldring er en risikofaktor for AAAS i mennesker, det er ikke systematisk undersøkt for AngII-indusert AAAS i mus. Det synes imidlertid forekomst og alvorlighetsgrad av AngII-indusert AAAS ligner på mus i en alder av 8 - 48 uker 4,5,7. Foreløpig er det bare noen få studier som rapporterer AngII-indusert TAA i mus i en alder av 8 - 24 uker 22-26, som ikke viser tydelige aldersrelaterte forskjeller på TAA formasjon.

Hunnmus har en mye lavere forekomst av AAAS enn hannmus infused med AngII 4,28. Det er også verdt å merke seg at forekomsten av AngII-indusert AAAS er mye høyere i hyper- enn Normo-cholesterolemic mus, som er mer enn 50% versus mindre enn 30%, henholdsvis. I tillegg er aortisk hyppig brudd (ca. 10 - 30%) i både normo- og hyperkolesterolemiske mus under AngII infusjon. Infusjon av AngII med en hastighet på 1000 ng / kg / min inn i hyperkolesterolemiske mus, slik som LDL-reseptoren - / - mus foret med en vestlig diett eller apolipoprotein (apoE) - / - mus tilført en normal eller vestlig diett, har maksimal effekt på AAA utvikling 3,4,29. Dette infusjonshastighet er optimal for en studie der manipulere et gen av interesse hyperkolesterolemiske mus forventes å redusere AAAS. Hvis en manipulasjon i hyperkolesterolemisk mus er forventet å øke aaas, er det anbefalt å tilføre AngII med en hastighet på 500 ng / kg / min eller lavere 30. I motsetning til aaas, er det ingen demonstrated sammenheng mellom mannlige kjønn eller hyperkolesterolemi og AngII-indusert TAA 25. Men på samme måte som AAAS, hvis manipulering av et gen av interesse er forventet å øke TAA, anbefaler vi en lavere infusjonshastighet enn 1000 ng / kg / min for AngII infusjon.

Det er også viktig å vite at forekomst og alvorlighetsgrad av AngII-indusert aortaaneurisme variere mellom individuelle mus og mellom studier. Hvis mus ikke utvikler aortaaneurisme, er en potensiell mulighet for at AngII kanskje ikke har blitt levert i mus. For validering av en høy infusjonshastighet på AngII, for eksempel 1000 ng / kg / min, måling av blodtrykk anbefales før og under AngII infusjon ved hjelp av en ikke-invasiv tail-cuff metoden 31. AngII infusjon med en hastighet på 1000 ng / kg / min øker systolisk blodtrykk hos mus. Dessuten kan plasma renin konsentrasjoner måles under AngII infusjon eller ved oppsigelse siden AngII har en negativ tilbakemelding på rEnin sekresjon. Derfor fører AngII infusjon til reduksjoner i plasma renin konsentrasjoner. Hvis en mus som oser av AngII har ingen åpen aorta patologi, ingen økning av blodtrykket, og ingen reduksjon av plasma renin konsentrasjon, ville det tyde på at AngII ikke har blitt levert effektivt gjennom implantert osmotisk mini pumpe. Vi vil anbefale å fjerne denne musen fra studien. Det er også viktig å merke seg at noen mus ikke utvikler aortaaneurisme tross for økt systolisk blodtrykk og redusert plasma renin konsentrasjoner. Disse musene bør forbli i studien.

Oppsummert er AngII infusjon oppnås ved subkutan implantasjon hjelp osmotiske pumper for å indusere aortaaneurisme hos mus. Denne metoden gir AngII konstant i en definert hastighet for angitte varigheter som anvendes til å studere både aaas og TAA.

Disclosures

Publisering av denne artikkelen er sponset av Alzet.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Angiotensin II Bachem H-1705 compound used to induce aortic aneurysms
Alzet Osmotic Pumps DURECT Corporation Alzet Model 2004 feasible for 28-day infusion in mice weighed > 20 g
Saturated fat-enriched diet Harlan Teklad TD.88137 42% calories/calories to stimulate hypercholesterolemia in LDL receptor -/- mice

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Pyo, R., et al. Targeted gene disruption of matrix metalloproteinase-9 (gelatinase B) suppresses development of experimental abdominal aortic aneurysms. J Clin Invest. 105 (11), 1641-1649 (2000).
  2. Chiou, A. C., Chiu, B., Pearce, W. H. Murine aortic aneurysm produced by periarterial application of calcium chloride. J Surg Res. 99 (2), 371-376 (2001).
  3. Daugherty, A., Cassis, L. Chronic angiotensin II infusion promotes atherogenesis in low density lipoprotein receptor -/- mice. Ann NY Acad Sci. 892 (1), 108-118 (1999).
  4. Daugherty, A., Manning, M. W., Cassis, L. A. Angiotensin II promotes atherosclerotic lesions and aneurysms in apolipoprotein E-deficient mice. J Clin Invest. 105 (11), 1605-1612 (2000).
  5. Deng, G. G., et al. Urokinase-type plasminogen activator plays a critical role in angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysm. Circ Res. 92 (5), 510-517 (2003).
  6. King, V. L., Trivedi, D., Gitlin, J. M., Loftin, C. D. Selective cyclooxygenase-2 inhibition with celecoxib decreases angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysm formation in mice. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 26 (5), 1137-1143 (2006).
  7. Uchida, H. A., Poduri, A., Subramanian, V., Cassis, L. A., Daugherty, A. Urokinase-type plasminogen activator deficiency in bone marrow-derived cells augments rupture of angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysms. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 31 (12), 2845-2852 (2011).
  8. Wang, Y. X., et al. Angiotensin II increases urokinase-type plasminogen activator expression and induces aneurysm in the abdominal aorta of apolipoprotein E-deficient mice. Am J Pathol. 159 (4), 1455-1464 (2001).
  9. Bruemmer, D., et al. Angiotensin II-accelerated atherosclerosis and aneurysm formation is attenuated in osteopontin-deficient mice. J Clin Invest. 112 (9), 1318-1331 (2003).
  10. Gavrila, D., et al. Vitamin E inhibits abdominal aortic aneurysm formation in angiotensin II-infused apolipoprotein E-deficient mice. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 25 (8), 1671-1677 (2005).
  11. Wang, J., et al. IgE actions on CD4+ T cells, mast cells, and macrophages participate in the pathogenesis of experimental abdominal aortic aneurysms. EMBO Mol Med. 6 (7), 952-969 (2014).
  12. Yoshimura, K., et al. Regression of abdominal aortic aneurysm by inhibition of c-Jun N-terminal kinase. Nat Med. 11 (12), 1330-1338 (2005).
  13. Usui, F., et al. Inflammasome activation by mitochondrial oxidative stress in macrophages leads to the development of angiotensin II-induced aortic aneurysm. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (1), 127-136 (2015).
  14. Mellak, S., et al. Angiotensin II mobilizes spleen monocytes to promote the development of abdominal aortic aneurysm in apoe-/- mice. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (2), 378-388 (2015).
  15. Krishna, S. M., et al. Peptide antagonist of thrombospondin-1 promotes abdominal aortic aneurysm progression in the angiotensin II-infused apolipoprotein-E-deficient mouse. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (2), 389-398 (2015).
  16. Norman, P. E., Curci, J. A. Understanding the effects of tobacco smoke on the pathogenesis of aortic aneurysm. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 33 (7), 1473-1477 (2013).
  17. Daugherty, A., Powell, J. T. Recent highlights of ATVB: aneurysms. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 34 (4), 691-694 (2014).
  18. Liu, J., Daugherty, A., Lu, H. Angiotensin II and abdominal aortic aneurysms: an update. Curr Pharm Design. , (2015).
  19. Rateri, D. L., Howatt, D. A., Moorleghen, J. J., Charnigo, R., Cassis, L. A., Daugherty, A. Prolonged infusion of angiotensin II in apoE(-/-) mice promotes macrophage recruitment with continued expansion of abdominal aortic aneurysm. Am J Pathol. 179 (3), 1542-1548 (2011).
  20. Saraff, K., Babamusta, F., Cassis, L. A., Daugherty, A. Aortic dissection precedes formation of aneurysms and atherosclerosis in angiotensin II-infused, apolipoprotein E-deficient mice. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 23 (9), 1621-1626 (2003).
  21. Daugherty, A., Cassis, L. A., Lu, H. Complex pathologies of angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysms. J Zhejiang Univ Sci B. 12 (8), 624-628 (2011).
  22. Daugherty, A., Rateri, D. L., Charo, I. F., Owens, A. P., Howatt, D. A., Cassis, L. A. Angiotensin II infusion promotes ascending aortic aneurysms: attenuation by CCR2 deficiency in apoE-/- mice. Clin Sci (Lond). 118 (11), 681-689 (2010).
  23. Rateri, D. L., et al. Endothelial cell-specific deficiency of Ang II type 1a receptors attenuates Ang II-induced ascending aortic aneurysms in LDL receptor-/- mice). Circ Res. 108 (5), 574-581 (2011).
  24. Rateri, D. L., et al. Depletion of endothelial or smooth muscle cell-specific angiotensin II type 1a receptors does not influence aortic aneurysms or atherosclerosis in LDL receptor deficient mice. PLoS One. 7 (12), 10-1371 (2012).
  25. Rateri, D. L., et al. Angiotensin II induces region-specific medial disruption during evolution of ascending aortic aneurysms. Am J Pathol. 184 (9), 2586-2595 (2014).
  26. Davis, F. M., et al. Smooth muscle cell deletion of low-density lipoprotein receptor-related protein 1 augments angiotensin II-induced superior mesenteric arterial and ascending aortic aneurysms. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 35 (1), 155-162 (2015).
  27. Daugherty, A., Rateri, D. Development of experimental designs for atherosclerosis studies in mice. Methods. 36 (2), 129-138 (2005).
  28. Henriques, T. A., Huang, J., D'Souza, S. S., Daugherty, A., Cassis, L. A. Orchidectomy, but not ovariectomy, regulates angiotensin II-induced vascular diseases in apolipoprotein E-deficient mice. Endocrinology. 145 (8), 3866-3872 (2004).
  29. Daugherty, A., Manning, M. W., Cassis, L. A. Antagonism of AT2 receptors augments angiotensin II-induced abdominal aortic aneurysms and atherosclerosis. Br J Pharmacol. 134 (4), 865-870 (2001).
  30. Wang, S., et al. Deficiency of receptor-associated protein attenuates angiotensin II-induced atherosclerosis in hypercholesterolemic mice without influencing abdominal aortic aneurysms. Atherosclerosis. 220 (2), 375-380 (2011).
  31. Daugherty, A., Rateri, D., Lu, H., Balakrishnan, A. Measuring blood pressure in mice using volume pressure recording, a tail-cuff method. J Vis Exp. (27), e1291 (2009).

Tags

Medisin osmotisk pumpe subkutan infusjon angiotensin abdominale aortaaneurismer mus
Subkutan Angiotensin II Infusion hjelp osmotiske pumper induserer aortaaneurismer i Mus
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Lu, H., Howatt, D. A., Balakrishnan, … More

Lu, H., Howatt, D. A., Balakrishnan, A., Moorleghen, J. J., Rateri, D. L., Cassis, L. A., Daugherty, A. Subcutaneous Angiotensin II Infusion using Osmotic Pumps Induces Aortic Aneurysms in Mice. J. Vis. Exp. (103), e53191, doi:10.3791/53191 (2015).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter