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Medicine

Ex Vivo Intestinal Sacs para Avaliar mucosa Permeabilidade de modelos de doença gastrointestinal

doi: 10.3791/53250 Published: February 9, 2016

Abstract

A barreira epitelial é a primeira defesa inata do tracto gastrointestinal e regula selectivamente o transporte a partir do lúmen para os compartimentos dos tecidos subjacentes, restringir o transporte de moléculas pequenas através do epitélio e quase completamente proibindo transporte macromolecular epitelial. Esta selectividade é determinada pela camada de gel mucosa, o que limita o transporte de moléculas lipofílicas e ambos os receptores apicais e complexos de proteína de junções apertadas do epitélio. Modelos in vitro de cultura de células de epitélio são convenientes, mas como um modelo, falta-lhes a complexidade das interacções entre a microbiota, muco-gel, epitélio e sistema imunológico. Por outro lado, a avaliação in vivo da absorção intestinal ou da permeabilidade pode ser realizada, mas estes ensaios medem a absorção gastrointestinal, em geral, sem qualquer indicação de especificidade local. Ex vivo ensaios de permeabilidade intestinal usando "sacos"; são um método rápido e sensível de medir tanto a integridade intestinal global comparativa ou transporte de uma molécula específica, com a vantagem adicional de especificidade local intestinal. Aqui descreve-se a preparação de sacos para os estudos de permeabilidade intestinal e o cálculo da permeabilidade aparente (P app) de uma molécula através da barreira intestinal. Esta técnica pode ser usada como um método de avaliar a absorção do fármaco, ou para analisar a disfunção da barreira epitelial regional nos modelos animais de doenças gastrointestinais.

Introduction

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A barreira epitelial intestinal do tracto gastrointestinal é uma área de superfície de mucosa estimado em cerca de 400 m 2 no adulto humano. Consequentemente, é constantemente expostos a desafiar de micróbios, drogas ingeridas, nutrientes e toxinas bacterianas. O hospedeiro deve não só distinguir entre bactérias comensais toleráveis ​​e os potenciais agentes patogénicos, mas deve evitar que estas espécies e as suas moléculas segregadas a partir de atravessar a barreira epitelial, enquanto, ao mesmo tempo que permite a absorção de nutrientes. Assim, o papel do epitélio intestinal é actuar como uma barreira selectiva para o conteúdo luminal 1. Isto é conseguido, em parte, pelo sistema de defesa inata epiteliais na mucosa, que actua através de um sistema biológico responsivo que consiste em mecanismos constitutivos e indutíveis 2.

A perda da função de barreira epitelial é uma patologia que é característico de um número de doenças gastrointestinais. In vivoexame da função de barreira epitelial podem ser avaliados através de gavagem oral de uma molécula de marcador e a análise subsequente de soro 3. No entanto, esta técnica não oferece nenhuma indicação quanto ao local da disfunção da barreira. In vitro e avaliação ex vivo da resistência transepitelial usando sistemas Transwell 3 e câmaras de Ussing 4,5, respectivamente, são comumente utilizados como marcadores substitutos da função barreira epitelial, mas falta a fisiologia da doença contribuindo de modelos animais 6. Neste protocolo, descrevem um modelo de preparação de tecido ex vivo que permite a avaliação directa e localizada de integridade intestinal e que pode ser utilizada para avaliar a função de barreira da mucosa a um número de níveis. Mais importante, esta técnica pode ser aplicada aos modelos animais de doença, ou podem ser manipulados para permitir farmacologicamente interrogação em profundidade de uma disfunção da barreira da mucosa.

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Protocol

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Todo o trabalho de animais neste protocolo é realizada com a estrita observância Universidade do Comitê de Ética Newcastle animal procedimentos aprovados.

1. Preparação de Instrumentos, Meios de Cultura e pratos

  1. Pré-quente Mídia 199 (TC199) ou de Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM) media a 37 ° C. Pré-oxigenar o meio por borbulhamento com 95% de O2 / 5% de CO 2. Verificar que a forma tem um pH final de 7,3.
  2. Prepare sutura cortando duas seções 5 cm para cada saída. Laço as suturas em um nó não fechada.

2. Dissecção e Preparação do Trato Gastrointestinal

  1. Retirar o alimento contínuo de 12 horas antes da eutanásia. Se desejado, colocar os animais sobre gel de suplementos de nutrientes durante este tempo.
  2. Eutanásia ratos por dose excessiva de pentobarbitona de sódio ([200 mg / kg], injecção intraperitoneal), seguida por deslocação cervical, de acordo com o proto de Ética Institucionalcols e pulverizar 70% de etanol para o abdômen e tórax.
  3. Utilizando uma tesoura, fazer uma incisão horizontal no meio do abdómen e expor o peritoneu.
  4. Avance para separar e remover o tracto gastrointestinal através da redução do intestino delgado superior a partir do estômago para o esfíncter pilórico e cortar o intestino grosso na margem anal. Use uma pinça para remover suavemente o mesentério. Colocar o tracto intestinal de pré-aquecido, o meio oxigenado.
  5. Identificar a secção de intestino de ser avaliada para a permeabilidade (Figura 1) e cortado desta secção livre do resto do tracto intestinal.
    1. A fim de manter a consistência entre os animais, medir secções do duodeno e jejuno em relação ao estômago, e medir secções de cólon e íleo em relação ao ceco.
    2. Ao selecionar segmentos de tecido, observe a presença de tecidos linfóides associados a mucosas, tais como placas de Peyer. Estes podem ser identificados como pequeno acenoULES no lado da serosa do lúmen.
    3. Usando uma seringa de 1 mL, gentilmente liberar o conteúdo luminal do segmento intestinal para uma placa de Petri com PBS pré-aquecido (37 ° C). Estes conteúdos fecais pode ser descartada ou armazenada a -80 ° C para análise futura conforme desejado.

3. Preparação de intestinal Sacos

  1. Prepara-se uma seringa de 1 mL com um volume de 300 uL do composto de teste ou molécula. Para a integridade da mucosa, uma solução de 1 mg / ml de FITC-Dextrano P.M. 4400 pode ser usado. As sondas que variam de 4,400-70,000 Da em tamanho pode ser usado para aumentar a sensibilidade. Firmemente encaixar um cateter animais vascular pequena na seringa.
  2. Medida 5 cm da abertura do segmento intestinal e amarrar o segmento de bem fechada com uma sutura em malha neste momento. Delicadamente, coloque um fio de sutura em circuito pré-amarrado ao redor da abertura do intestino e inserir o cateter embotada. Puxar o laço fechado, de modo a garantir o segmento intestinale libertar o volume de 300 uL a partir da seringa para dentro do intestino, assegurando que toda a solução é injectada.
  3. Remova cuidadosamente o cateter enquanto puxando simultaneamente o laço de sutura para garantir o fechamento do saco intestinal. Cortar o saco intestinal solto a partir do intestino e colocar num tubo cónico de 50 ml cheio com 20 ml de meio oxigenado, pré-aquecido a 37 a ° C.

4. Medição da permeabilidade

  1. Colocar os tubos cónicos contendo os sacos intestinais num banho de água aquecida para 37 definir ° C. Aos 0, 30, 60, 90 e 120 min pontos de tempo, tomar uma amostra de 100 ul a partir do tubo cónico e transferência para uma placa de 96 poços, substituindo o volume com 100 ul de meio fresco em cada exemplo.
  2. Depois de a amostra final é tomada, cortar sacos abertos no ponto de sutura e para baixo do comprimento do segmento, expondo a superfície da mucosa.
  3. Medir o comprimento e a largura de cada segmento intestinal. Se desivermelho, pressão congelar os segmentos e armazenar a -80 ° C para a proteína ou análise bioquímica, ou alternativamente, loja em solução estabilizadora de RNA para ensaios moleculares.
  4. Preparar uma curva padrão de diluições log para moléculas de FITC-tag que variam de 1 a 1 x 10 -6.
  5. medir amostras e padrões para FITC em um leitor de placas fluorescentes, FITC excitação / emissão: 495 nm / 519 nm.

5. Cálculo da permeabilidade aparente para cada indivíduo Intestinal Sac

  1. Converter unidades de tempo para seg.
  2. Para cada ponto de tempo, calcular a concentração cumulativa, Q

    Q t = (C t * V r) + (Q t soma * V s),
    onde:

    Q t = concentração cumulativa no tempo t
    C t = concentração no tempo t
    V r = Volume no lado receptor
    Q t sum = Soma de Q tudo t anterior
    V = svolume amostrado
  3. Lote Q em função do tempo (t) e calcular o declive: δQ / dt
  4. Calcule a permeabilidade aparente (app P)

    P app = (δQ / AT) / (A * Co), onde:

    A = Área de tecido
    0 C = concentração inicial

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Representative Results

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Este protocolo pode ser usado para examinar as mudanças regionais na função de barreira intestinal em modelos animais da doença gastrointestinal. Através da medição do fluxo de uma sonda paracelular através da superfície da mucosa em zonas diferentes do tracto gastrointestinal 7, a integridade das junções apertadas epiteliais pode ser avaliada. Além disso, fazendo variar a natureza da sonda paracelular por tamanho (Figura 2) ou a hidrofobicidade (Figura 3), o grau de perturbação epitelial, ou a integridade da camada de gel mucosa, podem também ser medidos. Empregando marcadores maiores peso molecular permite uma interrogação mais sensível da permeabilidade paracelular da mucosa, a detecção de alterações discretas, que pode não ser evidente através de medições electrofisiológicas tal como transepitelial resistência eléctrica (TEER), mas que seria suficiente para permitir o transporte paracelular (Figura 2). mucoSal inflamação pode levar a uma perda de células caliciformes e a redução no gel mucosa protectora que normalmente recobre e protege a interface epitelial. Utilizando sondas hidrofóbicos, a integridade da camada de gel mucosa intestinal também podem ser examinados (Figura 3). Além disso, a integridade da barreira regionais pode ser examinada através da preparação específica de sacos intestinais a partir de diferentes áreas intestinais. As mudanças regionais em função de barreira variar dentro de diferentes modelos animais de doença e, por conseguinte, a utilização de sacos intestinais permite uma avaliação localizada da função de barreira intestinal (Figura 4), ​​quando comparado com gavagem oral de sondas e ensaio de soro subsequente.

figura 1
Figura 1. Diagrama do tracto gastrointestinal de murino. Um esquema do tracto gastrointestinal de um ratinho C57BL / 6, a partir do estômago para tele ânus. As pequenas junções intestinais não possa ser facilmente diferenciado macroscopicamente e amostragem consistente ajuda a minimizar o mouse para variação mouse. Para efeitos de criação de sacos intestinais, um segmento distai 5 cm do esfíncter pilórico irá abranger o duodeno. A seção de 10 centímetros se estende proximalmente a partir do ceco irá abranger o íleo. O tecido do intestino delgado remanescente representa jejuno. O reto está localizado a 2 cm próximo do ânus, com o intestino grosso restante, estendendo-se até o ceco representando o cólon 8. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 2
Figura 2.   Transporte paracelular dependente do tamanho das moléculas de FITC-dextrano que a mucosa epitelial no controle e DSS colite animals. sacos intestinais foram preparados a partir dos cólons dos ratos DSS 10 dias para o curso da doença. Sacos foram carregadas com 1 mg / ml, solução de FD-4 (PM 4400 Da), FD-20 (PM 20000 Da) ou DF-70 (70000 Da) e o fluxo do marcador de permeabilidade de FITC-dextrano foi medido ao longo de 120 min. Idade combinado animais saudáveis ​​foram utilizados como controle. N = 5, 2 repetições técnicas por N. ** p <0,01, teste t de Student. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 3
Figura 3 :. A influência da camada muco-gel sobre a integridade da barreira para compostos hidrófobos. Sacos intestinais foram preparados a partir dos cólons dos ratos DSS 10 dias para o curso da doença. Idade combinado animais saudáveis ​​foram utilizados como controle. Para o controle da mucosa-gel negativo, os intestinosforam carregados com 10 mM de N-acetilcisteína (NAC) (300 ul de volume por 5 cm de intestino) e incubou-se a 37 ° C durante 15 minutos e purgou-se com meio fresco antes de sacos foram preparados. Sacos foram carregadas com uma solução de 1 mg / ml de FD-4 (PM 4400 Da) e o fluxo medido ao longo de 120 min. N = 3, 2 repetições técnicas por N. * p <0,05, ** p <0,01, teste t de Student. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 4
Figura 4. A permeabilidade regional do intestino para FD-4 em modelos de murídeo de inflamação intestinal. Intestinal sacos foram preparados a partir do jejuno, íleo ou cólon de animais saudáveis ​​e animais DSS ou Dysbiosis induzida antibióticos animais (DAI). Sacos foram carregadas com 1 mg / ml, solução de FD-4 (PM 4400 Da) e flux medidos durante 120 min. N = 3, 2 repetições técnicas por N. * p <0,05, ** p <0,01, teste t de Student. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

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Discussion

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Aqui, nós detalhou o isolamento e preparação de sacos intestinais para avaliar a função barreira da mucosa ex vivo. sac preparações intestinais têm sido principalmente utilizados em investigação farmacêutica, examinando a absorção de medicamentos candidatos em todo o intestino. No entanto, este ensaio é igualmente adequado para o estudo da doença intestinal. permeabilidade intestinal podem variar muito por região e local de avaliação específica da permeabilidade permite uma melhor compreensão da importância regional da integridade da mucosa em doenças do aparelho digestivo. O ensaio é robusto e sob as condições fisiológicas corretas, tecidos isolados permanecer viáveis ​​por até 6 horas post mortem. Após a eutanásia, a velocidade da preparação de tecido é importante e o intestino deve ser lavada do seu conteúdo e transferidos para meio oxigenado tão rapidamente quanto possível. A fim de assegurar a coerência entre os animais, é essencial que as regiões intestinais corretas são identifiED (Figura 1). É aconselhável que os segmentos do cólon e do íleo são medidos a partir do ceco, enquanto os segmentos de duodeno e o jejuno são medidos a partir do estômago. Porque diferentes cepas, modelos ou animais transgênicos podem ser maiores, e têm Gits mais longos, vale a pena caracterizar o comprimento médio ou cada segmento intestinal em seu modelo antes de se envolver em ensaios de permeabilidade.

Além disso a consistência regional, é importante assegurar que cada saco intestinal é cortado ao comprimento igual e o saco é enchido com o volume correcto do fluido. A inconsistência na estes factores irá resultar em distensão desigual da mucosa entre ensaios. Sub-distensão do segmento intestinal não só reduz a exposição do conteúdo luminal para a superfície da mucosa, mas também aumenta a espessura do tecido através do qual o marcador deve viajar. O excesso de distensão do segmento pode danificar o tecido ou activar respostas de stress no tecido, co potencialmenteresultados nfounding. Deve notar-se, que para o cálculo de P app não leva em conta a área de superfície da estrutura das vilosidades. Enquanto este conduz a erros no cálculo da permeabilidade aparente real do tecido, que não afecta os resultados comparativos entre os modelos, como a área de superfície é calculada como uma constante. Quaisquer alterações na superfície devido à doença são compensados ​​pela perda da integridade epitelial e o protocolo é suficientemente robusto para identificar alterações na permeabilidade com a progressão da doença 6.

O uso de meio de cultura de tecidos é recomendado. Em estudos realizados por Barthe et al., A utilização de TC199 foi encontrado para aumentar significativamente a longevidade da viabilidade do tecido epitelial e arquitectura histológica, quando comparado com tampões simples de sal 9. Nos nossos estudos forma tanto DMEM e mantidas a 37 TC199 ° C proporcionaram condições ideais para a sobrevivência do tecido 5,6,10. A mídia corretafornece o epitélio com nutrientes necessários para sustentar a integridade do tecido, mantendo a temperatura durante o ensaio garante o metabolismo do tecido ideal que é a integridade juncional apertado essencial e ensaios que envolvem o transporte activo através de vias transcelular. Temperaturas abaixo de 37 ° C causar perda de viabilidade do tecido, aumentando o transporte paracelular e diminuindo o transporte transcelular 11. Assim, prolongar a viabilidade do tecido com condições óptimas é essencial e, ao fazer isso, o ensaio pode ser usado não só para examinar a integridade de barreira e regional, mas também para examinar estudos de intervenção e respostas fisiológicas e transcrição.

Embora usado principalmente para estudos de absorção da droga, técnicas para examinar a permeabilidade aparente (P app) de uma molécula de marcador através de uma barreira epitelial são uma medida altamente sensível da integridade intestinal 12-15. Em contraste com substitutos ex vivo MeasureMents de função de barreira, como TEER, P app é uma medida direta e altamente sensível da barreira intestinal 4. Vale a pena notar que as medições TEER e permeabilidade medida pelo app P de moléculas marcadoras nem sempre se correlacionam. Medições TEER abranger a resistência de ambas as zonas de oclus e resistências paralelas 16 transcelulares. Portanto TEER é uma medida da resistência combinada oferecido por junções apertadas e as próprias células. Se as associações célula-célula são fracos (isto é, as junções apertadas são gotejante), em seguida, esta contribuição para a resistência global de uma monocamada será baixo. Assim, pequenas alterações nas resistências juncionais apertadas para se tornar epitélio gotejante alterações insignificantes para as resistências de o epitélio como um todo. Em contraste, os ensaios de P app medir a capacidade de uma molécula de atravessar a barreira da mucosa 17 e, de facto, a sensibilidade das medições P app pode ser aitered através da seleção moléculas marcadoras de tamanhos diferentes (Figura 1). A consideração do tamanho do marcador é importante em relação ao modelo de doença intestinal a ser examinado. Modelos de alergia ou doença funcional 18,19, onde a perda de integridade é ligeira a moderada, pode ser mais adequado para os marcadores de peso molecular mais baixo, o que irá permitir a identificação de mudanças subtis a função da barreira intestinal. Em contraste, com os modelos, tais como a colite DSS, que envolve desnudamento do epitélio intestinal, marcadores maiores pode ser mais apropriado para avaliar a cicatrização da mucosa, como aumentos relativamente pequenos na integridade da barreira será realçado.

Enquanto sacos intestinais oferecer um modelo fisiologicamente relevante da função de barreira GI, existem algumas limitações no que diz respeito à variabilidade de modelos animais que precisam de ser consideradas. Por exemplo, o estado secretório ou o epitélio pode influenciar tanto o transporte paracelular através das Intesdente 20 e a integridade da camada de gel mucosa 5. Enquanto ex vivo ensaios incorporando medidas eletrofisiológicas, como preparações câmara Ussing, podem ser responsáveis ​​por isso, sacos intestinais não. Em segundo lugar, na preparação dos investigadores sacos intestinal deve contabilizar estruturas linfóides, tais como placas de Peyer, no prazo de preparações do saco, uma vez que podem influenciar a permeabilidade do tecido 21. Apesar destas considerações, ao contrário de muitos modelos de cultura celular, utilizados para avaliar a integridade epitelial, os sacos intestinais oferecer a contribuição de ambas uma camada de gel mucosa e uma lâmina subjacente. A contribuição da camada de gel mucosa, em particular, pode ser avaliada através da utilização de agentes mucolíticos, como a N-acetilcisteína, ou moléculas marcadoras hidrofóbicos, tais como a dexametasona 5,17. Isto pode ser particularmente importante para avaliar a permeabilidade intestinal em modelos de terapia do cancro, ou doença inflamatória do intestino, Waqui perda da barreira mucosa pode ser uma patologia no início da inflamação da mucosa 22,23. Da mesma forma, em modelos de doenças diarreicas, doenças GI funcional ou disbiose, produção de muco intestinal e integridade global gel de muco pode ser alterada em sites regionais 5,19,24. Sonda oral de marcadores de permeabilidade e de amostragem soro posterior é outra opção para a avaliação da permeabilidade intestinal in vivo. Enquanto este método tem o mínimo de manipulação do tecido, é uma medida composta da função de barreira intestinal e não avaliar as contribuições regionais para a barreira geral. Diferentes modelos de doença GI são susceptíveis de ter diferentes sítios de importância relativa, que não será explicada por abordagens sonda oral. O uso de sacos intestinais, é, por conseguinte, um ensaio rápido, sensível e fisiologicamente relevante, que pode ser usado para examinar a integridade da mucosa intestinal regionais em pequenos modelos animais de doença.

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Disclosures

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Dekantel  Non-absorbable Silk suture Braintree Scientific SUT-S 116
Media 199 (TC199)  Life Technologies 11043-023 No phenol red as this interferes with fluorescence
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) Life Technologies 21063-045 No phenol red as this interferes with fluorescence
N-acetylcysteine Sigma Aldrich Use at 10 mM in media
Small animal vascular cathether: Physiocath Data Sciences International 277-1-002
FITC-Dextran 4,400 MW Sigma Aldrich FD-4
FITC-Dextran 20,000 MW Sigma Aldrich FD-20
FITC-Dextran 70,000 MW Sigma Aldrich FD-70

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References

  1. Goggins, B. J., Chaney, C., Radford-Smith, G. L., Horvat, J. C., Keely, S. Hypoxia and Integrin-Mediated Epithelial Restitution during Mucosal Inflammation. Frontiers in immunology. 4, 272 (2013).
  2. Otte, J. M., Kiehne, K., Herzig, K. H. Antimicrobial peptides in innate immunity of the human intestine. Journal of gastroenterology. 38, 717-726 (2003).
  3. Robinson, A., et al. Mucosal protection by hypoxia-inducible factor prolyl hydroxylase inhibition. Gastroenterology. 134, 145-155 (2008).
  4. Feighery, L., et al. Increased intestinal permeability in rats subjected to traumatic frontal lobe percussion brain injury. The Journal of trauma. 64, 131-137 (2008).
  5. Keely, S., et al. Chloride-led disruption of the intestinal mucous layer impedes Salmonella invasion: evidence for an 'enteric tear' mechanism. Cellular physiology and biochemistry : international journal of experimental cellular physiology, biochemistry, and pharmacology. 28, 743-752 (2011).
  6. Keely, S., et al. Contribution of epithelial innate immunity to systemic protection afforded by prolyl hydroxylase inhibition in murine colitis. Mucosal immunology. 7, 114-123 (2014).
  7. Sourisseau, T., et al. Regulation of PCNA and cyclin D1 expression and epithelial morphogenesis by the ZO-1-regulated transcription factor ZONAB/DbpA. Mol Cell Biol. 26, 2387-2398 (2006).
  8. Ruehl-Fehlert, C., et al. Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--part 1. Exp Toxicol Pathol. 55, 91-106 (2003).
  9. Barthe, L., Woodley, J. F., Kenworthy, S., Houin, G. An improved everted gut sac as a simple and accurate technique to measure paracellular transport across the small intestine. European journal of drug metabolism and pharmacokinetics. 23, 313-323 (1998).
  10. Marks, E., et al. Oral Delivery of Prolyl Hydroxylase Inhibitor: AKB-4924 Promotes Localized Mucosal Healing in a Mouse Model of Colitis. Inflammatory bowel diseases. 21, 267-275 (2015).
  11. Keely, S., et al. Hypoxia-inducible factor-dependent regulation of platelet-activating factor receptor as a route for gram-positive bacterial translocation across epithelia. Mol Biol Cell. 21, 538-546 (2010).
  12. Brayden, D. J., Bzik, V. A., Lewis, A. L., Illum, L. CriticalSorb promotes permeation of flux markers across isolated rat intestinal mucosae and Caco-2 monolayers. Pharmaceutical research. 29, 2543-2554 (2012).
  13. Hubbard, D., Ghandehari, H., Brayden, D. J. Transepithelial transport of PAMAM dendrimers across isolated rat jejunal mucosae in ussing chambers. Biomacromolecules. 15, 2889-2895 (2014).
  14. Keely, S., et al. In vitro and ex vivo intestinal tissue models to measure mucoadhesion of poly (methacrylate) and N-trimethylated chitosan polymers. Pharmaceutical research. 22, 38-49 (2005).
  15. Maher, S., et al. Evaluation of intestinal absorption enhancement and local mucosal toxicity of two promoters. I. Studies in isolated rat and human colonic mucosae. European journal of pharmaceutical sciences : official journal of the European Federation for Pharmaceutical Sciences. 38, 291-300 (2009).
  16. Balda, M. S., et al. Functional dissociation of paracellular permeability and transepithelial electrical resistance and disruption of the apical-basolateral intramembrane diffusion barrier by expression of a mutant tight junction membrane protein. The Journal of cell biology. 134, 1031-1049 (1996).
  17. Behrens, I., Stenberg, P., Artursson, P., Kissel, T. Transport of lipophilic drug molecules in a new mucus-secreting cell culture model based on HT29-MTX cells. Pharmaceutical research. 18, 1138-1145 (2001).
  18. Stefka, A. T., et al. Commensal bacteria protect against food allergen sensitization. Proc Natl Acad Sci U S A. 111, 13145-13150 (2014).
  19. Keely, S., et al. Activated fluid transport regulates bacterial-epithelial interactions and significantly shifts the murine colonic microbiome. Gut microbes. 3, 250-260 (2012).
  20. Barrett, K. E., Keely, S. J. Chloride secretion by the intestinal epithelium: molecular basis and regulatory aspects. Annual review of physiology. 62, 535-572 (2000).
  21. Soni, J., et al. Rat, ovine and bovine Peyer's patches mounted in horizontal diffusion chambers display sampling function. Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society. 115, 68-77 (2006).
  22. Justino, P. F., et al. Regulatory role of Lactobacillus acidophilus on inflammation and gastric dysmotility in intestinal mucositis induced by 5-fluorouracil in mice. Cancer chemotherapy and pharmacology. (2015).
  23. Tran, C. D., Sundar, S., Howarth, G. S. Dietary zinc supplementation and methotrexate-induced small intestinal mucositis in metallothionein-knockout and wild-type mice. Cancer biology & therapy. 8, 1662-1667 (2009).
  24. Musch, M. W., Wang, Y., Claud, E. C., Chang, E. B. Lubiprostone decreases mouse colonic inner mucus layer thickness and alters intestinal microbiota. Digestive diseases and sciences. 58, 668-677 (2013).
<em>Ex Vivo</em> Intestinal Sacs para Avaliar mucosa Permeabilidade de modelos de doença gastrointestinal
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Mateer, S. W., Cardona, J., Marks, E., Goggin, B. J., Hua, S., Keely, S. Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease. J. Vis. Exp. (108), e53250, doi:10.3791/53250 (2016).More

Mateer, S. W., Cardona, J., Marks, E., Goggin, B. J., Hua, S., Keely, S. Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease. J. Vis. Exp. (108), e53250, doi:10.3791/53250 (2016).

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