Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Экс Vivo Кишечные Sacs для оценки слизистой проницаемости в моделях желудочно-кишечные заболевания

doi: 10.3791/53250 Published: February 9, 2016

Abstract

Эпителиальный барьер является первым врожденным защита желудочно-кишечного тракта и избирательно регулирует транспорт из просвета к нижележащим тканях, ограничивая перенос мелких молекул через эпителий и практически полностью запрещающий эпителиальную макромолекулярную транспорт. Эта селективность определяется слизистой слоя геля, который ограничивает транспорт липофильных молекул и обоих апикальных рецепторов и узких соединительных белковых комплексов эпителия. В пробирке модели культуры клеток эпителия удобны, но в качестве модели, им не хватает сложность взаимодействий между микробиоты, слизистой-гель, эпителий и иммунной системы. С другой стороны, в естественных условиях оценка поглощения или проницаемости кишечника может быть выполнена, но эти анализы измерить общую желудочно-кишечную абсорбцию, без указания площадке специфичности. Экс естественных проницаемости анализов с использованием "кишечные мешочки"; являются быстрый и чувствительный метод измерения либо общую целостности кишечного или сравнительный перевозки конкретных молекулы, с дополнительным преимуществом кишечной специфики сайта. Здесь мы опишем приготовление кишечных мешков для исследований проницаемости и вычисление очевидно проницаемости (P приложение) молекулы через кишечный барьер. Эта техника может быть использована в качестве метода оценки абсорбции лекарственного, или изучить региональную эпителиальный барьер дисфункции у животных моделях желудочно-кишечных заболеваний.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Кишечного эпителиальный барьер желудочно-кишечного тракта является площадь поверхности слизистой оценивается в 400 м 2 в взрослого человека. Следовательно, она постоянно подвергается вызов от микробов, попадает препаратов, питательных веществ и бактериальных токсинов. Хост должен не только различать приемлемые синантропных бактерий и потенциально патогенных микроорганизмов, но должна предотвратить эти виды и их секретируемые молекулы от пересечения эпителиальный барьер, в то же время позволяя поглощение питательных веществ. Таким образом, роль кишечном эпителии будет действовать в качестве селективного барьера к просветными Содержание 1. Это достигается, в частности, путем врожденной эпителиальной защитной системы на слизистой, который действует через реагировать биологической системе, состоящей из конститутивных и индуцируемых механизмов 2.

Потеря функции эпителиальный барьер является патологией, что является характерной чертой ряда заболеваний желудочно-кишечного тракта. В естественных условияхэкспертиза эпителиальной барьерной функции могут быть оценены через желудочный зонд молекулы индикаторного и последующего анализа сыворотки 3. Однако эта методика не дает никаких указаний на сайт барьерного дисфункции. В пробирке и экс естественных оценки сопротивления трансэпителиального использованием Transwell системы 3 и Ussing камеры 4,5 соответственно, которые обычно используют в качестве суррогатных маркеров эпителиальных барьерной функции, но не хватает способствуя физиологию болезни животных моделей 6. В этом протоколе мы опишем модель подготовки экс виво ткани, обеспечивающую прямое и локализованное оценку кишечной целостности и который может быть использован для оценки слизистой барьерной функции при нескольких уровнях. Важно отметить, что эта методика может быть применена к животных моделях болезни, или может быть фармакологически манипулировать, чтобы позволить в глубине допроса слизистой барьерной дисфункции.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Все животное работа в этом протоколе производится при строгом соблюдении университета комитета Ньюкасл животных этике утверждены процедуры.

1. Подготовка инструментов, питательных сред и блюда

  1. Предварительно теплой СМИ 199 (TC199) или Игла в модификации Дульбекко (DMEM) СМИ до 37 ° С. Предварительно кислородсодержащих среда барботированием с 95% O 2/5% CO 2. Убедитесь, что среда имеет конечный рН 7,3.
  2. Подготовьте шва путем разрезания два 5 секций см для каждого мешка. Петля швы в незамкнутой узел.

2. Вскрытие и подготовка желудочно-кишечного тракта

  1. Вывод твердой пищи 12 ч, прежде чем эвтаназии. При желании, разместить животных на питательных добавок геля в течение этого времени.
  2. Эвтаназии мышей от передозировки пентобарбитоном натрия ([200 мг / кг], внутрибрюшинного введения) с последующим смещением шейных позвонков, в соответствии с институциональной этике протоСтолбцы и брызги 70% этанола на брюшной полости и грудной клетки.
  3. Используя ножницы, создать горизонтальную разрез в середине живота и выставить брюшины.
  4. Продолжить, чтобы отделить и удалить желудочно-кишечного тракта путем разрезания верхней части тонкой кишки из желудка в пилорического сфинктера и резки толстого кишечника у ануса. Используйте пинцет, чтобы мягко удалить брыжейки. Поместите кишечный тракт в предварительно подогретый, насыщенный кислородом среде.
  5. Определить секцию кишки должны быть оценены на проницаемость (Рисунок 1) и сократить секцию свободной от остальной части кишечного тракта.
    1. Для того чтобы поддерживать согласованность между животными, измерить секции двенадцатиперстной кишки и тощей кишки по отношению к животу, и измерять участки толстой кишки и подвздошной кишки по отношению к слепой кишке.
    2. При выборе участков ткани, обратите внимание на наличие слизистой ассоциированных лимфоидных тканей, таких как пейеровы бляшки. Они могут быть определены как небольшой кивокмологий на серозную сторону просвета.
    3. Использование 1 мл шприц, осторожно промойте просвета содержимое кишечного сегмента в чашку Петри с предварительно нагретой PBS (37 ° C). Эти фекальные содержание может быть отброшен или хранили при -80 ° C для последующего анализа по желанию.

3. Подготовка кишечника Sacs

  1. Приготовьте 1 мл шприц с объемом 300 мкл тестируемого соединения или молекулы. Для целостности слизистой, 1 мг / мл раствора FITC-декстрана M.Wt. в 4400 может быть использован. Зонды, начиная от 4,400-70,000 Da размера могут быть использованы для увеличения чувствительности. Надежно закрепите небольшой животное сосудистой катетера на шприце.
  2. Мера 5 см от открытия кишечного сегмента и связать сегмент надежно закрыта с шовным-петле в этой точке. Аккуратно поместите предварительно связаны шовный петлю вокруг отверстия кишечника и вставьте притупляются катетер. Вытяните петлю закрыта таким образом, чтобы обеспечить кишечного сегментаи освободить объем 300 мкл из шприца в кишечнике, гарантируя, что весь раствор впрыскивают.
  3. Аккуратно удалите катетер одновременно потянув шовный петлю, чтобы закрепить закрытие кишечного мешка. Вырезать кишечный мешок сыпучих из кишечника и поместить в 50 мл коническую трубку, наполненную 20 мл обогащенной кислородом среде, предварительно нагретой до 37, чтобы ° С.

4. Измерение проницаемости

  1. Место конические пробирки, содержащие кишечную мешочки в ванну с подогревом воды установлен в 37 ° С. На 0, 30, 60, 90 и 120 мин временных точках, взять пробу 100 мкл из конической трубе и переходом на 96-луночный планшет, заменив объем с 100 мкл свежей среды в каждом случае.
  2. После окончательного берут пробу, разрезать мешочки в точке шва и вниз по длине отрезка, подвергая поверхность слизистой.
  3. Измерьте длину и ширину каждой кишечного сегмента. Если Дезикрасный, оснастки заморозить сегменты и хранить при температуре -80 ° C для белка или биохимического анализа, или альтернативно, в магазине в стабилизации РНК раствора для молекулярных анализов.
  4. Построить стандартную кривую журнала разведений для FITC-меченых молекул от 1 до 1 × 10 -6.
  5. Образцы Мера и стандарты для FITC на флуоресцентной ридере, FITC возбуждения / испускания: 495 нм / 519 нм.

5. Расчет кажущейся проницаемости для каждого отдельного кишечной Сак

  1. Преобразование единиц времени, чтобы сек.
  2. Для каждой временной точке, вычислить кумулятивную концентрацию, Q

    Q T = (С Т * У г) + (Q T сумма * V s),
    где:

    Q T = Накопительное концентрация в момент времени т
    С т = Концентрация в момент Т
    V R = Объем при стороне приемника
    Q T сумма = сумма всех предыдущих Q T
    = V SОбъем пробы
  3. Участок Q от времени (Т) и вычислить наклон: δQ / & delta; t
  4. Вычислить кажущуюся проницаемость (P приложение)

    Р приложение = (δQ / & delta; t) / (А * Co), где:

    А = площадь ткани
    C 0 = Исходная концентрация

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Этот протокол может быть использован для изучения региональных изменений в барьерной функции кишечника на животных моделях желудочно-кишечных заболеваний. Измеряя поток от парацеллюлярной зонда по поверхности слизистой на разной областях желудочно-кишечного тракта 7, целостность эпителиальных плотных контактов может быть оценена. Кроме того, путем изменения характера парацеллюлярной зонда по размеру (Рисунок 2) или гидрофобность (рисунок 3), степень эпителиальной возмущения, или целостности слизистой слоя геля, также могут быть измерены. Используя маркеры большие рные позволяет более чувствительной допроса парацеллюлярной проницаемости слизистой, обнаружения дискретных изменений, которые могут быть не очевидны из электрофизиологических измерений, таких как трансэпителиального электрического сопротивления (Тир), но которые были бы достаточны, чтобы позволить парацеллюлярного транспорт (рис 2). Слизистосал воспаление может привести к утрате бокаловидных клеток и уменьшению защитной слизистой гель, который обычно перекрывает и защищает эпителиальную интерфейс. Использование гидрофобных зондов, целостность кишечной слизистой слоя геля также может быть рассмотрен (рисунок 3). Кроме того, региональный целостность барьера могут быть рассмотрены через специфического препарата кишечных мешочках из разных кишечных областях. Региональные изменения в барьерной функции варьировать в различных животных моделях болезни и, таким образом, использование кишечных мешочках позволяет локализованного оценки барьерной функции кишечника (рис 4), по сравнению с желудочный зонд зондов и последующего анализа сыворотки.

Рисунок 1
Рисунок 1. Схема мышиного желудочно-кишечного тракта. Схема на желудочно-кишечный тракт C57BL / 6 мыши, от желудка до тон анус. Тонкого кишечника переходы не могут быть легко дифференцированы макроскопически и последовательным выборки помогает минимизировать мышь к изменению мыши. Для целей создания кишечные мешочки, в 5 см сегмент дистальнее пилорического сфинктера будет охватывать в двенадцатиперстную кишку. Раздел 10 см продления проксимально от слепой кишки будет охватывать подвздошной кишки. Оставшийся небольшой ткани кишечника представляет тощей. Прямая кишка находится в 2 см проксимальнее к анусу, а остальные толстой кишки, распространяющееся на слепую кишку, представляющего двоеточие 8. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуре.

фигура 2
Фигура 2.   Размер зависит от парацеллюлярная транспорт FITC-декстран молекул, хотя эпителиальной слизистой контроля и DSS колит анимыLS. Кишечные мешочки были получены из двоеточия мышей DSS 10 дней в течении болезни. Sacs были загружены с 1 мг / мл раствора FD-4 (MW 4400 Da), FD-20 (МВт 20,000 Da) или FD-70 (70000 Да) и флюса ФИТЦ-декстрана проницаемости маркера была измерена более 120 мин. Возраст подобраны здоровые животные были использованы в качестве контрольных. N = 5, 2 технических дубликатов на N. ** р <0,01, т-тест Стьюдента. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуре.

Рисунок 3
Рисунок 3 :. Влияние слизисто-гель слоя на целостность барьера к гидрофобных соединений. Кишечные мешочки были получены из двоеточием мышей DSS 10 дней в течении болезни. Возраст подобраны здоровые животные были использованы в качестве контрольных. Для отрицательного контроля слизисто-гель, кишечникбыли загружены 10 мМ N-ацетилцистеин (NAC) (300 мкл объем за 5 см кишечника) и инкубировали при 37 ° C в течение 15 мин и продувают свежей средой, прежде чем были получены мешочки. Sacs были загружены 1 мг / мл раствора FD-4 (MW 4400 Да) и флюса, измеренной над 120 мин. N = 3, 2 технических дубликатов на Н. * р <0,05, ** р <0,01, т-тест Стьюдента. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуре.

Рисунок 4
Фигура 4. Региональный проницаемость кишечника в FD-4 в мышиных моделях воспаления кишечника. Кишечные мешочки были получены из тощей, подвздошной кишке или ободочной кишке здоровых животных, DSS животных или антибиотик-индуцированного дисбиоза (AID) животных. Sacs были загружены с 1 мг / мл раствора FD-4 (MW 4400 Da) и елк измеряется по 120 мин. N = 3, 2 технических дубликатов на Н. * р <0,05, ** р <0,01, т-тест Стьюдента. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуре.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Здесь мы подробно выделение и подготовку кишечника мешочков для оценки слизистой барьерную функцию Экс Vivo. Кишечные препараты SAC уже в основном были использованы в фармацевтических исследованиях, изучая поглощение кандидатов наркотиков через кишечник. Тем не менее, этот анализ в равной степени хорошо подходит для изучения кишечных заболеваний. Кишечная проницаемость может существенно варьироваться в зависимости от региона и сайт-специфической оценки проницаемости позволяет лучше понять регионального значения целостности слизистой желудочно-кишечного заболевания. Анализ является надежной и под правильным физиологических условиях, изолированные ткани остаются жизнеспособными до 6 ч после вскрытия. После эвтаназии, скорость препарата ткани является важным и кишечник следует промывать его содержание и переданы кислородом среде настолько быстро, насколько это возможно. Для того, чтобы обеспечить согласованность между животными, важно, что правильные регионы кишечные являются Опознавательнаяред (Рисунок 1). Он сообщил, что толстой и подвздошной сегменты отсчитываются от слепой кишки, в то время как сегменты двенадцатиперстной кишки и тощей кишки измеряются из желудка. Поскольку различные штаммы, модели или трансгенные животные могут быть больше, и имеют более длинные Gits, стоит характеризующий среднюю длину или каждый кишечного сегмента в модели, прежде чем вступать в проницаемостью анализов.

В дополнение к региональной консистенции, важно, чтобы гарантировать, что каждый кишечного мешка обрезают до одинаковой длины и мешок наполнен правильной объема жидкости. Несоответствие в этих факторов приведут к неравной растяжение слизистой между анализами. Под-вздутие кишечного сегмента не только уменьшает воздействие из просвета содержанию к поверхности слизистой оболочки, но также увеличивает толщину ткани, через которую маркер должен перемещаться. Чрезмерная живота сегмента может привести к повреждению ткани или активировать стресс-ответов в ткани, потенциально сотрудничестваnfounding результаты. Следует отметить, что для расчета P приложение не учитывает площадь поверхности ворсинок структуры. Хотя это приводит к ошибке в расчете фактического кажущуюся проницаемость ткани, она не влияет на результаты сравнительных между моделями, а площадь поверхности рассчитывается как константа. Любые изменения в площади поверхности за счет болезни компенсируются потери эпителиального целостности и протокол является достаточно устойчивой, чтобы идентифицировать изменения в проницаемости с прогрессированием заболевания 6.

Рекомендуется использование тканевой культуральной среде. В исследованиях, выполненных Barthe соавт. Было обнаружено, что использование TC199, чтобы значительно увеличить долговечность эпителиальной ткани жизнеспособности и гистологического архитектуры, по сравнению с простой соли буферов 9. В наших исследованиях как DMEM и TC199 среднего поддерживали при 37 ° C при условии, оптимальные условия для выживания тканей 5,6,10. Картриджипоставляет эпителий с питательными веществами, необходимыми для поддержания целостности тканей, сохраняя температуру во время теста обеспечивает оптимальную метаболизм тканей, которые важно плотное Junctional целостность и анализов, включавших активный транспорт через трансцеллюлярного путей. Температуры ниже 37 ° C привести к потере жизнеспособности ткани, увеличивая парацеллюлярного транспорта и снижения трансцеллюлярного транспорта 11. Таким образом, увеличение жизнеспособности тканей с оптимальными условиями является существенным и при этом, анализ может быть использован не только для изучения региональной целостности барьера и, но также исследовать исследования мероприятий и физиологические и транскрипционные ответов.

Хотя в основном используется для исследований поглощения наркотиков, методы для изучения кажущуюся проницаемость (P APP) молекулы маркера через эпителиального барьера являются высокочувствительным измерение кишечной целостности 12-15. В отличие от суррогатной экс естественных MeasureMeНТС барьерной функции, такие как TEER, P приложение является прямым и высокочувствительного измерения кишечного барьера 4. Стоит отметить, что измерения Teer и проницаемость, измеренные по P приложение молекул-маркеров не всегда коррелируют. Измерения Teer охватывают сопротивление обоих плотных контактов и трансцеллюлярного параллельных резисторов 16. Поэтому ТЭЭУ является измерение объединенного сопротивления, оказываемого плотных контактов и самих клеток. Если клетка-клетка ассоциации слабые (то есть, плотные соединения являются негерметичных), этот вклад в общее сопротивление монослоя будет низким. Таким образом, малые изменения в труднодоступных соединительных сопротивлений для негерметичных эпителия становятся незначительные изменения в сопротивлений эпителия в целом. В противоположность этому, приложение анализы P измерить способность молекулы пересечь барьер слизистой 17 и действительно, чувствительность измерений P приложения, могут альубито через выборе различных размеров маркерных молекул (рисунок 1). Рассмотрение размера маркера важно по отношению к модели кишечных заболеваний изучаются. Модели аллергии или функционального заболевания 18,19, где потеря целостности является легкой до умеренной, может быть, больше подходит для маркеров более низким молекулярным весом, что позволит идентифицировать тонкие изменения в барьерной функции кишечника. В противоположность этому, с моделями, такими как ДСС колита, который включает уже не верится в кишечном эпителии, крупными маркерами могут быть более подходящими для оценки слизистой заживление, как будет выделен сравнительно небольшое увеличение целостности барьерной.

В то время как кишечные мешочки предлагаем физиологически соответствующую модель функции GI барьера, существуют некоторые ограничения по отношению к изменчивости животных моделях, которые должны быть рассмотрены. Например, секреторная государственной или эпителий может влиять как парацеллюлярного транспорта через INTESзубцы 20 и целостность слизистой слоя геля 5. В то время как бывшие естественных анализы, включающие электрофизиологических измерений, таких как камеры препаратов Ussing, может составлять это, кишечные мешочки нет. Во-вторых, при подготовке исследователей кишечные мешочки должны составлять лимфоидных структур, таких как пейеровы бляшки, в пределах мешка препаратов, так как они могут влиять на проницаемость ткани 21. Несмотря на эти соображения, в отличие от многих моделей клеточных культур, используемых для оценки целостность эпителия, кишечная мешочки предлагаем вклад как в слизистой слоя геля и подстилающей собственной пластинки. Вклад слизистой слоя геля, в частности, может быть оценена путем использования муколитических агентов, таких как N-ацетилцистеин, или гидрофобными молекулами меченых, например, дексаметазон 5,17. Это может быть особенно важным при оценке кишечной проницаемости в моделях терапии рака или воспалительного заболевания кишечника, шздесь потеря слизистого барьера может быть ранним патология в слизистой воспаления 22,23. Аналогичным образом, в моделях диарейных заболеваний, функциональных заболеваний желудочно-кишечного дисбактериоза или, кишечной слизи и общей целостности слизистой гель может быть изменена в региональных сайтах 5,19,24. Желудочный зонд маркеров проницаемости и последующего отбора проб сыворотки и другой вариант оценки кишечной проницаемости в естественных условиях. Хотя этот метод имеет минимальную манипуляцию ткани, она представляет собой композиционный мера барьерной функции кишечника и не оценивает региональные вклад в общий барьер. Различные модели болезни желудочно-кишечного могут иметь различные сайты относительной важности, которые не будут приходится на устные подходов зонд. Применение кишечных мешочках, поэтому быстрое, чувствительным и физиологически уместным анализа, которые могут быть использованы для изучения целостности региональной слизистой кишечника в небольших животных моделей болезни.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Dekantel  Non-absorbable Silk suture Braintree Scientific SUT-S 116
Media 199 (TC199)  Life Technologies 11043-023 No phenol red as this interferes with fluorescence
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) Life Technologies 21063-045 No phenol red as this interferes with fluorescence
N-acetylcysteine Sigma Aldrich Use at 10 mM in media
Small animal vascular cathether: Physiocath Data Sciences International 277-1-002
FITC-Dextran 4,400 MW Sigma Aldrich FD-4
FITC-Dextran 20,000 MW Sigma Aldrich FD-20
FITC-Dextran 70,000 MW Sigma Aldrich FD-70

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Goggins, B. J., Chaney, C., Radford-Smith, G. L., Horvat, J. C., Keely, S. Hypoxia and Integrin-Mediated Epithelial Restitution during Mucosal Inflammation. Frontiers in immunology. 4, 272 (2013).
  2. Otte, J. M., Kiehne, K., Herzig, K. H. Antimicrobial peptides in innate immunity of the human intestine. Journal of gastroenterology. 38, 717-726 (2003).
  3. Robinson, A., et al. Mucosal protection by hypoxia-inducible factor prolyl hydroxylase inhibition. Gastroenterology. 134, 145-155 (2008).
  4. Feighery, L., et al. Increased intestinal permeability in rats subjected to traumatic frontal lobe percussion brain injury. The Journal of trauma. 64, 131-137 (2008).
  5. Keely, S., et al. Chloride-led disruption of the intestinal mucous layer impedes Salmonella invasion: evidence for an 'enteric tear' mechanism. Cellular physiology and biochemistry : international journal of experimental cellular physiology, biochemistry, and pharmacology. 28, 743-752 (2011).
  6. Keely, S., et al. Contribution of epithelial innate immunity to systemic protection afforded by prolyl hydroxylase inhibition in murine colitis. Mucosal immunology. 7, 114-123 (2014).
  7. Sourisseau, T., et al. Regulation of PCNA and cyclin D1 expression and epithelial morphogenesis by the ZO-1-regulated transcription factor ZONAB/DbpA. Mol Cell Biol. 26, 2387-2398 (2006).
  8. Ruehl-Fehlert, C., et al. Revised guides for organ sampling and trimming in rats and mice--part 1. Exp Toxicol Pathol. 55, 91-106 (2003).
  9. Barthe, L., Woodley, J. F., Kenworthy, S., Houin, G. An improved everted gut sac as a simple and accurate technique to measure paracellular transport across the small intestine. European journal of drug metabolism and pharmacokinetics. 23, 313-323 (1998).
  10. Marks, E., et al. Oral Delivery of Prolyl Hydroxylase Inhibitor: AKB-4924 Promotes Localized Mucosal Healing in a Mouse Model of Colitis. Inflammatory bowel diseases. 21, 267-275 (2015).
  11. Keely, S., et al. Hypoxia-inducible factor-dependent regulation of platelet-activating factor receptor as a route for gram-positive bacterial translocation across epithelia. Mol Biol Cell. 21, 538-546 (2010).
  12. Brayden, D. J., Bzik, V. A., Lewis, A. L., Illum, L. CriticalSorb promotes permeation of flux markers across isolated rat intestinal mucosae and Caco-2 monolayers. Pharmaceutical research. 29, 2543-2554 (2012).
  13. Hubbard, D., Ghandehari, H., Brayden, D. J. Transepithelial transport of PAMAM dendrimers across isolated rat jejunal mucosae in ussing chambers. Biomacromolecules. 15, 2889-2895 (2014).
  14. Keely, S., et al. In vitro and ex vivo intestinal tissue models to measure mucoadhesion of poly (methacrylate) and N-trimethylated chitosan polymers. Pharmaceutical research. 22, 38-49 (2005).
  15. Maher, S., et al. Evaluation of intestinal absorption enhancement and local mucosal toxicity of two promoters. I. Studies in isolated rat and human colonic mucosae. European journal of pharmaceutical sciences : official journal of the European Federation for Pharmaceutical Sciences. 38, 291-300 (2009).
  16. Balda, M. S., et al. Functional dissociation of paracellular permeability and transepithelial electrical resistance and disruption of the apical-basolateral intramembrane diffusion barrier by expression of a mutant tight junction membrane protein. The Journal of cell biology. 134, 1031-1049 (1996).
  17. Behrens, I., Stenberg, P., Artursson, P., Kissel, T. Transport of lipophilic drug molecules in a new mucus-secreting cell culture model based on HT29-MTX cells. Pharmaceutical research. 18, 1138-1145 (2001).
  18. Stefka, A. T., et al. Commensal bacteria protect against food allergen sensitization. Proc Natl Acad Sci U S A. 111, 13145-13150 (2014).
  19. Keely, S., et al. Activated fluid transport regulates bacterial-epithelial interactions and significantly shifts the murine colonic microbiome. Gut microbes. 3, 250-260 (2012).
  20. Barrett, K. E., Keely, S. J. Chloride secretion by the intestinal epithelium: molecular basis and regulatory aspects. Annual review of physiology. 62, 535-572 (2000).
  21. Soni, J., et al. Rat, ovine and bovine Peyer's patches mounted in horizontal diffusion chambers display sampling function. Journal of controlled release : official journal of the Controlled Release Society. 115, 68-77 (2006).
  22. Justino, P. F., et al. Regulatory role of Lactobacillus acidophilus on inflammation and gastric dysmotility in intestinal mucositis induced by 5-fluorouracil in mice. Cancer chemotherapy and pharmacology. (2015).
  23. Tran, C. D., Sundar, S., Howarth, G. S. Dietary zinc supplementation and methotrexate-induced small intestinal mucositis in metallothionein-knockout and wild-type mice. Cancer biology & therapy. 8, 1662-1667 (2009).
  24. Musch, M. W., Wang, Y., Claud, E. C., Chang, E. B. Lubiprostone decreases mouse colonic inner mucus layer thickness and alters intestinal microbiota. Digestive diseases and sciences. 58, 668-677 (2013).
<em>Экс Vivo</em> Кишечные Sacs для оценки слизистой проницаемости в моделях желудочно-кишечные заболевания
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Mateer, S. W., Cardona, J., Marks, E., Goggin, B. J., Hua, S., Keely, S. Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease. J. Vis. Exp. (108), e53250, doi:10.3791/53250 (2016).More

Mateer, S. W., Cardona, J., Marks, E., Goggin, B. J., Hua, S., Keely, S. Ex Vivo Intestinal Sacs to Assess Mucosal Permeability in Models of Gastrointestinal Disease. J. Vis. Exp. (108), e53250, doi:10.3791/53250 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter