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Bioengineering

微生物学的に誘導された方解石沈殿がによって媒介されます Published: April 16, 2016 doi: 10.3791/53253

Abstract

ここでは、調査中の特定の細菌(S.のパステウリイは )当然、酵素ウレアーゼの分泌を通して環境を発生中の尿素(尿素分解)の加水分解を誘導するために、適切な条件の下で、その能力において独特です。尿素分解のこのプロセスは、化学反応の連鎖を介して、炭酸カルシウムの沈殿物の形成をもたらします。これは、微生物学誘起方解石沈殿(MICP)として知られています。 MICPのための適切な培養プロトコルはここに詳述されています。最後に、顕微鏡の異なるモードの下で可視化実験は、沈殿プロセスの様々な側面を理解するために行きました。光学顕微鏡、走査電子顕微鏡(SEM)及びX線光電子分光法(XPS)のような技術は、化学的に最終生成物を特徴付けるために使用しました。また、自然の多孔質媒体の内部で毛穴を詰まらせるために、これらの析出物の能力はどこスポンジ定性実験により実証されましたバーは、長さスケールの範囲の細孔のネットワークを模倣するために使用しました。細菌細胞を含む培地に浸したスポンジバーが原因で化学沈殿を連続的プロセスから生じる、その細孔の目詰まりに硬化します。硬化バーは少し変形と同じ重量を支持することが可能であるが、適用される外部荷重の作用下で圧縮され、搾りなり制御スポンジバーと比較した場合、この硬化スポンジバーは、優れた強度を示します。

Introduction

スポロサルシナパステウリイは高アルカリ性環境(pH約10)1で生き残ることができるグラム陽性細菌であると(MICP)2-4微生物学誘起方解石の沈殿と呼ばれる現象の原因物質になることができる細菌種の一つです。 MICPは、炭酸カルシウムの沈殿は、適切な環境条件下で特定の微生物により誘発される方法である。S.パステウリイが原因特定の条件下でMICPの重要なボリュームを誘導するための可能な剤 ​​としての同定に近年の重要性を想定しています。この可能性は事実Sから茎パステウリイは、酵素ウレアーゼの大量を分泌するためのユニークな能力を持っています。この酵素は、水分子の存在下での尿素の加速溶解(広範かつ豊富な供給と天然に存在する生化学的化合物)を促進する、触媒として作用します。反応のカスケード、このプロセス究極を通じて、LY負に帯電した炭酸イオンの生成につながります。これらのイオンは、次いで、最終的に炭酸カルシウム(カルサイト)の沈殿物を形成するために、カルシウムのような正の金属イオンと反応します。したがって、ラベルMICP 5-9。

MICPのプロセスは、数十年10,11のために知られ、研究されています。過去数年間、MICPは、エンジニアリングとボトムアップのグリーン建設12、大規模な構造物13,14と炭素隔離およびストレージ15,16の強化を含む環境用途の広い範囲のために検討されています。

例えば、Cunnigham 17ら。アルはベリア砂岩コアを含む高圧中温流反応器を設計しました。リアクターは、細菌S.を接種しましたfridgidimarina高圧の超臨界二酸化炭素の注入、細孔体積内部のバイオマスの大規模な蓄積の条件下リュームは、透過性の95%以上の減少につながった、観察されました。 JonkersとSchlangen 18は、コンクリート中の自己治癒過程上の細菌の特定の特殊株の効果を検討しました。表面の孔を通って入る細孔ネットワーク内に輸送外部水が順番にMICPを経由して構造強度を助ける休眠バクテリアを活性化することが期待されています。トープラー19ら。 S.の尿素分解活性を比較しました大規模MCIPに有利な条件の下で先住民族の地下水の尿素分解縮図でパステウリイとことがわかったS.パステウリイは、先住民コミュニティの前ウレアーゼ活性を欠いていた場合でも、方解石沈殿を改善するための一貫性のある機能があります。モーテンセン20 et.al土壌タイプ、塩化アンモニウム、塩分濃度、酸素濃度とMICPの細胞の溶解の濃度などの外部因子の影響を研究しました。生物処理工程がRESPと非常に堅牢であり、彼らのデモ電気ショック療法パラメータ空間における幅広いバリエーションには行われている細菌を強化するための適切な濃縮プロセスを提供し、様々な大規模な修復アプリケーションのためのこのプロセスの適合性を実証します。フィリップス21ら。アルは、Sを注射された後、砂の列と砂岩コアの透磁率と強度の変化を研究するための実験を設計しましたパステウリイ文化。破壊強度が3倍に増加した4回 - 彼らは、透磁率が2に減少したことがわかりました。

S.のパステウリイとMICPにおけるその役割は、活発な研究のトピックであり、化学的析出のメカニズムに関するいくつかの問題はまだ完全には理解されていません。この観点では、Sの正確文化適当に濃縮された株式に一貫性のある標準化されたプロトコルのセットを持っていることは非常に重要ですMICPを達成するためにパステウリイ 。ここでは、再現性と再現性を確保する厳密なプロトコルの概要を説明します。このミリアンペアnuscriptはSを培養するための詳細なプロトコルを記述するパステウリイと適当に沈殿を誘導するために培養液を濃縮します。プロセスは、光学および走査電子顕微鏡(SEM)及びX線光電子分光法(XPS)などの様々な顕微鏡技術によって調べました。原稿の焦点は、MICPのプロセスです。 SEMおよびSIMSのような手順は、十分に確立された標準プロトコルであり、個別に記載されていません。

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Protocol

注:以下で説明するために、実験プロトコルを実行します。細菌培養プロトコルは第1節で議論されている(また、 図1を参照)。第2節では、外部添加剤を用いて培地を濃縮するためのプロトコルについて説明します。第3節では、マルチモード顕微鏡のためのプロトコルについて説明します。すべての個々の成分の重量は、化学天秤を用いて測定することができます。各溶液の体積は、体積シリンダーを用いて測定することができます。

注: - 詳細については、制度的安全事務所に相談してください。2.適切なバイオセーフティプロトコルは、セクション1のために従わなければなりません。

1.細菌培養

  1. 培養細菌-寒天はミディアム準備をプレート
    1. このようなペトリ皿、フラスコなどの機器や食材を組み立て、Tris塩基、塩酸、寒天、ミリポア水、pHメーターetc.Sterilize使用前に121℃でオートクレーブ処理することによってすべてのコンテナ。
    2. 0.1の1 Lを用意ミリポア水1Lで15.75グラムトリスベースを混合することによって、トリスバッファーの3 M水溶液。原液(pH 10.4)のpHレベルを低下させることのHCl 2,800μL(50%濃度)を加えます。でpH = 9を設定するには、pHメーターを使用して継続的に確認してください。
    3. 次のように二つの部分に1Lの緩衝液を分けます。
      1. この溶液800mlを取ります。 400ミリリットルずつの2つの部分に均等にそれを分割します。他の解決策8 G(NH 4)2 SO 4いずれかの解決策および16グラムの酵母抽出物を溶解します。
      2. ソリューション残り(の200ミリリットル)に乗り、100ミリリットルずつの2つの部分に再びそれを分けます。 2グラム(NH 4)2 SO 4 1にミックス。他に4グラムの酵母エキス4gの寒天を追加します。
    4. Al箔にそれぞれのフラスコを包み、オートクレーブテープを貼付した後に、別途4ソリューションをオートクレーブ。
      注:卓上オートクレーブ装置が使用される場合、体積を500ml(温度と圧力のオートに設定されるべきです的には)ボリュームの関数として指定されています。
    5. オートクレーブからそれらを取り出した後、ステップ1.3.1(以下)のために取って2 400ミリリットルのソリューションを設定します。 200ミリリットルのソリューションを持っているために、2つの100ミリリットルの溶液を混合。 12ペトリ皿 - 10に混合物を注ぎます。
  2. 培養細菌-寒天平板試料の調製
    1. 冷凍庫(-80℃)から細菌株を取り外し、それを解凍することができます。適切に解凍した後、細菌株およびバイオセーフティーフードの内側に寒天プレートを配置します。
    2. スポロサルシナパステウリイ株式で先端に寄生する- (10μlの良い選択である0.5)が利用可能な最小寸法のマイクロピペットを選択します。ストリークマイクロピペットチップと寒天プレート。 48時間31℃で非振盪インキュベーター内部に画線寒天プレートを置きます。
    3. 48時間後、インキュベーターからプレートを取り外し、視覚的に単一コロニーの有無を調べます。単一のコロニーが存在しない場合には、Tに配置彼は別の24時間インキュベーター。
    4. 単一コロニーが検出されるまで、このプロセスを繰り返します。試験の7日を超えないようにしてください。
      注:単一のコロニーがあっても一週間後に表示されない場合、手順が適切に守られておらず、全体のプロセスは、ステップ1から繰り返されなければならないと結論されます。
  3. 培養細菌-最終的なサンプル調製
    1. 2 400ミリリットルのソリューション(トリス緩衝液+(NH 4)2 SO 4およびトリス緩衝液+酵母エキス(1.5.1)を一緒に800ミリリットルの溶液を得るために混ぜる。フラスコに、このソリューションの125ミリリットルを転送します。
    2. 単一コロニーの高濃度の領域を同定するために、寒天プレートの表面の目視検査を行います。静かにナッジおよびマイクロピペットチップを用いてコロニーの一つを破ります。
    3. 125ミリリットルのフラスコに、同じマイクロピペットチップを浸しや転属堅牢な乗算のための細胞の十分な数を確保するために徹底的にそれをかき混ぜます。 3日 - 2、150 rpmで、30℃の振盪インキュベーター中でフラスコを置きます。 2後 - 3日間、インキュベーターからフラスコを取り外します。
  4. 培養細菌-最終セル数
    1. 可算単一コロニーが現れる保証するために、少なくとも10百万円(10 -7)の希釈を達成するために、PBSを用いて、非希釈した培養液の連続希釈を行います。寒天プレートの1に7並列等距離線を描画します。
      1. 上から見えるようにするのに十分な著名なシャーレの底面に太い線を描画することでこれを行います。 1セグメントに非希釈液の3小さな滴をドロップします。 1:10希釈液を得るために、リン酸緩衝生理食塩水(PBS)の9ミリリットルに非希釈液の1ミリリットルを追加します。
    2. ピペットでこの新しく希釈液の少量(〜0.1ミリリットル)を取り、次のセグメントに3以上の小滴をドロップします。して、新しいフラスコに新たに希釈した溶液を移し、さらに希釈した10倍(10倍)PBSを加えます。これは10 -2または1に希釈をダウンさせます:100。
      1. 次のセグメントに100解決策:この1を使用します。千のすべての方法:連続して新しいフラスコに転送し、連続して10 -3または1からますます希薄サンプルを得るためにPBSと並行して10倍(10倍)を希釈することによって、彼は新しく希釈したソリューションの小容量で処理これを繰り返します最後のセグメントへのダウンに10 -7または1:10百万円となりました。
    3. 31℃で2日間 - 1、プレートをインキュベートした後、寒天プレートに存在する細胞の数をカウントする単位(CFU)のプレートカウントコロニー - 形成行います。これにより、希釈せず、試料中の細菌数の定量的な尺度を与えます。
      注:CFU値は、すべてのコロニーを分離した単一の生存可能な微生物細胞によって設立されていると仮定した栄養培地、温度、および時間の特定の条件下でコロニーを生じさせるためのシステムの能力に基づいて測定されます。
    4. シール将来の使用のために冷蔵庫内のアイテムを残りの自己封止膜と店舗とのペトリ皿。

沈殿を加速するための栄養の充実2.プロトコル

  1. 転送いくつかの滅菌遠心チューブに調製した培養液(細胞+培地)の9ミリリットル、10ミリリットルボリュームの各。
  2. 尿素:2グラム/ L、塩化アンモニウム:1グラム/ L、重炭酸ナトリウム:212 mg / Lで、塩化カルシウム:280 mgの新鮮な培地中で以下の濃度で4成分からなる外部濃縮100mlの原液を準備/ L。慎重に分析天秤を使用してすべての成分を測定し、オートクレーブ(121℃、15 PSI、15分)でビーカーや場所に新鮮な培地とすべてが、尿素を混ぜます。
    1. オートクレーブ後、新鮮な培地1mlと尿素の必要量(2 mg)を混合し、濃縮のプロセスを完了するために0.22μmのシリンジフィルターを装着したシリンジを通過します。
    2. 1を追加します。準備された培養液(細胞+培地)の9ミリリットルを含む滅菌遠心分離管に添加剤と、この濃縮培地1ml(ステップ2.1参照)。
      注:すべてのこれらの成分のうち、高温で分解性である尿素は、オートクレーブ滅菌することはできません。他の成分がオートクレーブ処理された後したがって、(121℃、15 PSI、15分)、尿素を0.22μmシリンジフィルターを介して最後に追加されます。
  3. 機械ボルテクサーを用いて徹底的に各チューブをボルテックス。 30℃で非振盪インキュベーターに富む液体(細胞+培地+添加物)を配置します。降水の開始のために、定期的にすべてのユニットを監視します。降水の開始は肉眼で検出された後、光学顕微鏡を用いて、顕微鏡観察を始めます。実験の開始後36時間 - これは通常、30の間です。

マルチモード顕微鏡3.プロトコル

  1. 高マニフィカへの流体の少量(約1 ml)を転送します明視野モードで初期観測を行うためのイオン顕微鏡のチャンバーカバーガラスシステム。まず、最も低い倍率(4倍)を持つすべての観測を開始します。その析出物の分布についてのカバレッジの広い面積、ひいてはグローバルな情報を提供しています。
  2. 析出物のかなりのボリュームで特定の領域を選択し、漸進的に倍率を増加させることにより(20X、40X、60X)にズームします。
    注:それは正しく明視野下で細胞外高分子物質(EPS)から細胞を解決することは不可能ですので(これは非常に近い屈折率)に、必要に応じて位相コントラストモードに切り替えます。このモードでは、細胞膜のちょうど輪郭(バルクセルとは異なる位相であるが)、したがって、視覚的区別を可能にする、表示されています。
  3. 最後に、赤で死んコンポーネントを着色しながら、選択的に緑などのライブのコンポーネントを染めるライブ/デッド染色でいくつかの部屋を染色します。標準プロトコル28を参照してください</ SUP>。
  4. 適切に赤と緑の領域を区別するために、蛍光モードに切り替えます。レッド(540の励起波長とレッドフィルターキューブ - の660nm - 580nmで、600の595 nmおよびバリアフィルタのダイクロイックミラー) - 480nmでのダイクロイックミラー440の励起波長を持つとグリーン(GFPロングパスグリーンフィルターキューブ505 nmおよび510 nmでのバリアフィルタ)フィルタキューブは、蛍光顕微鏡写真を容易にするために使用されます。
  5. 一旦全てのマルチモード・データは、可能な限り最高のコントラストと明瞭さを得るために、最高の画像や手動でオーバーレイ(個々の明視野、位相コントラストおよび蛍光画像)を選択し、収集されました。
  6. 結晶構造を理解するために乾燥した固体試料のSEMを実行します。これは、十分に確立された標準手順である。22は、官能基(炭酸塩)の化学署名を識別するためのXPSを実行します。これは、同様に、十分に確立され、標準的な手順である。23

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Representative Results

S.は、好アルカリ菌24は、比較的過酷な条件に耐えることができているパステウリイ 。上記培養プロトコルが続く場合、およびS.パステウリイは、細菌が時間( 図2A)上の炭酸カルシウムの沈殿につながる、チャンバ内に成長させる。 図2(b)は、培地中で細菌細胞集団の位相差光学顕微鏡像を示します。個々の細胞は、非常に明白な細菌の菌クラスの特性棒状の形で、明確に区別することができます。小さな茶色の矢印は、特に二つの個別のセルを強調表示するために使用されています。炭酸カルシウムの沈殿は、数日間にわたって行われます。 図2Aは、析出物が遠心管の底に落ち着く方法を示しています。これは鮮やかで、液体媒体の下に座って白っぽい粉末として肉眼で見ることができます黄色がかった液体とは対照的に、色のシャープなコントラスト。黄色がかった液体がそれらの培養培地中に懸濁した細菌が含まれています。白い沈殿物を収集し、乾燥させ、後にSEM( 図2C)を使用して画像化しました。

図3A、明確に定義された切断線、結晶の特徴では、容易に識別することができる。 図3Bは、特徴付けのために、同じサンプルについてXPSグラフを示しています。カーボネート基のピンポイントに炭酸カルシウムの有無を対応するピーク。このように、 図3AおよびBは、一緒決定的に沈殿した化学物質として方解石の生成を証明します。

定性実験は、多孔質媒体の特性を変更するMICPの能力を評価するために行きました。この目的のために、我々は、多孔性を模倣することが期待されるスポンジを伴う実験を行いました細孔構造の長さスケールの範囲の媒体としては、代表的な天然の構造に見られます。スポンジバー(ミスタークリーン、P&G)は、Sの溶液に浸漬し、 7日間パステウリイし、次いで乾燥させました。 MICPプロセスに長時間露光後のスポンジは、硬化および圧縮強度を高めて表示します。これは、 図4に示されている1kgの体重( 図4A - B)にさらされたとき、スポンジは、浸漬(制御ケース)の前に、かなりの圧縮を示しました。一方、Sの浸漬に供された後パステウリイソリューション、それが結果として得られる方解石沈殿による目詰まり細孔を負いました。これは、細孔空間のブリッジングに起因する強度の大幅な増加につながったし、その後大幅な圧縮( 図4C - D)させることなく1キロの負荷をサポートするためにバーを有効に。

半定量的なアイデア硬化プロセスに関するロードされたバーのたわみ高さの測定によって得ることができます。オリジナルのスポンジのサンプル4.5センチ、高さの長方形のバーです。対照試料のたわみは、非常に負荷の作用点の近くに、約1.6 cmです。処理された試料の場合には、たわみを0.6 cmの減少します。硬化プロセスの更なる厳格な定量も可能です。例えば、剪断強度、ピーク偏差応力とダイラタンシー角の増大の点で、このプロセスのメカニズムの説明はTagliaferri氏25らによって提案されています。 X線撮影およびデジタル画像相関を介しら。

図1
図1. アルゴリズムの概略図として表さ全培養プロトコルの概要。、トリス緩衝液および寒天液で起動するにはpoureですペトリ皿中のd。寒天プレートの準備ができたら、それは細菌がはびこって先端に画線されます。画線プレートは、単一のコロニーを成長させるためにインキュベートされます。単一コロニーの一つは、メディアフラスコに移し、再びインキュベートする。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。

図2
図2. 細胞および析出物 (A)、観察化学沈殿をクリアするには、遠心分離管のリード内部に閉じ込め培地(5後- 7日)のセル底に落ち着くと肉眼で見えるようになります。 (B)位相コントラストの下で見た表面上に固定化された細菌の人口。個々のロッド状細胞(細菌、標識されたSpが)はっきり見ることができます(矢印で強調表示され、それらのカップル)。 (C)細胞(SP)と結晶(CC)の両方を示す白色沈殿物のSEM像。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。

図3
図3. 結晶とそのキャラクタリゼーション。乾燥した沈殿物の(A)走査型電子顕微鏡像。個々の結晶と関連する切断線がはっきりと見えます。化学沈殿物の(B)X線光電子分光法(XPS)グラフ。官能基は、カルサイトの存在の可能性を強化炭酸に対応する質量分析ピーク。 viにはこちらをクリックしてくださいこの図の拡大版をEW。

図4
図4. プロトタイプ多孔質媒体であるスポンジバーで半定量的実験。(A)(B)は、浸漬していない新鮮なドライサンプルです。 (C)及び(D)は、培地と細胞の溶液中に浸しウェットサンプルです。それら起因一定重量の作用の下でここに減少圧縮から見た方解石沈殿から生じる細孔の目詰まりを材料耐性の有意な増加を示します。未処理試料は自然に多孔質であり、1キロの重量を受けたときに、ボリュームの大幅な減少を被ります。細孔のサイズは全体的な減少につながる、空気との契約を絞り出します。一方、処理された試料は、人工的に細孔の目詰まりによって剛性のかなりの量を得ています。それは快適に任意の圧縮せずに同じ負荷をサポートしているときに強度の著しい向上を示している。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。

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Discussion

重要なステップ:この原稿を詳細にSの実行可能なサンプルを培養するためのプロトコルについて説明しますパステウリイ 。文化が用意されていたら、それは適切に濃縮されなければなりません。適切な化学的環境を提供するために、失敗は降水量の非常に長い時間スケールまたはその完全な欠如のいずれかにつながるので、これは実験の成功に不可欠の重要なステップである。S.パステウリイは、複数の外部機関に非常に敏感であり、生化学的な堅牢性と再現性を保証するために、ケアと高精度で培養する必要があります。濃縮の程度および投与量は現在、降水の化学的性質を決定することが知られているので、同様に正確に制御しなければなりません。

修正/トラブルシューティング:いくつかの態様は、エンド結果にはほとんど差異で修正することができます。プレートカウントは番目あたり(連続希釈上述の手法ごとに実行される必要はありません電子マイルMisraの方法)。ここで、連続希釈は、その底面に描かれたコードによって、7つの領域に分割して、単一の寒天プレート上で行われています。これは必須ではありません。また、拡散板を調製することにより、特定の希釈全体寒天プレートを使用するのが一般的です。最終的な計算のために選択される - 連続希釈は、連続する拡散板の一連の単一コロニー(200 20)の可算数のいずれかが行われます。種々の他の細胞計数技術のいずれも、ここで適用することができます。顕微鏡がよく、簡単なカバースリップまたはスライドを用いて行うことができます。室内ユニットは、すべての必須ではありません。

時には、細菌は、沈殿物を形成するために失敗することがあります。第一の液体培地に凍結培養物の少量を転送するために有用です。成長は最初の液体中に発生した後ストリーキングを行ってもよいです。

制限事項:これはNUと遅い技術であり、ステップ、別のにつながる1のmber。全ての工程で汚染、交差汚染や他の文化的欠陥の重要なチャンスがあります。インテンスケアは常に維持されなければなりません。沈殿物の約180 mgの培養液1ml当たりに形成されます。

意義は、本プロトコルは、必要なすべてのステップを確実にするために詳細に概説している細菌S.の文化パステウリイ忠実に外部から添加された濃縮度の影響下方解石を沈殿させます。この菌自体の文化が十分に確立されたプロトコルであるが、濃縮および定量化のプロセス全体ではありません。この問題は、ここで対処されてきました。

将来のアプリケーション:適切に順番に析出物の性質に応じて様々なアプリケーションを設計することができることを別の方法で沈殿させ、この細菌を調節することが可能かもしれません。これは、前述したことがありますS.を伴うMICPに関して、いくつかの未知の存在パステウリイ 。これらの未知数のいくつかは、Sの凝集ダイナミクスの役割を含みますMICPプロセスでパステウリイ 、このような多孔質媒体と流体の流れの効果として、マイクロスケールの環境26,27の役割。標準化されたプロトコルは、適切なマルチモード顕微鏡法を実行するための明確な機会を高速沈殿を確実に開発することができます。

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
Petridish Fisher Scientific FB0875712 Petridishes being used as Agar plate
Pyrex Flasks Fisher Scientific S63268 Corning Erlenmeyer
Tris-Base Promega H5133 being used to make Tris-Buffer
Hydrochloric Acid Sigma-Aldrich H9892 1.0 N, Bioreagent, suitable for cell culture
Agar Powder Sigma-Aldrich A1296 microbiology tested, plant cell culture tested, cell culture tested, powder
Ammonium Sulphate Sigma-Aldrich A4418 for Molecular Biology
Yeast extract powder Sigma-Aldrich 51475
Measuring Cylinder Cole-Parmer CP08559GC Cole-Parmer Class A Graduated Cylinder w/Cal Cert,TC; 1,000 ml,1/Pk
Analytical Balance OHAUS AX124E being used to measure weight of reagents
Autoclave Brinkmann 58619000
Autoclave Tape VWR 52428864
Aluminum Foil Sigma-Aldrich Z185140 being used to seal the flask before placing it in Autoclave
Bacterial Stock Cedarlane 11859 -80 °C stock of S. pasteurii, ATCC No. is mentioned against Cat. No.
Mline Single-Channel Mechanical Pipettors, Variable Volume Biohit 725010 Marketed by VWR under catalog number 14005976
Micropipette Tip Fisher Scientific 212772B Used for scratching Agar plates
Incubator Binder 80079098 Microbiology Incubator,BF Series
Shaking Incubator VWR 14004300 VWR Signature Benchtop Shaking Incubators
Phosphate Buffer Saline (PBS)  Sigma-Aldrich P7059
BD Falcon Express Pipet-Aid Pipetting Device BD Biosciences 357590 Marketed by VWR under catalog number 53106220
Parafilm Sigma-Aldrich P7793 Being used to seal Agar plates
Urea Sigma-Aldrich U1250 Enrichment for nutrient medium
Sodium Bicarbonate Sigma-Aldrich S8875 Enrichment for nutrient medium
Calcium chloride Sigma-Aldrich C1016 Enrichment for nutrient medium

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References

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バイオエンジニアリング、問題110、微生物学誘起方解石沈殿、
微生物学的に誘導された方解石沈殿がによって媒介されます<em&gt;スポロサルシナパステウリイ</em
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Bhaduri, S., Debnath, N., Mitra, S., More

Bhaduri, S., Debnath, N., Mitra, S., Liu, Y., Kumar, A. Microbiologically Induced Calcite Precipitation Mediated by Sporosarcina pasteurii. J. Vis. Exp. (110), e53253, doi:10.3791/53253 (2016).

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