Abstract
Herhaalde bloedafname is een van de meest gebruikte technieken uitgevoerd op laboratoriumdieren. Echter, een niet-dodelijke protocol voor bloedafname uit zebravis niet vastgesteld. De vorige methoden voor bloedafname uit zebravis zijn dodelijk, zoals laterale incisie, onthoofding en de staart ablatie. Zo hebben we een nieuwe "herhaalde" bloedafname methode een gedetailleerd protocol waarin deze procedure ontwikkeld, en hier aanwezig. Deze methode is minimaal invasief en resulteert in een zeer lage mortaliteit (2,3%) voor zebravis, waardoor herhaalde bloedmonsters van hetzelfde individu. Het maximale volume bloedafname is afhankelijk van het lichaamsgewicht van de vis. Het volume voor herhaalde bloedafname tussenpozen moet ≤0.4% lichaamsgewicht per week of ≤1% per 2 weken, die werden geëvalueerd door meting van hemoglobine zijn. Bovendien, hemoglobine, nuchtere bloedglucose, plasma triacylglycerol (TG) en totaal cholesterol niveaus in mannelijke en vrouwelijke volwassen zebravissen werden gemeten. We pasten deze methode ook de ontregeling van het glucosemetabolisme in dieet-geïnduceerde obesitas onderzoeken. Deze bloedafname methode vele toepassingen, waaronder glucose en lipidemetabolisme en hematologische onderzoeken, die het gebruik van zebravis zal toenemen menselijke ziekte modelorganisme toestaan.
Introduction
Zebravis winnen steeds populairder als een waardevol model van menselijke ziekten vanwege hun organen en genetica zijn vergelijkbaar met die van mensen 1,2. Op het gebied van de ontwikkelingsbiologie, hebben vele studies aangetoond dat de zebravis en de mens vertonen gemarkeerd gelijkenis in hematopoiesis 3, hemostase 4,5 en myelopoiese 6. Volwassen zebravissen worden ook gebruikt voor het bestuderen immunologische 7, neurodegeneratieve 8 en obesitas gerelateerde ziekten 9 omdat modelorganisme kent gemeenschappelijke pathways met die verstoord menselijke ziekten. Voor overgewicht en obesitas gerelateerde ziekten (diabetes, leververvetting en niet-alcoholische steatohepatitis en atherosclerose), zebravis bloedglucose en lipiden niveaus grondig zijn onderzocht in verschillende transgene en dieet-geïnduceerde zwaarlijvigheid modellen 10-13.
Herhaalde bloed bemonstering van individuele dieren zullen gebruik en december dier te verminderenrease interindividuele verschillen. Echter, herhaalde monstername in kleine dieren zoals zebravis technisch moeilijk vanwege hun relatief kleine bloedvolume en het gebrek aan gemakkelijk toegankelijke vaartuigen. Verschillende werkwijzen voor eenmalige bloedafname van zebravis ontwikkeld, alhoewel deze methoden hebben hun eigen nadelen, zoals dodelijkheid, geassocieerde weefselbeschadiging en beperkte bloedvolume. Zo kan 1-5 gl bloed worden geoogst uit een laterale incisie van ongeveer 0,3 cm in lengte in het gebied van de dorsale aorta 5. Onthoofding met een schaar door te snijden door de schoudergordel kan 5-10 ul bloed 10 te verzamelen. Een andere handige bloedafname methode is staart ablatie 14. Hartpunctie is één potentiële alternatieve methode voor herhaalde bloedafname van dezelfde vis, maar de zeer kleine hoeveelheid verkregen (ongeveer 50 nl) met deze procedure beperkt het aantal analyses die kan worden uitvoemed 11. Dienovereenkomstig is een nieuw protocol nodig om herhaaldelijk niet-dodelijke bloedmonsters, die een kritische vooruitgang nodig zou zijn voor dit organisme een standaard modelorganisme voor menselijke ziekten mogelijk. Deze techniek zou het mogelijk maken het testen van farmacologische respons, ontdekking van moleculaire biomarkers voor de diagnose, bepaling van prognose en het volgen van verschillende ziekten, zoals stofwisselingsziekten, degeneratieve ziekten en verschillende soorten tumoren.
We daarom een minimaal invasieve werkwijze voor het verkrijgen van bloed uit zebravis serie 15. Hier laten we de procedure visueel en een gedetailleerd protocol voor deze techniek. Met behulp van deze methode, werden de normale waarde op basis van verschillende parameters, zoals hemoglobine, nuchtere bloedglucose en lipiden in het bloed van gezonde volwassen zebravissen geëvalueerd. Daarnaast hebben we ook onderzocht of deze methode geschikt is voor studies die seriële monsters per m nodigMonitoring van de temporele veranderingen in de bloedsuikerspiegel tijdens overvoeding experimenten.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle dierlijke procedures werden goedgekeurd door de ethische commissie van Mie University, en werden uitgevoerd volgens de Japanse dierenwelzijn regelgeving 'Wet op het Welzijn en beheer van Animals' (Ministerie van Milieu van Japan) en nageleefd internationale richtlijnen.
1. Voorbereiding van de naald
LET OP: Alle experimenten werden uitgevoerd onder verdoving, en alle inspanningen werden gedaan om het lijden te minimaliseren. Voor euthanasie, werden vis ondergedompeld in een ijs-waterbad (5 delen ijs / 1 deel water bij ≤4 ° C) gedurende ≥20 min.
- Bereid de glazen microcapillaire naalden door het trekken van een 1,0-mm-outer diameter glazen capillair met een naald trekker (Figuur 1A).
- Snijd de uiteinden van de naalden schuin behulp van fijne schaar (figuur 1B). De ideale tip diameter moet ongeveer 100-200 micrometer (figuur 1C). Als de tip diameter is te smal, zal het bloed niet de naald in te voeren.
- Los héparine in zoutoplossing tot een concentratie van 5 mg / ml.
- Plaats een voorgesneden naald in het neusstuk einde van een beluchtingsbuis assemblage en houd het mondstuk in de mond, of sluit de naald om een gloeilamp dispenser. Dompel de naald in de heparine-oplossing, en heparinize de naald door het zuigen en blazen door de oplossing (figuur 1D en 1E).
Opmerking: De aspirator buisstelsel wordt al zebravis sperma cryopreservatie 16. Lange rubberen buis kan elke bloed vliegen in de mond stoppen. Een filter instellen in het midden van de buis kan voorkomen dat de gevaren. - Bewaar de gehepariniseerde naalden in een 10-cm petrischaal en drogen aan de lucht gedurende ten minste 1 uur. Een groot aantal naalden kunnen worden voorbereid.
2. Anesthesie
- Bereid de verdoving oplossing in een kleine plastic geval door het mengen van 200 ml water vissen met 100 ul van 2-fenoxyethanol (2-PE). De eindconcentratie van de verdoving is 500 ppm.
LET OP! 2-PE heeft een snelle werking. - Verwijder gewenste aantal vissen (AB stam) uit de circulatie systeem.
- Gebruik een net om de vis te brengen in de anesthesie voor 1-2 min (Figuur 1F). Let op de vis geleidelijk te zwemmen, verspreiden de borstvinnen horizontaal, snik, en hebben een snelle operculum bewegingen binnen 1 min.
- Naarmate de tijd vordert, nemen de vis lag op de bodem van de zaak en uiteindelijk stoppen met zwemmen. De chirurgische vlak van anesthesie zal bereiken wanneer de vis stopt om te hijgen en het operculum bewegingen zijn traag. Op dit punt, vis is klaar voor bloedafname.
- Met behulp van een skimmer til de verdoofde vis uit het 2-PE en zachtjes plaats het op een papieren handdoek gedrenkt in de anesthesie (figuur 1G). Bedek de kop van de vis met zacht weefsel papier ook doordrenkt met 2 PE-oplossing voor droge ogen te voorkomen en voorzichtig gebruik een andere droge zacht weefsel papierdrogen het lichaamsoppervlak.
3. bloedafname
- Plaats een gehepariniseerde naald in de neusstuk einde van de beluchtingsbuis montage (of de gloeilamp dispenser) en houd het mondstuk einde van de beluchtingsbuis assemblage in de mond.
- Pak de neusstuk einde en de naald samen, en de storende schalen verwijder voorzichtig met de naald. Steek de naald op een 30 - 45 ° hoek in de bloedafname website. Vermijd punctie van het maagdarmkanaal (Figuur 1H). In het geval van het gebruik van lamp dispenser, drukt u op de lamp met duim en middelvinger, en blokkeren het gat aan het uiteinde van de lamp met eerste vinger, steek de naald zoals hierboven beschreven.
Opmerking: De plaats voor bloedafname is langs de lichaamsas en posterior naar de anus in het gebied van de dorsale aorta. De dorsale aorta (da) en de achterste hoofdader (PCV) zijn ventraal aan de wervelkolom (figuur 2). - Begin met het zuigenmondstuk einde van de afzuigslang samenstel wanneer de naald wordt gevoeld aanraken van de wervelkolom. Als het bloed niet stijgt, beweegt de naald op subtiele wijze met de hand om de doorbloeding te stimuleren. Merk op dat zodra het bloed stijgt in de naald, onmiddellijk stoppen met schudden en zuigen zachtjes (figuur 1I). Bij gebruik lamp dispenser, laat de druk van de lamp om het bloed zuigen.
- Houd het bloed langzaam in de naald rijzen op een pulserende wijze zonder afzuiging, die waarschijnlijk door de arteriële bloeddruk. Derhalve is het niet noodzakelijk te zuigen wanneer de naald goed doordringt de slagader.
- Stop zuigkracht na de juiste hoeveelheid bloed wordt verzameld. Verwijder de naald uit de vis en druk op de prikplaats met zacht weefsel papier om het bloeden te stoppen. Observeer het bloeden te stoppen na ongeveer 10-20 seconden van de vinger druk (figuur 1J).
- Nadat het bloeden is gestopt, onmiddellijk de vis transfer terug naar een keleen warm-water (~ 28 ° C) tank. Help de vis te herstellen door voorzichtig schudden water naar de kieuwen tot het begint te zwemmen.
Opmerking: Bewaar tot 5 postsampling vis in een 2 L tank en sluit de tank naar het circulatiesysteem de vis zuurstof. Toevoeging van antibiotica om de vissen water niet noodzakelijk. Handhaving van de vis met een normale huisvesting en voeding. - Verdrijf het bloed van de naald op een schone ruimte van een stuk parafilm (figuur 1K).
- Bloedglucose meten met behulp van een commerciële handheld glucometer (figuur 1L).
Opmerking: De glucometer gebruikt een glucose-dehydrogenase flavineadeninedinucleotide elektrode en vergt een monstervolume van 0,6 pl.- Steek een teststrip volledig in de meter en direct contact met de bloeddruppel. Let op de bloedafname in de teststrip automatisch en het verkrijgen van de bloedglucose resultaat 5 seconden op het display. Noteer het resultaat en de teststrip weggooien. Gebruik eennieuwe teststrip voor elke meting.
- (optionele stap) Verricht nauwkeurige hoeveelheden bloed door pipetteren en het bloed over te brengen naar een microcentrifugebuis voor verdere analyse (hemoglobine, triacylglycerol (TG), totale cholesterol, etc.). Eventueel verdunnen geheel bloed van een vis met zoutoplossing. Centrifugeer de bloedmonsters voor 3 min bij 680 xg bij RT en de oogst van het plasma. Breng het plasma in een nieuwe buis. Op dit punt is het klaar voor gebruik in biochemische analyses.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Deze bloedafname methode veroorzaakt minimale schade aan de zebravis (een <1 mm punctie Figuur 1J) en levert een zeer laag sterftecijfer van 2,3%. We onderzochten de maximale hoeveelheid bloed die kunnen worden verzameld uit een enkele vis en evalueerde de relatie met haar lichaamsgewicht (figuur 3). We vonden dat de maximale bloedvolume verzameld lineair was gecorreleerd met het lichaamsgewicht (R = 0,813). Het grootste volume van het bloed verzameld van een individuele vis (lichaamsgewicht = 1,071 g) werd 25 ui, en het kleinste volume was 1,3 pi van een vis met een gewicht van 0,115 g. Dit suggereert dat de maximale hoeveelheid bloed verzameld is afhankelijk van het lichaamsgewicht van de zebravis.
Biochemische analyse van hemoglobine, bloedglucose, TG en totaal cholesterol werden uitgevoerd na bloedafname (tabel 1). Mannelijke en vrouwelijke gezonde volwassen zebravissen (4-6 maanden oud) werden gevast gedurende 18 uur voordat bloed collectiop. De biochemische analyse bleek dat de normale waarde van hemoglobine (mannelijke 9,91 ± 0,49 g / dl en vrouwelijke 10,02 ± 0,48 g / dl) en TG (mannelijke 417 ± 45 mg / dl en vrouwelijke 404 ± 35 mg / dl) niet significant tussen de twee groepen. Echter, nuchtere bloedglucose en totaal cholesterolgehalte van de mannelijke groep (44 ± 3 mg / dl en 365 ± 18 mg / dl, respectievelijk) waren significant lager (p <0,05) dan de vrouwelijke groep (69 ± 3 mg / dl en 511 ± 52 mg / dl, respectievelijk).
Terwijl de minimale trauma aan zebravis met behulp van de huidige methode maakt herhaalde bloedafname van hetzelfde individu, zijn de effecten van herhaalde bloedafname niet geëvalueerd. Onderzochten we deze effecten met behulp van metingen van het hemoglobinegehalte (figuur 4). Zoals we hebben laten zien in een eerdere publicatie 15, volwassen mannelijke vissen met een gewicht van ongeveer 0,5 g per stuk werden ingedeeld in vier groepen. Herhaalde bloedafname(2 pl per keer) van hetzelfde individu vis eenmaal per dag gedurende 7 dagen (in totaal zeven bloedmonsters) resulteerde in significante afname (p <0,01) hemoglobinegehalte van 10,82 ± 0,78 g / dl tot 2,38 ± 0,8 g / DL. Verwijdering van 2 pl bloed om de 2 dagen of een verzameling van 5 gl per week ook leverde een significante afname (p <0,05) van het hemoglobinegehalte. Bovendien heeft één week na een enkele verzameling van 2 ui bloedmonster, hemoglobineniveaus waren iets onder normaal (van 8,11 ± 1,15 g / dl tot 7,15 ± 1,17 g / dl). Het hemoglobinegehalte had geen effecten na één inning van een 2 of 5 ui bloedmonster voor een 2-weekse herstelperiode. Derhalve concludeerden wij dat herhaalde verzameling van 2 pl bloed (0,4% van het lichaamsgewicht) per week of 2-5 pl (0,4-1% van het lichaamsgewicht) per 2 weken exemplaren kunnen voorkomen bloedverlies bloedarmoede.
We pasten deze methode verder de studie van glucose metabolisme. De veranderingen in de bloedsuikerspiegel van elk individu in de normale voeding groep (eenmaal daags voeding) en overvoeding groep (vijf dagelijkse voeding) werden gevolgd over een periode van 5 weken. Normaal dieet gevoed zebravis (Fish A, B, C) vertoonde een stabiele bloedsuikerspiegel de hele tijd, terwijl de overvoerd zebravis (Fish D, E, F) ervaren een hoge bloedsuikerspiegel al in week 1, en onderhouden deze hyperglykemie voorwaarde gedurende de 5 weken durende studieperiode (figuur 5).
Figuur 1:. Procedure voor bloedafname Van Adult zebravis (A) Glas naalden bereid met een naald trekker. (B) Het snijden van de punt van de naald schuin met een fijne schaar. (C) Een voorgesneden naald met een tip diameter van ongeveer 135 urn. Schaal bar = 1 mm. (D) Blood collectie apparaten: een beluchtingsbuissamenstel (links) en een lamp dispenser (rechts). Pijlen geven de neusstuk op de microcapillaire naald vast te houden. De pijlpunt toont het mondstuk van de beluchtingsbuis montage. De naald is gepositioneerd in het einde van het neusstuk voor monstername. (E) Heparinizing de naald. (F) Een verdoofd vis. (G) Plaats de vis op een papieren handdoek gedrenkt met anesthetica. (H) Steek de naald in een 30-45 ° hoek in de bloedafname website. (I) bloed stijgen in de naald. (J) bloeden is gestopt en een <650 micrometer punctie wordt omcirkeld en getoond in een hoge vergrotingsfactor. (K) verdrijven van het bloed van de naald op een stuk parafilm. (L) Meting van bloedglucose met een glucosemeter.
Figuur 3:. De relatie van de maximale hoeveelheid bloed Sampling en Lichaamsgewicht Een totaal van 83 zebravis (2-6 maanden oud, 42 mannelijke en 41 vrouwelijke) onderging maximale bloedafname.
Figuur 4:. Veranderingen in het hemoglobinegehalte Over een 1-week Periode met Herhaalde Blood Sampling A 2ui bloedmonster verzameld uit dezelfde individuele vis per dag, een keer in 2 dagen, eenmaal per week of eenmaal per week 5 pi (n = 5). Het hemoglobinegehalte van elke groep voor bloedafname (dag 0, witte balk) en na herhaalde bloedafname (dag 7, grijze balk) getoond. Waarden zijn gemiddelden ± standaardafwijking van het gemiddelde (SEM). * P <0,05, ** p <0,01 versus dag 0. Aangepast van ref. 15.
Figuur 5:. Veranderingen in de nuchtere bloedglucose concentraties van zes afzonderlijke Male Fish over een 5-week Periode Fish A, B en C waren de normale voeding groep. Vis D, E en F waren de overvoerd groep.
Tabel 1: Hemoglobine, bloedglucose, TG en het totale cholesterolgehalte voor mannelijke enVrouwelijke zebravis 4-6 maanden oud.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Wij presenteren hier een gedetailleerd protocol voor serieel verkrijgen van bloed van volwassen zebravissen. Deze werkwijze is eenvoudig uit te voeren en we gebruiken in lab dagelijks. Deze bloedafname methode is gebaseerd op het plaatsen van een glazen capillaire naald in de zebravis de dorsale aorta. Tijdens deze procedure is het essentieel om voorzichtig te zijn om niet ablateren de wervelkolom, omdat het criterium voor het zoeken naar de dorsale aorta. Het verminderen van de wervelkolom letsel zal de overlevingskansen te verbeteren. Hoewel deze techniek is eenvoudig en gemakkelijk te beheersen, zijn er best practices die kunnen zorgen voor een hoge succes en overleving. Een bekwame onderzoeker zal 1-2 minuten duren voor het uitvoeren van de bloedafname procedure (Protocol 2,3-3,6, dat is de tijd dat de vis uit het water). Om tijd in grootschalige experimenten te redden, is een dubbel-team aanpak aanbevolen voor bloedafname uit te voeren. Zo kan men de onderzoeker bloedmonsters te voeren, terwijl een tweede kon omgaan met devissen, voer dan de verdoving en het verzamelde bloed (het meten van bloedglucose, opnemen, of het bloed verhuizen naar microcentrifugebuis, enz.) te analyseren.
Met deze methode, hebben we aangetoond dat het maximale bloedmonster dat mogelijk kan worden opgehaald afzonderlijke vis ongeveer 2% van het lichaamsgewicht ongeacht geslacht 15, wat suggereert dat de totale circulerend bloedvolume van zebravis groter is dan 2% van het lichaamsgewicht. Eerdere studies toonden aan dat beenvissen (Osteichthyes spp. En Salmo gairdneri gairdneri) over een totaal bloedvolume variërend van 1,8-3,8% van het lichaamsgewicht 17,18, waardoor voorspellen we de totale circulerend bloedvolume van zebravis 2-3,8% te zijn lichaamsgewicht in de zebravis. Voor een enkele bloedafname, raden we bloedafname van 3 maanden of> 0,3 g lichaamsgewicht zebravis moeten worden uitgevoerd om ≥5 ul van bloed te verkrijgen. Het is nieteworthy dat de helft van de zebravis ongeveer overleefden terwijl 2% van het lichaamsgewicht van het bloed werd verwijderd, waaruit bleek dat zebravis goed kunnen verwerken bloedverlies.
Het belangrijkste voordeel van deze methode is dat het mogelijk maakt herhaaldelijk bloedmonsters van hetzelfde individu. We bepaalden de optimale hoeveelheid en de frequentie van bloedafname door meting van de verandering van het hemoglobinegehalte (figuur 4). Wij adviseren dat het volume en de interval voor herhaalde bloedafname zijn ≤0.4% van het lichaamsgewicht per week en ≤1% van het lichaamsgewicht per 2 weken om bloedverlies bloedarmoede en hemorragische dood te voorkomen. Deze conclusie is in overeenstemming met de richtlijnen voor herhaalde bloed bemonstering van knaagdiermodel dieren 19,20 praktijk.
Als het experiment maakt het offeren van zebravis, kan de naald in een positie langs de lichaamsas, posterieur van de kieuw in het gebied van de dorsale aorta als troubl ingevoegdeshooting of een alternatieve methode. Deze site is in de buurt van het hart en de aorta is relatief groot, waardoor de bloedafname procedure eenvoudiger kan maken.
Zebravis zijn met succes gebruikt bij het modelleren van de samenhangende condities van metabole syndromen, waaronder diabetes 21,22, 23,24 obesitas, leververvetting 25 en 26 atherosclerose. We verder gebruikt een techniek die glucose metabolisme in dieet-geïnduceerde obesitas (figuur 5) te observeren. Net als zoogdieren, zebravis ontwikkeld abnormaal glycolipide metabolisme bij toediening een vetrijk dieet. De nuchtere bloedglucose van elk vertoonden individuele verschillen in de respons op overmatig voeren vergelijkbaar met die bij mensen 15,27. Dit resultaat geeft aan dat een onderzoek van de tijdelijke veranderingen in het bloed biochemische parameters van de individuele vis een goede gelegenheid om de individuele verschillen in metabole stoornissen zo te bepalen zal biedench zoals obesitas en type 2 diabetes mellitus, aldus verder zijn waarde als een diermodel van menselijke ziekte bevestigen.
Overall, ontwikkelden we een nieuwe methode voor herhaalde bloedafname van volwassen zebravissen. Deze methode is van essentieel belang voor de zebravis onderzoek waarbij herhaalde bloedmonsters, zoals studies van toxicokinetiek, farmacokinetiek en hematologie. Bovendien kan deze herhaalde bloedafname methode ook worden toegepast op andere kleine aquarium vissen in biomedisch onderzoek, bijvoorbeeld, medaka (Oryzias latipes) of Xiphophorus (Xiphophorus helleri).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Glass capillaries with filament | Narishige | GD-1 | 1.0 mm outer diameter. |
| Needle puller | Narishige | PC-10 | To produce the needles |
| Heparin | Wako Pure Chemical Industries | 081-00136 | For heparinization |
| Aspirator tube assembly | Drummond | 2-040-000 | For blood collection |
| Bulb dispenser | Drummond | 1-000-9000 | For blood collection |
| 2-phenoxyethanol | Wako Pure Chemical Industries | 163-12075 | For anesthetizing the fish |
| DRI-CHEM3500V | Fujifilm | - | For hemoglobin measurement |
| DRI-CHEM Slides | Fujifilm | Hb-WII | For hemoglobin measurement |
| Glutest Neo Super | Sanwa Kagaku Kenkyusho | - | For bood glucose measurement |
| Wako L-type TG kit | Wako Pure Chemical Industries | 464-44201 | For TG measurement |
| Wako L-type CHO kit | Wako Pure Chemical Industries | 460-44301 | For total cholesterol measurement |
| Parafilm M | Alcan Packaging | PM996 | To expel the blood on |
References
- Lieschke, G., Currie, P. Animal models of human disease: zebrafish swim into view. Nat Rev Genet. 8 (5), 353-367 (2007).
- Penberthy, W. T., Shafizadeh, E., Lin, S. The zebrafish as a model for human disease. Front Biosci. 7, d1439-d1453 (2002).
- Stachura, D. L., Traver, D. Cellular dissection of zebrafish hematopoiesis. Methods Cell Biol. 101, 75-110 (2011).
- Jagadeeswaran, P., Sheehan, J. P. Analysis of blood coagulation in the zebrafish. Blood Cells Mol Dis. 25 (3-4), 239-249 (1999).
- Jagadeeswaran, P., Sheehan, J. P., Craig, F. E., Troyer, D. Identification and characterization of zebrafish thrombocytes. Br J Haematol. 107 (4), 731-738 (1999).
- Lieschke, G. J., Oates, A. C., Crowhurst, M. O., Ward, A. C., Layton, J. E. Morphologic and functional characterization of granulocytes and macrophages in embryonic and adult. Blood. 98 (10), 3087-3096 (2001).
- Iwanami, N. Zebrafish as a model for understanding the evolution of the vertebrate immune system and human primary immunodeficiency. Exp Hematol. 42 (8), 697-706 (2014).
- Babin, P. J., Goizet, C., Raldua, D. Zebrafish models of human motor neuron diseases: advantages and limitations. Prog Neurobiol. 118, 36-58 (2014).
- Seth, A., Stemple, D. L., Barroso, I. The emerging use of zebrafish to model metabolic disease. Dis Mod Mech. 6 (5), 1080-1088 (2013).
- Eames, S. C., Philipson, L. H., Prince, V. E., Kinkel, M. D. Blood sugar measurement in zebrafish reveals dynamics of glucose homeostasis. Zebrafish. 7 (2), 205-213 (2010).
- Moss, J. B., et al. Regeneration of the pancreas in adult zebrafish. Diabetes. 58 (8), 1844-1851 (2009).
- Oka, T., et al. Diet-induced obesity in zebrafish shares common pathophysiological pathways with mammalian obesity. BMC Physiol. 10 (21), (2010).
- Chu, C. Y., et al. Overexpression of Akt1 enhances adipogenesis and leads to lipoma formation in zebrafish. PLoS One. 7 (5), e36474 (2012).
- Velasco-Santamaría, Y. M., Korsgaard, B., Madsen, S. S., Bjerregaard, P. Bezafibrate, a lipid-lowering pharmaceutical, as a potential endocrine disruptor in male zebrafish (Danio rerio). Aquat Toxicol. 105 (1-2), 107-118 (2011).
- Zang, L., Shimada, Y., Nishimura, Y., Tanaka, T., Nishimura, N. A novel, reliable method for repeated blood collection from aquarium fish. Zebrafish. 10 (3), 425-432 (2013).
- Carmichael, C., Westerfield, M., Varga, Z. M. Cryopreservation and in vitro fertilization at the zebrafish international resource center. Methods Mol Biol. 546, 45-65 (2009).
- Thorson, T. B. The partitioning of body water in Osteichthyes: phylogenetic and ecological implications in aquatic vertebrates. Biol Bull-US. 120, 238-254 (1961).
- Conte, F. P., Wagner, H. H., Harris, T. O. Measurement of blood volume in the fish (Salmo gairdneri gairdneri). Am J Physiol. 205, 533-540 (1963).
- Diehl, K. H., et al. A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. J Appl Toxicol. 21 (1), 15-23 (2001).
- Nahas, K., Provost, J. -P., Baneux, P. H., Rabemampianina, Y. Effects of acute blood removal via the sublingual vein on haematological and clinical parameters in Sprague-Dawley rats. Lab Anim. 34 (4), 362-371 (2000).
- Curado, S., et al. Conditional targeted cell ablation in zebrafish: a new tool for regeneration studies. DevDyn. 236 (4), 1025-1035 (2007).
- Andersson, O., et al. Adenosine signaling promotes regeneration of pancreatic beta cells in vivo. Cell Metab. 15 (6), 885-894 (2012).
- Hiramitsu, M., et al. Eriocitrin ameliorates diet-induced hepatic steatosis with activation of mitochondrial biogenesis. Sci Rep-UK. 4, 3708 (2014).
- Zang, L., Shimada, Y., Kawajiri, J., Tanaka, T., Nishimura, N. Effects of Yuzu (Citrus junos Siebold ex Tanaka) peel on the diet-induced obesity in a zebrafish model. J Funct Foods. 10, 499-510 (2014).
- Schlegel, A. Studying non-alcoholic fatty liver disease with zebrafish: a confluence of optics, genetics, and physiology. Cell Mol Life Sci. 69 (23), 3953-3961 (2012).
- Stoletov, K., et al. Vascular lipid accumulation, lipoprotein oxidation, and macrophage lipid uptake in hypercholesterolemic zebrafish. Circ Res. 104 (8), 952-960 (2009).
- Thomas, C. D., et al. Nutrient balance and energy expenditure during ad libitum feeding of high-fat and high-carbohydrate diets in humans. Am J Clin Nutr. 55 (5), 934-942 (1992).
