Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

धमनी नालव्रण विफलता का एक उपन्यास murine मॉडल: विस्तार में सर्जिकल प्रक्रिया

Published: February 3, 2016 doi: 10.3791/53294
Automatic Translation
1,2,3, 2,3, 4, 3, 3, 1,2, 3, 4, 1,2, 2,3, 1,2
1Department of Nephrology, Leiden University Medical Center, 2Einthoven Laboratory for Experimental Vascular Medicine, Leiden University Medical Center, 3Department of Surgery, Leiden University Medical Center, 4Division of Nephrology, University of Cincinnati

Introduction

एक कार्यात्मक नाड़ी का उपयोग नाली गुर्दे की विफलता के साथ रोगियों है कि जिंदा रहने के लिए पुरानी हेमोडायलिसिस पर निर्भर के लिए महत्वपूर्ण महत्व का है। एक धमनी फिस्टुला (AVF) का निर्माण वर्तमान में नाड़ी का उपयोग के लिए पसंदीदा विकल्प है। हालांकि, AVF संबंधित जटिलताओं पुरानी हेमोडायलिसिस पर रोगियों के लिए रुग्णता का एक प्रमुख कारण बनते हैं। व्यापक वैज्ञानिक प्रयासों के बावजूद, उपन्यास में से कोई भी AVF पहुँच से संबंधित जटिलताओं को कम करने के लिए AVF स्थायित्व की पर्याप्त सुधार में परिणाम था दृष्टिकोण। इस निराशाजनक प्रगति के भाग हेमोडायलिसिस पहुँच विफलता की अंतर्निहित pathophysiology की अधूरी समझ से संबंधित है।

ए वी पहुँच विफलता, पशु मॉडल है कि निकट मानव विकृति की नकल के pathophysiology जानने के लिए अत्यंत महत्व के हैं। इस संबंध में, न केवल पशु प्रजातियों लेकिन यह भी anastomotic साइट, आवश्यक विरोधी coagulatory चिकित्सा और उछाल की अवधि के बाद ऊपर का पालन करेंRY अकाउंट 1 में रखा जाना चाहिए। बड़े जानवरों नई चिकित्सकीय रणनीति विकसित करने के उद्देश्य से हस्तक्षेप की पढ़ाई के लिए सबसे उपयुक्त हैं, वहीं murine मॉडल सबसे बड़ी क्षमता ट्रांसजेनिक चूहों की उपलब्धता के कारण ए वी पहुँच विफलता अंतर्निहित आणविक तंत्र में और अधिक जानकारी हासिल करने के लिए है। इसके अलावा, चूहों की एक बड़ी संख्या में बड़ा जानवर उपयोग की तुलना में कम कीमत पर इस उद्देश्य के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।

AVF विफलता के पहले murine मॉडल Kwei और एट अल। 2 इस मॉडल में 2004 में वर्णित किया गया था, AVFs कैरोटिड धमनी और एक अंत करने के लिए अंत ढंग से गले नस एक intravascular कैथेटर का उपयोग कर का उपयोग कर निर्माण किया गया। हालांकि अंत करने के लिए अंत विन्यास और एक intravascular कैथेटर की उपस्थिति मानव AVFs के लिए इस मॉडल की वैधता सीमा इस मॉडल AVFs में जल्दी शिरापरक अनुकूलन का अध्ययन करने के लिए उपयोगी हो सकता है। एक उन्नत मॉडल AVF Castier और एट अल द्वारा पेश किया गया था। जो 3 के अंत मेंकैरोटिड धमनी गले नस की ओर से जुड़ा है। हालांकि, हेमोडायलिसिस रोगियों में AVFs आमतौर पर एक धमनी के किनारे एक नस के अंत anatomizing द्वारा निर्माण कर रहे हैं। AVF का सही विन्यास एक ए वी मॉडल का उपयोग करने का एक महत्वपूर्ण विशेषता है, क्योंकि यह नाली 4 के भीतर रक्तसंचारप्रकरण प्रोफ़ाइल निर्धारित करता है। उत्तरार्द्ध में शिथिलता और intimal हाइपरप्लासिया (IH) 5 के बाद के विकास endothelial लिए एक महत्वपूर्ण योगदान है।

एक उपन्यास murine मॉडल ने हाल ही में मनुष्य के रूप में 6 में उपयोग किया जाता है एक समान संरचनात्मक विन्यास के साथ विकसित किया गया था। इस मॉडल में, AVF बाधित टांके के साथ आम मन्या धमनी की ओर करने के लिए बाहरी गले नस की एक शाखा के अंत anastomosing द्वारा C57BL / 6 चूहों में बनाया जाता है। वर्तमान पत्र में, हम इस murine मॉडल के व्यापक उपयोग, के उद्देश्य से की सुविधा के लिए आदेश जटिल pathophysiology जानने के लिए यह मॉडल के microsurgical प्रक्रिया पर ध्यान केंद्रितहेमोडायलिसिस पहुँच विफलता की।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

सभी प्रयोगों लीडेन विश्वविद्यालय के मेडिकल सेंटर के पशु कल्याण संबंधी समिति द्वारा अनुमोदित किया गया।

1. पशु तैयारी और एनेस्थीसिया

  1. 3-4 isoflurane% से भरा एक निरंतर संवेदनाहारी प्रेरण कक्ष में माउस (1-3 महीने पुराने) anesthetize।
  2. गर्दन और बाएँ ऊपरी पैर एक बिजली के रेजर का उपयोग के अंदर भाग के उदर पक्ष दाढ़ी और बालों को हटाने के लिए टेप का एक टुकड़ा का उपयोग करें।
  3. दोनों आंखों पर नेत्र मरहम लागू करें।
  4. हीटिंग कंबल जिस पर नाक वेंटिलेशन मुखौटा तय हो गई है पर जानवरों की स्थिति। चिपकने वाला टेप का उपयोग करने के लिए नाक का मुखौटा सिर fixate।
    1. निम्न प्रवाह में ऑक्सीजन समृद्ध हवा सेट का उपयोग कर 1.5-2.0% की एकाग्रता में isoflurane उद्धार: हवा 0.3 एल / मिनट, 100% ऑक्सीजन 0.2 एल / मिनट। संज्ञाहरण की गहराई का आकलन और यदि आवश्यक हो तो isoflurane की एकाग्रता को समायोजित करने के पैर की उंगलियों के बीच की त्वचा चुटकी।
  5. करने के लिए पशु fixateसभी अंगों कि एक लापरवाह स्थिति में लगभग 37 डिग्री सेल्सियस पर सेट किया जाता है चिपकने वाला टेप के साथ हीटिंग कंबल।
  6. 0.1 मिलीग्राम की एक खुराक में सोडियम क्लोराइड (NaCl) 0.9% में भंग buprenorphine इंजेक्षन / पशु की दिशा में बाँझ 0.9% NaCl subcutaneously के 0.5 मिलीलीटर के साथ एक साथ किलो।
  7. तैयार किए गए क्षेत्र के लिए लागू chlorhexidine मिलावट 0.5%।

2. त्वचा चीरा

  1. सर्जन की ओर अपने सिर के साथ खुर्दबीन के तहत पशु स्थिति।
  2. उदर गर्दन एक सूक्ष्म कैंची का उपयोग करने का midline में लगभग 1.5 सेमी की एक अनुदैर्ध्य चीरा।
  3. संदंश के साथ लार ग्रंथियों ले लो और cranially सही लार ग्रंथि विस्थापित जब तक यह आंशिक रूप से घाव के बाहर है।

3. विदारक और नस तैयारी

  1. पहचानें और दो टूक प्रसार के द्वारा अपने परिवाहकीय ऊतक से पूरी तरह से सही बाहरी गले नस के dorsomedial शाखा काटना सिर्फ एकLongside और रक्त वाहिनियों की दिशा में।
  2. एक पाश (10.0 सिवनी) विच्छेदित नस के आसपास जगह है और इसे बंद किए बिना एक गाँठ लागू होते हैं।

4. sternocleidomastoid मांसपेशी को हटाने के

  1. संदंश का प्रयोग, दो टूक अपनी सीमा पर प्रसार के द्वारा अपने परिवेश से सही sternocleidomastoid पेशी काटना। खुला संदंश की एक जोड़ी अलग पेशी के तहत प्लेस और यह proximally और distally ligate एक 6.0 सीवन के साथ। इसके बाद, मांसपेशियों में एक cauterizer का उपयोग कर आबकारी।

5. विदारक और आम मन्या धमनी तैयारी

  1. पहचानें और संदंश का उपयोग सही आम मन्या धमनी काटना। धमनी के हेरफेर में सहायता करने के लिए धमनी के चारों ओर एक 6.0 सीवन धागे रखें।
  2. के रूप में distally और proximally संभव के रूप में संवहनी अकड़न लागू करें।
  3. विशेष सूक्ष्म कैंची का उपयोग कर लगभग 1 मिमी की धमनी के बीच में एक अनुदैर्ध्य चीरा।
  4. कुल्लाएक हेपरिन समाधान के साथ धमनी [100 आइयू / एमएल] जब तक पोत खून की स्पष्ट है।
  5. उपाय और यदि आवश्यक हो तो चौड़ाई संवहनी दबाना [1.1 मिमी] मैच के लिए चीरा की लंबाई को समायोजित।

6. नस के Ligation

  1. एक नाड़ी दबाना पहले से ही तैयार की नस नस proximally लागू करते हैं और चारों ओर एक सीवन धागे जगह है।
  2. नस को कोमल दुम कर्षण लागू करें एक haemostat कि 10.0 सीवन कि पहले रखा गया था का उपयोग कर सिवनी धागे पर रखा गया है और ligate नस के रूप में distally है संभव के रूप में इस्तेमाल करते हैं।
  3. नस बंधाव करने के लिए सिर्फ एक proximally कैंची का उपयोग कर काट।
  4. संवहनी संदंश का प्रयोग, धीरे नस के लुमेन खोलने के लिए और एक हेपरिन समाधान [100 आइयू / एमएल] के साथ यह कुल्ला।

7. सम्मिलन भाग 1 का निर्माण

  1. एक बाधित सिवनी (10.0) छह ओ 'पर एक सीवन के द्वारा पीछा 0:00 के स्थान पर 2 वर्ग समुद्री मील का उपयोग कर के साथ धमनी को नस कनेक्टघड़ी की स्थिति। यह अपनी ही धुरी के चारों ओर बारी बारी से करने की अनुमति के बिना धमनी को नस कनेक्ट करने के लिए सुनिश्चित करें। शल्य जोखिम में सुधार के क्रम में पशु घुमाएँ।
  2. नस के आसपास एक सीवन धागे स्थिति और एक haemostat का उपयोग कर कोमल पार्श्व कर्षण लागू होते हैं।
  3. एक ही बाधित टांके का उपयोग करना, सम्मिलन के दृश्य उदर पक्ष में लगभग 3-4 अतिरिक्त टांके रखकर सम्मिलन को पूरा करें।

8. हेपरिन प्रशासन

  1. घुमाएँ हीटिंग कंबल 180 ° और बाएँ ऊपरी पैर पर खुर्दबीन ध्यान केंद्रित।
  2. एक संवहनी संरचना है कि ऊपरी पैर की औसत दर्जे का भाग में longitudinally चलाता है और त्वचा के माध्यम से देखा जा सकता है की तलाश द्वारा ऊरु नस / धमनी / तंत्रिका बंडल को पहचानें। सीधे एक लंबाई ढंग से ऊरु नस ऊपर लगभग 1 सेमी की सूक्ष्म कैंची के साथ एक चीरा।
  3. ध्यान से ऊरु नस के perivascular ऊतक टुकड़े करना और एक खुराक ओ पर हेपरिन इंजेक्षनएफ ऊरु नस में 0.2 आइयू / जी bodyweight।

9. सम्मिलन भाग 2 का निर्माण

  1. गर्दन क्षेत्र पर लौटें और सिवनी धागा है कि नस के आसपास रखा गया था हटा दें।
  2. एक सिवनी धागा (6.0) है कि बाद में कैरोटिड धमनी के नीचे से गुजरता है, नस पर और फिर से कैरोटिड धमनी के नीचे रखें। (चित्रा 1L)
  3. शिरापरक संवहनी दबाना निकालें।
  4. इसके बाद, एक साथ दोनों संवहनी अकड़न घुमा द्वारा आधा पूरा धमनी फिस्टुला एक घड़ी ढंग से कैरोटिड धमनी की धुरी के साथ 180 डिग्री मोड़ और सिवनी धागे की छोर तक औसत दर्जे का कर्षण लागू होते हैं।
  5. एक ही फैशन में सम्मिलन को पूरा के रूप में कदम 7.2 में वर्णित है।

10 नाड़ी को दबाना निकालना

  1. सीवन धागे निकालें और बारी बारी से संवहनी clamps 180 ° काउंटर दक्षिणावर्त।
  2. बाहर का संवहनी दबाना समीपस्थ संवहनी दबाना द्वारा पीछा किया निकालें।
    3. <li> धीरे संवहनी संदंश के साथ शिरापरक बहिर्वाह पथ occluding द्वारा सम्मिलन की प्रत्यक्षता का आकलन करें। एक पेटेंट के सम्मिलन के मामले में पूर्व occluding शिरापरक खंड एक गुणवाला फैशन में विस्तार होगा। अपने मूल संरचनात्मक संदंश स्थिति का उपयोग करने के लिए सही लार ग्रंथि स्थानांतरित करना।

11. स्किन बंद और पश्चात की देखभाल

  1. एक निरंतर सिवनी (6.0) के साथ ऊपरी पैर की त्वचा को बंद करें।
  2. एक निरंतर सिवनी (6.0) के साथ गर्दन की त्वचा को बंद करें।
  3. हीटिंग कंबल से पशु निकालें और 0.5 मिलीग्राम सोडियम क्लोराइड 0.9% subcutaneously इंजेक्षन।
  4. एक अंधेरे पिंजरे कि एक हीटिंग दीपक के साथ गरम किया जाता है में पशु रखें और यह पूरी तरह से वसूली करते हैं। जब एक जानवर पूरी तरह से ठीक नहीं है, यकीन है कि यह एक सदमे से रक्तसंचारप्रकरण कारण शल्य चिकित्सा क्षेत्र में खून बह रहा करने के लिए पीड़ित नहीं करता है। इस तरह के एक सूजन गर्दन और खून के रिसाव के रूप में संकेत के लिए देखो।
  5. bupr के पहले इंजेक्शन के बाद लगभग 6 घंटे के बादenorphine, एक खुराक में buprenorphine subcutaneously के एक निरंतर रिलीज सूत्रीकरण है कि आदेश में एक अतिरिक्त 72 घंटे के लिए पर्याप्त analgesia प्रदान करने के लिए निर्माता से सिफारिश की है, की एक खुराक इंजेक्षन।

12. ऊतक कटाई

  1. एक और intraperitoneally प्रशासित संवेदनाहारी-मिश्रण midazolam (5 मिलीग्राम / किग्रा) युक्त, medetomidine (0.5 मिलीग्राम / किग्रा) Fentanyl (0.05 मिलीग्राम / किग्रा) के साथ पशु anesthetize।
  2. एक गैर-गरम सिलिकॉन चटाई में अपने पंजे और गालों के माध्यम से सुई डालने से एक लापरवाह स्थिति में पशु fixate।
  3. सूक्ष्म कैंची के साथ गर्दन में निशान के ऊपर लगभग 1.5-2.0 सेमी की एक चीरा।
  4. AVF काटना, और सिवनी धागे (6.0) proximal-, बाहर का धमनी और आसान पहचान के लिए शिरापरक बहिर्वाह पथ के आसपास जगह है।
  5. AVF की प्रत्यक्षता आकलन के रूप में प्रोटोकॉल की धारा 10.3 में वर्णित है।
  6. एक औसत दर्जे के प्रदर्शन से laparotomy यू पेरिटोनियल गुहा खोलेंसूक्ष्म कैंची गाते हैं।
    1. बाएँ और दाएँ उदर पसली midclavicular लाइन में दुमदारी शुरू कैंची की एक जोड़ी का उपयोग पिंजरे के माध्यम से कट। एक माइक्रो कैंची का प्रयोग, डायाफ्राम कि cranially उदर रिब पिंजरे के मध्य भाग से जुड़ा हुआ है और बाद में विस्थापित इस खंड संदंश का उपयोग आड़ा काट।
    2. अवर Caval नस जानें, और एक माइक्रो कैंची के साथ यह आड़ा काट।
  7. बाएं वेंट्रिकल में एक सुई 23 गेज सुई डालें और लगभग 100 एमएमएचजी के दबाव में पीबीएस के साथ छिड़कना तक intravasal द्रव लगभग स्पष्ट है।
  8. सुई को हटाने के बिना, अब लगभग 100 एमएमएचजी के दबाव में 10 मिनट के लिए 4% formalin के साथ छिड़कना।
  9. सूक्ष्म कैंची के साथ दोनों धमनियों और नस transecting द्वारा AVF आबकारी एवं एक 4% formalin समाधान हे / एन में यह डूब।

13. ऊतक एम्बेडिंग और सेक्शनिंग

  1. ऊतक प्रक्रिया निर्माण के protoco के अनुसार आयल कोएल। प्रोटोकॉल के बाद के शामिल लागू:
    1. आरटी पर 1 घंटे के लिए 70% इथेनॉल में विसर्जित कर दिया। 2x दोहराएँ।
    2. आरटी पर 1 घंटे के लिए 96% इथेनॉल में विसर्जित कर दिया। 2x दोहराएँ।
    3. आरटी पर 1 घंटे के लिए इथेनॉल में 99.5% विसर्जित कर दिया। एक बार पुन: दोहराएं।
    4. आरटी पर 1.5 घंटे के लिए इथेनॉल में 99.5% विसर्जित कर दिया।
    5. आरटी पर 1 घंटे के लिए xylene में विसर्जित कर दिया 100%। एक बार पुन: दोहराएं।
    6. 62 डिग्री सेल्सियस पर 1 घंटे के लिए Parafin में विसर्जित कर दिया। 2x दोहराएँ।
  2. पैराफिन में AVF एम्बेड इतना है कि शिरापरक बहिर्वाह पथ embedding कैसेट को सीधा केंद्रित है।
  3. एक microtome का उपयोग करना, प्रत्येक एक 5 माइक्रोन मोटाई के साथ 30 वर्गों से मिलकर 12 धारावाहिक वर्गों पैदा करते हैं। फिर प्रत्येक खंड के सीरियल, एक भी बढ़ते गिलास एक अर्दली फैशन में बारह तक की स्थिति एक से शुरू क्षेत्र सम्मिलन के सबसे करीब के साथ शुरू करने पर एक अनुभाग जगह है।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

सम्मिलन (चित्रा 1) के निर्माण के बाद, प्रत्यक्षता शीघ्र ही एक नाड़ी संदंश के साथ शिरापरक बहिर्वाह पथ occluding द्वारा मूल्यांकन किया जाना चाहिए। जब सम्मिलन पेटेंट है, रोड़ा के लिए संवहनी पथ समीपस्थ स्पष्ट रूप से एक गुणवाला ढंग से विस्तार करना चाहिए। इसके अलावा, प्रत्यक्षता अवरक्त प्रतिदीप्तिदर्शन (NIRF) को प्रभावी ढंग से एक के रूप में कार्य करता है कि एंजियोग्राफी (चित्रा 2) के पास का उपयोग करके इसकी पुष्टि की है। शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया में एक विफलता के रूप में (चित्रा 2) में दिखाया गया है सम्मिलन का एक रोड़ा पैदा कर सकते हैं। इस असफलता एक भी संकीर्ण anastomotic क्षेत्र, जहाजों की मरोड़, अपर्याप्त हेपरिन खुराक या एक आकस्मिक सिवनी प्लेसमेंट के पीछे की ओर करने के लिए सम्मिलन के सामने की ओर जोड़ता है की वजह से हो सकता है।

एक ऊतकीय स्तर पर, AVF में संवहनी remodeling की प्रक्रिया सुंदर ढंग से इस मॉडल का उपयोग कर जांच की जा सकती है। AVF में संवहनी remodeling का एक परिणाम के रूप में होता हैरक्त प्रवाह और दबाव में वृद्धि हुई है। चूहों में, इस प्रतिक्रिया परिधि में वृद्धि हुई है (जैसे, जावक remodeling) सर्जरी के बाद पहले 2 हफ्तों में ल्यूमिनल क्षेत्र में वृद्धि के लिए अग्रणी की विशेषता है। इन 2 सप्ताह के बाद, ल्यूमिनल क्षेत्र उत्तरोत्तर जावक remodeling और Tunica intima के चल रहे उमड़ना में एक बंद के कारण कम हो जाती है। इन प्रगतिशील stenotic घावों के गठन की सर्जरी के बाद 4 सप्ताह में AVF का 50% की आड़ में यह परिणाम है। इसलिए, AVFs फसल के लिए इष्टतम समय बिंदु, सर्जरी के बाद 2 सप्ताह में होगा, क्योंकि इस चरण में, पेटेंट AVF में संवहनी प्रतिक्रिया के समुचित विश्लेषण अभी भी संभव है। सर्जरी के बाद 2 सप्ताह में शिरापरक बहिर्वाह पथ के Immunostaining पता चलता है कि intima के सेलुलर डिब्बे मुख्य रूप से, अल्फा-चिकनी पेशी actin (α-SMA) के सकारात्मक कोशिकाओं (चित्रा 3) के होते हैं के रूप में विफल मानव AVFs साथ ही 7 में मनाया।

की जटिलता को देखते हुए microsurgical प्रक्रिया है, यह चूहों के एक अनुपात में प्रक्रिया की तकनीकी विफलता के साथ लगता यथार्थवादी है। हमारे हाथ में, प्रक्रिया की सफलता दर शुरुआत में 67% थी। हालांकि, आगे के प्रशिक्षण के साथ इस दर 97% तक बढ़ा दिया गया था। असफलता का मुख्य कारण नकसीर (60%) था, तीव्र थ्रोम्बोसिस (27%) और anesthesia- संबंधित मृत्यु (13%) द्वारा पीछा किया। पर्याप्त प्रशिक्षण के बाद, शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया लगभग 1 घंटे में किया जा सकता है।

आकृति 1
चित्रा 1. शल्य प्रक्रिया की विस्तृत योजना (ए - टी)। एक AVF के सफल निर्माण के लिए महत्वपूर्ण कदम। कृपया यहाँ यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए क्लिक करें।

Re 2 "src =" / files / ftp_upload / 53,294 / 53294fig2.jpg "/>
चित्रा 2. पेटेंट और अवरोधित AVFs के macroscopic तस्वीरें। (ए) बाहर का आम मन्या धमनी पर एक संवहनी क्लैंप के साथ एक पेटेंट AVF। (ख) एक AVF occluded। (सफेद तीर) रक्त प्रवाह की दिशा इंगित करता है। (सी) एक पेटेंट AVF पास इन्फ्रारेड प्रतिदीप्तिदर्शन का उपयोग कर प्रदर्शन किया। (लाल तीर) धमनी इंगित करता है। (नीले तीर) शिरापरक बहिर्वाह पथ को इंगित करता है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र तीन
चित्रा 3. बनाम unoperated नियंत्रण वाहिकाओं 14 दिन में AVF के शिरापरक बहिर्वाह पथ के histological stainings (ए - बी)। का उपयोग कर शब्द के भागों अवलोकन hematoxylin, phloxin और Saffरॉन 14 दिनों AVF निर्माण के बाद पोत परिधि और intimal हाइपरप्लासिया विकास में एक स्पष्ट वृद्धि दर्शाता है। (सी - डी) Immunohistochemical धुंधला प्रदर्शन है कि कोशिकाओं के बहुमत intimal हाइपरप्लासिया पेश अल्फा चिकनी पेशी actin सकारात्मक रहे हैं। (एल) लुमेन; (IH) अंत: कला हाइपरप्लासिया; पैमाने पर पट्टी:। 200 माइक्रोन यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

AVF हेमोडायलिसिस उपचार में दुखती रग माना जाता है। दुर्भाग्य से, AVF अभी भी विफलता 8-10 के एक उच्च संख्या से ग्रस्त है। अंतर्निहित तंत्र पर व्यापक अनुसंधान के बावजूद, सटीक pathophysiology अनजान बनी हुई है। AVF विफलता के लिए कई murine मॉडल पहले से ही साहित्य 2,3,11,12 में वर्णित किया गया है। हालांकि, इन मॉडलों में से कोई भी पक्ष धमनी सम्मिलन विन्यास है कि ज्यादातर नैदानिक ​​स्थिति में इस्तेमाल किया जाता है के लिए एक शिरापरक अंत शामिल। यह बहुत ही प्रासंगिक है क्योंकि उसके एवज में रक्तसंचारप्रकरण प्रोफ़ाइल संवहनी remodeling में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है। इसके अलावा, कुछ मॉडलों के धमनी और शिरा 2,11, जो नैदानिक ​​सेटिंग में नहीं किया जाता है के बीच कनेक्शन के लिए एक कृत्रिम कफ का इस्तेमाल किया।

नैदानिक ​​प्रासंगिकता को बेहतर बनाने के लिए, हम इसलिए एक murine मॉडल में जो धमनियों की ओर सम्मिलन के लिए एक एकतरफा शिरापरक अंत jugu की एक शाखा के बीच बनाया गया था विकसितLAR नस और बाधित टांके 6 के साथ आम मन्या धमनी। इस मॉडल में महत्वपूर्ण परिवर्तन histomorphological जावक सहित मनाया गया remodeling और प्रगतिशील intimal हाइपरप्लासिया, अंततः AVF विफलता के लिए अग्रणी।

शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया का एक महत्वपूर्ण पहलू संज्ञाहरण प्रोटोकॉल है। यह isoflurane साँस लेना संज्ञाहरण का उपयोग करने की सिफारिश के रूप में इस संज्ञाहरण की लंबी अवधि प्राप्त करने के लिए एक सुरक्षित और आसान तरीका है। बाद के प्रशिक्षण चरण में जो पूरी प्रक्रिया 3 घंटा तक लग सकते हैं के लिए विशेष रूप से महत्वपूर्ण है।

आदेश धमनी फिस्टुला के traversing बहिर्वाह नस के लिए आवश्यक कमरे बनाने के लिए, ipsilateral sternocleidomastoid पेशी excised किया जाना चाहिए।

सर्जरी के दौरान पोत से निपटने के लिए सम्मान के साथ, जहाजों के विच्छेदन संदंश का उपयोग कर एक कुंद ढंग से किया जाना चाहिए। विशेष नाड़ी सीधे संदंश का उपयोग r रहे हैंगोल टिप के कारण प्रत्यक्ष हैंडलिंग और जहाजों के हेरफेर के रूप में वे और अधिक सटीक प्रदान करते हैं और कम यांत्रिक क्षति का उत्पादन के लिए ecommended। सिवनी धागे के उपयोग के पोत एक hemostat के साथ संयुक्त छोरों सुरक्षित ऊतक से निपटने में सहायता के रूप में कर सकते हैं और इसके अलावा, जब एक तिहाई हाथ है जो महत्वपूर्ण है, ताकि इस प्रक्रिया के किसी भी प्रत्यक्ष सहायता के बिना किया जा सकता है के रूप में इस्तेमाल एक इष्टतम तरीके से पेश करने में ऊतक।

निस्संदेह, प्रक्रिया में सबसे कठिन कदम धमनी और शिरा के बीच सीवन प्लेसमेंट नहीं है। केयर, "सामने" साइड के साथ सम्मिलन के 'वापस' साइड सीवन के लिए नहीं लिया जाना चाहिए के रूप में इस सम्मिलन कि AVF के शुरुआती विफलता के लिए नेतृत्व कर सकते हैं के संकुचन को बढ़ावा मिलेगा। हो रहा से इसे रोकने के लिए, ताकि उन्हें अलग करने के पोत के दो दीवारों के बीच संवहनी संदंश की नोक स्थिति। तकनीकी कठिनाई इस मॉडल की एक सीमा माना जा सकता है। हालांकि, हम वें नहीं लगता हैइस प्रक्रिया में मॉडल है कि वर्तमान में सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल किया 3,6 से ज्यादा चुनौतीपूर्ण है।

यह भविष्य के अध्ययन के लिए नमूने का आकार पर एक सामान्य टिप्पणी करने के लिए मुश्किल है, के रूप में गणना नमूने का आकार केवल जानवरों के बीच लेकिन यह भी हस्तक्षेप की 'ताकत' पर परिवर्तनशीलता पर निर्भर नहीं करता। हम अनुमान है कि लगभग 10 चूहों (चूहों कि AVF के तकनीकी विफलता की वजह से अध्ययन के बाहर ड्रॉप को छोड़कर) के एक समूह के आकार अध्ययन है कि AVF विफलता में एक विशेष जीन की भूमिका पर ध्यान केंद्रित करने के लिए पर्याप्त होना चाहिए। हाल ही में, हम murine AVF में इलास्टिन की भूमिका 13 remodeling पर एक अध्ययन में 10 पशुओं के एक औसत समूह आकार के साथ महत्वपूर्ण परिणाम प्राप्त करने में सक्षम थे।

हमारे murine मॉडल का एक पहलू और चर्चा की आवश्यकता है। यह ज्ञात है कि अंतिम चरण गुर्दे की बीमारी से पीड़ित रोगियों में uremic परिवेश शिरापरक intimal hyperplasi सहित संवहनी रोगों की एक भीड़ के लिए योगदानहेमोडायलिसिस एक्सेस सर्जरी 14-16 के लिए एक भी पहले। यह वर्तमान मॉडल uremic परिवेश को शामिल नहीं करता। इसलिए, क्रोनिक रीनल फेल्योर 17 साल की एक मॉडल के समावेश आगे इस murine मॉडल की वैधता को बेहतर बनाने के लिए एक मूल्यवान एडिटिव कदम होगा।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

लेखकों के पास खुलासे के लिए कुछ भी नहीं है।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Dissecting microsocpe Leica M80
Forceps Medicon 07.61.25
Vascular forceps S&T JFL-3D.2
Vascular forceps S&T D-5a.2
Forceps Roboz SS/45
Micro scissor 5 mm blade Fine science tools 15000-08
Micro scissor 2 mm blade Fine science tools 15000-03
Scissor Medicon 05.12.21
Clip applier 1 S&T CAF-4
Vascular clamp 1 S&T B-1V
Clip applier 2 BBraun FE572K
Vascular clamp 2 BBraun FE740K
Hemostatic forceps BBraun BH110
10.0 sutures BBraun G1117041
6.0 sutures BBraun 768464
Cauterizer Fine science tools 18010-00
Needle holder Medicon 11.82.18
Ocular ointment Pharmachemie 41821101
Chlorhexidine tincture 0,5% Leiden University Medical Center NA
Heparin Leo Pharma 012866-08
Buprenorphin RB Pharmaceuticals  283732
Isoflurane Pharmachemie 45,112,110
Anesthesia mask Maastricht university custom made
Midazolam Actavis AAAC6877
Dexmedetomidine Orion 141-267
Fentanyl Bipharma 15923002
Continuous anaesthetic induction chamber Vet-tech solutions AN010R

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Rotmans, J. I. Animal Models for Studying Pathophysiology of Hemodialysis Access. The Open Urology & Nephrology Journal. 7, 14-21 (2014).
  2. Kwei, S., et al. Early adaptive responses of the vascular wall during venous arterialization in mice. Am.J.Pathol. 164 (1), 81-89 (2004).
  3. Castier, Y., et al. Characterization of neointima lesions associated with arteriovenous fistulas in a mouse model. Kidney Int. 70 (2), 315-320 (2006).
  4. Krishnamoorthy, M. K., et al. Hemodynamic wall shear stress profiles influence the magnitude and pattern of stenosis in a pig AV fistula. Kidney Int. 74 (11), 1410-1419 (2008).
  5. Ene-Iordache, B., Cattaneo, L., Dubini, G., Remuzzi, A. Effect of anastomosis angle on the localization of disturbed flow in 'side-to-end' fistulae for haemodialysis access. Nephrol. Dial. Transplant. 28 (4), 997-1005 (2013).
  6. Wong, C. Y., et al. Vascular remodeling and intimal hyperplasia in a novel murine model of arteriovenous fistula failure. J.Vasc.Surg. 59 (1), 192-201 (2014).
  7. Rekhter, M., Nicholls, S., Ferguson, M., Gordon, D. Cell proliferation in human arteriovenous fistulas used for hemodialysis. Arterioscler. Thromb. 13 (4), 609-617 (1993).
  8. Falk, A. Maintenance and salvage of arteriovenous fistulas. J. Vasc. Interv. Radiol. 17 (5), 807-813 (2006).
  9. Tordoir, J. H., et al. Prospective evaluation of failure modes in autogenous radiocephalic wrist access for haemodialysis. Nephrol. Dial. Transplant. 18 (2), 378-383 (2003).
  10. Dixon, B. S., Novak, L., Fangman, J. Hemodialysis vascular access survival: upper-arm native arteriovenous fistula. Am. J. Kidney Dis. 39 (1), 92-101 (2002).
  11. Yang, B., Shergill, U., Fu, A. A., Knudsen, B., Misra, S. The mouse arteriovenous fistula model. J. Vasc. Interv. Radiol. 20 (7), 946-950 (2009).
  12. Kang, L., et al. Regional and systemic hemodynamic responses following the creation of a murine arteriovenous fistula. Am. J. Physiol Renal Physiol. 301 (4), F845-F851 (2011).
  13. Wong, C. Y., et al. Elastin is a key regulator of outward remodeling in arteriovenous fistulas. Eur. J. Vasc. Endovasc. Surg. 49 (4), 480-486 (2015).
  14. Kennedy, R., et al. Does renal failure cause an atherosclerotic milieu in patients with end-stage renal disease. Am. J. Med. 110 (3), 198-204 (2001).
  15. Cheung, A. K., et al. Atherosclerotic cardiovascular disease risks in chronic hemodialysis patients. Kidney Int. 58 (1), 353-362 (2000).
  16. Lee, T., et al. Severe venous neointimal hyperplasia prior to dialysis access surgery. Nephrol. Dial. Transplant. 26 (7), 2264-2270 (2011).
  17. Kokubo, T., et al. CKD accelerates development of neointimal hyperplasia in arteriovenous fistulas. J. Am. Soc. Nephrol. 20 (6), 1236-1245 (2009).

Tags

चिकित्सा अंक 108 पशु मॉडल माउस धमनी फिस्टुला परिपक्वता की विफलता हीमोडायलिसिस का उपयोग अंत: कला हाइपरप्लासिया जावक remodeling Microsurgery
धमनी नालव्रण विफलता का एक उपन्यास murine मॉडल: विस्तार में सर्जिकल प्रक्रिया
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Wong, C. Y., de Vries, M. R., Wang,… More

Wong, C. Y., de Vries, M. R., Wang, Y., van der Vorst, J. R., Vahrmeijer, A. L., van Zonneveld, A. J., Hamming, J. F., Roy-Chaudhury, P., Rabelink, T. J., Quax, P. H. A., Rotmans, J. I. A Novel Murine Model of Arteriovenous Fistula Failure: The Surgical Procedure in Detail. J. Vis. Exp. (108), e53294, doi:10.3791/53294 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter