Abstract
Insekten luktsystemet spelar en viktig roll i att upptäcka semiochemicals i miljön. I synnerhet antenn sensilla som hus en eller flera nervceller inuti, anses göra det största bidraget för att svara på de kemiska stimuli. Genom att direkt inspelning aktionspotentialen i lukt sensillum efter exponering för stimuli, ger enkel sensillum inspelning (SSR) tekniken en kraftfull metod för att undersöka neurala svaren från insekter till kemiska stimuli. För sängen bugg, som är en ökänd parasit människa, har flera olika typer av lukt sensillum karakteriserats. I denna studie visade vi neurala svar säng bugg luktsensilla till två kemiska stimuli och dosberoende svar på en av dem med SSR-metoden. På så sätt kan forskare att genomföra tidig screening för enskilda kemiska stimuli på sängen bug olfactory sensilla, vilket skulle ge värdefull information för devellingen av nya säng bug dragande eller repellenter och förmåner säng bugg kontrollinsatser.
Introduction
Den vanliga sängen bug Cimex lectularius L (Hemiptera: Cimicidae), som en tillfällig ektoparasit, är en skyldig blodsugande insekt, vilket innebär att deras överlevnad, utveckling, och reproduktion kräver blodkällor från värdar, både människor och djur 1,2. Även om virusöverföring har sällsynta fall rapporterats på grund av C. lectularius, den bitande olägenheter som genereras av ett angrepp allvarligt påverkar värdar både fysiskt och psykiskt 3. Införandet och utbredda användningen av kemiska bekämpningsmedel, särskilt DDT, sänkte risken för angrepp och i slutet av 1950-talet angrepp var på en så låg nivå att de inte längre var ett allvarligt oro hos allmänheten. Däremot har ett antal möjliga faktorer ledde till uppsving i sängen bug populationer världen över, såsom minskad användning av insekticider, en minskning med allmänhetens medvetenhet, ökad resande aktivitet och utvecklingen av resistens mot insekticider 4-9. </ p>
Kemiska signaler i miljön upptäcks och erkänns av insekter genom lukt organ såsom antenner och maxillary palps. Luktsensilla på insekten antenner spelar en avgörande roll när det gäller att upptäcka dessa kemiska signaler. De kemiska molekyler in i antenn nagelband genom porer på nagelbanden ytan. Luktämne bindande proteiner i antenn lymfan binder till dessa kemiska molekyler och transportera dem till de luktreceptorer 10. De luktreceptorer och deras co-receptor från den icke-selektiva katjon jonkanal på neurala membranet, som kommer att depolariseras när dessa kemiska molekyler erkänts av luktreceptorer 11.
Enkel sensillum inspelning (SSR) utvecklades för att detektera den extracellulära förändringen av aktionspotentialen orsakad genom applicering av antingen kemisk eller icke-kemiska stimuli. Genom att föra in en inspelning elektrod i sensillum lymfan och en referenselektrodi någon annan del av insektskroppen (vanligtvis antingen de sammansatta ögon eller buken), kan spelas in den eldhastighet av neuronerna som svar på stimuli 12. Förändringar i antalet spikar representerar känsligheten hos insekten till specifika stimuli. Kemiska stimuli av olika identiteter och koncentration kommer att framkalla olika neurala reaktioner, med olika bränning priser och temporala strukturer, och kan således användas för att undersöka den kodande processen för insekten till specifika kemikalier.
För den vanliga sängen bugg, både sexuella former delar samma mönster av luktsensilla på antennerna: nio räfflade tappen C sensilla, 29 hårliknande E (E1 och E2) sensilla, och ett par vardera Dα, Dβ, Dγ slät pinne sensilla 13,14. Som flera nervceller har identifierats i varje typ av sensillum, är det inte lätt att skilja aktionspotentialer från olika nervceller inrymt i samma sensillum, så för detta experiment total antalet aktionspotentialer räknades off-line för en ms period 500 före och efter stimulering. Antalet aktionspotentialer efter stimulering sedan subtraheras från antalet aktionspotentialer före stimulering och multiplicerat med två för att kvantifiera förändringar i eldhastighet i varje enskilt sensillum i spikar per sekund 15.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Framställning av instrument, stimuli Solutions och Vägglöss
- Bered en 50% KNO 2-lösning (vikt / volym) i en 20 ml flaska.
- Vässa två volfram microelectrodes i KNO 2 lösning vid 5 V genom att upprepade gånger doppa volframelektroder in och ut ur lösningen.
- Ungefär skärpa volfram tråd genom att doppa ungefär 10 mm av volframtråd i och ut ur KNO 2 lösningen med en hastighet av 2 spenar / sek under ca 5 min, vilket i hög grad kan förbruka den främre änden av volframtråd.
- Noga skärpa elektroden genom doppning omkring 1 mm av trådspetsen i och ut ur lösningen med en hastighet av 2 spenar / sek under minst en minut för att göra en fin och vass spets hos elektroden. Kontrollera elektrodspetsdiameter under mikroskop ofta tills den når 0,2-0,5 pm, vilket bör vara bra nog för att punktera nagelbanden sängen bug olfactory sensillum.
Obs: Medan manuellt skarpaningsmedel elektroden, är doppningshastighet av volframtråden i KNO 2 lösningen inte konstant hela tiden. Med mer praktiken är det mycket lättare att hålla en relativt konstant hastighet i skärpning elektroden. Skärpningen Tiden är också osäkert beroende på hur bra elektroden bör vara. Här, är tillräcklig för att punktera genom det olfaktoriska sensillum en elektrodspets med diametern hos ~ 0,2 um.
- Späd ut varje av de kemiska stimuli i dimetylsulfoxid (DMSO) från den rena föreningen till en initial koncentration av 1:10 volym / volym som en stamlösning. Skapa en serie decadic utspädningar beroende på hur många doser som krävs i försöket, återigen med DMSO, från var och en av stamlösningarna för varje kemikalie. Här använder 10% (+) - β-pinen och eukalyptol.
- Placera omatade eller sju dagar efter utfodring vuxna vägglöss (antingen män eller kvinnor) från Ft. Dix koloni (en gåva från Dr. Haynes i University of Kentucky) som skall användas i than experimentera i en petriskål.
Obs: Det finns ingen exakt nummer för vägglöss placeras i petriskålen. Det kan vara några eller mycket.
2. Bed Bug antenner Förberedelse
- Bedöva vägglöss på is (2-3 min).
- Fix både antennerna och insekts kropp på ett mikroskoptäck med dubbelhäftande tejp och ta bort benen med fina sax.
- Använd en liten nål för att försiktigt röra antennerna så att hålla dem på bandet stadigt.
- Vila täckglas mot en liten kula (~ 1 cm i diameter) av dental vax för att underlätta manipulering och anpassa den till en lämplig vinkel (~ 90 °) under inspelningen elektroden (Figur 1).
- När säkrade, placera sängen bug under ett stereomikroskop, slå på den kalla ljuskällan och justera intensiteten av belysningen tills antennen tydligt presenteras och fokusera mikroskopet på andra flagell av sängen bug antennen vid hög förstoring (720X) .
Notera: Intensiteten hos belysningen som används i experimentet inte kvantifieras, som är beroende på hur försöks ögon känna intensiteten av belysningen.
3. Single sensillum inspelning
- Anslut förförstärkaren (10X) med signalen förvärvsstyrenheten, som är ansluten till datorn för signalinspelning och visualisering. Slå på datorn och starta programmet, till exempel, AutoSpike32 och klicka på "Record" -läge från menyraden. Välj sedan "vågen" för att starta registrering av vågsignaler.
Obs: En rak linje som löper från vänster till höger på skärmen upprepade gånger ska nu vara synliga. Här varar inspelningsfönstret 40 sekunder. Max våg inspelning är 10 sek. Valda samplingshastigheten är 96000 och digital samplingsfrekvens är 240. Det finns 0% offset och ingen filtrering, ingen rättelse för inspelningssignalerna. Alla dessa parameterinställningar i programvaran kan ändras efter behov. <li> Aktivera högtalaren är ansluten till förförstärkaren, som används för att presentera toningsläget för de neuronala svar från antenn sensillum. - Inför referens elektroden i buken av den stabiliserade säng bugg.
Obs: Referenselektroden hölls av en metall står magnetiskt fäst på luftbordet. - Efter referenselektroden har anslutits till bed bug buk, flytta inspelningen elektroden, som är ansluten till förförstärkaren och manipuleras av en mikromanipulator, mot den bakre änden av sängen bug antenn.
- När inspelnings elektroden är i kontakt med den högra antenntoppen, slå på mikroskop och lokalisera elektroden vid låg förstoring.
- Justera inspelnings elektroden medan gradvis ökning av förstoringen till dess både elektroden och antennal sensillum ligger i samma plan och tydligt synliga under mikroskop.
Obs: Vid den här tiden, är mikroskopet vanligaly på högsta förstoring. - Sätt inspelningen elektroden i axeln av sensillum hjälp av mikromanipulator och gå lite djupare om bakgrundsljudet är högt jämfört med aktionspotentialen.
- När tydliga aktionspotentialer observeras från den inspelade sensillum, fylla en mikropipett med 10% (+) - β-pinen. Använd mikropipett för att avsätta 10 | il alikvot av 10% (+) - β-pinen på ett filterpappersremsa (~ 3 x 15 mm) placerades inuti en glas pasteurpipett.
- Anslut den laddade pipetten till utloppet hos pulsflödesröret av stimulans styrenheten och placera spetsen på pipetten in i det lilla hålet i röret orienterad mot antennen.
- När alla dessa anslutningar har stabiliserats, tryck ned fotomkopplaren enligt stimulans styrenheten för att leverera en 0,5 sek puff av stimulus (0,5 liter / min) in i den kontinuerliga fuktad luftströmmen. Registreringen av aktionspotentialer kommer att inledas samtidigt när footswitch är nedtryckt. Inspelningen kommer att pågå i 10 sekunder med start 1 sek före stimuleringen.
- Räkna aktionspotentialer off-line för två 500 ms perioder, en före och en efter stimuleringen. Subtrahera varje förändring i spetsen hastigheten under 500 msek efter stimulering från spontan aktivitet registrerats under de föregående 500 ms och omvandla räkningarna i den konventionella skala av spikar / s genom att multiplicera dem med två.
4. Stimulus Byte i SSR
- När fotpedalen har utlösts, leverera 10% (+) - β-pinen i pipetten på sängen bug antenner och registrera svar på denna specifika luktämnen i 10 sekunder, varefter pipetten avlägsnas.
- Märk en ny pipett med 0,001% eukalyptol som ska testas. Placera en liten bit filterpapper på vilket 10 fil av stimulus har anbringats, in i det ny pipett.
- Vänta 2-5 min tills stimulansen är helt vaporized i glaspipett. Fäst pipetten på utloppet från pulsflödesröret.
- För in pipettspetsen i det lilla hålet hos röret orienterad mot antennen. Trampa fotpedalen och starta 10 sekunder inspelningen.
- Koppla pipetten och förbereda en annan pipett med 0,01% eukalyptol.
- Testa resten av doserna av eukalyptol (från 0,001% till 10%) på antenn sensilla att observera dosberoende svar. Test från det mest spädda till de minst utspädda doser.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Single sensillum inspelning är en kraftfull utredningsteknik som används i studier av insekts kemisk ekologi och neurala fysiologi. Undersöka neurala svaren från insekter till olika flyktiga föreningar, särskilt de som tros vara ekologiskt relaterat till överlevnad och utveckling av insekter, ger oss inte bara ovärderliga insikter insekten olfaction processen, men också öppnar lovande nya vägar som kan medföra till utveckling av nya användbara reagens för skadedjursbekämpning.
Den vanliga sängen bugg, som en ökänd urban skadedjur, har verkligen uppmärksammats av många forskare. Bland de olika studie områden med anknytning till vägglöss, är deras luktmekanism av yttersta vikt för kemisk ekologi av vägglöss. Tidigare studier har beskrivits explicit, mängden och fördelningen av olika typer av lukt sensillum på sängenbugg antenner. Såsom visas i fig 2A, bed bug antenner besitter fyra segment (SC, PE, F1 och F2). Majoriteten av det olfaktoriska sensilla presenteras på den bakre änden av den 2: a flagellen (F2), men deras fördelning är distinkt olika för varje typ: D sensilla, nämligen Dα, Dβ och Dγ, är endast belägna utmed den inre sidan av antenner (Figur 2C), under det att C och E (E1 och E2) sensilla finns på båda sidor av antenner (Figur 2B). Därför, för att se till att vi registrera neurala svar på D sensilla, är väsentligt noggrann placering av antennen.
Eftersom både sexuella former av säng bug delar samma mönster av sensilla typer och insidan av sina antenner innehåller alla typer av sensilla, med inriktning på detta område gör det mycket lättare att spela in de kemiska reaktioner i alla olika typer av sensilla separat på antennene (Figur 3A). I enstaka sensillum inspelning, sensilla olika lukt uppvisar neurala signaler med distinkt olika åtgärder potentiella typer och amplituder (Figur 3B). Till exempel är E sensilla kända för att ha en eller två neuroner inuti, medan D-typ sensilla hus fler neuroner än antingen E- eller C-sensilla, som producerar mer komplicerade aktionspotentialer än de andra som följd. Amplituderna hos de neurala svar från C sensilla är mycket mindre än de för de andra Sensillum typerna.
När anslutningarna elektrod har satts upp, kan spelas in de neurala svar från varje typ av sensillum till varje stimulus baserat på deras identitet och intensitet. För vissa stimuli till vilka vägglöss är extremt känsliga, kan det neurala svaret vara mycket starka och sista flera sekunder bortom avslutande av stimulering. Exempelvis, som svar på 10% (+) - β-pinen, vägglöss visadeen stark reaktion med en stor förbränningshastighet (≥200 spikar / sek) och super-ihållande tidsmässig dynamik jämfört med kontrollen med enbart lösningsmedel som stimulus (figur 4A och B). Olika stimuli kan framkalla helt andra neurala svar från samma sensillum och olika koncentrationer av samma stimulans kommer sannolikt att generera helt andra tänd frekvenser. Såsom visas i fig 5, öka koncentrationen av eukalyptol höjde tänd frekvenser från 30 spikar / s vid 0,001% till 240 spikar / s vid 10% på ett dos-beroende sätt.
Figur 1. En schematisk bild som visar fixeringsförfarandet för vägglöss. Denna bed bug stabiliseras på täck med antennerna fast på bandet. Den hopsatta Provet placeras sedan på en magnetisk stadium. Orienteringen och höjden av provet cen justeras till en lämplig vinkel mellan bed bug antenner och inspelningen elektroden. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2. Fördelning av luktsensilla på sängen bug antenner. (A) En Scanning elektrod mikroskop (SEM) bild av en säng bugg antenn. Antennen har fyra segment, den Sculpus (SC) Pedecel (PE), varvid den första flagellen (F1) och den andra flagellen (F2). De flesta av luktsensilla ligger på F2, även om några luktsensilla har också hittats på F1, som tros vara relaterade till deras funktion sammanläggning feromon upptäckt för sängen bug 16. (B) En SEM-bild av den yttre sidan av F2, som inrymmer C och E olfactory sensilla. (C) En SEM-bild av insidan av F2, som konstaterades att hysa alla olika typer av luktsensilla: D (Dα, Dβ, Dγ), C och E. Klicka här för att se en större version av denna siffra .
Figur 3. Typiska neurala signaler av olika typer av luktsensilla på sängen bug antenner. (A) Högupplöst SEM-bilder av varje typ av lukt sensillum på sängen bug antenner. (B) Typiska neurala signalerna för de olika luktsensilla före exponering för ett stimulus. Dα, Dβ, Dγ och C sensilla, som hus flera lukt sensoriska neuroner (OSN), uppvisar mer komplicerade aktionspotentialer än E1 och E2 sensilla, som contain bara en eller två OSN. Amplituderna av aktionspotentialer från C sensilla är mycket mindre än i andra Sensillum typer. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4. Representant neurala svar på stimuli som vägglöss är känsliga för. (A) Signal spår som visar den typiska neurala svaret från ett doft sensillum (Dγ) till lösningsmedlet, som användes som kontroll på den inre sensillum inspelningen. Signal spår är inställda på att starta en sekund före 0,5 sek puff av stimulans. Signal spår fortsätter inspelning för 10 sekunder efter initiering av stimulans puff. (B) signalspår visar extremt starka neurala svar på ett doftsensillum (Dγ) till en botanisk stimulans, 10% (+) - β-pinen. Efter puff av (+) - β-pinen levereras till Dγ sensillum är OSN inrymda inuti denna sensillum eldas med hög frekvens och en långvarig tidsmässig dynamik. Den vita stapeln ovanför signalspåret indikerar en sek intervall före stimulans exponering, den röda stapeln ovanför spåret motsvarar leverans av stimulans puff på lukt sensillum och svarta fältet ovanför spår indikerar signalen registreras efter avslutad stimulans puff. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 5. Representativa dosberoende svar OSN till stimuli. Använda en annan botaniska stimulans, eukalyptol som example, den Dγ sensilla uppvisade en dosberoende svar på olika koncentrationer av eukalyptol. Eftersom halterna ökade från 0,001% till 10%, tändfrekvenserna ökade från 30 spikar / s till 240 spikar / sek. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Den inre sensillum inspelning teknik har i stor utsträckning använts för att testa de neurala svaren från insekter som bananflugor, myggor och vägglöss till olika kemiska stimuli i miljön. Dessa kemiska stimuli ofta löstes och späddes i ett vanligt lösningsmedel för att framställa olika doser av behandlingar. Däremot kan olika lösningsmedel producera helt olika frisättningshastigheter för stimuli. Tidigare studier på vissa omfattande studerade insekter såsom Drosophila melanogaster, Anopheles gambiae, Culex quinquefasciatus och Aedes aegypti har vanligtvis används paraffinolja som lösningsmedel för att upplösa stimuli, eftersom dessa insekter är relativt okänsliga för paraffinolja 17-20. Paraffinolja har också använts i tidigare enda sensillum inspelning studier av vägglöss, av samma anledning 14. Emellertid kan den mest använda lösningsmedlet inte vara det bästa för varje insektsarter. I caSO om vägglöss, både paraffinolja och DMSO, till vilka vägglöss uppvisar också okänslighet, har använts för att lösa upp stimuli i olika studier 14,15, men samma doser av stimuli utspädda i DMSO tycks framkalla mycket starkare neurala svar på den sensilla av vägglöss. Exempelvis, DMSO-upplöst R - (+) - limonen och S - (-) - limonen alstrade neurala svaren hos ≥70 spikar / sek från Dγ sensilla på bed bug antenner, medan paraffinoljan upplöst limonen framkallade neurala svaren från endast ≤25 spikar / sek från Dγ sensilla. Denna minskning av de neurala svaren är ganska vanligt i stimuli som har spätts ut med paraffinolja, förmodligen på grund av den långsammare frisättningshastighet av paraffinolja jämfört med DMSO. Denna långsammare frisättningshastighet minskar mängden stimulans levereras på ytan av den sensillum och kan resultera i en missvisande slutsats om känsligheten hos insekter att vissa semiochemicals.
Två kritiska steps för att genomföra den inre sensillum inspelningen är beredning 1) prov och 2) signalinspelnings. För provberedningen, eftersom vägglöss har mycket starka ben och aktivt rörliga antenner, är det mycket viktigt att avlägsna alla ben och hålla antennerna ordentligt på dubbelhäftande tejp. I signalinspelningsprocessen, ibland är det läges omöjligt för elektroden för att peka in i sensillum axeln. Om detta är fallet, kan elektroden punktera den bakre änden av sensillum, som alltid ger en mycket ren och tydlig signal med mycket lite bakgrundsljud.
Eftersom det finns flera nervceller inrymt i D och C-typ sensilla, är det ofta svårt att skilja mellan enskilda nervceller baserat på de amplituder och former av aktionspotentialer som producerats under SSR. Emellertid är det fortfarande möjligt att visa skillnader i bed bug svar på olika stimuli på grundval av Kombinerade avfyrningsfrekvensen för alla neuroner i samma sensillum. Teoretiskt, vägglöss är känsliga för vissa stimuli med kraftig stimulering medan okänslig för andra stimuli med svag stimulering vid samma dos. Ytterligare studier som integrerar beteendetester och information om deras neurala svar på dessa stimuli skulle därför ge meningsfull information om ekologiskt relaterade semiochemicals för vägglöss.
I denna studie använde vi också SSR teknik för att testa de neurala svaren av luktsensilla till olika doser av stimuli. Vi observerade en dosberoende mönster i bed bug s neurala svar på olika kemikalier. Men med tanke på den komplexa miljö vägglöss lever i, kommer den verkliga dosen av flyktiga möter vägglöss i sina normala omgivning vara mycket låg. Som ett resultat, de semiochemicals som framkallar starka neurala svar vid låga doser ned till 01:10 5 volym / volym och 1:10 4 volym / volym är mer benägna att vara biologiskt meningsfull för vägglöss än andra kemikalier thatt fungerar endast vid höga doser. Därför, de semiochemicals som verkar vid låga doser spelar troligen en viktig roll i chemoreception av vägglöss, hjälpa dem att hitta en värd eller undvika negativa faktorer, och kommer således att ge användbar vägledning vid screening för lovande bed bug dragande eller repellenter för användning i både laboratorie- och fältanalyser.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Tungsten wire | A-M SYSTEMS | #716500 | Used for preparing the electrode |
| KNO2 | Sigma | #310484 | Used for sharpening the tungsten wire |
| AC Power Supply | BK Precision | 1653A | Providing the voltage in sharpening the tungsten wire |
| Leica Z6 APO Microscope | Leica | 10447424 | Used for observing the sensilla on antennae |
| Simulus controller | Syntech | CS-55 | Used for controlling the stimulus application |
| 4-Channel USB Acquisition Controller | Syntech | IDAC-4 | Real-time on screen display of all signals before and during recording |
| Light Source | SCHOTT | A20500 | Providing light sources for observation |
| Micromanupulator | Leica | 115378 | Used for minor movement of electrode |
| Speaker | Juster | 95a | Connected with Acquisition Controller IDAC-4 and providing sound for the signal |
| Magnetic stand | Narishige | GJ-1 | Used to hold the reference electrode, stablized bed bug and stimulus delivery tube |
| TMC Vibration Isolation Table | TMC | 63-500 | Used for isolating the vibration from the equipments |
| Coverslip | Tedpella | 2225-1 | Used for holding the bed bug |
| Double-sided Tape | 3M | XT6110 | Used for stablizing the bed bug on the coverclip |
| Dental Wax | Dentakit | DK-R012 | Used for supporting the coverclip where bed bug is stablized |
References
- Bartonicka, T., Gaisler, J. Seasonal dynamics in the numbers of parasitic bugs (Heteroptera, Cimicidae): a possible cause of roost switching in bats (Chiroptera, Vespertilionidae). Parasitol Res. 100 (6), 1323-1330 (2007).
- Thomas, I., Kihiczak, G. G., Schwartz, R. A. Bed bug bites: a review. Int J Dermatol. 43 (6), 430-433 (2004).
- Anderson, A. L., Leffler, K. Bed bug infestations in the news: a picture of an emerging public health problem in the United States. J Environ Health. 70 (9), 24-27 (2008).
- Boase, C. Bed bugs (Hemiptera: Cimicidae): an evidence-based analysis of the current situation. Sixth international conference on urban pests. OOK-Press Kft. Robinnson, W., Bajomi, D. Budapest, Hungary, , (2008).
- Doggett, S. L., Geary, M. J., Russell, R. C. The Resurgence of bed bugs in Australia: with notes on their ecology and control. Environ Health. 4 (2), 30-38 (2004).
- Ter Poorten, M. C., Prose, N. S. The return of the common bedbug. Pediatr Dermatol. 22 (3), 183-187 (2005).
- Yoon, K. S., Kwon, D. H., Strycharz, J. P., Craig, S., Lee, S. H., Clark, J. M. Biochemical and molecular analysis of deltamethrin resistance in the common bed bug (Hemiptera: Cimicidae). J Med Entomol. 45 (6), 1092-1101 (2008).
- Wang, L., Xu, Y., Zeng, L. Resurgence of bed bugs (Hemiptera: Cimicidae) in mainland China. Fla Entomol. 96 (1), 131-136 (2013).
- Haynes, K. F., Potter, M. F. Recent progress in bed bug management. Advanced technologies for managing insect pests. Ishaaya, I., Palli, S. R., Horowitz, A. R. , Springer. New York. 269-278 (2013).
- Carey, A. F., Carlson, J. R. Insect olfaction from model systems to disease control. Proc Natl Acad Sci. 108 (32), 12987-12995 (2011).
- Leal, W. S. Odorant reception in insects: roles of receptors, binding proteins, and degrading enzymes. Annu Rev Entomol. 58, 373-391 (2013).
- Den Otter, C. J., Behan, M., Maes, F. W. Single cell response in female Pieris brassicae. (Lepidoptera: Pieridae) to plant volatiles and conspecific egg odours. J Insect Physiol. 26 (7), 465-472 (1980).
- Levinson, H. Z., Levinson, A. R., Muller, B., Steinbrecht, R. A. Structural of sensilla, olfactory perception, and behavior of the bed bug, Cimex lectularius., in response to its alarm pheromone. J Insect Physiol. 20 (7), 1231-1248 (1974).
- Harraca, V., Ignell, R., Löfstedt, C., Ryne, C. Characterization of the antennal olfactory system of the bed bug (Cimex lectularius). Chem Senses. 35 (3), 195-204 (2010).
- Liu, F., Haynes, K. F., Appel, A. G., Liu, N. Antennal olfactory sensilla responses to insect chemical repellents in the common bed bug, Cimex lectularius. J Chem Ecol. 40 (6), 522-533 (2014).
- Olson, J. F., Moon, R. D., Kells, S. A., Mesce, K. A. Morphology, ultrastructure and functional role of antennal sensilla in off-host aggregation by the bed bug, Cimex lectularius. Arthropod Struct Dev. 43 (2), 117-122 (2014).
- Bruyne, M., Foster, K., Carlson, J. R. Odor coding in the Drosophila antenna. Neuron. 30 (2), 537-552 (2001).
- Qiu, Y. T., Loon, J. J. A., Takken, W., Meijerink, J., Smid, H. M. Olfactory coding in antennal neurons of the malaria mosquito, Anopheles gambiae. Chem Senses. 31 (9), 845-863 (2006).
- Ghaninia, M., Ignell, R., Hansson, B. S. Functional classification and central nervous projections of olfactory receptor neurons housed in antennal trichoid sensilla of female yellow fever mosquito, Aedes aegypti. Eur J Neurosci. 26 (6), 1611-1623 (2007).
- Hill, S. R., Hanson, B. S., Ignell, R. Characterization of antennal trichoid sensilla from female southern house mosquito, Culex quinquefasciatus Say. Chem Senses. 34 (3), 231-252 (2009).
