Summary
ミバエの戦いの間に、行動パターンが見られ、ダイナミクスを戦うし、学習や記憶が実験条件によって影響される関連します。ここで紹介するプロトコルは、完全に実験中にハエの取り扱いがなくなり新たな手順を説明します。これは戦いのダイナミクスを向上させ、強力な「敗者」の効果を形成することができます。
Abstract
キイロショウジョウバエでの積極的な行動はステレオタイプの行動パターンの連続的な表現で構成されている（分析のための1を参照）。この複雑な挙動は、遺伝子、ホルモン、および環境因子によって影響されます。多くの生物のように、前回の戦いの経験は、ハエの戦いの戦略とそれ以降のコンテストの結果に影響を与える：戦いを失うことは可能性が学習と記憶2-4を伴う 「敗者」の効果を明らかにし、後でコンテストを失う確率が高くなります。侵略のような複雑な社会的行動の発現を伴う学習と記憶は、動物5,6のテスト前の取り扱いに敏感です。多くの実験手順は、侵略7-9を研究するために別の研究室で使用されている、ハエの取り扱いを除外しかし、日常的に使用されるプロトコルは、現在入手可能です。ここでは、insteaを使用して、ハエの取り扱いがなくなり、新しい行動の装置を報告D彼らの生来の負の走地性の応答は、にや戦闘室の外に動物を移動します。このプロトコルでは、食品のカップを含む小さな円形の戦いアリーナ前ハエの導入に取り外し可能なプラスチック製のスライダーによって2等分されています。ハエは、チャンバドアと走地性をスライドを経由して自宅分離バイアルからチャンバーを入力してください。プラスチックスライダーを除去すると、ハエが相互に作用するのは自由です。指定された期間の後、ハエは、その後の実験のためのスライダによって再び分離されています。このすべては、個々のハエの取扱いことなく、容易に行われます。この装置は、ハエの戦いで「敗者」効果の形成を含む侵略と関連する学習や記憶を研究するための新しいアプローチを提供しています。また、この新しい汎用行動装置は、ハエの他の社会的行動を研究するために使用することができると、一般的には、基本的な行動プロセスの経験に関連した変化を調査するための関心を持たれるべきものです。
Introduction
動物系での攻撃が強く、食品、領土や仲間のような資源の獲得と保持に関連しています。これは、個人の適応に果たす重要な役割を考えると、それは侵略は動物界全体で進化してきたことは驚くべきことではありません。直接個人に利益をもたらす適応形質として、強力な学習と記憶コンポーネントは、攻撃に関連している。社会的地位のための競争では、前回の戦いの経験が、後にコンテストの結果に影響を与えます。一般に、従来負け経験が増加し、そして勝利経験が減少し、後コンテストを失う確率は、（「敗者」と「勝者」効果と呼ばれます）。 「敗者」の効果は、種の広い範囲で観察されている、といくつかの報告は、「勝者」の効果は、通常より短い期間2,10,11のものでありながら、これらは数日間続く ことができることを示唆しています。
攻撃的な行動の最初の報告ショウジョウバエ（D. ampelophila）で性別認識や性別の選択12に関する論文で1915年にスタートバントによるものでした。半世紀後、男性の果物のより完全な検査は侵略を飛ぶミバエの戦いの間に観察された行動パターンのほとんどが記載されている、行われました。これらの実験は主に13-15時間にわたって観察オスとメスのハエの小グループで行いました。最近では、強力な遺伝子ツール、ダイアディック同性の戦いのセットアップと観察、Dの短い時間を加えましたショウジョウバエは侵略1,16の生物学の研究のための重要なモデル系として浮上しています。男性と女性のハエの同性ペア間の戦いの分析は、侵略は、その統計的に信頼できる方法1,17で一方から他方への移行ステレオタイプの行動パターンを伴うことが示されました。他の人が戦いで観察しながら観察行動パターンの中には、性別固有のものです男女ともsです。男の戦いは、女性の戦いよりも高い強度レベルに移動し、明確な「勝者」と「敗者」との支配関係の形成をもたらします。現在では、多くの研究室は、生化学18、神経7,19-21、および攻撃性の遺伝的基盤22を調査し始めています。残念ながら、戦いのダイナミクスと支配関係の形成と維持への洞察を得るための研究のメタ分析は、異なる実験室で実験手順を多数の使用に問題があります。基本的に文献に記載された技術のすべては、競技場の外にハエを転送するために競技場19,23,24へと行動実験3,4の間にそれらを導入するハエの取り扱いと操作を伴います。ジェントル吸引がハエ3,4,23-25 を操作するための最も一般的な方法ですが、寒さやCO 2麻酔にもかかわらず、P、9,26をも使用されていますrevious研究はすでにこれらの手順は、ハエの行動27,28に有害な影響を持っていることを報告しています。少なくとも24時間の期間は、動作29,30への影響を最小限にするために任意の麻酔薬の使用後に推奨されます。
ハエは、前の戦いの経験から学び、学習と記憶が同行し、アゴニストの出会いの結果であることを示唆し、新しい状況で彼らの行動パターンの使用量を変更します。その意味で、戦いは戦略が働いていることを学び、その後の遭遇の間にますます頻繁にそれを使用飛ぶいるオペラント条件付け学習状況に似て飛びます。支配関係が受賞者はますますと敗者少なくを突進して、戦いの間に確立された後、ハエは、彼らの戦いの戦略を変更します。分離の期間の後、以前の敗者は、はるかに従順行動を示し、ナイーブFLと対になったときに2 番目の戦いを失う可能性が高いですIESまたは以前の受賞者3,4。しかし、ハエの取り扱いを除外実験手順が存在しないことは、困難な「敗者」の効果の詳細な検討を行いました。最近の研究では、日常の取り扱いがなくなり新しいプロシージャに対する行動室にハエを導入する研究室（吸引及び冷麻酔）で使用される2つの実験手順を比較しました。結果はコールド麻酔が吸引よりも攻撃性にはるかに大きな負の影響があったが、あっても吸引がハエによって攻撃性のレベルを減少させることを示しました。吸引は、しかし、攻撃性を伴う学習と記憶に非常に重大な影響を与えるでした。ハエの取り扱いが実験手順5,6から除去されたときに、2つの実験手順（吸引なしの取り扱い）、強固な「敗者」効果と同一のプロトコルに続いてのみ観察されました。
理想的には、ラボでのショウジョウバエの侵略の研究ratoriesは通常、（リソースの競合、領土防衛するとスペースが脱出するために）野生で遭遇飛ぶ環境の状況を含める必要があります。また、実験条件は確実に（麻酔薬としてのCO 2の使用を制限、動物の取扱いを最小限に抑えるようにしてください、と実験手順を標準化）、誘導検査中の行動を観察し、解釈するために最適化する必要があります。ほとんどまたはこれらの問題のすべてを解決しようとすると、我々は中と行動アリーナにそれらを導入した後、前にハエの取り扱いがなくなり、新しい行動の装置を設計しました。これらの装置では、ハエがにとの戦い室の外に移動して転送するために彼らの生得的な負の走地性を使用しています。ハエの処理を排除することによって、プロトコルはを目指して：（a）は、個人間での行動変動性を減少させます。ハエが相互作用し、明確な支配関係（オス）を生成するための（b）に必要な時間を短縮します。 （c）確実に十分に強いbehavioを誘導RAL変化は、「敗者」効果の形成を可能にします。
このプロトコルは、新しい実験装置と侵略を分析すると Dに強い「敗者」効果の形成を可能にするためにステップの手順を追って説明しますメラノ。我々は、この行動の装置は簡単にミバエが示す他の社会的行動の研究のために適合させることができることを期待しています。
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Protocol
注：以下は、私たちは男性ミバエ（キイロショウジョウバエ）のペア間の侵略の信頼性の高いトリガを可能にするために使用する実験プロトコールのステップバイステップの説明です。この手順は、「敗者」効果の形成を誘導します。このプロトコルを使用して、短期的な「勝者」効果も最近5,6を報告されている。 図1は、行動実験のタイムラインを示しています。
攻撃実験の1タイムライン図 。 1日目に、（翼が黒くなる）後期のオス蛹は、新たに調製した分離バイアル中に分離されています。大人として浮上した後、5日目に、4日齢の雄のハエを CO 2で麻酔し、識別目的のために、異なる色で塗装。 7日目に、食品のカップや戦闘室があります行動実験を設定するために用意しました。二6-7日齢の成人男性は、チャンバー内にロードし、対話することができますされている。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
1. 1日目：蛹の社会的孤立
- 上げて、25℃、相対湿度50％で、環境的に制御12時間の明/ 12時間暗サイクルインキュベーターでフライストックを維持します。
- 溶融するまで加熱新鮮なフライ食品：アイソレーションバイアルを準備します。パスツールピペットを用いて、単一の空のガラス試験管（1.6×10 cm）の中に約1.5ミリリットル溶融フライ食品のを転送します。食べ物が固化することを許可します。
- 蛹を分離：（羽が黒くなるとき）細かい絵筆を使用すると、静かに株式バイアルから後期のオス蛹を削除し、新たに調製された食品を含む試験管の側に置きます。綿との密接なアイソレーションバイアル（ 図2）。
図2.社会的孤立。ワン後期オス蛹は、新たに調製し、分離バイアル側に配置されています。蛹を含む分離バイアルを25℃、相対湿度50％で12時間の明/ 12時間暗インキュベーターに入れている。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
2. 5日目：個体識別の目的のためにハエを絵画
- CO 2麻酔の負の影響を最小限にするために4日齢の雄ハエや行動実験前に2日で5日目に、この手順を実行します。
- CO 2でハエを麻酔。 細かい爪楊枝で、胸部にアクリル塗料の小さなドットを配置します。頭、翼、腹部や脚（ 図3）に塗料を置かないでください。
- 約10秒のためのペイント乾燥させ、ゆっくり元の分離バイアルに戻ってハエを転送します。
- 25℃、相対湿度50％で12時間の明/ 12時間暗インキュベーターに分離バイアルを返します。
図3.個人識別。CO 2でハエを麻酔した後、アクリル絵の具の小滴は、胸部に適用されます。個体識別の目的のために、異なる色の（白ここ青）が使用されます。この段階でのCO 2の使用に関する以下の説明を参照してください。 このfiguの拡大版を表示するには、こちらをクリックしてください再。
3. 7日目：装置の準備
- 食品カップを準備します。
- それが溶けるまで新鮮なフライ食品を加熱します。
- パスツールピペットを用いて、スクリューキャップバイアル（直径1.5cm、1cmの高さ）の蓋に約0.8ミリリットル食品を転送し、冷却します。気泡を避けてください。
- 数滴の水とドライイーストを混合することにより、新鮮な酵母ペーストしてください。ときに厚い、爪楊枝（ 図4）を有する食品カップ表面の中央に酵母ペーストの小滴を適用します。
食品カップの準備図4。食品カップ、新鮮なフライ食品を用いて調製されます。食品固化した後、酵母ペーストのドットは、食品カップ面の中央に配置されている。Vにはこちらをクリックしてくださいこの図の拡大版をIEW。
- 個々の戦闘室を準備します。
- 使用前に完全に水で毎回装置および個々の戦闘室を洗います。使用前にペーパータオルで乾燥。
- 各戦闘室の中心に食品カップを置き、パテのドロップで所定の位置に固定します。
- 装置の蓋（ 図5）との戦闘室をカバー。
- 25℃での高湿度環境（60％）に装置を置きます。
- 戦闘室を照らすと、上から記録するビデオカメラを設定するには、装置の上に光源を配置します。
図5.個々の戦闘室を準備。表面上の酵母ペーストのドットと新たに調製された食品カップを洗浄し、個々 Fi接続に固定されていますチャンバーをghting。チェンバースは、個々の戦闘室に不透明なプラスチック分配器の挿入を可能ツーピースカバーで閉じられている。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
4. 7日目：行動実験
- 6-7日齢の雄のハエと行動実験を実行します。
- 各戦闘室にプラスチック製の仕切りを挿入します。
- 分離管から綿のプラグを外し、装置の側面に開いた穴の下にチューブを置きます。
- ハエは、通常、数秒以内に、負の走地性により戦闘室に入るみましょう。
- フライ、チューブを残し、室内に入った後、スライドの壁を閉じます。
- 装置の他の側の戦い室に第2のフライを導入する手順を繰り返します。
- 裏面照射videotapiで装置を配置ngの位置。
- ビデオ録画を開始し、ハエが対話できるようにプラスチック製の仕切りを取り外します。
- 攻撃実験のために：
- これらの実験では、レコードは、強い支配関係の形成を確実にするために、少なくとも20分間戦います。
- 所望の期間が経過した後、録画を停止します。
- 上記の手順を逆にすることによって戦闘室からハエを削除します。
- 徹底的にそれぞれ使用し、すすぎ後の中性洗剤と水で行動装置を洗います。
- 「敗者」効果実験のために：
注：これらの実験では、最初の戦いは、調整段階と試験段階である第2の戦いと考えられます。戦いの間に残りの期間が異なることがありますが、10分には、強力な「敗者」効果を形成することができます。- 最初の戦いを実行するために、上記の手順に従ってください。
- 重要なステップ：「敗者」の考え方の形成を誘導するために、電子最初の戦いは、少なくとも20分、強力な支配関係を確立するために長いnsure。 20分後、ハエを分離するために戦闘室にプラスチック分割器を再挿入します。
- 残りの10分の期間の後、静かにハエが第二の戦いのために対話できるようにプラスチック製の仕切りを取り外します。
- 第20分の戦いの終わりには、ビデオの録画を停止します。
- 上記のように行動室からハエを削除します。
- もう一度、徹底的行動装置を清掃してください。
- 攻撃実験のために：
5.行動分析
- ムービーを転送
- パソコンにカメラを接続します。
- 「選択したクリップを結合する「ビデオ変換ソフトウェアおよびオプションを使用して、ハエを.MOVと一緒に映画のクリップを結合するためにハエの.MTSに変換します。
- ビデオ・リーダー・ソフトウェアと各ムービーを観察し、分析します。
- 採点行動
注：これは手動で行うか、私たちすることができます利用可能な場合の行動解析プログラムソフトをる。下の図は、「敗者」効果の可能な手動分析を説明しています。- 食品カップにハエ間の最初の出会いの時間をスコアし、最初の突進の出現の時間（1フライに高い上昇する行動パターン（出会いは、少なくとも2秒続くハエのペア間の相互作用がある）、その後ろ足とダウンのスナップと）相手をつかむしようとします。次に、（最初の出会いと最初の突進の間の間隔）を突進する待ち時間を獲得。
- 戦いの間に出会いと突進の合計数をカウントします。
注：必要に応じて、1は、例えば、翼の脅威、ボクシング、フェンシング、後退または最初の突進前の出会いの数のように、他の行動パターンを獲得することができます。 - 支配の確立時のスコア（最初の出会いの間の時間、もう1つは食品カップ後方から3回連続リトリートを飛ぶ時間突進を受けえー）。飛ぶ注意が勝者とする戦いの敗者です。
- 「敗者」効果を計算
- 以前の敗者は、2 番目の戦い（失う敗者：LL）を失うする戦いの数で割り戦いの総数では、得られた割合は「敗者」効果を表して100を掛け：
[（＃はLLを飛ぶ）/（＃総戦い）]×100 - 「敗者」効果が50％の期待値と統計的に異なるかどうかを比較するためにカイ二乗検定を使用してください。
- 以前の敗者は、2 番目の戦い（失う敗者：LL）を失うする戦いの数で割り戦いの総数では、得られた割合は「敗者」効果を表して100を掛け：
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Representative Results
このセクションでは、行動室の設計と侵略と「敗者」効果の形成を測定する上述のプロトコルを、以下の行動実験の典型的なセットの分析を提示します。また、この装置を用いて測定することができる他の行動のサンプルが示されています。
図6は、新たな装置の概略図を示します。戦闘室のとおりです。装置は、3つの円筒形のウェル（22.86ミリメートル直径17ミリメートル、高さ寸法）で構成されています。ツーピースカバーは上部の戦闘室を閉じて、2つの等しい部分にチャンバーを分割薄い不透明なプラスチックの分周器を挿入することができます。装置の各側には、3つの穴（15.88ミリメートルの直径）で壁をスライドすると、それらの単離バイアルから直接負の走地性により戦闘室にハエの読み込みを可能にします。ハエが戦闘室を入力した後、スライド壁が使用されていますdは全てのチャンバの側面を閉じます。この時点では、2つのハエは戦いアリーナ内にあるが、分周器による対話することはできません。これらを除去することにより、ハエが相互に作用して自由であり、その後の行動パターンを観察し、記録することができます。
攻撃実験：野生型CSの男性のペア間の38試合を行いました。 （ 表1）ハエが食品カップにあったときに別の行動のパラメータが採点したとの戦いのダイナミクスを分析しました。 24出会い（ハエ間の短い会議）、54突進（より高い強度の戦いの指標）の平均は、通常は2 回目の遭遇時に配信第一突進して、20分の期間中に観察されました。平均して、1 回目の出会い、1 回目の突進と優位性を確立するための時間は、録画開始後2、4、8分を見られました。ほとんどの場合、戦いの最後の12分は、高強度ENCOの反復配列からなります下位の動物が支配または各動物の従順なステータスを強化、近づいて攻撃されると後退してunters。
「敗者」効果実験は、「敗者」効果を形成するために検索するために、20分の持続時間の21 1の戦いは、野生型CSの男性の対の間で行いました。チャンバースライド分周器は、その後、ハエを分離するために挿入しました。 10分後、2 回目 20分の戦いは、（a）は、以前の敗者と勝者おなじみの間で行われた、または（b）の前の敗者と勝者なじみのない、これらは（ 図7）は、上記のように分析しました。両方の条件では、20以前の敗者は、強力な「敗者」効果を実証し、その2 番目の戦い（95.5パーセント）を失いました。戦いの結果は、両側検定カイ二乗分析と50-50の期待値と比較して、非常に重要な「敗者」効果が認められました。他の行動の変化は、個人を失うことに観察されました1番目と「敗者」効果5の形成を伴う2 番目の戦いの間。
攻撃以外の行動は、装置内で研究することができる：（T できる2）求愛と歩行実験を行った、説明するために。求愛のために、男性と女性のハエが行動室に負の走地性によってロードされた、分周器を除去し、行動求愛パターンを記録しました。 34の実験を行ったと裁判所に待ち時間（第一出会いと1求愛行動の間の時間= 7秒）と（第一出会いと交尾= 4分の間の時間）を交尾するを分析しました。唯一の2人の男性は、観測の15分の時間の間に交尾に成功しませんでした。求愛活力指数（1求愛行動パターン後の15分の期間中に女性が求愛過ごした男性時間の割合）は、75％（ 表2）で記録しました。運動のいずれかの罪のためにGLEハエまたは10ハエの群は、チャンバに導入し、5分間の正中交差の総数を計数しました。グループ内の個々のハエは平均45回/ 5分（ 表2）上の正中線を横断しながら、シングルハエは、5分の間に平均73回のチャンバーの正中線を横切ります。ハエがグループにある場合に観察されたこの減少は、フライ当たり、それらが相互に対話する代わりに領土を探索費やす時間によって利用可能な省スペースによって説明することができます。
図6.行動室の模式図。装置の（A）は側面図。新しい装置は、3つの別々の部分から構成されています。（a）のチャンバーを戦う3人を含むプラスチックのブロック。 （b）のそれぞれに3つの穴（15.88ミリメートル直径）を持つ2つのスライドの壁。および（c）上のツーピースカバー。 （B）トップ装置のビュー。プラスチックブロック（A）の寸法は123.19ミリメートルによって36.83ミリメートルです。個々の戦闘室は22.86ミリメートルと17ミリメートルの高さの直径を有します。ハエのローディングを可能にする側の穴は15.88ミリメートルの直径を有している。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
強固な「敗者」効果の形成7.図。重要な「敗者」効果（おなじみの受賞者（N = 21と以前の敗者がペアされたときに観察されたND戦う2を失う敗者の割合（a）は、*** P <0.0001）または（b）その2 番目の戦いのために不慣れな勝者と（N = 21、*** P <0.0001）（失う：95.5％で、勝利：4.5％、いいえ描画）をP1の容易にこの図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
| 行動パラメータ | ユニット | 時間（秒） | N |
| 出会い | 24±2 | 38 | |
| 突進 | 54±6 | 38 | |
| 第一突進前の出会いの数 | 2±0.3 | 38 | |
| 第一の出会いの時間 | 145±20 | 38 | |
| 第一突進の時間 | 229±26 | 38 | |
| 支配の時間 | 475±56 | 34 | |
| 突進の待ち時間 | 87±20 | 38 | |
| 優位にレイテンシ | 342±51 | 34 |
表1：各パラメータは攻撃性の指標としてスコアのために±SEMで男性のハエのペア間の作動性の相互作用のダイナミクス平均値を算出します。出会いと突進の合計数、および数出会いの第一突進をスコア化した前に。第一の出会い、第1回突進し、支配し、待ち時間の時間が突進し、優位に（nは> 34）±標準秒で表示されます。
| 行動パラメータ | 時間（秒） | ユニット | （％） | N |
| 求愛行動 | ||||
| 裁判所へのレイテンシ | 7±3 | 34 | ||
| 交尾するレイテンシ | 273±62 </ TD> | 32 | ||
| 求愛活力指数 | 75±0.05 | 34 | ||
| 移動 | ||||
| 合計正中十字（シングルフライ） | 73±4 | 48 | ||
| 合計正中交配（ハエのグループ） | 45±3 | 20 |
表2：±SEMで求愛行動と歩行の分析平均値は、裁判所及び（秒単位）交尾する待ち時間のために計算されます。求愛活力指数雄と雌が負の走地性（nは> 32）で行動チャンバーに入れた後に採点した（時間の％で第一求愛ディスプレイ後求愛過ごしました）。移動は、単一のハエまたは10ハエの群がチャンバにロードされたときに、5分（N = 48及び20）の間に正中交差の総数をカウントすることによって採点しました。
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Discussion
侵略の研究のためのモデル生物としての強力な遺伝的方法とショウジョウバエを用いて、現代の時代には、信頼性の高い戦闘行動はハエ1,7の単一ペアを得ることができた新規な実験アリーナの導入により、十数年ほど前始まりました8,17,19。これらのアリーナは、所望のリソース（食品カップ、潜在的な仲間）と敗者のためのスペースがに撤退を飛ぶが含まれています。これらのアリーナで得られた結果は、ミバエの戦いの行動についての予備知識に加えられた場合には、 キイロショウジョウバエは、しっかりと攻撃性のような複雑な挙動を調べるための非常に望ましいモデル系として設立され、多くの研究室で使用されています。 （a）は食料資源、仲間にアクセスするためのまたは地域14,15の防衛のために競争の中で展示侵略を飛ぶ;得加算結果は、ことを明らかにしました（B）の戦いは、ステレオタイプの行動パターン1の連続的な一連の構成されています。 （c）は男性と女性のハエは、（いくつかのパターンが特定の男性で、いくつかは、特定の女性であり、一部は男女ともに共有されている）、同性のペアで17を戦います。 （d）の男性のみの戦いは、高強度レベルに行くとクリア«受賞者»と«敗者»17を飛ぶと階層関係の形成をもたらします。 （e）のセックス決意階層の無駄な単一遺伝子は、ハエが男性または女性16のように戦うと、（f）アミンおよびペプチドを含む複数のホルモン物質がショウジョウバエで侵略7,8,19,20に影響を与えるかどうかを決定します。
ここでは、新規のアプローチは、実験中のハエの取り扱いが除去された攻撃をショウジョウバエの研究のために記載されています。すべての行動の測定は行動に関する新たな情報が得られている、5,6改善されているように、これは実験プロトコルの有意な改善を提供し、学習と記憶を伴うこと男性のハエの戦いが大幅に向上します。例示するために、2つだけの以前の研究は、このモデルシステム3,4における「敗者」効果の形成を報告しています。これらの両方で、このプロトコルで説明したものよりも大きな室はハエが吸引にとの戦いアリーナの外に移し、使用された、との戦いの間の長い戦いの時間とインターバル時間は明確な「敗者」効果を生成するのに必要でした。私たちの最近の研究では、実験プロトコルから取り扱いDのペアの間に明確な支配関係を排除することを実証しましたショウジョウバエのオスのハエは、相互作用のわずか20分後に観察されます。この時間は、1 回目の戦いの間に両方のハエの戦闘戦略の重要な変化を誘導すると、確実に2 番目の戦いに強い「敗者」効果の形成を観察するのに十分です。また、最初に、透明な短期「勝者」の効果はまた、2 回目の間に観察されました5,6を戦います。
このプロトコルを使用して成功するために、いくつかの重要な点に注意する必要があります。堅牢な積極的な行動パターンを誘導し、観察するために、我々は後半蛹以来、社会的孤立に開催されている6~7日齢の雄のハエを使用することをお勧めします。一般的に、ハエのリソースの可用性が（食品、仲間）の上に競争して喜んでであるが、強力な戦闘行動と支配関係の確立を得るために非常に望ましいです。このプロトコルの間、ハエをCO 2を使用して麻酔した後に塗装されており、私たちの最近発表された研究は、真剣にハエを麻酔すると、その後の行動5を妨害することを示すようにそれが懸念される場合があります。麻酔を避けるために可能な方法は、個人の追跡を維持することが重要でない場合は、動物を描画しないことであるかもしれません。絵が必要な場合、動物は、実験、または同定するための代替的なアプローチのために使用される前に、しかし、麻酔が48時間を使用すべきです個人はまた、31を使用されることがあります。強力な「敗者」と「勝者」の効果を誘導するために、それはハエが最初の戦いの間に支配関係を確立し、維持することが重要です。 25℃での野生型CSの株を用いて、ここで紹介するプロトコルでは、相互作用の20分は、明確な「勝者」と「敗者」を生成するために、両方の個人の戦いの戦略の変化を観察するのに十分です。 25°CまたはCS以外の遺伝子型とは異なる温度で行われた実験では、しかし、強固な支配関係を確立するための平均時間は異なる場合があります。したがって、戦闘期間は予備実験のセットを実行することによって調整されるべきです。最後に、ハエのペアが彼らの最初の戦いの後に分離されているかの戦いの結果の記憶を維持する上で重要であるかもしれません。ために、装置の移動を減らすために、プラスチックの分周器の導入の間、穏やかであることがおそらく重要なことです動物の乱れを最小限にします。
装置の設計と2つの等しい区画に行動室の分離を可能ツーピースカバーは、それが簡単に最初の戦いの後に2ハエを分離し、2 番目の戦いで新たな相手を紹介することを可能にします。実験プロトコルの微調整と、表2に示すように、また、同装置は、実験動物のためのストレスの少ない条件でなければならないもので求愛、移動または実際にほとんどのミバエの挙動を研究するために使用することができます。手続き上可能な更なる改善は、温度に敏感な試薬（shibireのTS1、dTRPA1チャネル）を簡単に使用できるように装置（圧電素子や温度制御された流体を循環させるコイル）にサーモスタット制御のいくつかのフォームを導入するかもしれません。
要約すると、我々は攻撃の私の研究のための新たな戦略を提供しています新規な装置を考案しました実験前が除去された中および後にハエの取り扱いここでnのミバエ。ハエを扱う他のいくつかの一般的な方法と比較したときに、すべての行動措置は、新たな装置を用いて改善されています。おそらく作るために、より一般的なコメントは、実験室環境での実質的に全ての行動実験動物の取り扱い、拾っまたは他の方法で実験者が関与することです。この処理に優しくなるように努力にもかかわらず、これは、動物のためのストレスになる可能性があります。それは可能な限り動物がやや多く、通常の条件下で観察されるかもしれないように、この処理を排除するための方法を考案することが有用である可能性があります。
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Acknowledgments
この研究は、資金提供者は、研究デザイン、データ収集と分析、公開することを決定、または原稿の準備で何の役割を持っていたEAKする総合医科学研究所（GM099883とGM074675）からの助成金によってサポートされていました。 （：接触私達は行動装置の設計のためのハーバード大学医学部での私たちのマシンショップの人に感謝http://mikesmachine.com）。
著者の貢献：STは、BCは行動の装置を設計しました。 STは、実験プロトコルを設計し、最適化されています。 STとBCは実験を行ったと分析しました。 ST、EAKとBCは、紙を書きました。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Drosophila melanogaster pupa | Bloomington Stock Center | ||
| Standard fly food | Fabricated in-house. | ||
| Behavioral chambers | Mike machine | Fabricated in-house. Directly contact the compagny for more informations. | |
| Borosilicate glass vials | VWR International | 47729-576 | 16 x 10 mm |
| Cotton | Fisherbrand | 22-456-881 | Any brand can be used |
| Pasteur pipettes | VWR International | 53300-567 | |
| Paintbrush | Blick Art Material | 06157-7030 | Round , Size 3/0 |
| Toothpick | N/A | N/A | Any brand can be used |
| Acrylic paint (blue/white) | Blick Art Material | 01637-5172/01637-1022 | Any brand can be used |
| Dry active yeast | Sigma | YSC2-500G | |
| Srew cap tube | VWR International | 10011-394 | 15 mm diameter, 10 mm height |
| Eppendorf | VWR International | 22363212 | |
| Tape | N/A | N/A | Any brand can be used |
| Plastic slices | Electron Microscopy Sciences | 70329-40 | 22 x 40 x 0.25 mm Thickness |
| Light source (bulb) | VWR International | 500003-418 | Any brand can be used |
| Timer | VWR International | 62344-641 | Any brand can be used |
| Incubator | Percival | Directly contact the constructor for more informations. | |
| Carbon Dioxide Dry (CO2) | Medical-Technical Gases, Inc | 14H31 | |
| Binocular | Nikon | SMZ-745 | Any brand can be used |
| Camera (SONY Handycam HDR-CX330) | B&H | SOHDRCX330B | Any brand can be used |
| Computer | With a minimum of 1.4 Ghz Processor, running Microsoft Windows or Machintosh HD | ||
| ClipWrap | Download online | Any importing software can be used | |
| QuickTime Player | Download online | Any reading software can be used | |
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References
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