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Medicine

माउस में Orthotopic हिंद अंग प्रत्यारोपण

Published: February 12, 2016 doi: 10.3791/53483
* These authors contributed equally

Summary

माउस में ओर्थोटोपिक हिंद अंग प्रत्यारोपण के लिए इस उपन्यास मॉडल, सुपर microvascular सम्मिलन के लिए एक गैर-सिवनी कफ तकनीक को लागू करने, इन विवो यंत्रवत प्रतिरक्षात्मक vascularized कम्पोजिट allotransplantation (वीसीए) से संबंधित अनुसंधान के लिए एक शक्तिशाली उपकरण प्रदान करता है।

Protocol

सभी प्रयोगों की देखभाल और स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थान (एनआईएच) की प्रयोगशाला पशु के उपयोग के लिए गाइड के अनुसार आयोजित किया गया और जॉन्स हॉपकिंस विश्वविद्यालय के पशु की देखभाल और उपयोग समिति (JHUACUC) द्वारा अनुमोदित किया गया। विशिष्ट प्रक्रियाओं को मंजूरी दे दी ACUC प्रोटोकॉल MO13M108 के तहत प्रदर्शन किया गया।

1. दाता ऑपरेशन

  1. प्रत्येक औषधीय तैयार करने के लिए सर्जरी से पहले उचित समय बिंदु पर पीड़ानाश प्रशासन। के अनुसार स्वीकृत पशु की देखभाल और उपयोग प्रोटोकॉल का उपयोग 0.1 मिलीग्राम buprenorphine subcutaneously की / किलो BW 1 घंटा त्वचा चीरा से पहले के रूप में।
  2. शांत isoflurane के साथ दाता एक कक्ष 4% पर एक isoflurane vaporizer से जुड़ी माध्यम से लागू किया; एक नाक शंकु के माध्यम से 2% से कम बेहोश करने की क्रिया और संज्ञाहरण बनाए रखें। संज्ञाहरण प्रक्रिया की दीक्षा से पहले की गहराई पर नजर रखने के लिए पैर की अंगुली चुटकी वापसी प्रतिबिंब प्रदर्शन करना।
  3. मास्क, डिस्पोजेबल अलगाव गाउन और दस्ताने पहनें।
  4. शल्य चिकित्सा की गिरफ्तारी दाढ़ीईए, विशेष रूप से हिंद अंग और कमर, और प्रस्तुत करने का 10% पॉवीडान साथ - आयोडीन।
  5. एक बाँझ क्षेत्र कपड़ा, autoclaved उपकरणों और एक उच्च बढ़ाई माइक्रोस्कोप (40X) का प्रयोग करें।
  6. मध्य जांघ क्षेत्र के लिए proximally कैंची का उपयोग कमर त्वचा चीरा और circumferentially माउस शरीर के बाकी हिस्सों से हिंद अंग हदबंदी को चीरा कनेक्ट।
  7. पहचानें और और्विक धमनी, नस और तंत्रिका काटना। संदंश और सूक्ष्म कैंची का उपयोग सभी तीन संरचनाओं अलग करें।
  8. एक बार जब संवहनी डंडी विच्छेदित है वंक्षण बंधन सूक्ष्म कैंची का उपयोग के स्तर पर जहाजों को विभाजित।
  9. अगले, मध्य जांघ के स्तर पर proximally व्यक्ति उदर (gracilis और औसत दर्जे का जांघ की मांसपेशियों) और पृष्ठीय मांसपेशी समूहों 20 विभाजित करने के लिए कैंची का उपयोग कर दाता जानवर से भ्रष्टाचार को अलग करने के लिए जारी है।
  10. फीमर आड़ा काट और ऊरु शाफ्ट कैंची का उपयोग कर के मध्य में कटौती।
  11. isoflurane अधिक मात्रा fol से पशु euthanizeग्रीवा अव्यवस्था से इजाजत। दिल की धड़कन और श्वसन की समाप्ति की पुष्टि करें।
  12. एक 33 जी निस्तब्धता सुई एक सिरिंज पर घुड़सवार का उपयोग करके heparinized 2 मिलीलीटर (30 आईई) ठंड (4 डिग्री सेल्सियस) नमक के साथ अंग फ्लश (देखें सामग्री तालिका)।
  13. ऊरु नस और धमनी पर एक polyimide कफ की जगह, क्रमशः।
  14. इनसेट जब तक 4 डिग्री सेल्सियस पर गीला कपास धुंध, पेट्री डिश और दुकान में जगह में भ्रष्टाचार लपेटें।

2. प्राप्तकर्ता ऑपरेशन

  1. हिंद अंग का हटाया
    1. प्रत्येक औषधीय तैयार करने के लिए सर्जरी से पहले उचित समय बिंदु पर पीड़ानाश प्रशासन। के अनुसार स्वीकृत पशु की देखभाल और उपयोग प्रोटोकॉल का उपयोग 0.1 मिलीग्राम / किग्रा Buprenorphine अनुसूचित जाति 1 घंटा पहले त्वचा चीरा के BW के रूप में।
    2. शांत isoflurane के साथ दाता एक कक्ष 4% पर एक isoflurane vaporizer से जुड़ी माध्यम से लागू किया; एक नाक शंकु के माध्यम से 2% से कम बेहोश करने की क्रिया और संज्ञाहरण बनाए रखें। विभाग की निगरानी के लिए पैर की अंगुली चुटकी वापसी प्रतिबिंब प्रदर्शन करनासंज्ञाहरण प्रक्रिया की दीक्षा से पहले की ज।
    3. जबकि संज्ञाहरण के तहत सूखापन को रोकने के लिए माउस की आँखों पर पशु चिकित्सा मरहम का प्रयोग करें।
    4. शल्य चिकित्सा क्षेत्र दाढ़ी, विशेष रूप से हिंद अंग और कमर और 10% पॉवीडान साथ प्रस्तुत करने का - आयोडीन।
    5. मध्य जांघ क्षेत्र के लिए proximally कैंची का उपयोग कमर त्वचा चीरा और circumferentially माउस शरीर के बाकी हिस्सों से हिंद अंग हदबंदी को चीरा कनेक्ट।
    6. पहचानें और और्विक धमनी, नस और तंत्रिका काटना और संदंश और सूक्ष्म कैंची का उपयोग सभी तीन संरचनाओं अलग।
    7. एक बार जब संवहनी डंडी विच्छेदित है, वंक्षण बंधन के स्तर पर ऊरु वाहिकाओं दबाना।
    8. सतही अधिजठर धमनी के स्तर पर बाहर का वाहिकाओं में कटौती।
    9. इसके बाद, देशी हिंद ली को अलग करने के proximally मध्य जांघ के स्तर पर अलग-अलग उदर (gracilis और औसत दर्जे का जांघ की मांसपेशियों) और पृष्ठीय मांसपेशी समूहों 20 विभाजित करने के लिए जारीकैंची का उपयोग प्राप्तकर्ता जानवरों से एमबी।
    10. ऊरु शाफ्ट कैंची का उपयोग कर के बीच में फीमर आड़ा काट।
    11. विच्छेदन साइट का खून बह रहा है और इस तरह प्राप्तकर्ता खून की कमी को रोकने के लिए पहले से transected जांघ की मांसपेशियों दाग़ना।
  2. दाखिल करना
    1. गर्म खारा (37 डिग्री सेल्सियस) के साथ सहकारी क्षेत्र की सिंचाई और इससे पहले 0.3 मिलीलीटर इंजेक्शन लगाने के द्वारा गर्म खारा और ऑपरेशन के बाद तरल पदार्थ नुकसान को कम।
    2. एक तरीका है कि प्राप्तकर्ता और भ्रष्टाचार के फीमर हड्डी aligning और एक intramedullary रॉड के रूप में एक 20 जी रीढ़ की हड्डी में सुई का उपयोग कर उन्हें कनेक्ट द्वारा मूल निवासी हिंद अंग का सही शारीरिक स्थिति को दर्शाता है में भ्रष्टाचार रखें।
    3. Coapt उदर और पृष्ठीय पेशी absorbable सिवनी सामग्री (6-0 Polysorb) का उपयोग समूहों।
    4. गैर-सिवनी कफ तकनीक का उपयोग कर ऊरु वाहिकाओं कनेक्ट; विस्तार में, पर पहले से कफ पोत पर मुहिम शुरू की पोत के प्राप्तकर्ता ओर खींच ग्रेफ के समाप्त होता हैटी। एक 10-0 नायलॉन सीवन का प्रयोग करें और कफ पर प्राप्तकर्ता पोत ठीक करने के लिए एक परिधीय टाई प्रदर्शन करते हैं।
    5. अगली अकड़न जारी। इस स्तर पर नेत्रहीन कफ रोटेशन और गलत रोटेशन और जहाजों के kinking को रोकने के लिए इष्टतम स्थिति की पुष्टि करें।
    6. पेशी प्राप्तकर्ता दाता इंटरफेस और हड्डी सिरों पर एक विशेष ध्यान के साथ विद्युत का उपयोग कर दाग़ना सावधानीपूर्वक रक्तस्तम्भन प्रदर्शन करना।
    7. त्वचा गैर absorbable नायलॉन टांके (6-0 Ethilon) का उपयोग बंद कर दें।
    8. जानवर एक हीटिंग दीपक के तहत अपने पिंजरे में ठीक करने के लिए अनुमति देकर normothermic शर्तों की स्थापना। कम से कम 4 घंटा आवास सुविधा को लौटने से पहले नियमित रूप से निगरानी के लिए जारी रखें।
    9. 3 दिन के लिए 0.1mg / किग्रा अनुसूचित जाति हर 6-8 घंटा की एक खुराक में buprenorphine साथ पोस्ट ऑपरेटिव analgesia प्रदान करें।

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Representative Results

एक माउस मॉडल में vascularized कम्पोजिट allotransplantation प्रदर्शन एक गैर सिवनी कफ तकनीक का उपयोग कर के रूप में चित्र 1 में दिखाया उत्कृष्ट और लंबी अवधि के भ्रष्टाचार और पशुओं के अस्तित्व को प्राप्त करने के लिए अनुमति देता है। इसके अलावा, यह vascularized कम्पोजिट में क्रमिक allograft अस्वीकृति की प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणामों को प्राप्त करने का एक विश्वसनीय विधि का प्रतिनिधित्व करता है allotransplantation चित्रा 2 में दिखाया छवियों द्वारा दस्तावेज के रूप में। एच ई के दौर से गुजर अस्वीकृति आगे प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य (चित्रा 3) इस murine मॉडल में allograft अस्वीकृति की गतिशीलता को रेखांकित करता है जानवरों से प्राप्त ऊतकों के ऊतक विज्ञान।

आकृति 1
एक पूरी तरह से एच 2-बेमेल माउस तनाव संयोजन में चित्रा 1. Allograft जीवन रक्षा [Balb / सी (H2K घ) C57BL6 (H2K ख) में]। जबकि सभी syngeneic transpl9 दिन - चींटियों (एन = 10) दीर्घकालिक, इलाज allografts (एन = 10) तीव्रता के भीतर खारिज कर दिया और 8 की औसत स्वीकार कर लिए गए थे। त्वचा की अस्वीकृति ग्रेड 3 Banff मापदंड के अनुसार इस अध्ययन में पूर्ण अस्वीकृति माना जाता था। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2
चित्रा 2. नैदानिक ​​अस्वीकृति सुविधाओं और एक पूरी तरह से एच 2-बेमेल [Balb / सी (H2K घ) C57BL6 (H2K ख) में] Murine Orthotopic हिंद अंग प्रत्यारोपण की गतिशीलता। (ए) नैदानिक ​​ग्रेड 0, (बी) के नैदानिक ​​ग्रेड 1, ( सी) नैदानिक ​​ग्रेड 2, (डी) नैदानिक ​​ग्रेड 3, और (ई) नैदानिक ​​ग्रेड 4 अस्वीकृति, (एफ) दीर्घकालिक जीवित allograft (पॉड 100) एक costimul के साथ इलाजव्यावहारिक नाकाबंदी (एमएबी antiCD40 + CTLA4Ig) आधारित आहार। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र तीन
चित्रा 3. पॉड 8 के साथ ही पर एक syngeneic प्रत्यारोपण में त्वचा और मांसपेशियों (ए) और एलोजेनिक ट्रांसप्लांट (बी) के एच एंड ई धुंधला लुटेरा त्वचा और एक syngeneic प्रत्यारोपण (सी) और पॉड 8 पर एलोजेनिक ट्रांसप्लांट में पेशी के एच एंड ई धुंधला (डी ) (स्केल पट्टी:। 0.1 माइक्रोन) यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

Vascularized कम्पोजिट Allotransplantation, इस तरह के ऊपरी सिरा और विनाशकारी ऊतक दोषों के पुनर्निर्माण के लिए चेहरे के प्रत्यारोपण के रूप में, मरीजों को पारंपरिक पुनर्निर्माण की प्रक्रिया को संशोधनीय नहीं करने के लिए एक वैध उपचार विकल्प के रूप में विकसित किया गया है। पुनर्निर्माण microsurgery के क्षेत्र में तकनीकी प्रगति के साथ ही शक्तिशाली प्रतिरक्षा को दबाने और ठोस अंग प्रत्यारोपण में प्रतिरक्षा modulatory चिकित्सा के साथ एक विशाल अनुभव, अब इस अनूठी रोगी जनसंख्या 3,21 में लंबे समय तक जीवित रहने के allograft सक्षम बनाता है। हालांकि, लंबी अवधि प्रतिरक्षादमन के महत्वपूर्ण दुष्प्रभाव allograft रखरखाव और अस्तित्व के लिए आवश्यक अभी भी इन जीवन को बढ़ाने के तौर तरीकों लेकिन पुनर्निर्माण 3,22,23 नहीं जीवन रक्षक के व्यापक आवेदन की सीमा। इसके अलावा, ठोस अंग प्रत्यारोपण के विपरीत VCAs की सफलता भी प्राप्तकर्ता नसों का समय पर उत्थान पर allograft में फिर से आना करने के लिए मोटर समारोह के लिए दोनों की मांसपेशियों, साथ ही निर्भर करता हैस्पर्श और तापमान सनसनी के लिए संवेदी घटक समारोह हासिल करने के लिए। एक immunologic दृष्टिकोण से, प्रत्यारोपण चिकित्सा के सभी के रूप में, पुनर्निर्माण प्रत्यारोपण में व्यापक लक्ष्य परिचालन सहिष्णुता लंबी अवधि के रखरखाव प्रतिरक्षादमन 23 के लिए आवश्यकता के बिना एक allograft की स्वीकृति के लिए अनुमति देने का एक राज्य को प्राप्त करने के लिए है। इस संबंध में माउस एक अक्षुण्ण प्रतिरक्षा प्रणाली में विशिष्ट सहिष्णुता alloantigen प्राप्त करने के तरीके की जांच करने के प्रत्यारोपण इम्यूनोलॉजी अनुसंधान के क्षेत्र में विवो मॉडल प्रणाली में मुख्य प्रतिनिधित्व करने के लिए विकसित किया गया है। इसके अलावा, माउस एच 2 जटिल बारीकी से मानव एमएचसी जटिल जैसा दिखता है। इस प्रकार, सहज और genotyped माउस उपभेदों एक पूरी तरह से अनुवांशिक रूप से भिन्न तनाव संयोजन के लिए एक alloantigen syngeneic से mismatching के विभिन्न डिग्री को रोजगार से संबंधित और गैर संबंधित रहने और शव का दाता सेटिंग्स के नैदानिक ​​परिदृश्यों मॉडल करने के लिए अनुमति देते हैं। ट्रांसजेनिक जानवरों और विशिष्ट पीटकर जानवरों की उपलब्धता के अतिरिक्त सभीचयनात्मक सक्रियण या सेल या प्रोटीन घटकों की कमी की संभावना प्रदान करके भूमिकाओं और प्रतिरक्षा स्वीकृति और अस्वीकृति पर व्यक्तिगत आणविक रास्ते और नियामक तंत्र के प्रभाव की जांच OWS। यह (जैसे।, एंटीबॉडी) नैदानिक ​​और चिकित्सीय एजेंट विशिष्ट रूप में इन विट्रो के लिए माउस सिस्टम के लिए विकसित की एक व्यापक उपलब्धता से paralleled है और vivo में अध्ययन करता है 24। कुल मिलाकर, इन पहलुओं murine प्रणाली 'सोने के मानक' बुनियादी प्रत्यारोपण इम्यूनोलॉजी अनुसंधान के लिए बनाते हैं।

यद्यपि वहाँ विभिन्न छोटे 13,16,18,20,25,26 और बड़े जानवर 14,27-29 मॉडल वीसीए के लिए वर्णित किया गया है के रूप में हाल ही में Brandacher एट अल द्वारा की समीक्षा की। 30 केवल वास्तव में बहुत कुछ बुनियादी यंत्रवत प्रतिरक्षा अनुसंधान 16 के लिए लागू कर रहे हैं , 24,30। माउस और्विक धमनी और शिरा के छोटे पोत व्यास के कारण, यह उन्नत शल्य चिकित्सा और सुपर-मील की आवश्यकता हैcrosurgical प्रशिक्षण और कौशल ओर्थोटोपिक हिंद अंग प्रत्यारोपण के प्रमुख घटक के रूप में सफल सम्मिलन प्रदर्शन करने के लिए। जबकि शारीरिक संरचनाओं के सावधानीपूर्वक और सावधान विच्छेदन के रूप में गंभीर रूप से पहले प्रकाशित मॉडल 20,31,32 के रूप में इस मॉडल में प्रासंगिक है, कफ तकनीक के लिए एक कम तेजी से सीखने की अवस्था से पता चला है उप मिलीमीटर वाहिकाओं 16,25 और सिवनी के सम्मिलन की तुलना कठोर दैनिक अभ्यास के साथ एक महीने की जोड़ी प्रशिक्षण में प्राप्त किया जा सकता है। हमारे अनुभव के आधार पर, एक अप्रशिक्षित microsurgeon उच्च सफलता दर के साथ इस मॉडल करने के लिए पर्याप्त और विश्वसनीय कौशल प्राप्त करने के लिए 30 -50 प्रक्रियात्मक प्रयासों की आवश्यकता होगी। अनुभवी और उच्च प्रशिक्षित microsurgeon के लिए 15 - 30 के प्रयास यह कफ के आधार पर माउस हिंद अंग प्रत्यारोपण model.The कम कर यहाँ प्रस्तुत की प्रक्रिया की जटिलता को आगे तथ्य यह है कि इस दृष्टिकोण सीमित पोत की लंबाई और इस प्रकार विच्छेदन की आवश्यकता से परिलक्षित होता है मास्टर करने के लिए पर्याप्त होना चाहिए। हम टी ले पायावंक्षण बंधन में वह दाता और प्राप्तकर्ता जहाजों जहाजों सतही अधिजठर वाहिकाओं के स्तर पर आम धारणा है कि कफ तकनीक लागू होने की व्यापक अतिरिक्त लंबाई की आवश्यकता के बावजूद पर्याप्त लंबाई प्रदान करता है। उदाहरण के लिए, एक पूर्व प्रकाशित दृष्टिकोण घुटने की चक्की जहाजों 32 के स्तर पर बाहरी श्रोणिफलक वाहिकाओं और प्राप्तकर्ता वाहिकाओं के स्तर पर फसल दाता जहाजों के लिए आवश्यकता का वर्णन है। इसके अलावा, कफ तकनीक के साथ, सम्मिलन प्रदर्शन कम समय सिवनी तकनीक की तुलना की आवश्यकता है और एक समग्र कम परिचालन समय के लिए होता है। अनुभवी हाथों में, दोनों दाता और प्राप्तकर्ता प्रक्रियाओं 90 मिनट की एक औसत में पूरा किया जा सकता। यह पहले से सूचना दी तरीकों में बढ़ाया प्राप्तकर्ता संज्ञाहरण की अवधि सफलता और perioperative अस्तित्व के लिए एक प्रमुख निर्धारक था के साथ तुलना में एक महत्वपूर्ण सुधार है; बनाने के लिए एक दो-सर्जन की आवश्यकता दृष्टिकोण एक शर्त 31-33।इसके अलावा, सम्मिलन आगे योगदान से खून बह रहा है नहीं करने के लिए कम से कम काफी खून की कमी को कम करने के लिए और के रूप में इस मॉडल 33 में सफलता के लिए एक और कारक के रूप में पहले से वर्णित जिससे प्राप्तकर्ताओं की द्रव पुनर्जीवन के लिए की आवश्यकता कम कर देता है। अंत में, कफ तकनीक 11-0 सूक्ष्म सिवनी सामग्री की उच्च लागत की तुलना में एक महत्वपूर्ण लागत लाभ के साथ एक विधि का प्रतिनिधित्व करता है। इस प्रकार, गैर सिवनी कफ तकनीक अंतर्निहित प्रोटोकॉल का सबसे महत्वपूर्ण कदम का प्रतिनिधित्व करता है। तुंग द्वारा एक सुरुचिपूर्ण अध्ययन में एट अल।, विभिन्न विभिन्न myo- और एक vascularized कमर त्वचा फ्लैप सहित osteomyocutaneous फ्लैप दिया वर्णित माउस ऊरु पोत डंडी 32 के आधार पर बंद कर दिया है। यहाँ प्रस्तुत विधि पूरे माउस हिंद अंग के प्रत्यारोपण पर विशेष रूप से केंद्रित है, प्रस्तुत सिद्धांतों को आसानी से अनुवाद किया है और विभिन्न अन्य संरचनात्मक फ्लैप डिजाइनों में नियोजित किया जा सकता है। उल्लेखनीय तथ्य यह है कि जब पिछले लेखकों automutilation रिपोर्टया पोस्ट ऑपरेटिव अस्तित्व 31,32 यह हमारा अनुभव में मनाया नहीं किया गया है के दौरान एक महत्वपूर्ण जटिलता के रूप में भ्रष्टाचार के भोजी। इसके अतिरिक्त, तेजी से वसूली और खिलाने और संवारने के पशु की क्षमता की हानि सीमित रेखांकित करता है कि प्रत्यारोपित पैर की ओर्थोटोपिक इनसेट केवल न्यूनतम प्राप्तकर्ता रुग्णता inflicts।

मॉडल इस वीडियो प्रकाशन में वर्णित इसके अतिरिक्त पहले प्रकाशित तकनीकों की तुलना में माउस स्थापित करने के लिए विशिष्ट लाभ का परिचय। और सबसे पहले, के रूप में हमारे समूह में 16 से पहले बताया, कफ तकनीक एक लुमेन व्यास छोटे से 1 मिलीमीटर के साथ जहाजों में नियोजित किया जा सकता है, एक हिंद अंग allograft की ओर्थोटोपिक प्रत्यारोपण के लिए अनुमति देता है। यह दृष्टिकोण इस मॉडल दोनों प्रतिरक्षा के साथ ही तंत्रिका वीसीए 16,25 से संबंधित उत्थान के कार्यात्मक अध्ययन में संयुक्त रोजगार के लिए आधार प्रदान करता है। तंत्रिका पुनर्जनन च के लिए महत्वपूर्ण महत्व का हैपुनर्निर्माण प्रत्यारोपण के ield, के रूप में इन गैर-जीवन की बचत प्रक्रियाओं जिसकी सफलता मुख्य रूप से कार्यात्मक और सौंदर्य दोषों की बहाली के द्वारा निर्धारित किया जाता हैं।

एक osteomyocutaneous फ्लैप हिंद अंग से होने की Heterotopic इनसेट एक अतिरिक्त मॉडल सर्जन 15 के लिए उपलब्ध है। इस दृष्टिकोण हालांकि, इस तरह के नाखून और लुटेरा की चिकना त्वचा के रूप में संभावित ब्याज की संरचनाओं, के सर्जिकल हटाने, एक anatomically अनछुए हिंद अंग प्रत्यारोपण ओर्थोटोपिक allograft के साथ तुलना में इस विधि की चंचलता को सीमित करता है। इस रूप में इन संरचनाओं उनके हाथ allografts से 34 यांत्रिक तनाव पहुंचाई रोगियों में असामान्य अस्वीकृति प्रक्रियाओं के लक्ष्य के रूप में वर्णित किया गया है पुनर्निर्माण प्रत्यारोपण में विशेष रुचि का है। स्वाभाविक एक vascularized समग्र ऊतक allograft के लिए अद्वितीय हड्डी घटक है, के रूप vascularized हड्डी व्यवहार्य अस्थि मज्जा में शामिल है और एक constantl हैY घटकों और दाता प्रतिरक्षा प्रणाली के व्यापारियों के स्रोत के नवीकरण। हालांकि यह सावधानी से भ्रष्टाचार बनाम मेजबान रोग (GVHD) के लिए एक संभावित स्रोत के रूप में माना गया था, यह दोनों पशु मॉडल 35,36 के साथ ही मनुष्य 37 में नहीं रखा गया है। इसके विपरीत करने के लिए बहुत वास्तव में, के रूप में 36 preclinical और नैदानिक ​​अध्ययन 38-40 में दिखाया गया है, दाता अस्थि मज्जा प्रत्यारोपण के साथ अंग प्रत्यारोपण के संयोजन या चयनित अस्थि मज्जा व्युत्पन्न सेल के उत्पादों के आधान वास्तव में प्रतिरक्षादमन की राशि के बारे में 21 की जरूरत लाभप्रद प्रभाव दिखाता है ; कुछ प्रोटोकॉल भी दवा आधारित प्रतिरक्षादमन 41 के लिए आवश्यकता के बिना परिचालन सहिष्णुता दिखाई है।

मॉडल और कार्यप्रणाली इस प्रकाशन के द्वारा दिखाया झुकेंगे syngeneic दाता में 100% लंबी अवधि के पशु अस्तित्व - प्राप्तकर्ता संयोजन (चित्रा 1) के रूप में अच्छी तरह से प्रदर्शन किया भ्रष्टाचार accepta की एक अच्छी तरह से विशेषता पैटर्नnce और अनुवांशिक रूप से भिन्न तनाव संयोजन में अस्वीकृति आंकड़े 2 और 3 में उल्लिखित के रूप में। इसके अलावा, वीसीए में अस्वीकृति का एक दृश्य प्राथमिक लक्ष्य के रूप में त्वचा, अस्वीकृति मानव वीसीए के लिए उन लोगों के साथ correlating के 4 अलग नैदानिक ​​परिदृश्यों की एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य पैटर्न के रूप में निम्नानुसार द्वारा उल्लिखित Banff का काम कर रहे 2,007 वर्गीकरण त्वचा युक्त, 42 वीसीए यह मॉडल विशेष रूप से अनुवाद कर रही है। इस प्रकार, सब से ऊपर पुनर्निर्माण प्रत्यारोपण के लिए यह अत्यंत विश्वसनीय माउस मॉडल, आनुवंशिक रूप से परिभाषित जन्मजात और ट्रांसजेनिक माउस उपभेदों के एक बहुमुखी प्रतिरक्षा प्रणाली है जो मॉडल नैदानिक ​​वीसीए पर translational प्रभाव के साथ निदान और हस्तक्षेप के अध्ययन के लिए संभावनाओं को खोलता की उपलब्धता का परिचय।

वर्णित तकनीक के माहिर पर तैयार करने से पहले बुनियादी microsurgical कौशल के लिए जरूरत इस मॉडल के लिए एक सीमा के रूप में माना जा सकता है, तथापि, यह किसी भी माउस microsurgical मॉडल के लिए एक ही मुख्य बाधा है। गुरुएस, इस वीडियो प्रोटोकॉल मुख्य रूप से एक विकल्प vascularized कम्पोजिट allotransplantation के लिए विवो मॉडल में एक murine में microvascular सम्मिलन के लिए दृष्टिकोण के साथ अनुभवी microsurgeon प्रदान करने का इरादा है। इसके अलावा, मॉडल एक अक्षुण्ण vascularized अस्थि मज्जा प्रत्यारोपण के घटक है, साथ ही तंत्रिका उत्थान अनुसंधान के क्षेत्र में एक कार्यात्मक मॉडल के उपयोग के लिए अनुमति देता है।

अंत में, हम एक उपन्यास, बहुमुखी और ओर्थोटोपिक हिंद अंग प्रत्यारोपण के लिए विश्वसनीय माउस मॉडल स्थापित एक गैर सिवनी कफ तकनीक वीसीए के किसी भी पहलू से संबंधित बुनियादी यंत्रवत के लिए दरवाजे, साथ ही शोधों खुलती इस्तेमाल करते हैं।

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Acknowledgments

इस काम में सेना, नौसेना, एनआईएच, वायु सेना, VA और स्वास्थ्य मंत्रालय द्वारा समर्थित किया गया पुरस्कार सं W81XWH-13-2-0053 के तहत, AFIRM द्वितीय प्रयास का समर्थन करने के लिए। अमेरिकी सेना चिकित्सा अनुसंधान अधिग्रहण गतिविधियों, 820 चांडलर स्ट्रीट, फोर्ट Detrick एमडी 21702-5,014 देने और प्रशासन अधिग्रहण कार्यालय है। राय, व्याख्याओं, निष्कर्ष और सिफारिशें लेखक के हैं और जरूरी रक्षा विभाग द्वारा समर्थन नहीं कर रहे हैं।

लेखक इस अध्ययन के दौरान उनके उत्कृष्ट पशु चिकित्सा सहायता के लिए जेसिका Izzi, DVM, कैरोलीन गैरेट, DVM और जूली वाटसन, DVM को धन्यवाद देना चाहूंगा।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Suture, 6-0 Nylon MWI 31849
Suture, 6-0 Polysorb MWI 72667
Suture, 10-0 Nylon Aero Surgical TK-107038
Polyimide Tubing, Size 25 Vention Medical 141-0023
Polyimide Tubing, Size 27 Vention Medical 141-0015
Microvascular Clamps (Single) Synovis 00396
Microvascular Clamps (Double) Synovis 00414
Micro-Scissors Synovis SAS-18
Micro-Forceps Synovis FRS-15 RM-8
Micro-Dilators Synovis FRS-15 RM-8d.1
Micro-Needledriver Synovis C-14
Micro-Clamp Applicator Synovis CAF-4
Micro-Flushing Needle Hamilton 10MM, 30°, 33G
Lactated Ringers Solution Fisher Scientific NC9968051
Buprenorphine DEA Number required; Obtained from hosptial pharmacy.
Enrofloxacin; Baytril Bayer Health Care 186599
Heparin Obtained from hosptial pharmacy

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References

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माउस में Orthotopic हिंद अंग प्रत्यारोपण
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Furtmüller, G. J., Oh, B.,More

Furtmüller, G. J., Oh, B., Grahammer, J., Lin, C. H., Sucher, R., Fryer, M. L., Raimondi, G., Lee, W. P. A., Brandacher, G. Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse. J. Vis. Exp. (108), e53483, doi:10.3791/53483 (2016).

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