Summary
Dit nieuwe model voor orthotope achterste ledematen transplantatie in de muis, van een niet-hechtingsmanchet techniek voor super-microvasculaire anastomose, een krachtig hulpmiddel voor in vivo mechanistische immunologisch onderzoek naar gevasculariseerd samengestelde allotransplantatie (VCA).
Protocol
Alle experimenten werden uitgevoerd in overeenstemming met de Gids voor de Zorg en gebruik van proefdieren van het National Institute of Health (NIH) en werden goedgekeurd door de Johns Hopkins University Dierverzorging en gebruik Comite (JHUACUC). De specifieke procedures werden uitgevoerd in het kader van het goedgekeurde ACUC protocol MO13M108.
1. Donor Operation
- Dien pijnstilling op het juiste tijdstip voor elke farmacologische formulering voorafgaand aan de operatie. Zoals aangegeven in de goedgekeurde dier zorg en het gebruik protocol gebruik 0,1 mg / kg lichaamsgewicht van buprenorfine subcutaan 1 uur voorafgaand aan de huid incisie.
- Sedate de donor met isofluraan aangebracht door een kamer die aan een isofluraan vaporizer op 4%; onderhouden sedatie en anesthesie bij 2% door middel van een neuskegel. Voer teen knijpen terugtrekking reflectie om de diepte van de anesthesie voorafgaand aan de inleiding van de procedure te volgen.
- Maskers dragen, wegwerp isolatie jassen en handschoenen.
- Scheer de chirurgische area, met name de achterste ledematen en lies en prep met 10% povidon - jood.
- Gebruik een steriele laken, geautoclaveerd instrumenten en een hoge vergroting microscoop (40X).
- Maak lies huid incisie met een schaar proximaal naar het halverwege de dij en de omtrek sluit de incisie aan de achterste ledematen van de rest van de muis lichaam af te bakenen.
- Identificeren en ontleden de femorale slagader, ader en zenuw. Scheid alle drie structuren met behulp van een tang en micro-schaar.
- Zodra de vaatsteel wordt ontleed verdelen de schepen op het niveau van het inguinale ligament behulp van micro schaar.
- Vervolgens blijven de individuele ventrale (gracilis en mediale dijspieren) en dorsale spiergroepen 20 proximaal verdelen op het niveau van het midden van de dij naar het transplantaat te scheiden van de donor dier met een schaar.
- Doorsnijden het dijbeen en op het midden van de femurschacht met een schaar te snijden.
- Euthanaseren van dieren door isofluraan overdosis folgevolgd door cervicale dislocatie. Bevestig stopzetting van de hartslag en de ademhaling.
- Spoel de ledemaat met 2 ml gehepariniseerde (30 IE) koud (4 ° C) zoutoplossing met behulp van een 33 G naald spoelen gemonteerd op een injectiespuit (zie Materialen tabel).
- Plaats een polyimide manchet op de femorale ader en slagader, respectievelijk.
- Wikkel graft in natte gaasje, plaats in de petrischaal en bewaar bij 4 ° C tot inzet.
2. Ontvanger Operation
- Verwijdering van de achterpoot
- Dien pijnstilling op het juiste tijdstip voor elke farmacologische formulering voorafgaand aan de operatie. Zoals aangegeven in de goedgekeurde dier zorg en het gebruik protocol gebruik 0,1 mg / kg lichaamsgewicht van buprenorfine SC 1 uur voorafgaand aan de huid incisie.
- Sedate de donor met isofluraan aangebracht door een kamer die aan een isofluraan vaporizer op 4%; onderhouden sedatie en anesthesie bij 2% door middel van een neuskegel. Voer teen knijpen terugtrekking reflectie aan de dept controlerenh van anesthesie voorafgaand aan de inleiding van de procedure.
- Gebruik veterinaire zalf op de ogen van de muis tot droog voorkomen terwijl onder verdoving.
- Scheer de chirurgische gebied, in het bijzonder de achterste ledematen en lies en prep met 10% Povidon - Jodium.
- Maak lies huid incisie met een schaar proximaal naar het halverwege de dij en de omtrek sluit de incisie aan de achterste ledematen van de rest van de muis lichaam af te bakenen.
- Identificeren en ontleden de femorale slagader, ader en zenuw en scheiden alle drie structuren met behulp van een tang en micro-schaar.
- Zodra de vaatsteel wordt ontleed, klem de femorale vaten ter hoogte van het inguinale ligament.
- Snijd de vaten distale ter hoogte van de oppervlakkige epigastrische slagader.
- Vervolgens blijven de individuele ventrale (gracilis en mediale dijspieren) en dorsale spiergroepen 20 proximaal op het niveau van het midden van de dij te verdelen aan de inheemse achterpoten li scheidenmb van de ontvanger dieren met behulp van een schaar.
- Doorsnijden het dijbeen in het midden van de femorale schacht met een schaar.
- Cauterize eerder doorsneden dijspieren om het bloeden van de dissectie plaats en dus ontvanger bloedverlies te voorkomen.
- implantatie
- Minimaliseren vochtverlies door de irrigatie van het operatieve veld met warme zoutoplossing (37 ° C) en het injecteren van 0,3 ml warm zoutoplossing voor en na de operatie.
- Plaats het implantaat zodanig dat de juiste anatomische positie van het natieve achterpoot door uitlijnen van de femur bot van de ontvanger en het transplantaat en sluit ze met een 20 G naald spinale als een intramedullaire staaf weerspiegelt.
- Coapt de ventrale en dorsale spiergroepen gebruikt absorbeerbare hechtmateriaal (6-0 Polysorb).
- Sluit de femorale vaten met behulp van de niet-hechtingsmanchet techniek; in detail, trekt u de ontvanger zijde van het schip over de manchetten eerder gemonteerd op het schip uiteinden van het graft. Gebruik een 10-0 nylon hechtdraad en het uitvoeren van een rondlopende band met het ontvangende vaartuig op de manchet op te lossen.
- Naast de klemmen los. In dit stadium visueel te controleren manchet rotatie en optimale positionering te mis-rotatie en knikken van de vaten te voorkomen.
- Voer zorgvuldige hemostase met behulp van electro cautery met een bijzondere focus op de spier ontvanger donor interface en het bot eindigt.
- Sluit de huid met behulp van niet absorbeerbaar nylon hechtingen (6-0 Ethilon).
- Vestigen normotherme voorwaarden doordat het dier te herstellen in zijn kooi onder een warmtelamp. Doorgaan regelmatige controle gedurende tenminste 4 uur voorafgaand aan de terugkeer naar de behuizing faciliteit.
- Post-operatieve analgesie met buprenorfine in een dosis van 0,1 mg / kg SC elke 6-8 uur gedurende 3 dagen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Uitvoeren gevasculariseerde composiet allotransplantation in een muizenmodel met een niet-hechtingsmanchet techniek maakt uitstekende lange termijn graft en dierlijke overleving bereiken zoals getoond in figuur 1. Bovendien is een betrouwbare methode om reproduceerbare resultaten geleidelijke allograft afstoting bij gevasculariseerde composiet allotransplantatie zoals blijkt uit de in figuur 2 beelden. H & E histologie van weefsel van dieren ondergaan afwijzing onderstreept verder het reproduceerbare dynamiek van transplantaatafstoting in dit muizenmodel (figuur 3).
Figuur 1. Allograft Survival in een volledig H2 mismatch muizenstam Combinatie [Balb / c (H2K d) in C57BL6 (H2K b)]. Hoewel alle syngene Transpl9 dagen - mieren (n = 10) werden op lange termijn, onbehandelde transplantaten (n = 10) werden afgewezen acuut binnen en gemiddeld 8 aanvaard. Skin afwijzing Grade 3 volgens Banff criteria werd beschouwd als volledige afwijzing in dit onderzoek. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 2. Klinische Afwijzing kenmerken en dynamiek van een volledig H2 mismatch [Balb / c (H2K d) in C57BL6 (H2K b)] Muizen Orthotope Hind Limb Transplant. (A) Klinische Grade 0, (B) Clinical Grade 1, ( C) Klinische Grade 2, (D) Klinische Grade 3, en (E) Klinische Graad 4 afstoting, (F) lange termijn overlevende allograft (POD 100) behandeld met een costimulatie blokkade (antiCD40 mAb + CTLA4Ig) gebaseerde regime. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 3. H & E kleuring van de huid en spieren in een Syngene Transplant (A) en allogene Transplant (B) op POD 8 evenals H & E kleuring van Footpad huid en spieren in een Syngene Transplant (C) als allogene Transplant op POD 8 (D ) (Schaal bar:. 0,1 pm) klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Doorbloed Composite allotransplantatie, zoals de bovenste ledematen en het gezicht transplantatie voor de wederopbouw van de verwoestende weefsel gebreken, heeft zich ontwikkeld als een geldige behandelingsoptie voor patiënten die niet amendeerbaar conventionele reconstructieve procedures. Technische ontwikkelingen op het gebied van reconstructieve microchirurgie en ruime ervaring met krachtige immuunonderdrukkende en immuunmodulerende therapieën in orgaantransplantaties, nu mogelijk langdurige allograft overleving bij deze unieke patiëntenpopulatie 3,21. Echter, significante bijwerkingen van langdurige immunosuppressie vereist voor allograft onderhoud en overleving te beperken nog steeds de bredere toepassing van deze leven verbeteren, maar niet levensreddende reconstructieve modaliteiten 3,22,23. Bovendien is het succes van VCA's in tegenstelling tot vaste orgaantransplantaten ook afhankelijk tijdige regeneratie van zenuwen ontvanger in de allograft opnieuw innerveren in spieren voor motorische functie, enzintuiglijke componenten voor touch en de temperatuur sensatie om de functie te herwinnen. Vanuit immunologische vooruitzichten zoals in heel transplantatiegeneeskunde, het overkoepelende doel reconstructieve transplantatie is een toestand van operationele tolerantie waardoor de acceptatie van een allograft zonder de noodzaak van lange termijn onderhoud immunosuppressie 23 bereiken. In dit verband heeft de muis ontwikkeld tot de belangrijkste in vivo modelsysteem vertegenwoordigen transplantatie immunologie aan manieren om allogeen specifieke tolerantie in een intact immuunsysteem te onderzoeken. Bovendien is de muis H2 complex lijkt op de menselijke MHC complex. Zo inteelt en gegenotypeerd muizenstammen laten klinische scenario's van verwante en niet-verwante levende en dode donor instellingen modelleren door het gebruik van verschillende gradaties van allogeen mismatching van een syngene naar een volledig allogene stam combinatie. De beschikbaarheid van transgene dieren en knockout dieren bovendien alleows onderzoek naar de rol en de effecten van de individuele moleculaire pathways en regulerende mechanismen op het immuunsysteem acceptatie en afwijzing door het verstrekken van de mogelijkheid van een selectieve activering of uitputting van de cel of eiwit componenten. Dit gepaard met een ruime beschikbaarheid van diagnostische en therapeutische middelen (bijv., Antilichamen) uniek ontwikkeld voor de muis voor in vitro en in vivo studies 24. Kortom, deze aspecten maken het systeem van muizen de "gouden standaard" voor fundamenteel transplantatie immunologie.
Hoewel er diverse kleine 13,16,18,20,25,26 en groot dier 14,27-29 modellen beschreven voor VCA zijn geweest zoals onlangs beoordeeld door Brandacher et al. 30 slechts zeer weinig zijn eigenlijk van toepassing voor fundamenteel mechanistisch immunologisch onderzoek 16 , 24,30. Door de kleine diameter van het vat muis femorale slagader en ader, vereist geavanceerde chirurgische en super-microsurgical opleiding en vaardigheden om een succesvolle anastomose uit te voeren als de belangrijkste component van orthotope achterste ledematen transplantatie. Terwijl nauwgezette en zorgvuldige dissectie van de anatomische structuren is zo kritisch relevant in dit model als in eerder gepubliceerde modellen 20,31,32, heeft de manchet techniek hiervoor een minder steile leercurve in vergelijking met hechtdraad anastomose van sub-millimeter schepen 16,25 en kan worden bereikt in een paar maanden training met harde, dagelijkse praktijk. Op basis van onze ervaring, zal een ongetrainde microchirurg moet 30 -50 procedurele pogingen om voldoende en betrouwbare vaardigheden te verwerven om dit model met een hoge slagingspercentages te voeren. Voor de ervaren en hoog opgeleide microchirurg 15-30 pogingen zou voldoende moeten zijn om dit manchet gebaseerde muis achterste ledematen transplantatie model.The verminderde complexiteit van de procedure die hier gepresenteerd wordt verder tot uiting in het feit dat deze aanpak vereist lengte beperkt vat en dus dissectie beheersen. We vonden het nemen van tHij donor schepen de inguinale ligament en de ontvangende vaten op het niveau van de oppervlakkige epigastrische vaten voldoende lengte, ondanks de gemeenschappelijke idee dat de manchet techniek vergt veel extra lengte toepassing. Bijvoorbeeld, een eerder gepubliceerde benadering beschrijft de noodzaak oogst donor vaartuigen op het niveau van de externe darmbeenvaten en ontvangende vaten ter hoogte van de knieholte vaartuigen 32. Verder met de manchet techniek uitvoeren van de anastomose vereist minder tijd in vergelijking met de hechtdraad techniek en leidt tot een verlaagde totale bedrijfstijd. In ervaren handen, kunnen donor en ontvanger procedures in een gemiddelde van 90 minuten worden voltooid. Dit is een aanzienlijke verbetering ten opzichte van eerder beschreven methoden waaronder verlengde duur van anesthesie ontvanger een doorslaggevende factor voor succes en perioperatieve overleving; waardoor de noodzaak van een twee-chirurg benaderen voorwaarde 31-33.Bovendien weinig tot geen bloeden uit de anastomose verder bij aan aanzienlijk verminderd bloedverlies en daardoor vermindert de behoefte aan vochtsuppletie van de ontvangers, zoals hiervoor beschreven als een determinant voor succes in dit model 33. Tenslotte de manchet techniek is een werkwijze met een lage kost in vergelijking met de hoge kosten van 11-0 micro-hechtmateriaal. Derhalve moet de niet-hechtingsmanchet techniek is de meest kritische stap van het onderliggende protocol. In een elegante studie van Tung et al., Verschillende myo- en osteomyocutaneous kleppen met inbegrip van een gevasculariseerde lies huidflap zijn beschreven gebaseerd off van de muis femur vaartuig pedikel 32 de. Hoewel de hier gepresenteerde methode zich uitsluitend richt op de transplantatie van de hele muis achterste lidmaat, kan de gepresenteerde principes gemakkelijk worden vertaald en ingezet in diverse andere anatomische flap ontwerpen. Opmerkelijk is het feit dat, terwijl de vorige auteurs verslag automutilatieof autofagie van het transplantaat als een belangrijke complicatie tijdens de post-operatieve survival 31,32 is dit niet in onze ervaring waargenomen. Bovendien, snel herstel en beperkte aantasting van het vermogen van de voeding en verzorging van het dier onderstreept dat de orthotope inzet van de getransplanteerde been toebrengt slechts minimale receptor morbiditeit.
De in deze video publicatie beschreven model introduceert bovendien duidelijke voordelen om de muis instelling ten opzichte van eerder gepubliceerde technieken. Allereerst, zoals eerder gerapporteerd door de groep 16, de manchet techniek kan worden toegepast in vaten met een lumen diameter kleiner dan 1 millimeter, waardoor orthotope transplantatie van een achterpoot allograft. Deze benadering verschaft de basis voor het gebruik van dit model gecombineerd in zowel immunologische als functionele studies van zenuwregeneratie betrekking tot VCA 16,25. Zenuwregeneratie is van essentieel belang voor de field reconstructieve transplantatie omdat deze opslagmomenten schade- waarvan het succes wordt hoofdzakelijk bepaald door het herstel van functionele en esthetische defecten.
De heterotope inzet van een osteomyocutaneous flap afkomstig van de achterste ledematen is een extra model ter beschikking van de chirurg 15. In deze benadering echter chirurgische verwijdering van structuren van potentieel belang, zoals de nagels en kaal huid van de voetzool, beperkt de veelzijdigheid van deze methode ten opzichte van de orthotope transplantatie van een anatomisch onveranderde achterpoot allograft. Dit is van bijzonder belang bij reconstructieve transplantatie deze structuren als doel van atypische afstotingsprocessen beschreven bij patiënten toebrengen mechanische spanning hun hand allogene 34. Inherent uniek zijn voor een gevasculariseerde samengestelde weefsel allograft is het bot component, zoals gevasculariseerd bot bevat levensvatbare beenmerg en is een constantly vernieuwen van de bron van de componenten en de voorlopers van de donor immuunsysteem. Hoewel dit voorzichtig als een mogelijke bron van graft versus host ziekte (GvHD) werd beschouwd, werd dit niet waargenomen bij zowel dierlijke modellen 35,36 en 37 mensen. Tot het tegendeel ervan, zoals getoond in preklinische en klinische 36 studies 38-40, de combinatie van orgaantransplantatie met donor beenmerg transplantatie of transfusie van geselecteerde beenmerg afgeleide cellen blijkt produkten daadwerkelijk voordelige effecten betreffende de hoeveelheid immuunsuppressie nodig 21 ; sommige protocollen zijn ook weergegeven operationele tolerantie zonder dat medicamenteuze immunosuppressie 41.
Het model en methodologie blijkt uit deze publicatie gaf 100% langdurige dieroverleving in syngene donor - ontvanger combinaties (figuur 1) en vertoonde een goed gekarakteriseerde patronen van graft acceptaNVU en afstoting bij allogene stam combinaties, zoals beschreven in de figuren 2 en 3. Bovendien is de huid als een zichtbare primaire doelgroep van afstoting bij VCA, volgt op een reproduceerbaar patroon van 4 verschillende klinische scenario van afwijzing correleren met die voor menselijke VCA zoals geschetst door het Banff 2007 werkende indeling van de huid met VCA 42, waardoor dit model in het bijzonder te vertalen. Aldus is deze uiterst betrouwbare muismodel voor reconstructieve transplantatie bovenal introduceert de beschikbaarheid van een veelzijdige immunologisch modelsysteem van genetische gedefinieerde inteelt en transgene muizenstammen die mogelijkheden opent voor diagnostische en interventionele studies met translationeel impact op klinische VCA.
De behoefte aan fundamentele microchirurgische vaardigheden dan het opstarten van het beheersen van de beschreven techniek kan als beperking op dit model te beschouwen, maar het is dezelfde belangrijkste obstakel voor elke muis microchirurgische model. Dons is deze videoprotocol eerste plaats bedoeld om de gekruide microchirurg voorzien van een alternatieve benadering microvasculaire anastomose in een muizenmodel in vivo model voor samengestelde gevasculariseerde allotransplantation. Bovendien staat het model voor transplantatie van een intact gevasculariseerde beenmerg component, en het gebruik van een functioneel model in zenuwregeneratie onderzoek.
Tot slot hebben we een nieuwe, veelzijdige en betrouwbare muismodel voor orthotope achterste ledematen transplantatie met een niet-hechtingsmanchet techniek die de deur naar fundamentele mechanistische, evenals translationeel onderzoek met betrekking tot elk aspect van VCA wordt geopend.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Dit werk werd ondersteund door het leger, de marine, NIH, Air Force, VA en Health Affairs aan de AFIRM II te steunen, onder Award No. W81XWH-13-2-0053. De US Army Medical Research overnameactiviteit, 820 Chandler Street, Fort Detrick MD 21702-5014 is het toekennen en beheren van acquisitie kantoor. Adviezen, interpretaties, conclusies en aanbevelingen zijn die van de auteur en zijn niet per se door het ministerie van Defensie onderschreven.
De auteurs willen graag Jessica Izzi, DVM, Caroline Garrett, DVM en Julie Watson, DVM bedanken voor hun uitstekende veterinaire steun tijdens deze studie.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Suture, 6-0 Nylon | MWI | 31849 | |
| Suture, 6-0 Polysorb | MWI | 72667 | |
| Suture, 10-0 Nylon | Aero Surgical | TK-107038 | |
| Polyimide Tubing, Size 25 | Vention Medical | 141-0023 | |
| Polyimide Tubing, Size 27 | Vention Medical | 141-0015 | |
| Microvascular Clamps (Single) | Synovis | 00396 | |
| Microvascular Clamps (Double) | Synovis | 00414 | |
| Micro-Scissors | Synovis | SAS-18 | |
| Micro-Forceps | Synovis | FRS-15 RM-8 | |
| Micro-Dilators | Synovis | FRS-15 RM-8d.1 | |
| Micro-Needledriver | Synovis | C-14 | |
| Micro-Clamp Applicator | Synovis | CAF-4 | |
| Micro-Flushing Needle | Hamilton | 10MM, 30°, 33G | |
| Lactated Ringers Solution | Fisher Scientific | NC9968051 | |
| Buprenorphine | DEA Number required; Obtained from hosptial pharmacy. | ||
| Enrofloxacin; Baytril | Bayer Health Care | 186599 | |
| Heparin | Obtained from hosptial pharmacy |
References
- Khalifian, S., et al. Facial transplantation: the first 9 years. Lancet. , (2014).
- Petruzzo, P., Dubernard, J. M. The International Registry on Hand and Composite Tissue allotransplantation. Clin. Transpl. , 247-253 (2011).
- Shores, J. T., Brandacher, G., Lee, W. A. Hand and Upper Extremity Transplantation: An Update of Outcomes in the Worldwide Experience. Plast. Reconstr. Surg. , (2014).
- Levi, D. M., et al. Transplantation of the abdominal wall. Lancet. 361, 2173-2176 (2003).
- Strome, M., et al. Laryngeal transplantation and 40-month follow-up. N.Engl.J. Med. 344, 1676-1679 (2001).
- Rose, K. G., Sesterhenn, K., Wustrow, F. Tracheal allotransplantation in man. Lancet. 1, 433 (1979).
- Hofmann, G. O., et al. Allogeneic vascularized transplantation of human femoral diaphyses and total knee joints--first clinical experiences. Transplant. Proc. 30, 2754-2761 (1998).
- Hu, W., et al. A preliminary report of penile transplantation. Eur. Urol. 50, 851-853 (2006).
- Brannstrom, M., et al. Livebirth after uterus transplantation. Lancet. , (2014).
- Sarhane, K. A., et al. Diagnosing skin rejection in vascularized composite allotransplantation: advances and challenges. Clin. Transplant. 28, 277-285 (2014).
- Schneeberger, S., Khalifian, S., Brandacher, G. Immunosuppression and monitoring of rejection in hand transplantation. Tech. Hand Up. Extrem. Surg. 17, 208-214 (2013).
- Lee, W. P., et al. Relative antigenicity of components of a vascularized limb allograft. Plast. Reconstr. Surg. 87, 401-411 (1991).
- Sucher, R., et al. Hemiface allotransplantation in the mouse. Plast. Reconstr. Surg. 129, 867-870 (2012).
- Ibrahim, Z., et al. A modified heterotopic swine hind limb transplant model for translational vascularized composite allotransplantation (VCA) research. J Vis Exp. , (2013).
- Oberhuber, R., et al. Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique. J Vis Exp. , (2014).
- Sucher, R., et al. Mouse hind limb transplantation: a new composite tissue allotransplantation model using nonsuture supermicrosurgery. Transplantation. 90, 1374-1380 (2010).
- Maglione, M., et al. A novel technique for heterotopic vascularized pancreas transplantation in mice to assess ischemia reperfusion injury and graft pancreatitis. Surgery. 141, 682-689 (2007).
- Sucher, R., et al. Orthotopic hind-limb transplantation in rats. J Vis Exp. , (2010).
- Zou, Y., Brandacher, G., Margreiter, R., Steurer, W. Cervical heterotopic arterialized liver transplantation in the mouse. J. Surg. Res. 93, 97-100 (2000).
- Zhang, F., et al. Development of a mouse limb transplantation model. Microsurgery. 19, 209-213 (1999).
- Schneeberger, S., et al. Upper-extremity transplantation using a cell-based protocol to minimize immunosuppression. Ann. Surg. 257, 345-351 (2013).
- Azari, K., Brandacher, G. Vascularized composite allotransplantation. Curr Opin Organ Transplant. 18, 631-632 (2013).
- Pomahac, B., Gobble, R. M., Schneeberger, S. Facial and hand allotransplantation. Cold Spring Harb. Perspect. Med. 4, (2014).
- Chong, A. S., Alegre, M. L., Miller, M. L., Fairchild, R. L. Lessons and limits of mouse models. Cold Spring Harb. Perspect. Med. 3, a015495 (2013).
- Lin, C. H., et al. The neck as a preferred recipient site for vascularized composite allotransplantation in the mouse. Plast. Reconstr. Surg. 133, 133e-141e (2014).
- Shapiro, R. I., Cerra, F. B. A model for reimplantation and transplantation of a complex organ: the rat hind limb. J. Surg. Res. 24, 501-506 (1978).
- Leto Barone, A. A., et al. The gracilis myocutaneous free flap in swine: an advantageous preclinical model for vascularized composite allograft transplantation research. Microsurgery. 33, 51-55 (2013).
- Mathes, D. W., et al. A preclinical canine model for composite tissue transplantation. J. Reconstr. Microsurg. 26, 201-207 (2010).
- Barth, R. N., et al. Prolonged survival of composite facial allografts in non-human primates associated with posttransplant lymphoproliferative disorder. Transplantation. 88, 1242-1250 (2009).
- Brandacher, G., Grahammer, J., Sucher, R., Lee, W. P. Animal models for basic and translational research in reconstructive transplantation. Birth Defects Res C Embryo Today. 96, 39-50 (2012).
- Foster, R. D., Liu, T. Orthotopic hindlimb transplantation in the mouse. J. Reconstr. Microsurg. 19, 49 (2002).
- Tung, T. H., Mohanakumar, T., Mackinnon, S. E. Development of a Mouse Model for Heterotopic Limb and Composite-Tissue Transplantation. J. Reconstr. Microsurg. 17, 267-274 (2001).
- Zhang, F., Shi, D. Y., Kryger, Z., Moon, W. Development of a mouse limb transplantation model. Microsurgery. 19 (5), 209-213 (1999).
- Schneeberger, S., et al. Atypical acute rejection after hand transplantation. Am. J. Transplant. 8, 688-696 (2008).
- Mathes, D. W., et al. Stable mixed hematopoietic chimerism permits tolerance of vascularized composite allografts across a full major histocompatibility mismatch in swine. Transpl. Int. 27, 1086-1096 (2014).
- Yamada, Y., et al. Use of CTLA4Ig for induction of mixed chimerism and renal allograft tolerance in nonhuman primates. Am. J. Transplant. 14, 2704-2712 (2014).
- Sachs, D. H., Kawai, T., Sykes, M. Induction of tolerance through mixed chimerism. Cold Spring Harb. Perspect. Med. 4, a015529 (2014).
- Kawai, T., et al. HLA-mismatched renal transplantation without maintenance immunosuppression. N. Engl. J. Med. 358, 353-361 (2008).
- Kawai, T., Sachs, D. H. Tolerance induction: hematopoietic chimerism. Curr Opin Organ Transplant. 18, 402-407 (2013).
- Kawai, T., Sachs, D. H., Sykes, M., Cosimi, A. .B. HLA-mismatched renal transplantation without maintenance immunosuppression. N. Engl. J. Med. 368, 1850-1852 (2013).
- Leventhal, J., et al. Chimerism and tolerance without GVHD or engraftment syndrome in HLA-mismatched combined kidney and hematopoietic stem cell transplantation. Sci. Transl. Med. 4, 124-128 (2012).
- Cendales, L. C., et al. The Banff 2007 working classification of skin-containing composite tissue allograft pathology. Am. J. Transplant. 8, 1396-1400 (2008).
