Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Orthotopic הינד לימב השתלה בבית העכבר

Published: February 12, 2016 doi: 10.3791/53483
* These authors contributed equally

Summary

מודל הרומן הזה להשתלה הגפיים האחוריות orthotopic בתוך העכבר, החלת טכניקה השרוול הלא תפר עבור השקה סופר-כלי הדם, מספק כלי רב עוצמה עבור מחקר אימונולוגי מכניסטית in vivo הקשורים אלוגרפט מרוכבים vascularized (VCA).

Protocol

כל הניסויים נערכו בהתאם מדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה של המכון הלאומי לבריאות (NIH) ואושרו על ידי ועדת טיפול בבעלי חיים באוניברסיטת ג'ונס הופקינס ושימוש (JHUACUC). הנהלים הספציפיים בוצעו תחת MO13M108 פרוטוקול ACUC אושר.

מבצע התורם 1.

  1. נהל שיכוך כאבים בנקודת הזמן המתאים לכל ניסוח תרופתי לפני ניתוח. על פי השימוש בפרוטוקול טיפול בבעלי חיים ושימוש אישרה 0.1 מ"ג / ק"ג BW של עצירות תת עורי 1 hr לפני החתך בעור.
  2. התורם שלווה עם isoflurane מיושם באמצעות תא המצורף מאדה isoflurane ב 4%; לשמור הרגעה והרדמה ב -2% באמצעות חרטומו. בצע השתקפות נסיגת קמצוץ בוהן כדי לפקח על עומק ההרדמה לפני תחילתו של ההליך.
  3. לובשים מסכות, שמלות בידוד הפנויה וכפפות.
  4. לגלח את ar כירורגיתea, בפרט הגפה ובמפשעה האחוריות, ו prep עם 10% Povidone - יוד.
  5. השתמש וילון שדה סטרילי, מכשירים autoclaved ו מיקרוסקופ בהגדלה גבוהה (40X).
  6. בצעו חתך עור במפשעה באמצעות מספרי proximally לאזור אמצע הירכיים ואת circumferentially לחבר את החתך כדי לתחום את הגפיים אחוריים משאר גוף העכבר.
  7. זהה לנתח את עורק, וריד עצב הירך. הפרד כל שלושת המבנים באמצעות מלקחיים ומספריים מיקרו.
  8. לאחר pedicle וסקולרית הוא גזור לחלק את הכלי ברמה של הרצועה מפשעתי באמצעות מספרי מייקרו.
  9. לאחר מכן, ממשיכים לחלק את גחון הפרט (שרירי ירך gracilis המדיאלי) וקבוצות שרירים הגבו 20 proximally ברמה של ירך האמצע להפריד השתל מן החיה התורמת באמצעות מספריים.
  10. Transect הירך וגוזר באמצע פיר הירך באמצעות מספריים.
  11. להרדים בעלי חיים על ידי fol מנת יתר isofluraneשאחריו נקע בצוואר הרחם. אשר הפסיק פעימה ונשימת לב.
  12. שטוף את האיבר עם 2 מיליליטר heparinized (30 IE) קר (4 ° C) מלוח באמצעות מחט שטיפת G 33 רכובה על מזרק (ראה לוח חומרים).
  13. מניח שרוול polyimide אחד על וריד, ועצם ירך, בהתאמה.
  14. עוטפים השתל לתוך גזה צמר גפן רטוב, מקום בצלחת פטרי ולאחסן ב 4 ° C עד הבלעה.

2. נמען מבצע

  1. הסרת הגפיים האחוריות
    1. נהל שיכוך כאבים בנקודת הזמן המתאים לכל ניסוח תרופתי לפני ניתוח. על פי השימוש בפרוטוקול טיפול בבעלי חיים ושימוש אישרה 0.1 מ"ג / ק"ג BW של עצירות SC 1 hr לפני החתך בעור.
    2. התורם שלווה עם isoflurane מיושם באמצעות תא המצורף מאדה isoflurane ב 4%; לשמור הרגעה והרדמה ב -2% באמצעות חרטומו. בצע השתקפות נסיגת קמצוץ בוהן כדי לפקח על המחלקהשעות של הרדמה לפני תחילתו של ההליך.
    3. השתמש במשחה וטרינריים המשפיעים על העיניים של העכבר כדי למנוע יובש לאחר הרדמה.
    4. לגלח את אזור הניתוח, ובמיוחד הגפיים האחוריות ובמפשעה מכין עם 10% Povidone - יוד.
    5. בצעו חתך עור במפשעה באמצעות מספרי proximally לאזור אמצע הירכיים ואת circumferentially לחבר את החתך כדי לתחום את הגפיים אחוריים משאר גוף העכבר.
    6. זהה לנתח את עורק הירך, וריד ועצב ולהפריד כל שלושת המבנים באמצעות מלקחיים ומספריים מיקרו.
    7. לאחר pedicle וסקולרית הוא גזור, מהדק את כלי הירך ברמה של הרצועה מפשעתי.
    8. חותכים את כלי דיסטלי ברמה של העורק ברום הבטן שטחית.
    9. לאחר מכן, ממשיכים לחלק את גחון הפרט (שרירי ירך gracilis המדיאלי) וקבוצות שרירים הגבו 20 proximally ברמה של ירך האמצע להפריד את האחוריות li הילידיםMB מבעלי החיים לנמען באמצעות מספריים.
    10. Transect הירך באמצע פיר הירך באמצעות מספריים.
    11. לצרוב שרירי ירך transected בעבר כדי למנוע דימום של אתר לנתיחה ובכך איבוד דם נמען.
  2. הַשׁרָשָׁה
    1. להקטין את איבוד הנוזלים על ידי להשקיית שדה הניתוח עם מלח חמים (37 מעלות צלזיוס) והזרקת 0.3 מ"ל תמיסת מלח חמים לפני ואחרי הניתוח.
    2. מניחים את השתל באופן המשקף את עמדת אנטומי מדויק של הגפיים האחוריות יליד ידי יישור עצם הירך של הנמען ואת השתל ולחבר אותם באמצעות מחט השדרה 20 G כמו מסמר תוך לשדי.
    3. Coapt קבוצות שרירים הגחון ועל הגב באמצעות חומר תפר נספג (6-0 Polysorb).
    4. חבר את כלי הירך באמצעות טכניקת השרוול-תפר הכללי; בפירוט, למשוך את הצד המקבל של כלי שיט על האזיקים רכובים בעבר על הכלי המסתיים של גרףt. השתמש תפר 10-0 ניילון ולבצע עניבה היקפית כדי לתקן את ספינת הנמען על השרוול.
    5. הבא לשחרר את המלחציים. בשלב זה לוודא ויזואלית סיבוב שרוול ומיצוב אופטימלי כדי למנוע אי-סיבוב מסתלסל של הכלים.
    6. בצע המוסטאסיס מוקפד באמצעות כוויית אלקטרו עם דגש מיוחד על הממשק התורם למקבל השריר ואת קצות העצם.
    7. סגור את העור באמצעות תפרים ניילון שאינם נספגים (6-0 Ethilon).
    8. לקבוע תנאי normothermic בכך שהוא מאפשר את החיה להתאושש בכלוב שלה תחת מנורת חימום. המשך מעקב שוטף לפחות 4 שעות לפני חזרת אותו למוקד הדיור.
    9. לספק שיכוך כאבים שלאחר הניתוח עם עצירות במינון של 0.1mg / kg SC כל 6-8 שעות במשך 3 ימים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Performing אלוגרפט מרוכבים vascularized במודל של עכברים באמצעות טכניקה השרוול הלא תפר מאפשר להשיג הישרדות השתל ובעלי חיים טווח מצוין וארוך כפי שמוצג באיור 1. יתר על כן, הוא מייצג שיטה אמינה לקבל תוצאות לשחזור של דחייה של השתל הדרגתית מרוכבים vascularized אלוגרפט כפי שתועד על ידי מהתמונות המוצגות באיור 2. היסטולוגיה H & E של רקמות המתקבל חיות שעברו דחייה נוספת מדגישה את הדינמיקה לשחזור של דחייה של השתל במודל בעכברים זו (איור 3).

איור 1
איור 1. השתל הישרדות שילוב H2-לא תואם באופן מלא עכבר הזנים [Balb / ג H2K) לתוך C57BL6 H2K)]. בעוד כל transpl syngeneicנמלים (n = 10) התקבלו לטווח ארוך, allografts מטופל (n = 10) נדחו בחריפות בתוך הממוצע של 8 - 9 ימים. כיתת 3 דחיית עור על פי קריטריוני Banff נחשבה דחייה מלאה במחקר זה. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 2
איור 2. תכונות דחייה קלינית Dynamics של כיתה קליני מלא H2-לא תואם [Balb / ג H2K) לתוך C57BL6 H2K)] Murine Orthotopic הינד לימב להשתלות. (א) קלינית כיתה 0, (ב) 1, ( C) כיתה קלינית 2, (ד) כיתה קלינית 3, ו (ה) דחייה קלינית כיתת 4, (F) של שתל לשרוד לטווח ארוך (POD 100) שטופלה costimulטיפול המבוסס המצור ation (antiCD40 מב + CTLA4Ig). נא ללחוץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 3
איור 3. H & E מכתים של העור והשריר השתלת syngeneic (א) ו להשתלה אלוגנאית (B) על POD 8 וכן H & E מכתים של העור והשריר שודד בהשתלה syngeneic (C) להשתלה אלוגנאית ב -8 POD (D ) (סרגל קנה מידה:. 0.1 מיקרומטר) אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Vascularized Composite אלוגרפט, כגון גפיים עליונים והשתלות פן לשיקום פגמי רקמות הרסניות, התפתח כאפשרות טיפול תקפה בחולים לא amendable להליכים שיקומיים קונבנציונליים. התקדמות טכנית בתחום המיקרו-כירורגיה לשחזור וכן ניסיון רב עם אימונוסופרסיבי החזק וטיפולי modulatory חיסוניים בהשתלות איברים מוצקות, מאפשרת כעת הישרדות של שתל לטווח ארוך באוכלוסיית חולים ייחודית זו 3,21. עם זאת, תופעות לוואי משמעותיות של דיכוי חיסוני ארוכת הטווח הנדרשת לצורך תחזוקה של השתל והישרדות עדיין להגביל את היישום הרחב יותר של אלה החיים שיפור אבל לא מצילי חיים שיטות שחזור 3,22,23. יתר על כן, הצלחה של VCAs בניגוד להשתלת איברים מוצקה גם תלוי התחדשות בזמן עצבי נמען לתוך השתל מחדש innervate הוא השרירים בתפקוד מוטורי, כמו גםרכיבים חושיים למגע תחושת הטמפרטורה ל יוכלו לפעול. מנקודת המבט אימונולוגית, כמו בכל רפואת השתלות, מטרת העל בהשתלות שיקומיות היא להגיע למצב של סובלנות תפעולית המאפשרת קבלה של שתל ללא צורך דיכוי חיסוני תחזוקה לטווח ארוך 23. בהקשר זה, עכבר התפתח לייצג את העיקריים במערכת מודל vivo במחקר אימונולוגיה השתלה לבחינת דרך השגת alloantigen סובלנות ספציפית במערכת חיסון ללא פגע. יתר על כן, במתחם העכבר H2 דומה מאוד מורכב MHC אדם. לפיכך, זנים טהורים עכבר ו genotyped לאפשר לבנות מודל תרחישים קליניים של הגדרות תורם חי קשורים ושאינם קשורים cadaveric ידי העסקת בדרגות שונות של alloantigen mismatching מתוך syngeneic כדי שילוב זן אלוגנאית מלא. הזמינות של חיות טרנסגניות וחיות בנוקאאוט ספציפיות בנוסף כלOWS חקירת התפקידים והאפקטים של מסלולים מולקולריים פרט מנגנוני ויסות על קבלת חיסון ודחייה על ידי מתן אפשרות הפעלה או דלדול סלקטיבית של מרכיבי תא או חלבון. זה מקביל זמינות רחב של סוכני אבחון וטיפול (למשל., נוגדנים) שפותחו באופן ייחודי עבור מערכת העכבר במבחנה ובחי שמלומד 24. בסך הכל, היבטים אלה להפוך את המערכת בעכברים "תקן זהב" למחקר אימונולוגיה השתלה בסיסי.

אמנם היו דגמים 13,16,18,20,25,26 וגדולים חיה 14,27-29 קטן השונים המתוארים עבור VCA כפי שנסקרו לאחרונה על ידי Brandacher et al. 30 רק מעט מאוד חלים למעשה למחקר אימונולוגי מכניסטית בסיסי 16 , 24,30. בשל קוטר הכלי הקטן של עורק וריד ירך עכבר, זה דורש כירורגית ומתקדם סופר-מיילהכשרה וכישורי crosurgical לבצע השקה מוצלחת כמרכיב המרכזי של השתלת איבר האחורי orthotopic. בעוד לנתיחה מוקפדת וזהירה של המבנים אנטומיים היא כמו ביקורתי רלוונטי במודל זה כמו מודלים שפורסמו בעבר 20,31,32, טכניקת השרוול הוכיח עקומה למידה תלולה פחות בהשוואת השקת תפר כלי תת מילימטר 16,25 ו ניתן להשיג אימון כמה חודשים עם תרגול יומי קפדני. בהתבסס על ניסיון שלנו, גידול מיקרוסקופי מאומן יצטרך 30 -50 ניסיונות פרוצדורליים לרכוש מיומנויות מספיק אמין כדי לבצע את המודל הזה עם שיעורי הצלחה גבוהים. עבור מיקרוסקופיים המנוסים ומאומנים -15 - 30 ניסיונות צריכים להספיק כדי להתמחות השתלת איבר אחורי עכבר שרוול מבוסס זה model.The מופחת מורכבות של הנוהל שהוצג כאן באו לידי הביטוי עוד יותר בשל העובדה כי הגישה זו דורש אורך כלי מוגבל ולכן לנתיחה. מצאנו לוקח tהוא כלי תורם על הרצועה מפשעתי וכלי הנמען ברמה של הכלי ברום הבטן השטחי מספק אורך מספיק, למרות הרעיון המשותף כי טכניקת השרוול דורש אורך נוסף נרחב לחול. לדוגמא, גישה אחת שפורסם בעבר מתארת ​​את צורך כלי תורם קציר ברמה של כלי כסל החיצוניים וכלי נמען ברמה של כלי popliteal 32. יתר על כן, עם טכניקת השרוול, ביצוע ההשקה דורש פחות זמן לעומת טכניקת התפר ומוביל זמן הפעלה מופחת כולל. בידיים מנוסות, בשני ההליכים התורם והמקבל יכול להסתיים בממוצע 90 דקות. זהו שיפור משמעותי לעומת שיטות שדווח בעבר שבו הוארך משך ההרדמה הנמען היה הקובע המפתח להצלחה והישרדות סביב הניתוח; מה שהופך את הצורך של גישה דו-מנתח תנאי 31-33.יתר על כן, מינימלית ללא דימום מן תורמת עוד השקה כדי לצמצם באופן משמעותי את איבוד הדם ובכך מפחית את הצורך החייאה נוזל של הנמענים, כפי שתואר לעיל כפי הקובע אחרת להצלחה במודל זה 33. לבסוף, הטכניקה השרוול מייצג שיטה עם יתרון משמעותי בעלויות לעומת העלויות הגבוהות של 11-0 חומר מיקרו-תפר. לכן, שיטת השרוול הלא תפר מייצג את השלב הקריטי ביותר של פרוטוקול הבסיסי. במחקר אלגנטים ידי טונג et al., Myo- השונה דשי osteomyocutaneous כוללים דש עור vascularized במפשעה תוארו מבוסס על הנחה של pedicle כלי עצם ירך עכבר 32. בעוד השיטה המוצגת כאן מתמקדת באופן בלעדי על ההשתלה של גפיים אחורי עכבר כולו, העקרונות שהוצגו עלולים להיות מתורגם בקלות מועסקי עיצובים דשים אנטומיים שונים אחרים. ראוי לציין את העובדה כי בעוד המחברים הקודמים לדווח automutilationאו autophagy של השתל כסיבוך משמעותי במהלך ההישרדות שלאחר הניתוח 31,32 זו לא נצפתה מניסיוננו. בנוסף, התאוששות מהירה וירידת ערך המוגבלת של היכולת של בעל חיים של האכלה וטיפוח מדגישים כי הבלעת orthotopic של הרגל המושתלת גורמת לתחלואת נמען מינימאלית בלבד.

המודל מתואר בפרסום וידאו זה גם מציג יתרונות ברורים להגדרת העכבר לעומת טכניקות שפורסמו בעבר. בראש ובראשונה, כפי שדווח בעבר על ידי קבוצה שלנו 16, יכולה להיות מועסק טכניקת השרוול כלי בקוטר לומן קטן מ -1 מילימטר, מה שמאפשר להשתלת orthotopic של שתל גפיים אחורי. גישה זו מספקת את הבסיס העסקת מודל זה בשילוב בשני אימונולוגית כמו גם מחקרים תפקודית של התחדשות עצב הקשורים VCA 16,25. התחדשות עצבה היא בעלת חשיבות מפתח field של השתלה שיקומית, כמו אלה הם הליכי חיסכון כללי שהצלחתה נקבע בעיקר על ידי שיקום פגמים פונקציונליים ואסתטיים.

הבלעת heterotopic של דש osteomyocutaneous שמקורם הגפיים האחורי היא מודל נוסף לרשות המנתח 15. בגישה זו עם זאת, הסרה כירורגית של מבנים בעלי עניין פוטנציאלי, כגון מסמרי העור החלק על של שודד הדרכים, מגבילה את הרבגוניות של שיטה זו בהשוואת השתלת orthotopic של שתל גפיים אחורי ללא שינוי אנטומית. זהו עניין מיוחד בהשתלות שחזור מבנים אלו תוארו כיעד של תהליכי דחייה טיפוסיים בחולי גרימת לחץ מכאני כדי allografts מזלם 34. מטבעם ייחודי שתל רקמת מרוכבים vascularized הוא מרכיב העצם, כמו עצם vascularized מכיל מח עצם קיימא הוא constantly חידוש מקור רכיבים ומבשרים של מערכת התורם החיסונית. אמנם זה נחשב בזהירות כמקור אפשרי עבור שתל מול מחל מארח (GVHD), זה לא נצפה בשני המודלים של בעלי חי 35,36 כמו גם בבני אדם 37. למרבה להיפך למעשה, כפי שמוצג פרה-36 ומחקרים קליניים 38-40, השילוב של השתלת איברים עם השתלת מח עצם מתורם או עירוי של מוצרי תאים שמקורם במוח העצם שנבחר למעשה מראה תופעות יתרון בדבר סכום של דיכוי חיסוני צורך 21 ; פרוטוקולים מסוימים אף הראו סובלנות מבצעית ללא צורך דיכוי חיסוני מבוסס התרופה 41.

המודל ומתודולוגיה שמוצג על ידי פרסום זה ניב 100% הישרדות בעלי חיים לטווח ארוך תורם syngeneic - שילובי נמען (איור 1) וכן הפגין דפוסים מאופיינים היטב של accepta שתלNCE ודחייה לפי צירופי זן אלוגנאית כפי שמתואר איורים 2 ו -3. יתר על כן, העור כמטרה עיקרית גלויה של דחיית VCA, כדלקמן דפוס לשחזור של 4 תרחישים קליניים ברורים של דחיית correlating עם אלו של VCA אדם כפי שהתוו סיווג העבודה באנף 2007 עור המכיל 42 VCA, מה שהופך את המודל הזה במיוחד לתרגום. לפיכך, אמין ביותר זה במודל עכבר להשתלה שיקומית ומעל לכל, מציג את הזמינות של מערכת מודל אימונולוגיים צדדית של גנטי מוגדר זנים טהורים עכבר ו מהונדסים אשר פותחו את האפשרויות ללימודי אבחון התערבותית עם שפעת translational על VCA הקליני.

הצורך מיומנויות microsurgical בסיסי לפני היציאה מאסטרינג הטכניקה המתוארת עלול להיחשב כהגבלה מודל זה, עם זאת, זה אותו המכשול העיקרי לכל מודל מיקרו העכבר. יום חמישיהים, פרוטוקול וידאו זה נועד בעיקר כדי לספק מיקרוסקופיים המתובלים עם גישה חלופית השקת כלי דם בתוך בעכברים במודל vivo עבור אלוגרפט מרוכבים vascularized. כמו כן, המודל מאפשר להשתלה של מרכיב מח עצם vascularized ללא פגע, כמו גם את השימוש של מודל פונקציונלי במחקר התחדשות של עצבים.

לסיכום, הקמנו רומן, תכליתיים, במודל של עכברים אמינים להשתלת איבר orthotopic אחורית בטכניקת שרוול הלא תפר שנפתחה את דלת המכאניסטיים בסיסי, כמו גם מחקר translational הקשורים להיבט כלשהו של VCA.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

עבודה זו נתמכה על ידי הצבא, חיל הים, NIH, חיל האוויר, VA לענייני בריאות לתמוך במאמץ AFIRM השנייה, תחת פרס מס W81XWH-13-2-0053. פעילות רכישה הצבא האמריקני למחקר רפואי, 820 צ'נדלר רחוב, פורט דטריק MD 21,702-5,014 הוא משרד הרכישה הענקת וניהלה. דעות, פרשנויות, מסקנות והמלצות הן על דעת המחבר ואינם שאושרו בהכרח על ידי משרד הגנה.

המחברים מבקשים להודות ג'סיקה איזי, DVM, קרוליין גארט, DVM וג'ולי ווטסון, DVM לתמיכת הווטרינרים המעולה שלהם במהלך המחקר.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Suture, 6-0 Nylon MWI 31849
Suture, 6-0 Polysorb MWI 72667
Suture, 10-0 Nylon Aero Surgical TK-107038
Polyimide Tubing, Size 25 Vention Medical 141-0023
Polyimide Tubing, Size 27 Vention Medical 141-0015
Microvascular Clamps (Single) Synovis 00396
Microvascular Clamps (Double) Synovis 00414
Micro-Scissors Synovis SAS-18
Micro-Forceps Synovis FRS-15 RM-8
Micro-Dilators Synovis FRS-15 RM-8d.1
Micro-Needledriver Synovis C-14
Micro-Clamp Applicator Synovis CAF-4
Micro-Flushing Needle Hamilton 10MM, 30°, 33G
Lactated Ringers Solution Fisher Scientific NC9968051
Buprenorphine DEA Number required; Obtained from hosptial pharmacy.
Enrofloxacin; Baytril Bayer Health Care 186599
Heparin Obtained from hosptial pharmacy

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Khalifian, S., et al. Facial transplantation: the first 9 years. Lancet. , (2014).
  2. Petruzzo, P., Dubernard, J. M. The International Registry on Hand and Composite Tissue allotransplantation. Clin. Transpl. , 247-253 (2011).
  3. Shores, J. T., Brandacher, G., Lee, W. A. Hand and Upper Extremity Transplantation: An Update of Outcomes in the Worldwide Experience. Plast. Reconstr. Surg. , (2014).
  4. Levi, D. M., et al. Transplantation of the abdominal wall. Lancet. 361, 2173-2176 (2003).
  5. Strome, M., et al. Laryngeal transplantation and 40-month follow-up. N.Engl.J. Med. 344, 1676-1679 (2001).
  6. Rose, K. G., Sesterhenn, K., Wustrow, F. Tracheal allotransplantation in man. Lancet. 1, 433 (1979).
  7. Hofmann, G. O., et al. Allogeneic vascularized transplantation of human femoral diaphyses and total knee joints--first clinical experiences. Transplant. Proc. 30, 2754-2761 (1998).
  8. Hu, W., et al. A preliminary report of penile transplantation. Eur. Urol. 50, 851-853 (2006).
  9. Brannstrom, M., et al. Livebirth after uterus transplantation. Lancet. , (2014).
  10. Sarhane, K. A., et al. Diagnosing skin rejection in vascularized composite allotransplantation: advances and challenges. Clin. Transplant. 28, 277-285 (2014).
  11. Schneeberger, S., Khalifian, S., Brandacher, G. Immunosuppression and monitoring of rejection in hand transplantation. Tech. Hand Up. Extrem. Surg. 17, 208-214 (2013).
  12. Lee, W. P., et al. Relative antigenicity of components of a vascularized limb allograft. Plast. Reconstr. Surg. 87, 401-411 (1991).
  13. Sucher, R., et al. Hemiface allotransplantation in the mouse. Plast. Reconstr. Surg. 129, 867-870 (2012).
  14. Ibrahim, Z., et al. A modified heterotopic swine hind limb transplant model for translational vascularized composite allotransplantation (VCA) research. J Vis Exp. , (2013).
  15. Oberhuber, R., et al. Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique. J Vis Exp. , (2014).
  16. Sucher, R., et al. Mouse hind limb transplantation: a new composite tissue allotransplantation model using nonsuture supermicrosurgery. Transplantation. 90, 1374-1380 (2010).
  17. Maglione, M., et al. A novel technique for heterotopic vascularized pancreas transplantation in mice to assess ischemia reperfusion injury and graft pancreatitis. Surgery. 141, 682-689 (2007).
  18. Sucher, R., et al. Orthotopic hind-limb transplantation in rats. J Vis Exp. , (2010).
  19. Zou, Y., Brandacher, G., Margreiter, R., Steurer, W. Cervical heterotopic arterialized liver transplantation in the mouse. J. Surg. Res. 93, 97-100 (2000).
  20. Zhang, F., et al. Development of a mouse limb transplantation model. Microsurgery. 19, 209-213 (1999).
  21. Schneeberger, S., et al. Upper-extremity transplantation using a cell-based protocol to minimize immunosuppression. Ann. Surg. 257, 345-351 (2013).
  22. Azari, K., Brandacher, G. Vascularized composite allotransplantation. Curr Opin Organ Transplant. 18, 631-632 (2013).
  23. Pomahac, B., Gobble, R. M., Schneeberger, S. Facial and hand allotransplantation. Cold Spring Harb. Perspect. Med. 4, (2014).
  24. Chong, A. S., Alegre, M. L., Miller, M. L., Fairchild, R. L. Lessons and limits of mouse models. Cold Spring Harb. Perspect. Med. 3, a015495 (2013).
  25. Lin, C. H., et al. The neck as a preferred recipient site for vascularized composite allotransplantation in the mouse. Plast. Reconstr. Surg. 133, 133e-141e (2014).
  26. Shapiro, R. I., Cerra, F. B. A model for reimplantation and transplantation of a complex organ: the rat hind limb. J. Surg. Res. 24, 501-506 (1978).
  27. Leto Barone, A. A., et al. The gracilis myocutaneous free flap in swine: an advantageous preclinical model for vascularized composite allograft transplantation research. Microsurgery. 33, 51-55 (2013).
  28. Mathes, D. W., et al. A preclinical canine model for composite tissue transplantation. J. Reconstr. Microsurg. 26, 201-207 (2010).
  29. Barth, R. N., et al. Prolonged survival of composite facial allografts in non-human primates associated with posttransplant lymphoproliferative disorder. Transplantation. 88, 1242-1250 (2009).
  30. Brandacher, G., Grahammer, J., Sucher, R., Lee, W. P. Animal models for basic and translational research in reconstructive transplantation. Birth Defects Res C Embryo Today. 96, 39-50 (2012).
  31. Foster, R. D., Liu, T. Orthotopic hindlimb transplantation in the mouse. J. Reconstr. Microsurg. 19, 49 (2002).
  32. Tung, T. H., Mohanakumar, T., Mackinnon, S. E. Development of a Mouse Model for Heterotopic Limb and Composite-Tissue Transplantation. J. Reconstr. Microsurg. 17, 267-274 (2001).
  33. Zhang, F., Shi, D. Y., Kryger, Z., Moon, W. Development of a mouse limb transplantation model. Microsurgery. 19 (5), 209-213 (1999).
  34. Schneeberger, S., et al. Atypical acute rejection after hand transplantation. Am. J. Transplant. 8, 688-696 (2008).
  35. Mathes, D. W., et al. Stable mixed hematopoietic chimerism permits tolerance of vascularized composite allografts across a full major histocompatibility mismatch in swine. Transpl. Int. 27, 1086-1096 (2014).
  36. Yamada, Y., et al. Use of CTLA4Ig for induction of mixed chimerism and renal allograft tolerance in nonhuman primates. Am. J. Transplant. 14, 2704-2712 (2014).
  37. Sachs, D. H., Kawai, T., Sykes, M. Induction of tolerance through mixed chimerism. Cold Spring Harb. Perspect. Med. 4, a015529 (2014).
  38. Kawai, T., et al. HLA-mismatched renal transplantation without maintenance immunosuppression. N. Engl. J. Med. 358, 353-361 (2008).
  39. Kawai, T., Sachs, D. H. Tolerance induction: hematopoietic chimerism. Curr Opin Organ Transplant. 18, 402-407 (2013).
  40. Kawai, T., Sachs, D. H., Sykes, M., Cosimi, A. .B. HLA-mismatched renal transplantation without maintenance immunosuppression. N. Engl. J. Med. 368, 1850-1852 (2013).
  41. Leventhal, J., et al. Chimerism and tolerance without GVHD or engraftment syndrome in HLA-mismatched combined kidney and hematopoietic stem cell transplantation. Sci. Transl. Med. 4, 124-128 (2012).
  42. Cendales, L. C., et al. The Banff 2007 working classification of skin-containing composite tissue allograft pathology. Am. J. Transplant. 8, 1396-1400 (2008).

Tags

רפואה גיליון 108 עכבר vascularized Composite אלוגרפט הינד לימב השתלה אימונולוגיה חדרי תפר טכניקת קאף
Orthotopic הינד לימב השתלה בבית העכבר
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Furtmüller, G. J., Oh, B.,More

Furtmüller, G. J., Oh, B., Grahammer, J., Lin, C. H., Sucher, R., Fryer, M. L., Raimondi, G., Lee, W. P. A., Brandacher, G. Orthotopic Hind Limb Transplantation in the Mouse. J. Vis. Exp. (108), e53483, doi:10.3791/53483 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter