Abstract
A causa della omologia strutturale e funzionale alle cellule ciliate dell'orecchio interno dei mammiferi, i neuroni che innervano i Drosophila organi di senso esterni forniscono un eccellente sistema modello per lo studio della mechanosensation. Questo protocollo descrive un semplice tocco di comportamento nei moscerini della frutta che possono essere utilizzati per identificare le mutazioni che interferiscono con mechanosensation. La stimolazione tattile di una macrochaete setola sul torace di mosche provoca un riflesso governare sia dal primo o terza gamba. Le mutazioni che interferiscono con mechanotransduction (come NOMPC), o con altri aspetti della dell'arco riflesso, possono inibire la risposta governare. Uno schermo tradizionale di comportamenti adulti avrebbe perso mutanti che hanno un ruolo essenziale durante lo sviluppo. Invece, questo protocollo combina il touch screen con analisi mosaico con un marker delle cellule reprimibile (marcm) per consentire solo le regioni limitate di cellule mutanti omozigoti per essere generato e segnata dalla exprESSIONE di proteina fluorescente verde (GFP). Testando cloni marcm per risposte comportamentali anomali, è possibile programmare una collezione di mutazioni p-elemento letali per la ricerca di nuovi geni coinvolti nella mechanosensation che sarebbero state perse con i metodi più tradizionali.
Protocol
1. Croci per generare mosche marcm
- Mantenere mosche sulla melassa supporti farina di mais (6,5 g / l di agar; 23,5 g / L di lievito; 60 g / L di farina di mais, 60 ml / L melassa; 4 ml / miscela acido L; 0,13% Tegosept) o supporti Drosophila norma a 22 gradi Celsius in una luce 12 ore / ciclo scuro.
Nota: A inferiore ad una temperatura standard viene utilizzato per mantenere marcm-scorte sano. Questo si estende il tempo di sviluppo fra l'uovo e l'età adulta a 14 giorni. - Utilizzare femmine vergini (circa 1 - 8 giorni di età) da uno stock marcm-ready contenente gli elementi genetici necessari (GFP sotto il controllo di una sequenza upstream-attivazione (UAS-GFP), la proteina repressore Gal80, il fattore di trascrizione Gal4, un shock termico ricombinasi guidato, e una ricombinazione sito FRT).
Nota: Il nostro marcm ready-titoli contengono i seguenti genotipi: elavGal4, UAS-CD8-GFP, hs-flipase; FRT40A, tubGal80 / cyo; tubGal4 / TM3Sb.
Nota: Il sito FRT specifico dipenderà dalla posizione della mutazionenel genoma. Ad esempio, FRT40A è utilizzato per testare le mutazioni sul braccio sinistro del cromosoma 2, come NOMPC (vedi 10 per maggiori dettagli sui protocolli marcm). - Croce marcm-ready femmine vergini per i maschi che contengono una mutazione di interesse e il suo sito FRT corrispondente (ad esempio, W-, NOMPC3, FRT40A / cyo; + / +). Per controllare per l'induzione marcm efficace, impostare una seconda croce con le mosche di sesso maschile che contengono lo stesso sito FRT, ma senza una mutazione. Utilizzare un rapporto approssimativo di 5 femmine: 1 maschio in croci.
2. Timed ovaiole
- Dopo aver lasciato le mosche di accoppiarsi per almeno una notte, spostare gli adulti in nuove flaconcini con mezzi freschi. Lasciare le mosche di deporre le uova in un ambiente scuro per circa 4 ore prima di nuovo trasferire le croci in nuove fiale. Nota i tempi di inizio e di fine del periodo di deposizione delle uova.
Nota: gli intervalli più brevi sono accettabili quando sembra che vi sia un alto numero di uova sui media prima della fine del interva di 4 orel.- Tenere i flaconcini con un numero sufficiente di uova (circa maggiore di 20) e conservare in una luce 12 ore / buio ciclo a 22 gradi centigradi per essere il calore scioccato più tardi.
Nota: Fiale con un basso numero di uova sul supporto (inferiore a circa 20) sono difficilmente danno un numero sufficiente di mosche adulte per i test comportamentali e nell'interesse di efficienza si consiglia di non che essere conservati per ulteriori test.
Nota: I nostri mosche sono allevati con le luci accese 08:00-20:00. Abbiamo trovato il tempo serata punti portano a densità più elevate di uova, quindi di solito eseguire incroci cronometrati tra 4-8 PM e 8:00 a mezzanotte. Le mosche depongono le loro uova a RT in un armadio buio ed sono restituiti al incubatore il giorno seguente in modo da non disturbare il normale ciclo luce-buio nell'incubatrice.
- Tenere i flaconcini con un numero sufficiente di uova (circa maggiore di 20) e conservare in una luce 12 ore / buio ciclo a 22 gradi centigradi per essere il calore scioccato più tardi.
3. Eseguire Shock termico per indurre Mitotic Ricombinazione
- Circa 85-100 ore dopo la deposizione delle uova, luogo vIALS in un bagno d'acqua a 37 ° C per 1 ora. Assicurarsi che il livello dell'acqua raggiunge sopra l'altezza media in fiale, ma non annulla completamente le fiale per evitare che le larve dall'annegamento.
- Rimuovere le fiale da bagno di acqua e consentire un periodo di recupero 1 ora a temperatura ambiente.
- Luogo fiale indietro in 37 ° C bagnomaria per 1 ora.
- Rimuovere le fiale da bagnomaria e conservare in incubatrice in luce 12 ore / buio ciclo a 22 ° C fino eclosion.
4. Preparazione per il test comportamentale
- A seguito di eclosion, anestetizzare mosche sul ghiaccio. Selezionare mosche con genotipi che contengono tutti gli elementi genetici per marcm e indicano probabilmente essere osservati GFP cloni di espressione-segnato in base ai marcatori fenotipici osservabili utilizzati nelle scorte genitori. Decapitare mosche con iridectomia forbici.
Nota: Per esempio, abbiamo selezionato per le mosche, senza i marcatori genetici cyo (ali graffe) e Sb (setola stoppie) per identimosche fy che contengono tutti gli elementi genetici necessari per creare le regioni mosaico contrassegnati con GFP.
Nota: La decapitazione è necessaria per evitare che le adulti di volare via quando stimolato. - Posizionare mosche senza testa in un ambiente umido chiuso e consentire circa 10 - 20 ore di recupero. Solo uso vola tale diritto se stessi quando perturbato per ulteriori test. Prova vola entro 30 ore della decapitazione.
5. Test comportamentale
- Osservando mosche decapitati sotto un microscopio a fluorescenza dissezione, identificare i cloni omozigoti contrassegnati con GFP ai setola organi sensoriali esterni. Registrare il nome setole e lato sinistro o destro. Per eliminare ogni pregiudizio potenziale, il membro del laboratorio di eseguire la stimolazione setole dovrebbe essere ciechi per il genotipo del setola, wild-type o mutante.
- Suscitare una reflex grooming deviando la GFP contrassegnato setole verso il corpo volo con un capello rigido o una pinza sottile e osservare la ri gambarisposta. Dare un punteggio da uno a mosche che sollevare la gamba in risposta alla stimolazione setole e un punteggio pari a zero per le mosche che non si muovono le gambe.
Nota: Precedente studi 6,7 hanno caratterizzato la risposta della gamba che si manifesta stimolando una particolare setola. Questo include la gamba che risponde ad ogni setola e la proporzione di mosche che rispondono alla stimolazione di quel particolare setola. Abbiamo segnato solo per i movimenti della gamba che ci aspettavamo di rispondere basò sulla classificazione di Vandervorst 6. - Condurre cinque studi distanziati 2 minuti a parte.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Il successo di questo protocollo dipende in gran parte la resa complessiva di mosche testabili, l'efficacia dello shock termico per indurre ricombinazione mitotica, e la capacità di ottenere una risposta comportamentale robusta in linea stimolati ad intervalli di 2 min. Dal momento che si stima che il 12,5% degli embrioni contengono elementi marcm necessari e si stima che 16,67% degli adulti che Eclose hanno il potenziale per l'espressione della GFP, è fondamentale per ottenere un elevato numero di uova durante temporizzato stabilisce. Un esempio di successo temporizzato trovava su un intervallo di 4 ore che verrebbe utilizzato nel resto del protocollo è mostrato nella Figura 1A.
Quando il calore shock avviene 85 - 100 ore dopo la deposizione delle uova, la resa di GFP etichettati organi sensori esterni è più alta, con la maggior parte mosche avere uno dei macrochaetae etichettato. Numerose aree di interesse possono contenere cellule omozigoti alle basi di testable setole quando gli shock termici vengono eseguite entro questo periodo di tempo, con setole dorsale centrale e post-Alar essere trovato etichettati con maggiore frequenza (Figura 2A). I punti temporali di fuori di questo risultato finestra in chiazze di espressione GFP di fuori delle regioni di body di interesse o nessuna espressione GFP (Figura 2B).
Mosche naturalmente rispondere a uno stimolo incombente avviando una risposta di fuga 19. Al fine di evitare che le mosche di fuggire, abbiamo decapitato mosche. Il circuito di risposta governare rimane intatto nel cordone nervoso ventrale 5. Le mosche non recuperano bene se decapitato sotto anestesia anidride carbonica, ma recuperare in poche ore quando decapitato con anestesia freddi sul ghiaccio. Dopo la decapitazione, mosche devono essere conservati in un ambiente chiuso, ambiente umido durante il periodo di recupero per prevenire l'essiccamento. Mentre alcune mosche possono essiccare o essere in grado di stare in piedi (Figura 1B),solo quelli in grado di stare in piedi (Figura 1C) sono utilizzati per il test. Prima della prova, mosche sono controllati per reattività generale guardando per movimento dopo un tocco al notum. Molte mosche rimangono reattivo per diversi giorni, ma i test dovrebbero essere completati entro 24 - 36 ore dopo la decapitazione. Vola iperattività può essere un problema durante i test comportamentali perché un osservatore può avere difficoltà a distinguere tra una vera risposta governare stimolo-dipendente e movimenti generali della mosca. Negli animali con eccesso movimento non provocata dalla stimolazione tattile, risultati più affidabili sono raggiunti da attesa mosche iperattivo diventare quiescente.
Abbiamo scoperto che il 47% delle wild-type mosche rispondere almeno una volta quando viene toccato su una setola cinque volte, distanziati ad intervalli di 2 min per evitare assuefazione. Diversi gruppi hanno dimostrato che la stimolazione di diverse setole provoca una risposta modellato da una gamba specifico 6,7 6. Nei nostri esperimenti, le mosche di controllo wild-type risposto a un tocco leggero dal 14% (dorsale centrale) al 86% (Noto-pleurica) delle prove (Figura 3). In uno schermo basato marcm-con mutanti sconosciute, quelle mosche che contengono una mutazione non coinvolto nella mechanosensation si può aspettare ad esporre una risposta comportamentale affidabile simile a quello osservato negli animali di controllo wild-type.
Il noto mutante meccanosensibili, NOMPC interrotto la risposta governare come previsto. Mosche controllo risposto a setole stimolazioni a omozigote clonato post-Alar setole 37% del tempo (figura 4). Al contrario, gli animali con setole che erano omozigoti per NOMPC risposto 2% del tempo (figura 4). Mentre wild-type mosche rispondono diverso alla stimolazione di diverse setole, questi risultati suggeriscono che una mutazione meccanosensibili, quali NOMPC, quasi elimina la risposta governare. In uno schermo con mutanti sconosciuti, sono attese numerose mutazioni coinvolte nella mechanosensation che inibiscono la risposta governare.
Figura 1. corrette condizioni di allevamento sono necessari per Optimal comportamentale Testing. (A) Un numero sufficiente di embrioni sono necessari i seguenti: 2 - 4 ore periodo di deposizione delle uova. Il numero di embrioni dopo 4 ore lay temporizzato rischia di produrre un numero sufficiente di mosche adulte per test comportamentali. (B) Durante il periodo di recupero dopo decapitazione, alcune mosche non sopravvivono e non possono essere utilizzati in ulteriori prove. (C) Una mosca che è stata decapitata correttamente conservato in un ambiente umido durante il periodo di recupero è verificabili in un test comportamentale. Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 2. marcm cloni in setole quando calore scioccato tra 85-100 ore dopo la deposizione delle uova. (A) l'espressione della GFP in mosche adulte quando il calore scioccato 98-101 ore dopo la deposizione delle uova. Ben 10 setole macrochaete contengono omozigoti mutanti organi di senso esterno e sono adatti per le prove in risposta grooming analisi comportamentale (B) l'espressione della GFP in mosche adulte quando il calore scioccato 161 -. 164 ore dopo la deposizione delle uova. Si noti la mancanza di espressione GFP alle basi delle setole macrochaete, indicando nessuna patch di cellule omozigoti ad un organo sensoriale esterna testabile.arge.jpg "target =" _ blank "> Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 3. La frequenza di risposta alla stimolazione tattile dipende setola Identity. Il numero totale di risposte di una mosca individuale alla stimolazione di un singolo setola è stato diviso per il numero di stimoli per dare una risposta per cento. Le percentuali sono stati in media per ogni setola (N = # di mosche testati, 22 Messaggio Alar, 21 Dorsale Centrale 14, Scutellar, 7 Notopleural). Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 4. Mutanti NOMPC non rispondono ad tattile stimolazione. Stimolazione della psetole ost-Alar provoca una risposta di wild-type cloni marcm. Tuttavia, la stimolazione di cloni marcm sulle setole posto alari che erano NOMPC 3 - / - (barra verde) ha portato a poche risposte (N = 23 wild-type, e 12 NOMPC - / -). Cliccate qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Questo protocollo utilizza un test comportamentale adulti per lo screening per le mutazioni che colpiscono mechanosensation in Drosophila. Poiché la collezione di mutanti contiene letali mutazioni p-elemento che escluderebbe di screening come gli adulti, questo protocollo fa uso di una tecnica genetica complessa descritta da Lee e Luo , (1999) e dettagliato come protocollo da Wu e Luo, (2006) per aggirare letalità degli adulti. Marcm induce ricombinazione mitotica fra cromosomi omologhi di generare regioni clonali di cellule omozigoti. Queste regioni sono contrassegnati con GFP a causa della perdita della proteina repressore, vasca-GAL80 che si verifica durante la ricombinazione mitotica. Utilizzando marcm per generare cellule che sono omozigoti in un particolare locus genetico, la funzione del gene può essere studiato in adulti mosche utilizzando una varietà di metodi, compreso il test comportamentale descritta in questo documento.
Il fattore primario e limitando il numero ei geni specifici che possono Be testato è la presenza di un sito FRT nel genoma della mosca. Scorte di topo devono contenere un sito FRT sul braccio cromosomico della mutazione di interesse. Marcm scorte mosca pronta devono contenere un sito FRT identica come il cromosoma mutante per consentire la ricombinazione mitotica. Nel nostro laboratorio, abbiamo sviluppato le scorte fly contenenti sfondi marcm con siti FRT40A e FRT42D. Queste scorte ci permetteranno di vagliare ogni adulto letale p-elemento già combinato con un sito FRT corrispondente sulle 2L e 2R braccia cromosomiche, rispettivamente. Per massimizzare il potenziale di marcm in schermi per le mutazioni che interessano meccanotrasduzione o il riflesso toelettatura, le scorte mosca supplementari con sfondi marcm in grado di testare i geni su entrambe le braccia del terzo cromosoma e verrà creato il cromosoma X. Una volta messo a punto, queste azioni consentiranno la maggior parte adulti mutazioni letali p-elemento in combinazione con un sito FRT per essere testati per il coinvolgimento in mechanosensation.
I tempi della sh di caloreock protocollo è stato sviluppato per massimizzare il numero di regioni di cellule omozigoti presso gli organi sensori esterni, lasciando gran parte del resto della mosca eterozigoti a livello del locus di interesse. Numerose aree di interesse possono essere contrassegnati da espressione GFP a seguito di un doppio shock termico, che consente a più setole da testare (Figura 2). Il protocollo marcm offre un'eccellente opportunità per creare mutazioni omozigote letali in regioni specifiche di interesse, ma il nostro protocollo marcm si basa sull'induzione heat shock di attività recombinase, rendendolo un processo casuale su quale setole alla fine sarà verificabile. Poiché ogni setola suscita una specifica governare gamba reflex 6,7, è stato importante per noi per confermare che le risposte a wild-type cloni marcm sono paragonabili a quelli precedentemente descritti. Massimizzare l'efficienza di un schermo basato marcm-richiede la capacità di testare qualsiasi delle setole macrochaete una risposta mutante e di confrontare questi datuna contro il tasso di risposta da una corrispondente setola in un magazzino marcm-ready. Abbiamo confermato i risultati di Corfas e Dudai 7 in setole esprimono GFP in linea marcm.
La capacità di distinguere facilmente tra le risposte comportamentali mosca normale e anormale è fondamentale per determinare quali mutazioni interferiscono con meccanotrasduzione. Una mutazione in un gene coinvolto nella meccanotrasduzione o l'altro aspetto del riflesso governare dovrebbe inibire la risposta gamba; Si prevede un tasso di risposta significativamente inferiore al corrispondente setola in un magazzino marcm-ready. Le percentuali di risposta comportamentale a mosaico NOMPC e wild-type mosche servire come prova del principio che lo schermo comportamentale basato su marcm può essere utilizzato per differenziare i mutanti meccanosensoriali e mosche normali. Abbiamo dimostrato che in NOMPC cloni mutanti mosaico, il riflesso governare in risposta alla stimolazione setole è quasi abolita. Solo due mosche di quattordici testati espostiuna risposta gamba. Ciascuna di queste mosche risposto solo una volta nel corso della sperimentazione, suggerendo che un test comportamentale basato marcm-è efficace ad individuare un difetto mechanosensation. Un osservatore in grado di distinguere tra mutante meccanosensibili vola e vola senza una mutazione o con una mutazione che non è coinvolto nella risposta governare. A causa dell'elevato grado di variabilità nelle risposte wild-type, lo schermo identificare gli alleli forti, ma probabilmente mancherà più sottili cambiamenti nel comportamento a causa di alleli più deboli. La collezione di mutanti di essere proiettati include solo omozigoti alleli letali, per cui è probabile che questi sono alleli forti o nulli e sono suscettibili di abolire la funzione delle proteine. Tuttavia, lo schermo potrebbe perdere alleli che possono essere letali in fase di sviluppo, ma produrre un difetto meccanosensoriali più sottile quando realizzato omozigote in maniera più limitata da marcm.
Abbiamo scelto un sistema di punteggio o tutto o nulla per semplicità. Questo metodo produce un generosopunteggio rispetto al sistema utilizzato da Corfas e Dudai 7 che assegna un punteggio di 0 - 4 a seconda dell'entità del movimento delle gambe. Nel sistema tutto o niente, qualsiasi risposta è dato pieno credito con il presupposto che qualsiasi risposta alla stimolazione indica che il sistema sensoriale rileva lo stimolo e segnalamento per il sistema motorio.
Questa schermata può identificare le mutazioni che colpiscono qualsiasi passo nel circuito comportamentale. Ulteriori test, come elettrofisiologia (come in Kernan et al 5) o calcium imaging, dovrebbe essere usato per determinare se la mutazione direttamente interessato mechanotransduction o qualche altro aspetto dello sviluppo o la funzione del arco riflesso senso-motorio.
Drosophila melanogaster fornire un ottimo sistema modello per lo studio della mechanosensation. Gli organi sensoriali esterni condividono molte somiglianze strutturali e funzionali con le cellule ciliate dell'orecchio interno dei mammiferi20. Il chiarimento delle molecole coinvolte in questo processo in Drosophila ha il potenziale per rivelare omologhi mammiferi e ortologhi. Schermi volte a scoprire le mutazioni che sconvolgono mechanosensation aprirà la strada per la successiva cellula biologica, elettrofisiologici e studi biochimici per identificare e caratterizzare ulteriormente queste molecole, approfondire la nostra comprensione di questo processo sia mosche e mammiferi. Uno schermo a base marcm-per mutazioni che interessano mechanosensation utilizzerà una tecnica genetica consolidata in coppia con una risposta governare test comportamentali per rivelare nuovi geni coinvolti nella mechanotransduction e la mosca governare reflex.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Gli autori non hanno interessi finanziari concorrenti.
Acknowledgments
Gli autori desiderano ringraziare il centro di Bloomington magazzino, Liqun Luo, Charles Zuker, e Lily e Yuh Nung Jan per la generosa condivisione delle scorte mosca e il seguente per il finanziamento: Somas-URM (JD e SW), Laurea Ford Facoltà Estate Fellowship (SW), BD Corporation Estate Research Fellowship (a CL e DL), Il Renee e Anthony M. Marlon, MD '63 Estate Research Fellowship (DL) James C. '75 e Jane Colihan Estate Research Fellowship (TO) attraverso Alumni / Parent Estate Fondo di ricerca del Collegio della Santa Croce e il Stransky Fondazione Estate Research Fellowship (a TO). Un ringraziamento speciale al Dipartimento di Biologia e l'Ufficio di Presidenza a College of the Holy Cross per il sostegno di tutto il lavoro in laboratorio.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Brewers Yeast (25 lb) | MP Biomedicals | ICN90331225 | Fly Food |
| Corn (25 lb) | MP Biomedicals | ICN90141125 | Fly Food |
| Agar (1 lb) | MoorAgar Inc. | 41004 | Fly Food |
| Tegosept (5 kg) | Genesee | 20-259 | Fly Food |
| Molasses (1 Gallon) | Sugarmill Brand - Thomsen Food Service | 0 2625 | Fly Food |
| Propionic Acid | Fisher | A258-500 | Fly Food |
| Phosphoric acid | Fisher | A260-500 | Fly Food |
| Drosophila Vials, Narrow (PS) | Genesee | 32-109 | Fly Cultures |
| 6oz Square Bottom Bottle (PP) | Genesee | 32-130 | Fly Cultures |
| Flugs - Plastic Fly Bottles | Genesee | 49-100 | Fly Cultures |
| Rayon Balls, Large | Genesee | 51-100 | Fly Cultures |
| Droso-Filler, Narrow | Genesee | 59-168 | Fly Food Preparation |
| Droso-Filler, Bottles | Genesee | 59-170 | Fly Food Preparation |
| 8A-C / gear driven lab stirrer with c-clamp mount 1/15 HP, 700 rpm variable speed, 115 V, 50/60 Hz | Cleveland Mixer | 8A-C | Fly Food Preparation |
| Water jacketed Kettle | Fly Food Preparation | ||
| Diurnal Growth Chamber | Forma Scientific | Temperature and light/dark cycle controlled | |
| Water bath | VWR | For heat shock | |
| MicroScissors | Fine Science Tools | 15000-08 | For removing heads |
| Fluroscence Dissecting Microscope | Zeiss | SteREO Discovery V8 | With GFP cube (KSC295-814D) band pass filter |
| Fluroscence Light Source | Zeiss | X-Cite 120 | Fiber optic light pipe makes this easy to configure |
| Camera for Scope | Zeiss | AxioCam ICc1 | |
| Image acquistion software | Zeiss | ||
| Ice bucket | for cold anthesia | ||
| Homemade cold anthesia tray | for cold anthesia decapitation | ||
| Plastic boxes | for recovery of decaptitated flies in humid environment |
References
- Grünert, U., Gnatzy, W. K+ and Ca++ in the receptor lymph of arthropod cuticular mechanoreceptors. J Comp Physiol A. 161, 329-333 (1987).
- Kernan, M. J. Mechanotransduction and auditory transduction in Drosophila. Pflugers Arch. 454, 703-720 (2007).
- Gillespie, P. G., Walker, R. G. Molecular basis of mechanosensory transduction. Nature. 413, 194-202 (2001).
- Corfas, G., Dudai, Y. Adaptation and fatigue of a mechanosensory neuron in wild-type Drosophila and in memory mutants. J Neurosci. 10, 491-499 (1990).
- Kernan, M., Cowan, D., Zuker, C. Genetic dissection of mechanosensory transduction: mechanoreception-defective mutations of Drosophila. Neuron. 12, 1195-1206 (1994).
- Vandervorst, P., Ghysen, A. Genetic control of sensory connections in Drosophila. Nature. 286, 65-67 (1980).
- Corfas, G., Dudai, Y. Habituation and dishabituation of a cleaning reflex in normal and mutant Drosophila. J Neurosci. 9, 56-62 (1989).
- Chen, J., et al. Discovery-based science education: functional genomic dissection in Drosophila by undergraduate researchers. PLoS Biol. 3, e59 (2005).
- Lee, T., Luo, L. Mosaic analysis with a repressible cell marker for studies of gene function in neuronal morphogenesis. Neuron. 22, 451-461 (1999).
- Wu, J. S., Luo, L. A protocol for mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) in Drosophila. Nature Protocols. 1, 2583-2589 (2006).
- Eberl, D. F., Hardy, R. W., Kernan, M. J. Genetically similar transduction mechanisms for touch and hearing in Drosophila. J Neurosci. 20, 5981-5988 (2000).
- Walker, R. G., Willingham, A. T., Zuker, C. S. A Drosophila mechanosensory transduction channel. Science. 287, 2229-2234 (2000).
- Yan, Z., et al. Drosophila NOMPC is a mechanotransduction channel subunit for gentle-touch sensation. Nature. 493, 221-225 (2013).
- Arnadottir, J., Chalfie, M. Eukaryotic Mechanosensitive Channels. Annual Review of Biophysics. 39, 111-137 (2010).
- Christensen, A. P., Corey, D. P. TRP channels in mechanosensation: direct or indirect activation? Nature Reviews Neuroscience. 8, 510-521 (2007).
- Cheng, L. E., Song, W., Looger, L. L., Jan, L. Y., Jan, Y. N. The Role of the TRP Channel NompC in Drosophila Larval and Adult Locomotion. Neuron. 67, 373-380 (2010).
- Lee, J., Moon, S., Cha, Y., Chung, Y. D. Drosophila TRPN(=NOMPC) channel localizes to the distal end of mechanosensory cilia. PLoS One. 5, e11012 (2010).
- Liang, X., Madrid, J., Saleh, H. S., Howard, J. NOMPC, a Member of the TRP Channel Family, Localizes to the Tubular Body and Distal Cilium of Drosophila Campaniform and Chordotonal Receptor Cells. Cytoskeleton. 68, 1-7 (2011).
- de Vries, S. E., Clandinin, T. R. Loom-sensitive neurons link computation to action in the Drosophila visual system. Curr Biol. 22, 353-362 (2012).
- Jarman, A. P. Studies of mechanosensation using the fly. Hum Mol Genet. 11, 1215-1218 (2002).
