Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

مجموعة من الاختبارات للسيارات في ماوس نموذج حديثي الولادة من الشلل الدماغي

Published: November 3, 2016 doi: 10.3791/53569
Automatic Translation
1,2, 1,2
1Department of Medical Genetics and Molecular Biochemistry, Lewiz Katz School of Medicine at Temple University, 2Shriners Hospitals Pediatric Research Center

Introduction

تطوير نماذج جديدة من إصابة الأطفال أو المرض باستخدام القوارض غالبا ما يكون صعبا بسبب قدرة مذهلة على حد سواء الجرذان والفئران لاسترداد بسرعة من الإصابة العصبية. ولذلك، من أجل التحقق من صحة أي نموذج مرض جديد للأطفال، فحص بدقة التغيرات الخلوية والجزيئية يجب أن تذهب جنبا إلى جنب مع النتائج السلوكية. في نواح كثيرة، قد يكون الانتعاش السلوكي وظيفية أكثر أهمية من التغيرات الخلوية الأساسية من حيث أهميتها العلاجية أو متعدية. كما يتعلم الباحثون أكثر عن الإصابات في البالغين وحديثي الولادة، فمن الواضح أن إجاباتهم مختلفة جدا ولا يمكن استقراء بين البلدين. على سبيل المثال، الفئران حديثي الولادة عرض مستويات مختلفة من عامل نمو الأعصاب، عامل التغذية العصبية المشتق من الدماغ، neurotrophin-3 و الدبقية عامل التغذية العصبية المشتقة خط الخلية التالية إصابة الحبل الشوكي 1،2. بالإضافة إلى ذلك، حديثي الولادة لها كبير تسرب حاجز الدم في الدماغ بعد السكتة الدماغية 3، دemonstrate القشرية إعادة ترتيب الخلايا العصبية بعد الإصابة الأعصاب الطرفية 4، ولها دباق النجمي تأخير أو تباطؤ التالية إصابة الحبل الشوكي ونقص الأكسجة نقص التروية 5،6. وبالتالي، فمن المهم أن الأبحاث الأطفال متعدية استخدام نماذج تعادل تنمويا وأن تلك النماذج يتم تقييم لكل من التغيرات الجزيئية الخلوية / والاختبارات السلوكية المناسبة للفئة العمرية.

الشلل الدماغي (CP) هو اضطراب حركي يؤثر 3: 1000 ولادة حية سنويا (NIH). الأطفال يعانون من الشلل الدماغي المعرض مجموعة من الأعراض والظروف المشارك المهووسين، اعتمادا على شدة المرض. صعوبة في الحركة والتنسيق هي العلامات الأكثر شيوعا، جنبا إلى جنب مع التأخير في الوصول إلى المعالم التنموية السيارات. وتشمل علامات أخرى العضلات غير طبيعية (إما زيادة أو نقصان)، وانخفاض المهارات غرامة السيارات، وصعوبة في المشي، الترويل المفرطة والبلع، وتأخر الكلام (NIH). ويعتقد أن السبب الكامن وراء CP أن يكوننقص الأكسجين و / أو تدفق الدم إلى الدماغ خلال فترة ما قبل أو الفترة المحيطة بالولادة، أو ما يصل إلى سنة واحدة بعد الولادة. وبالإضافة إلى ذلك، يعتقد التهاب الآن أن تكون عنصرا أساسيا في تطوير الإنتاج الأنظف.

وترتبط معظم الحالات CP مع الضرر المادة البيضاء حول البطينات، والمعروفة باسم تلين حول البطينات الدماغية (PVL). وتشير هذه السمة المميزة العصبية أن إهانة الأولية مما أدى إلى CP يحدث خلال فترة نمو الدماغ عندما قليلة التغصن هي الأكثر عرضة للإهانة. فترة النمو السريع دبقية قليلة التغصن في الإنسان، وأيضا الفترة عندما قليلة التغصن هي الأكثر عرضة للإصابة، ما بين 24 - 32 أسبوعا من الحمل. في القوارض، والفترة المماثلة هي أيام بعد الولادة 2-7 يوليو، وليس عند يسببها CP في هذا النموذج.

نموذج الفأر حديثي الولادة من حزب المحافظين الذي تم استخدامه لإجراء الاختبارات المذكورة هنا يجمع بين نقص الأكسجين ونقص التروية مع التهاب لخلق ينجأوروغواي الذي يحاكي أفضل من التنكس العصبي ينظر في CP البشري. ويتناول هذا النموذج بعض أوجه القصور التي لوحظت في النماذج الحيوانية الأخرى من حزب المحافظين، والتي تفتقر إلى العجز الحركي المتميزة التي تشبه المرضى CP البشري، وكذلك متميز الضرر المادة البيضاء. وقد أظهرت دراسات سابقة من قبل متعاون باستخدام نفس النموذج أن إضافة التهاب يعزز الضرر المادة البيضاء، وبالتالي محاكاة أفضل PVL تظهر على الأطفال المصابين بالشلل الدماغي 8. بناء على البيانات السابقة، تعرض هذه الورقة على بطارية شاملة من اختبارات السيارات حديثي الولادة وذلك لتقييم التغيرات في السلوك الحركي والذين تتراوح أعمارهم الحيوان.

Protocol

ملاحظة: تم إجراء جميع العمليات الجراحية الحيوانات وفقا للقسم جزيئية جامعة تمبل والسياسات والإجراءات IACUC. تم شراء C57BL / 6 السدود والموالون من مختبرات نهر تشارلز وتم إيواؤهم في أقفاص تربية مع 12 ساعة دورة الضوء / الظلام (الضوء على 7:00 حتي 19:00) مع حرية الوصول إلى الغذاء والماء. تربية أزواج أنتجت أحجام القمامة بين 5-10 الجراء.

جراحة 1. الشلل الدماغي التعريفي

  1. ملاحظة: تم يسببها الشلل الدماغي باستخدام اليوم ما بعد الولادة (الحزب الوطني الديمقراطي) 6 الجراء الماوس، كما هو موضح سابقا 8،9 (http://www.jove.com/video/1951/mouse-models-of-periventricular-leukomalacia).
  2. وضع الجرو في وعاء زجاجي على الجليد مع مختبر مسح لحماية الجلد الجرو ل. تحقق من الطائرة التخدير المناسبة قرصة القدم وقلة الحركة. نقل الجرو إلى حزمة الجليد مبطن لعملية جراحية.
  3. تعقيم الجلد من الجرو باستخدام الايثانول 70٪. عندما تجف، واستخدام بلوخ الجراحية # 11 معقمدي وجعل شق 1 سم في الرقبة.
  4. باستخدام الميكروسكوب الجراحي مجسمة، عزل الصحيح الشريان السباتي المشترك مع ربط الصغيرة وكوى باستخدام cauterizer باليد المحمولة. تأكيد بصريا أن الشريان والمغطي. وتشمل جراحة الشام التصور وعزل الشريان السباتي المشترك دون الكي.
  5. إعادة ترتيب الجلد وثيق باستخدام خياطة الغراء (ن بوتيل cyanoacrylate).
  6. وضع الجرو على 34 درجة لوحة C التسخين لمدة 30 دقيقة لمراقبة التنفس التلقائي والحركة الطبيعية.
  7. العودة الجرو (ق) إلى سد لمدة 30 دقيقة.
  8. ضع الجراء على وسادة التدفئة أو غيرها من جهاز الاحترار وضعت في 34 درجة مئوية داخل غرفة نقص الأكسجة وضعت في 6٪ من الأكسجين لمدة 35 دقيقة. يتم استبدال الأكسجين النيتروجين. تراقب عن كثب مستوى غرفة الأوكسجين ودرجة الحرارة للحصول على نتائج الإصابة متسقة.
  9. إزالة الجراء من غرفة نقص الأكسجة وإعادتها إلى وسادة التدفئة.
  10. حقن داخل الصفاق lipopolyالسكريد المخفف في محلول ملحي في 1 ميكروغرام / كغ والعودة الجرو الى السد. حقن الشام هي حقن المياه المالحة فقط.

2. الاختبارات حديثي الولادة للسيارات

ملاحظة: في الحزب الوطني الديمقراطي 8، 48 ساعة بعد تحريض CP، ويتم اختبار الجراء الماوس للتنمية السلوك العصبي. ويتم اختبار الجراء داخل كتلة 4 ساعات قبل الظهر من أجل القضاء على وقت الاختلافات اليوم في السلوك. تتم إزالة الجراء من السد لمدة لا تتجاوز 15 دقيقة في الوقت المناسب لمنع فقدان سريع للقضايا حرارة الجسم والجوع / الفصل. وبالإضافة إلى ذلك، يسمح الجراء للراحة بين الاختبارات بحيث يتم أثارت الجهود القصوى على كل اختبار. ويتم تكييف أساس الاختبارات الحركية الأطفال حديثي الولادة باستخدام بطارية فوكس من الاختبارات 10،11 والتكيف Wahlsten للاختبارات فوكس 12، وكذلك المنشورات علاج-الدفاع المضادة للقذائف وسلوك الآخرين (كما ورد في النص لكل اختبار). بطارية فوكس من الاختبارات المناسبة لاكتئاب ما بعد الولادة 2 - 21. من الاختبارات فوكس، الخليطذ الحاضر هنا تشمل: المنعكس التقويمي، واستيعاب رد الفعل، انجذاب بالجاذبية السلبية (وتسمى اختبار الشاشة الرأسي في بطارية فوكس) وأربعة أطرافه قوة قبضة (معدلة من فوكس وWahlsten في الاختبارات تسلق الشاشة). هنا، يتم اختبار التمشي، القوة الطرف الأمامي، وقوة hindlimb أيضا للتمييز السلوك الحركي انعكاسية بين الشام والفأر CP الجراء. للقضاء على إدخال تحسينات على اختبار بسبب التعلم، واختبارات محدودة لمدة أقصاها 3 محاكمات حيث لوحظ. وقال إن جميع التجارب الأخرى تجربة واحدة فقط لكل حيوان.

  1. التمشي (الشكل 1) (مقتبس من بروتوكول الفئران 13):
    ملاحظة: الزحف هو سلوك وضعت في وقت مبكر من الجرو الفأر بين الحزب الوطني الديمقراطي 0-5، حيث تبدأ الفئران أشر إلى الانتقال إلى المشي، 5-10 أيام من العمر 14 عاما. في الحزب الوطني الديمقراطي 8، واختبار التمشي يستفيد من هذه الدورة فترة انتقالية. التمشي يمكن، مع ذلك، أن سجل طوال مدة الماوس ويمكن تحديد في أي سن.حيث لا يوجد إمكانية للتعلم، واختبار التمشي يمكن أن يتكرر عدة مرات حسب الحاجة من خلال مسار التجربة.
    1. مكان الفئران في حاوية واضحة حيث الفئران واضحة من أعلى وكذلك الجانب. استخدام الحث لطيف عن طريق لمس ذيل الجرو لتحفيز الجرو على السير.
    2. يسجل التمشي لمدة 3 دقائق باستخدام المقياس التالي: 0 = عدم الحركة، و1 = الزحف مع حركة الأطراف غير المتماثلة، 2 = بطيئة الزحف ولكن حركة الأطراف متماثل، و 3 = بسرعة الزحف / المشي.
      ملاحظة: هنا، وصفت حركة الأطراف متماثل حيث يلتقي hindpaws frontpaws خلال كل خطوة، وفي كل خطوة بسلاسة الانتقال إلى الخطوة التالية. فأر عرض حركة الأطراف غير المتماثلة لديها عدم انتظام وضع مخلب والانتقال من خطوة إلى أخرى لا يتم على نحو سلس.

شكل 1
الشكل 1. الانتقال منالزحف إلى المشي يمكن تمييزها من خلال مراقبة Hindpaw، فضلا عن رئيس والذيل. (A) خلال الزحف، مخلب كامل إلى الوراء، من أصابع القدم إلى الكعب، تلامس الأرض عند التجول، كما يرمز لها (*). ويعتبر نمط المشي الكبار فقط عند أصابع القدم والجزء الأمامي من hindpaw تلمس الأرض (هو ارتفاع كعب، deonoted بواسطة [**]). (ب) الرأس والذيل على فأرة الحاسوب الزحف منخفض على الأرض. يبدأ رئيس في الارتفاع خلال الفترة الانتقالية من الزحف إلى المشي. الانتقال اكتمال عندما يتم رفع كل من الرأس والذيل وفقط الجزء الأمامي من hindpaw تلامس الأرض. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

  1. Hindlimb القدم زاوية (الشكل 2)
    ملاحظة: هناك تغيير تنموي واضح في الموقف hindlimb كما مذكرات التفاهمالبريد ينضج من الزحف إلى المشي، حيث يتم وضع hindlimbs تحت الجسم عند المشي والزاوية بين hindlimbs أقل من زاوية ينظر في الزحف. على الرغم من أن زاوية hindlimb القدم تتغير مع مرور الوقت، الجراء الماوس من نفس الفئة العمرية يعانون من إصابات أو أمراض مختلفة ويمكن مقارنة. على غرار اختبار التمشي (3.1)، ليست هناك إمكانية للتعلم. وهكذا، فإن اختبار زاوية hindlimb القدم يمكن أن يتكرر عدة مرات حسب الحاجة من خلال مسار التجربة.
    1. إما في مربع حقل مفتوح واضحة أو أي مكان مغلق، جبل كاميرا فيديو من تحت أو فوق، على التوالي، ليسجل الجرو وهو يتحرك حول الملعب. استخدام الحث لطيف عن طريق لمس ذيل الجرو لتحفيز الجرو على السير. سجل لمدة دقيقة.
    2. باستخدام تسجيلات الفيديو، وقياس زاوية سفح الجراء عن طريق رسم خط من نهاية كعب / الساق إلى غيض من اطول (وسط) اصبع القدم. أخذ القياس فقط عندما يكون الجرو هو المنفذ خطوة الكاملفي خط مستقيم والقدمين هي مسطحة على الأرض. لا تأخذ القياسات في حين أن الجرو هو ثابت أو أثناء الجرو تحول.
    3. قياس 3-5 مجموعات من زوايا القدم وحساب متوسط ​​زاوية لكل الجرو اختبارها.

الشكل 2
الشكل 2. يمكن استخدامها Hindlimb القدم زاوية تحديد مشية شذوذ، ويمكن قياس زاوية القدم عن طريق رسم خط من منتصف كعب من خلال الرقم منتصف (أطول). الحيوانات المصابة لديها زاوية أكبر القدم بالمقارنة إلى وضعها الطبيعي (انظر ممثل النتائج، قدم زاوية). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

  1. تصحيح السطح (الشكل 3):
    ملاحظة: إن المنعكس المقوم هو القدرة الحركية لل الجرو الماوس لتكون قادرة على الوجه على قدميها من موقف ضعيف. ويبلغ متوسط عمر لالمنعكس المقوم لتظهر في القوارض هو اكتئاب ما بعد الولادة 5 مع مجموعة من اكتئاب ما بعد الولادة 1 - 10 15 وهذا الاختبار هو رد الفعل، لا يوجد أي عنصر التعلم وويمكن تكرار ذلك طوال فترة التجريب.
    1. ضع الجراء على ظهورهم على ورقة القطن أو مقعد وسادة وعقد في المنصب لمدة 5 ثوان.
    2. الافراج عن الجراء وتسجيل الوقت الذي يستغرقه الجرو للعودة إلى ضعية الرقود، فضلا عن اتجاه تصحيح (اليمين أو اليسار). ويرد مجموعه من دقيقة واحدة لكل محاكمة، إذا لزم الأمر.
    3. تكرار لما مجموعه ثلاث محاكمات.

الشكل (3)
الشكل 3. تصحيح السطح. يتطلب هذا الاختبار السيطرة على جذعه، ويمكن اختبار لالاختلالات الوضعي. قد يكون المرضى CP البشري العجز في الأساسية.e.com/files/ftp_upload/53569/53569fig3large.jpg "الهدف =" _ فارغة "> الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

  1. انجذاب بالجاذبية سلبي (الشكل 4)
    ملاحظة: متوسط العمر للالمنعكس انجذاب بالجاذبية سلبي لتظهر في القوارض هو اكتئاب ما بعد الولادة 7 مع مجموعة من الحزب الوطني الديمقراطي 3-15 15 اختبار انجذاب بالجاذبية سلبي يقيم التنسيق الحركي في الفئران الشابة. يتم وضع الفئران لأسفل المنحدر، ونظرا لمنبهات الدهليزي الجاذبية، الجراء تتحول إلى مواجهة المنحدر. وردا على التحفيز، أو سيارات الأجرة، هو سلوك فطري.
    1. وضع الجرو مع رئيسها نحو الانخفاض على 45 س انحدر وأنه عقد لمدة 5 ثوان.
    2. الافراج عن الجرو وتسجل الوقت والاتجاه الجرو يتحول إلى مواجهة التصاعدي. إجمالي وقت الاختبار 2 دقيقة.
    3. تكرار لما مجموعه ثلاث محاكمات. الفئران التي تسقط الصعود أو تفشل لتحويل يمكن أن يكون إما إعادة اختبار، القضاء، أو يعطى درجة الصفر.
      ملاحظة: هذا القرار لEFT إلى الفاحص، وأحيانا الجراء سوف لفة أسفل المنحدر بسبب النعاس وليس ضعف. وبمجرد التوصل إلى قرار بشأن كيفية تسجيل الجراء التي تقع أسفل المنحدر، تجدر الإشارة في طرق وينبغي أن تكون متسقة في جميع أنحاء اختبار جميع المواد الدراسية.

الشكل (4)
مطلوب الشكل 4. سلبي انجذاب بالجاذبية. موتور والمدخلات الدهليزي للماوس على الاعتراف توجهها على منحدر وبدوره حولها. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

  1. التعليق الأمامي الأطراف الاصطناعية (الشكل 5) 16؛ مقتبس من 17، 18:
    ملاحظة: التعليق الجبهة الأطراف الاصطناعية باختبار قوة forelimb من الجراء، بما في ذلك ذراع وقوة مخلب. ت لا ينصح اختبار له لالجراء الذين تقل أعمارهم عن الحزب الوطني الديمقراطي 10 15. ويسمح الجراء لفهم سلك موتر عبر كائن مستقر وتشبث السلك مع كل من الأرجل الأمامية. منطقة الاختبار هو أكثر من منطقة الهبوط مبطن. الاختبار يمكن الكشف عن اليمين / اليسار الخلافات قوة الجانب. التعلم وغياب التعزيز السلبي يمكن أن يؤدي إلى زيادة عدم المشاركة. الفئران التي تقع مباشرة عند الإفراج عنهم أو الفشل في فهم عند وضعها على السلك تدل على عدم المشاركة.
    1. عقد الجراء بحزم من قبل الهيئة وتمكينهم من فهم السلك مع كل من الأرجل الأمامية.
    2. الافراج عن الجرو. باستخدام جهاز توقيت أو ساعة توقيت، وتسجيل الوقت الإجمالي للسقوط، وكذلك ضعف مخلب.
      ملاحظة: يتم تحديد ضعف باو إذا الجرو يسقط باستمرار من السلك مع مخلب واحد قبل الآخر بدلا من إطلاق من السلك مع كل الكفوف في نفس الوقت.
    3. تكرار الاختبار ليصبح المجموع ثلاث مرات.

er.within الصفحات = "1"> الرقم 5
الرقم 5. الجبهة الاطراف تعليق. يؤدي هذا الاختبار تعليق التوتر في الأطراف الأمامية حتى التعب العضلي. مع هذا النهج، وإنشاء قوة أساسية في الأطراف الأمامية. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

  1. تعليق Hindlimb (الشكل 6):
    ملاحظة: هذا الاختبار تعليق يحدد قوة hindlimb. إنه اختبار مصممة خصيصا لحديثي الولادة، وكان يستخدم في البداية على الحيوانات بين الحزب الوطني الديمقراطي 2-12 19،20، ولكن يمكن تكييفها للفئران يصل إلى الحزب الوطني الديمقراطي 14. هذا الاختبار يمكن الكشف عن hindlimb الخلافات قوة اليمين / اليسار فضلا عن وظيفة العصبية والعضلية. يتم استخدام معيار مخروطي 50 مل، مبطن مع مناديل المختبر. على غرار اختبار تعليق الأطراف الاصطناعية الجبهة، وهذا الاختبار يمكن تعلمها، وخاصة الخطيئةم لا يوجد أي نتيجة سلبية للهبوط. وهكذا، وزيادة عدم المشاركة، كما يراها الفئران الوقوع في أقرب وقت الإفراج عنهم أو الفشل في البقاء عند وضعها على حافة الأنبوب، وتجدر الإشارة.
    1. باستخدام مخروطي 50 مل، ومكان الجرو تواجه بلطف إلى أسفل داخل أنبوب مع رجليه الخلفيتين معلقة على حافة.
    2. الافراج عن الجرو. مراقبة الموقف hindlimb.
    3. تسجيل الموقف وفقا للمعايير التالية.
      ملاحظة: نقاط من 4 يشير الفصل hindlimb العادي مع ذيل رفعت. النتيجة من 3 يعني ضعف واضح وhindlimbs هي أقرب معا لكنهم نادرا ما تلامس بعضها البعض. النتيجة من 2 إلى hindlimbs هي قريبة من بعضها البعض، وغالبا ما لمس. النتيجة 1 أظهرت ضعف واضح وhindlimbs هي دائما تقريبا في وضع شبك مع الذيل التي أثيرت. على درجة من 0 إلى الشبك المستمر للhindlimbs مع الذيل خفض أو عدم التمسك أنبوب لأي فترة من الزمن.
    4. تسحب العد إذا لزم الأمر. عملية سحب هو التأهيليةified عندما يحاول الجرو لرفع الجسم باستخدام hindlimbs في حين علقت على جانب أنبوب مخروطي الشكل.
    5. باستخدام جهاز توقيت أو ساعة توقيت، وتسجيل الكمون في الانخفاض.
    6. كرر الاختبار كله في ثلاث نسخ.

الشكل (6)
الشكل 6. Hindlimb تعليق. (A). يؤدي هذا الاختبار تعليق التوتر في hindlimbs حتى التعب العضلي. وأنشئت قوة أساسية والموقف في hindlimbs. (B). التهديف. لاحظ الأرقام المذكورة أعلاه الفئران التمثيلية مما يدل على درجة الموقف الممكنة. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

  1. قوة قبضة (الشكل 7):
    ملاحظة: هذا اختبار فحص مخلب الصورةtrength جميع الكفوف الأربعة في نفس الوقت. ويستخدم 16 × 18 الألياف الزجاجية سلك الشاشة. ويبلغ متوسط عمر لمكافحة القوارض لتكون قادرة على استيعاب شاشة أفقية هو اكتئاب ما بعد الولادة (8) مع مجموعة من الحزب الوطني الديمقراطي 5-15 15 فوكس استخدام أربعة أطرافه شاشة أفقية اختبار من اكتئاب ما بعد الولادة 2 - 21 10 يتم تعديل هذا الاختبار من مستوى أفقي اختبار الشاشة؛ هنا يتم تدوير الشاشة ببطء من الأفقي إلى الوضع الرأسي، للطعن في استيعاب جميع أطرافه الأربعة 21؛ مقتبس من كورتي S 16. إذا كان الماوس يحمل على شاشة شبكة عندما مقلوب إلى 180 درجة مئوية، تسجيل الكمون في الانخفاض. أيضا، لاحظ وزن الجسم. يمكن احتساب دفعة شنقا كما [وزن (ز) س الكمون في الانخفاض (ثانية)] يعكس القوة اللازمة لمقاومة الجاذبية.
    1. باستخدام قطعة من شبكة سلكية، وضع الجرو على الشاشة. السماح الجرو على التكيف مع هذه البيئة لنحو 5 ثوان.
    2. عكس الشاشة ببطء إلى 180 درجة. تسجيل ANGL تقريبي(ه) من الشاشة عندما يسقط الجرو خارج.
    3. تكرار لما مجموعه ثلاث محاكمات ومتوسط ​​المحاكمات.

الرقم 7
ويطلب الرقم 7. قبضة القوة. الفئران للحفاظ على توتر العضلات في جميع أطرافه الأربعة كما يزيد من قوة الجاذبية. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

  1. استيعاب رد الفعل (الشكل 8)
    ملاحظة: عادة ما تظهر ردة فعل استيعاب في القوارض في الحزب الوطني الديمقراطي 7 مع مجموعة من الحزب الوطني الديمقراطي 3-15 15 يتم اختبار كل مخلب على حدة، وبالتالي فإن الاختبار يمكن أن تكشف عن قضايا الأمامية أو hindlimb، فضلا عن القضايا تحيز. كما هو منعكس، وهذا الاختبار يمكن أن تتكرر حتى يظهر رد الفعل. أنها ليست عرضة للتعلم. كما تحذيرا هاما، هذا الاختبار لا يميز استيعاب القوة، والقدرة فقط، ويجب أن يتم اختبار قبل 15 يوما من العمر عندما تبدأ الفئران الأحداث لفهم بسبب الخوف استجابة.
    1. عقد الماوس من القفا من عنقه، على غرار الطريقة التي يتم بها تنفيذ الجرو الماوس عن طريق السد. يؤدي هذا عقد الجرو لتصبح قادرة على الحركة بشكل غريزي ومريح، مما يسمح لسهولة الاختبار.
    2. السكتة الدماغية كل مخلب من الجرو مع صريحا، تقريب جانب شفرة حلاقة.
    3. اختبار كل مخلب بشكل فردي وتسجيل وجود أو عدم وجود فهم واستيعاب ودرجة 1 نقطة لكل مخلب التي والقبضات الماوس.
      ملاحظة: لتفضيل مخلب الصحيح سجل 100٪ لتفضيل مخلب الصحيح، - - -100٪ لالأيسر تفضيل مخلب، و 50٪ لكل من الكفوف واستيعاب، و0٪ لمدة لا الكفوف واستيعاب. المعادلة لتحديد هذه الأرقام هي [(مخلب الصحيح - مخلب الأيسر) / (مخلب الصحيح + مخلب اليسار + على حد سواء الكفوف)] × 100٪.

/53569/53569fig8.jpg "/>
الرقم 8. استيعاب رد الفعل. لأن الفئران حديثي الولادة ليس لديها استجابة الخوف قوية، هذا الاختبار يحدد بدقة منعكس أخمصي / الراحي. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

  1. جرف كره (الشكل 9):
    ملاحظة: الاختبارات النفور كليف متاهة ردود الفعل، فضلا عن قوة والتنسيق، ويمكن استخدامها لاختبار الجراء من الحزب الوطني الديمقراطي 1-14 22. ويستخدم مربع ما قبل المعطرة (مربع حيث لم يسمح لا تقل عن 5 الفئران للتجول بحرية) مع حافة مرتفعة مسطحة ويتم وضع الجرو مع الأرقام فقط من الأرجل الأمامية وخطم على وضعه فوق الحافة. يتم تنفيذ التهديف عن طريق حساب إجمالي الوقت المستغرق الجرو للابتعاد عن الهاوية والتحرك الكفوف والخطم بعيدا عن الحافة. إذا كان ينظر أي رد بعد 30 ثانية، يتم إنهاء الاختبار.إذا الجرو يقع قبالة الحافة، محاكمة إضافية واحدة لا يمكن أن يؤديها.
    1. باستخدام طريقة عرض الجانب، وضع الجرو على حافة منطقة الجزاء المعطرة مسبقا، والتأكد من أن الأرجل الأمامية، أرقام وخطم هي أجزاء فقط على الحافة.
    2. الافراج عن الجرو وبدء الموقت.
    3. مرة واحدة وقد تم إزالة كل من الخطم والكفوف من الحافة، وإيقاف الموقت ووقت قياسي.
    4. تكرار الاختبار ليصبح المجموع 3 محاكمات. إذا لم الجرو الابتعاد عن الهاوية في غضون 30 ثانية، لا يتم منح أي نتيجة.
      ملاحظة: إن تحديد ما إذا كان الجرو هو غير المشارك في مقابل بذوي الإعاقات متروك لتقدير الفاحص. ويمكن تعديل ارتفاع الهاوية بالنسبة لعمر في الجرو لضمان سلامة الجرو ل. وارتفاع أصغر يمكن استخدامها مع "أرضية" أسود لمحاكاة مزيد من الارتفاع.

الرقم 9
شملت رقميتم قياس الاختلالات ه 9. كليف نفور. الدهليزي باستخدام اختبار جرف النفور. هنا، وعيون الجرو وما زالت مغلقة حتى الخوف ليس هو الدافع للابتعاد عن حافة الهاوية. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

3. الدلالة الإحصائية

  1. باستخدام البرنامج الإحصائي تحليل النتائج. التعبير عن البيانات كما يعني خطأ ± المعياري للمتوسط ​​(SEM). الاختبارات المعلمية وبالتالي، بدراسة البيانات باستخدام تحليل اختبار t.
    لم تكن مصممة التجارب لاختبار الفروق بين الجنسين: ملاحظة. تعتبر الاختلافات لتكون ذات دلالة إحصائية عند P <0.05.

Representative Results

تم اختبار الفئران من P7 (24 ساعة بعد الجراحة) لP13 (1 أسبوع بعد الجراحة)، وذلك باستخدام الفئران مختلفة لكل نقطة الوقت لكي تعلم اختبار النموذج لم يكن متغير الخلط. وقد تم اختيار P8 كنتائج التمثيلية، حيث أظهرت الفئران أكبر عجز في هذه المرحلة الزمنية.

مؤجلة الانتقال من الزحف إلى المشي في CP الفئران حديثي الولادة

المرضى CP البشري لديها تشوهات المشية، بدءا من القدمين المشي لمشية scissored. لأن هذا CP يعرض نموذج مشية العجز مماثلة على البشر، وجرى تقييم التمشي. وسجل الفئران على التماثل المشي وحركة الأطراف، مخلب أثناء المشي على التوالي. في 48 ساعة بعد الجراحة (الحزب الوطني الديمقراطي 8)، كانت الفئران CP أقل حركة الأطراف متماثل و "الزحف" مشية بالمقارنة مع نظرائهم الزائف الذي يرمون به (متوسط ​​درجة التمشي: CP 1.083 ±0.6337، ن = 12 مباراة صورية 1.639 ± 0.4859، ن = 9؛ ف <0.05، الشكل 10). قبل أسبوع واحد، وانتقلت على حد سواء CP والفئران صورية إلى المشي (لا تظهر البيانات).

الرقم 10
الرقم 10. CP الفأر الجراء لا Ambulate وكذلك شمس. الفئران الشام (شريط أسود) لديها متوسط درجة من 1.639 ± 0.4859 (ن = 9)، وهذا يعني تنميتها المتنقلة يقع بين حركة الأطراف غير المتماثلة والزحف البطيء. الفئران CP (شريط رمادي) تحصل على معدل 1.083 ± 0.6337 (ن = 12)، وهذا يعني التمشي بها هو الأقل نموا، وتميل إلى أن تكون حركة الأطراف غير المتماثلة. يتم التعبير عن البيانات كما يعني ± SEM. * غير ف <0.05. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

هينوزيادة dlimb القدم زاوية في CP

بالإضافة إلى التمشي، وجرى تقييم hindlimb القدم الزاوية. العمر ثماني يوما الجراء صورية الماوس سيرا على الأقدام مع hindpaws بهم تواجه الأمام، مقارنة مع الفئران HIL، الذين مفلطحة hindpaws عند المشي في خط مستقيم (الشكل 2، متوسط زاوية: CP 77.48 ± 9.848، ن = 9، مقابل الشام 54.54 ± 8.043، ن = 11؛ ف <0.0001، الشكل 11). هذه الزيادة في زاوية يرتبط مع عدم الاستقرار بالمشي، في هذا الجراء تحتاج إلى زيادة زاوية من الكفوف الخلفية من أجل تحقيق الاستقرار مشية والمساعدة في التوازن والتنسيق.

الرقم 11
الرقم 11. CP الفأر الجراء تباعد Hindpaws بهم عند المشي. الفئران CP (أشرطة سوداء) ويبلغ متوسط الزاوية بين hindlimbs بهم من 77.48 ± 8.043 (ن = 11)، في حين أن الفئران الشام (ب الرمادية ARS) لديها زاوية متوسط ​​54.54 ± 9.848 (ن = 9). يتم التعبير عن البيانات كما يعني ± SEM. **** هو P <0.0001. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الفئران CP لا تظهر العجز عند تصحيح السطح

أدرج اختبار المقوم السطح حيث أن بعض المرضى الذين يعانون من ضعف CP السيطرة على جذعه (Heyrman وآخرون، 2013). بالإضافة إلى ذلك، هو النظام الدهليزي اللازمة للكشف عن الحاجة إلى تصحيح، وهناك عجز الدهليزي في بعض المرضى CP 23. الفئران CP لا تظهر عجوزا كبيرة عند تصحيح بالمقارنة مع الضوابط صورية (لا تظهر البيانات).

الفئران CP تنفيذ نفس كما الشام في سالب انجذاب بالجاذبية اختبار

ر "FO: المحافظة على together.within الصفحات =" 1 "> يستخدم انجذاب بالجاذبية السلبية لاختبار التنسيق الحركي في الجراء الصغار وتحدى الفئران التي يجري مكان تواجه هبوطا على سطح منحدر تأخير أو عدم شاقة توجيه يمكن أن تشير إلى العجز. في التنسيق والتوازن، أو إدخال الدهليزي. الفئران CP تظهر أي عجز عندما تحدى مع انجذاب بالجاذبية السلبية بالمقارنة مع الفئران الشام (لا تظهر البيانات). بالإضافة إلى ذلك، الفئران CP لم تظهر تفضيل لتحويل نحو جانب واحد مقابل أخرى عند إعادة توجيه، .

أمام الأطراف الاصطناعية تعليق الاختبار المناسب الفئران أقدم من 10 أيام

انخفضت المرضى CP العضلات والعجز في المهارات الحركية الدقيقة، مثل استيعاب. لاختبار الضعف في هذا النموذج من الفئران، استخدمنا اختبار تعليق الأطراف الاصطناعية الجبهة. وعلاوة على ذلك، يستخدم هذا النموذج الإصابة الدماغية من جانب واحد ومن جانب ونيس يمكن تحديد باستخدام هذا الاختبار تعليق. هذا الاختبارخير الفئران الأكبر سنا من 10 أيام 15. في 8 أيام من العمر، بعد يومين الإصابة، لم تكن هناك فروق ذات دلالة إحصائية بين CP والفئران الشام (لا تظهر البيانات).

وانخفض القوة Hindlimb في الفئران CP

المرضى CP الإنسان غالبا ما تحتاج الأقواس أو أجهزة المشي والمساعدة بسبب نقص التحكم في المحركات وقوة. من أجل المقارنة بين نموذج CP القوارض للإنسان، وجرى تقييم قوة hindlimb باستخدام اختبار تعليق hindlimb. عندما علقت من جانب أنبوب مخروطي الشكل، وأظهرت الفئران CP ضعف hindlimb، كما يتضح من انخفاض في شنقا درجة (hindlimb شنقا النتيجة: CP 3.468 ± 0.5561، ن = 13، مقابل صورية 3.891 ± 0.1329، ن = 13؛ ف < 0.05، الشكل 12). ولم يلاحظ أي اختلاف في الوقت المناسب تعليق hindlimb (لا تظهر البيانات). وهكذا، على غرار مرضى CP الإنسان والفئران CP تظهر hindlالمكتب البحري الدولي (الساق) ضعف.

الرقم 12
الرقم 12. الفئران الشام هي قليلا ولكن أقوى بكثير في Hindlimbs بهم من الفئران CP. بمتوسط درجة اعدام 3.891 ± 0.1329 (ن = 13)، والفئران الشام (شريط أسود) تظهر فصل أكثر hindlimb، وبالتالي موقفا أقوى hindlimb، عندما معلقة على حافة أنبوب من الفئران CP (شريط رمادي) مع متوسط ​​درجة اعدام 3.468 ± 0.5561 (ن = 13). يتم التعبير عن البيانات كما يعني ± SEM. * غير ف <0.05. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

وانخفض قبضة القوة الآتية CP الإصابات

استيعاب مع كل الكفوف أربعة المهم للالقوارض فيحيث تسلق الجبال ويمر عبر الأسطح غير المستوية. قبضة تتطلب قوة مستمرة كبيرة، بدلا من البراعة أو قوة الخطية، لا سيما في خانة والكفوف 24. وطلب من الفئران لاجراء وزن الجسم على شاشة سلكية مقلوب. وكانت الفئران CP لم تستطع الحفاظ على قبضتهم وانخفضت هذه الفئران في زوايا أقل بكثير (أربعة أطرافه متوسط زاوية: CP 75.627 ± 24.48، ن = 11، مقابل صورية 96.57 ± 10.836، ن = 9؛ ف <0.05، الشكل 13). هذه البيانات تظهر أن هناك عجز كبير في قوة قبضة في الفئران CP.

الرقم 13
الرقم 13. الفئران CP لها قبضة الأضعف من شمس. الفئران الشام (شريط أسود) يمكن فهم إلى زاوية مقلوب متوسط 96.57 ± 10.836 (ن = 9). يمكن أن الفئران CP (شريط رمادي) تصل فقط زاوية مقلوب من 75،627 ± 24.48 (ن = 11). يتم التعبير عن البيانات كما يعني ± SEM. * غير ع0؛ 0.05. يرجى النقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

العجز استيعاب رد الفعل واضحة في الفئران CP

جنبا إلى جنب مع العجز الحركية، وضعف الحركات الحركية الدقيقة أيضا في المرضى الذين يعانون CP 25،26. منعكس استيعاب في البشر موجودا عند الولادة ويختفي حوالي 5-6 أشهر. ومع ذلك، والتغيرات في رد الفعل استيعاب، مثل سرعة مبالغ فيها أو قوة استيعاب، وعدم الفهم، أو عودة ظهور رد الفعل استيعاب بعد 6 أشهر من العمر، وكلها تشير إلى تلف الجهاز العصبي. لمقارنة استيعاب في نموذج حزب المحافظين، وتم تحديد العجز في استيعاب انعكاسية.

في 48 ساعة بعد الإصابة، الفئران CP يبرهن على وجود انخفاض في استيعاب العاكسة (متوسط ​​الكفوف اغتنامهافي 48 ساعة: CP 2.429 ± 0.9376، ن = 14، مقابل صورية 3.214 ± 0.8018، ن = 14؛ ف <0.05، الشكل 14A). وكانت هناك زيادة طفيفة، ولكن ليس كبيرة في تفضيل مخلب المناسب في الأرجل الأمامية (لا تظهر البيانات). كان هناك تفضيل مخلب الصحيح كبير في hindpaws (CP 75.0 ± 42.74، ن = 14، مقابل صورية 17.86 ± 54.09، ن = 14؛ ف <0.005، الشكل 14B). بعد أسبوع واحد إصابة الفئران، CP تظهر العجز استيعاب (اغتنامها متوسط الكفوف في 1 الأسبوع: CP 2.75 ± 1.035، ن = 8، مقابل صورية 3.80 ± 0.6325، ن = 10؛ ف <0.05، الشكل 14C)، مع عدم وجود تفضيل مخلب ملحوظ .

الرقم 14
الرقم 14. الفئران CP ديها عجز استيعاب، في Hindpaws، المقابل للدماغ منطقة المصاب. (A) 48 ساعة بعد الإصابة (الحزب الوطني الديمقراطي 8)، والفئران CP (شريط رمادي) يمسك العصا معه، في المتوسط، الكفوف أقل من أنيما صوريةليرة سورية (شريط أسود). الفئران (B) CP (شريط رمادي) عرض تفضيل لاستيعاب مع hindpaw الأيمن (المقابل للإصابة) بدلا من استخدام hindpaw الأيسر (المماثل للإصابة). الفئران الشام (شريط أسود) لا يتم عرض هذه مخلب الصحيح تفضيل. يتم احتساب تفضيل مخلب الصحيح كما ([مخلب الحق - غادر مخلب] / [مخلب الصحيح + مخلب الأيسر + على حد سواء الكفوف] * 100) (C) أسبوع واحد إصابة التالية، الفئران CP (شريط الرمادي) لا تزال تظهر استيعاب العجز مقارنة. شمس (شريط أسود). يتم التعبير عن البيانات كما يعني ± SEM. * غير ف <0.05، ** غير ع <0.005. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الفئران CP تتحول بعيدا عن حافة خلال نفور كليف

يعتمد اختبار جرف النفور على الخوف المتأصل من الفئران لتحويل العواذ من منحدر حاد ويتجه نحو بر الأمان. على الرغم من أن بعض المرضى CP صعوبات الدهليزي، فضلا عن ضعف التحكم في المحركات، فإن الفئران CP لا تظهر أي عجز في هذا الاختبار.

Discussion

باستخدام نماذج حيوانية لدراسة الأمراض التي تصيب الإنسان هي ذات الصلة فقط إذا كان هناك تداخل بين الاستجابة الخلوية والجزيئية بين الإنسان والقوارض وأن الاختبارات السلوكية يؤديها لها صلة مباشرة الأعراض الإنسان. واحدة من القضايا الرئيسية مع دراسات أمراض الأطفال هو أن العديد من الباحثين استخدام القوارض الكبار لإنشاء نموذج، وكذلك تقييم السلوكي القوارض البالغين، دون النظر إلى الاختلافات التنموية التي قد تكون مهمة لعملية المرض. وبسبب هذه القضايا، فمن المهم أن البحوث حول استخدام أمراض الأطفال ليس فقط المعدلة التنموية نقاط الوقت المناسب (على سبيل المثال، وتطوير الجهاز العصبي المركزي الإنسان في 28-32 أسابيع ما يعادل يوم بعد الولادة 2-7 يوم القوارض) 7، ولكن أيضا الاختبارات السلوكية التي ستدرس المحرك المناسب، والسلوكيات التنموية الحسية أو انعكاسية. وهكذا، كما تم تطوير كل نموذج مرض المواليد الجدد، فإنه يجب أن يتم اختبار صارم لضمان أن الخلويةوالاستجابات السلوكية وتوفير البيانات للترجمة أنسب بين القوارض والإنسان.

الشلل الدماغي هو اضطراب حركي، والتي تستمر حتى سن البلوغ. مشكلة واحدة مع العديد من النماذج الشلل الدماغي المتاحة اليوم هي عدم وجود تكرار اختبار محرك موحد، التي يمكن أن ترتبط مع العجز ينظر في طب الأطفال المرضى. في هذا النموذج الجديد، الذي يجمع بين نقص الأكسجين، ونقص التروية والتهاب في الماوس حديثي الولادة، تم تقييم السلوك الحركي باستخدام مجموعة من الاختبارات المحددة للفئران حديثي الولادة. من أجل تقليل الذاتية وزيادة الإبلاغ الكمي، تم تعديل العديد من الاختبارات لتشمل محددة جدا، ولكن من السهل تقييم التدابير التي يمكن أن تكون موحدة. وبالإضافة إلى ذلك، التقييمات الأمامية وhindlimb لا يمكن أن يؤديها على حدة، ويمكن تحديد الفروق يسار / يمين. هذا من الاختبارات هي محددة لالفئران حديثي الولادة تصل إلى أسبوعين من العمر.

يوضح هذا النموذج CPصعوبة في المشي (التمشي، hindlimb زاوية القدم)، وكذلك الأطراف محددة ضعف (تعليق أربعة أطرافه، تعليق hindlimb)، والعجز في ردود الفعل التنموية (استيعاب رد الفعل). على الرغم من أن في هذه الدراسة تم فحص timepoint واحد فقط، يمكن تتبع هذا العجز مع مرور الوقت.

هناك بطاريات أخرى من الاختبارات التي يمكن استخدامها على حديثي الولادة، مثل بطارية فوكس من الاختبارات أو تقييم Heyser من مراحل تطور الطفل (15). ومع ذلك، هذه الاختبارات مقارنة الوليد إلى الكبار، الذين قد لا تكون هي نفسها لأن الوليد لا تزال تتطور الاستجابات. بطارية فوكس والاختبارات Assement Heyser وتعتمد على المعلومات الموضوعية الرصد مع تقييم شيئين (نعم أو لا)، بدلا من بيانات موضوعية (زاوية، الموقف القائم على القوة، وما إلى ذلك). بسبب subjectiveness هذه الاختبارات، وقد تكيفت العديد من العلماء، وأضاف، أو إزالة المعايير، مما يجعل نتائجها لا تضاهى للآخرين والحدجي فائدة البيانات من حيث إقامة العجز الأساسي لمرض أو اضطراب معين. عن طريق إنشاء مجموعة واحدة من التجارب الحركية الموحدة التي هي النوعية والتي صممت خصيصا لاختبار حديثي الولادة، والنتائج من المجموعات البحثية الفردية ويمكن الإبلاغ عن ومقارنة بدقة وبشكل موثوق.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
C57BL/6 mice Charles River Laboratories STRAIN CODE: 027  C57BL/6NCrl is the exact strain we use
Anesthesia Dish, PYREX™ Crystallizing Dish Corning Life Sciences Glass  3140125 Capacity: 25.03 oz. (740ml); Dia. x H: 4.92 x 2.55 in. (125 x 65mm). However, any small round glass container will work. A 2 cup capacity pyrex food storage bowl with flat bottom will also work and is much cheaper (Pyrex model number: 6017399).
Covered lead ring Fisher Scientific S90139C Lead ring for stablizing flasks in a water bath. It is used inside the anesthesia dish.
Scalpel Blade #11 World Precision Instrucments, Inc. 500240
Small Vessel Cauterizer Fine Science Tools 18000-00
Micro Hook Fine Science Tools 10064-14
Vetbond Suture Glue 3M 1469SB n-butyl cyanoacrylate adhesive
Lipopolysaccharide Sigma Life Science L4391 Lipopolysaccaride from E.coli 0111:B4, gamma irradiated
12 x 12 inch opaque box Acrylic Display Manufacturing: A division of Piasa Plastics C4022 Colored Acrylic 5-Sided Cube, 3/16" Colored Acrylic, 12"W x 12"D x 12"H;  http://www.acrylicdisplaymfg.com/html/cubes_19.html
Camera/camcorder JVC GC-PX100BUS Any camcorder that works well in low light and can be imported and edited. We use the JVC GC-PX100 Full HD Everio Camcorder.
Covidien Tendersorb™ Underpads Kendall Healthcare Products Co 7174
WypAll L40 Kimberly-Clark Professional 5600 Any surface with moderate grip will do
Surface at 45 degree incline We use a cardboard box.
Thin wire from a pipe cleaner Creatology M10314420 Any pipe cleaner from any craft store will work.
50mL conical tube Falcon 352070
Fiberglass Screen Wire New York Wire  www.lowes.com 14436 Any supplier can be used as long as their screen is 16 x 16 or 18 x 16
Razor blade Fisherbrand 12-640 A wooden stick applicator or wooden part of a cotton-tipped swab will also work.
OPTIX 24-in x 4-ft x 0.22-in Clear Acrylic Sheet to make Clear Acrylic Walkway PLASKOLITE INC 1AG2196A Clear acrylic (1/8" thick) with sides and a top to limit exploration. We bought a sheet of acrylic from a local hardware store and had them cut it to size. (2) 2" x 2"; (3) 2" x 18"; (1) 2" x 15.5"; (1) 2" x 3". Using clear tape, tape all sides together, with the 15.5" piece on top. Tape the 3" piece to the end of the 15.5" piece to create a flap/entryway for the mice. Alternatively, part or all of the walkway can be glued together, and only taping on the top pieces. This design will allow for the walkway to be opened for easy cleaning.
Protractor Westscott ACM14371

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Nakamura, M., Bregman, B. S. Differences in neurotrophic factor gene expression profiles between neonate and adult rat spinal cord after injury. Exp Neurol. 169 (2), 407-415 (2001).
  2. Widenfalk, J., Lundströmer, K., Jubran, M., Brene, S., Olson, L. Neurotrophic factors and receptors in the immature and adult spinal cord after mechanical injury or kainic acid. J Neurosci. 21 (10), 3457-3475 (2001).
  3. Fernández-Lòpez, D., Faustino, J., et al. Blood-brain barrier permeability is increased after acute adult stroke but not neonatal stroke in the rat. J Neurosci. 32 (28), 9588-9600 (2012).
  4. Cusick, C. G. Extensive cortical reorganization following sciatic nerve injury in adult rats versus restricted reorganization after neonatal injury: implications for spatial and temporal limits on somatosensory plasticity. Prog Brain Res. 108, 379-390 (1996).
  5. Barrett, C. P., Donati, E. J., Guth, L. Differences between adult and neonatal rats in their astroglial response to spinal injury. Exp Neurol. 84 (2), 374-385 (1984).
  6. Villapol, S., Gelot, A., Renolleau, S., Charriaut-Marlangue, C. Astrocyte Responses after Neonatal Ischemia: The Yin and the Yang. Neuroscientist. 14 (4), 339-344 (2008).
  7. Craig, A., Ling Luo, N., et al. Quantitative analysis of perinatal rodent oligodendrocyte lineage progression and its correlation with human. Exp Neurol. 181 (2), 231-240 (2003).
  8. Shen, Y., Liu, X. B., Pleasure, D. E., Deng, W. Axon-glia synapses are highly vulnerable to white matter injury in the developing brain. J Neurosci Res. 90 (1), 105-121 (2012).
  9. Shen, Y., Plane, J. M., Deng, W. Mouse models of periventricular leukomalacia. J Vis Exp. (39), (2010).
  10. Fox, W. M. Reflex-ontogeny and behavioural development of the mouse. Anim Behav. 13 (2), 234-241 (1965).
  11. Tremml, P., Lipp, H. P., Müller, U., Ricceri, L., Wolfer, D. P. Neurobehavioral development, adult openfield exploration and swimming navigation learning in mice with a modified beta-amyloid precursor protein gene. Behav Brain Res. 95 (1), 65-76 (1998).
  12. Wahlsten, D. A developmental time scale for postnatal changes in brain and behavior of B6D2F2 mice. Brain Res. 72 (2), 251-264 (1974).
  13. Balasubramaniam, J., Xue, M., Del Bigio, Long-term motor deficit following periventricular hemorrhage in neonatal rats: A potential model for human cerebral palsy. J Cerebr Blood F Met. , (2005).
  14. Williams, E., Scott, J. P. The Development of Social Behavior Patterns in the Mouse, in Relation to Natural Periods. Behaviour. 6 (1), 35-65 (1954).
  15. Heyser, C. J. Assessment of developmental milestones in rodents. Current protocols in neuroscience. Crawley, J. Q., et al. Chapter 8, (2004).
  16. Corti, S. Grip strength TREAT-NMD: Experimental protocols for SMA animal models. , http://www.treat-nmd.eu/research/preclinical/sma-sops/ (2014).
  17. Corti, S., Nizzardo, M., et al. Neural stem cell transplantation can ameliorate the phenotype of a mouse model of spinal muscular atrophy. J Clin Invest. 118 (10), 3316-3330 (2008).
  18. Grondard, C., Biondi, O., et al. Regular exercise prolongs survival in a type 2 spinal muscular atrophy model mouse. J Neurosci. 25 (33), 7615-7622 (2005).
  19. El-Khodor, B. F. Behavioral Phenotyping for Neonates. Experimental Protocols for SMA animal models. , (2011).
  20. El-Khodor, B. F., Edgar, N., et al. Identification of a battery of tests for drug candidate evaluation in the SMNDelta7 neonate model of spinal muscular atrophy. Exp Neurol. 212 (1), http://www.treat-nmd.eu/research/preclinical/sma-sops/ 29-43 (2008).
  21. Venerosi, A., Ricceri, L., Scattoni, M. L., Calamandrei, G. Prenatal chlorpyrifos exposure alters motor behavior and ultrasonic vocalization in CD-1 mouse pups. Environ Health. 8 (12), (2009).
  22. Hill, J. M., Lim, M. A., Stone, M. M. Developmental milestones in the newborn mouse. Neuromethods 39: Neuropeptide Techniques. , Humana Press. New Jersey. (2008).
  23. Visual dependence influences postural responses to continuous visual perturbation in adults with spastic cerebral palsy. Yu, Y., Keshner, A. E., Tucker, C. A., Thompson, E. D., Lauer, R. T. Combined Sections Meeting of American Physical Therapy Association, Anaheim, CA, USA, , (2016).
  24. Carlson, G. The use of four limb hanging tests to monitor muscle strength and condition over time. Experimental Protocols for SMA animal models. , http://www.treat-nmd.eu/downloads/file/sops/dmd/MDX/DMD_M.2.1.005.pdf (2011).
  25. Gordon, A. M., Duff, S. V. Relation between clinical measures and fine manipulative control in children with hemiplegic cerebral palsy. Dev Med Child Neurol. 41 (9), 586-591 (1999).
  26. Futagi, Y., Toribe, Y., Suzuki, Y. The grasp reflex and moro reflex in infants: hierarchy of primitive reflex responses. Int J Pediat. , (2012).

Tags

الطب، العدد 117، السلوك، والماوس حديثي الولادة، العجز الحركي، الشلل الدماغي، نقص الأكسجين، ونقص التروية، والتهاب، اختبارات السيارات حديثي الولادة
مجموعة من الاختبارات للسيارات في ماوس نموذج حديثي الولادة من الشلل الدماغي
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Feather-Schussler, D. N., Ferguson,… More

Feather-Schussler, D. N., Ferguson, T. S. A Battery of Motor Tests in a Neonatal Mouse Model of Cerebral Palsy. J. Vis. Exp. (117), e53569, doi:10.3791/53569 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter