Summary
يقدم هذا المقال مقاربة بسيطة لتوفير سلالات ثابتة التدرج غير مستمرة على المائية خلية لادن متحدة مركز لتنظيم المحاذاة لخلية لهندسة الأنسجة.
Abstract
لمحاذاة الخلوية التوجيه الاصطناعية موضوع ساخن في مجال هندسة الأنسجة. وحقق معظم البحوث السابقة واحد محاذاة الخلوية المستحثة بالضغط على المائية المحملة بالخلية باستخدام العمليات التجريبية المعقدة والتحكم في النظم الجماعية، التي ترتبط عادة بقضايا التلوث. وهكذا، في هذه المقالة، نقترح اتباع نهج بسيط لبناء سلالة ثابتة متدرجة باستخدام رقاقة فلويديك مع غطاء PDMS بلاستيك وركيزة زجاج شفاف الأشعة فوق البنفسجية لتحفيز السلوك الخلوية في هيدروجيل 3D. يمكن أن تولد prepolymer خلية صور باتيرنابل الزائد في قاعة فلويديك غشاء PDMS منحنى محدب على الغلاف. بعد كروسلينكينج الأشعة فوق البنفسجية، من خلال ميكروباتيرن دائرية متحدة مركز تحت المنحنى PDMS الغشاء، والغسيل والمخزن المؤقت المكروية خلية التحقيق السلوكيات تحت مجموعة متنوعة من السلالات التدرج الذاتية الراسخة في رقاقة فلويديك واحد، دون أدوات خارجية. وقد عرضت الخلايا NIH3T3 بعد مراقبة التغيير في اتجاه محاذاة الخلوية تحت إشراف الهندسة، بالتعاون مع سلالة التحفيز، والذي يتراوح بين 15-65% في الهلاميات المائية. بعد حضانة 3 أيام، سيطر الهندسة المائية محاذاة الخلية تحت ضغط الضغط المنخفض، حيث محاذاة الخلايا على طول اتجاه استطالة المائية تحت ضغط ارتفاع الضغط. بين هذه الخلايا أظهرت المحاذاة عشوائية بسبب تبديد توجيه جذرية استطالة المائية وتوجيهات الهندسة المائية منقوشة.
Introduction
بوصفه مادة كتلة أن يقلد المكروية أصلي، يمكن إعادة بناء المائية التي تتضمن المصفوفة خارج الخلية (ECM) المحاكاة البيولوجية الأنسجة السقالات لدعم نمو الخلايا. تمتلك وظائف الأنسجة، محاذاة الخلية المنظمة شرط أساسي. مختلف 2D (أي الخلايا المزروعة على سطح) و 3D (أي الخلايا مغلفة في hydrogel) قد تحققت بمحاذاة الخلية باستزراع أو تغليف الخلايا أو على ركائز مرنة مع الصغرى-أو أنماط نانو1. المحاذاة لخلية ثلاثية الأبعاد في المصغرة أكثر جاذبية، كما المكروية أقرب إلى الأنسجة الأصلية بناء2،،من34. يتمثل أحد النهج المشترك لمحاذاة الخلية 3D جديلة الهندسية المائية الشكل2،3. بسبب المساحة المقيدة لتكاثر الخلايا في اتجاه المحور قصيرة، والخلايا تهدف إلى محاذاة على طول اتجاه المحور الطويل في المائية الصغيرة المنقوشة. وثمة نهج آخر تطبيق تمتد الشد على الهلاميات المائية لتحقيق المحاذاة لخلية موازية ل اتجاه تمتد4،5.
التحفيز الفيزيائية في الهلاميات المائية إدارة المحتوى في المؤسسة، مثل سلالة ضاغطة أو حقل كهربائي، يمكن تنظيم الوظائف الخلية للتكامل الأنسجة السليمة، والانتشار، والتمايز1،،من23. وقد أجريت أبحاث كثيرة للتحقيق في سلوك الخلوية بتطبيق شرط سلالة واحد في وقت باستخدام عدة التحكم الميكانيكية وحدات4،6،7،،من89. على سبيل المثال، استخدام المحركات الميكانيكية خطوة تقلص أو قد امتدت على هيدروجيل 3D الكولاجين مغلفة الخلية نهج مشترك7،10. بيد أن هذه المعدات التحكم يتطلب مساحة إضافية وتواجه مسألة التلوث في حاضنة7،9،،من1112. وبالإضافة إلى ذلك، لا يمكن إعطاء الصك كبيرة في بيئة مراقبة دقيقة لتوفير إمكانية تكرار نتائج عالية13.
وبالنظر إلى أن الخلية لادن الهلاميات المائية يعملون عادة في الصغر للتطبيقات الطبية الحيوية، أنها مفيدة للجمع بين تقنيات ممس لتوليد مجموعة من التحفيز سلالة/تمتد التحقيق في نفس الوقت سلوك الخلية في 3D المحاكاة البيولوجية بنيات في المختبر2،14،15،16،،من1718. على سبيل المثال، باستخدام ضغط الغاز لتشوه الغشاء PDMS في رقائق موائع جزيئية يمكن أن يؤدي إلى سلالات مختلفة، يقود تمايز خلية مختلفة الأنساب9،16. ومع ذلك، هناك العديد من التحديات التقنية، مثل عمليات تصنيع الرقائق معقدة في غرفة نظيفة وإدماج برامج التحكم للمحركات والمضخات والصمامات والغازات المضغوطة.
في هذا العمل، ونظهر نهج بسيط للحصول على رقاقة موائع جزيئية ثابتة-سلالة تدرج مكتفية ذاتيا باستخدام نمط المائية دائرية متحدة مركز وغشاء PDMS مرنة. خلافا لمعظم النهج القائمة، منصة لدينا جهاز مصغرة محمولة ويمكن التخلص منها التي يمكن أن تكون ملفقة خارج غرفة صفراء والتي تمتلك ذاتيا توليد سلالات التدرج في متحدة المركز مغلفة الخلية الهلاميات المائية، دون المعدات الميكانيكية الخارجية أثناء الاحتضان. 3T3 تنتجها الخلايا الليفية خلية السلوكيات تتأثر بمزيج من الشكل المائية وأظهرت العديد من الإشارات التوجيه تمتد الشد أثناء مراقبة محاذاة الخلية داخل بيئات ECM mimetic ثلاثي الأبعاد في رقاقة سلالة التدرج لمدة 3 أيام.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
لمقارنة الاختلافات الميكانيكية بين كل المائية الدائرية في رقاقة التحفيز سلالة التدرج المكتملة، قمنا بقياس عرض خط كل المائية الدائرية في اثنين من رقائق نفسه، مع حقن كميات من 0 ميليلتر (الشكل 4 أ) و 40 ميكروليتر (الشكل 4)، على التوالي. وحسبت الونجاتيونس النسبة المئوية في كل دائرة بقسمة الونجاتيونس في رقاقة ميليلتر حقن 40 عرض خط الهلاميات المائية المقابلة في رقاقة 0 حقن ميليلتر (الشكل 4 ج). المائية مادة، حتى سلالة المتعاقدة العمودي سيكون معادلاً لسلالة الاستطالة الجانبية. الونجيشنز المئوية في الشريحة مع حجم حقن 40-ميليلتر لذلك، تظهر استطالة 15-65%، التي يمكن تحويلها إلى سلالة ضاغطة (انظر 1 ملف تكميلي).
تم تلطيخ الفلورسنت نواة الخلية وواو-أكتين DAPI وفالويدين، على التوالي، لتحليل المحاذاة الخلوية. تلطيخ DAPI وقدمت بيانات عن التوجه النووي، وتلطيخ فالويدين تم تطبيقها لتقييم انتشار الخلايا. الشكل 5a ج- يظهر محاذاة الخلية في رقاقة سلالة التدرج. في السطر الأول، محاذاة الخلايا 3T3 على طول اتجاه شعاعي. في هيدروجيل 7، محاذاة الخلايا عشوائياً، ومحاذاة الخلايا على طول اتجاه التعميم في السطر 12. وفقا الفلورسنت تلوين الصور، اكتشفت تحولاً 90 ° من زاوية محاذاة الخلية من الخلايا 3T3 في السطر 1 (استطالة المائية كحد أقصى في اتجاه شعاعي) إلى زاوية محاذاة الخلايا بمحاذاة المحور الطويل في السطر 12 (استطالة المائية أدنى في اتجاه شعاعي).
في البحوث السابقة2،9، والخلايا في 200 ميكرومتر نقوش الخط الهلاميات المائية تهدف إلى محاذاة على طول اتجاه المحور الطويل المائية. ومع ذلك، لاحظنا في هذه الدراسة، أن تمتد ممدود على الهلاميات المائية 200 ميكرومتر في اتجاه المحور قصيرة تقدم عامل آخر يؤثر وتهيمن على محاذاة الخلوية بالسيطرة على النسبة المئوية للضغط على المائية. لسلالة 65% في السطر الأول، أثبتت المحاذاة الراديكالية أن الاستطالة امتداد المائية تسيطر على محاذاة الخلية. لسلالة 15% على خط 12، ثبت المحاذاة التعميم أن تهيمن على أثر فترة طويلة محور محاذاة الخلية. لسلالة 40% على المائية 7، محاذاة الخلايا عشوائياً نظراً لتحييد أثر التوجيه وسلالة الهندسة.
الشكل 1 . البولي ميثيل ميثا اكريلات الأم العفن لورقة PDMS وتصنيع المكونات. (أ) فصل مكونات العفن البولي ميثيل ميثا اكريلات، بما في ذلك أسفل لوحة وحدود الإطار، وتدفق القناة. ويتكون بعد الجمعية مع الشريط على الوجهين، (ب) العفن البولي ميثيل ميثا اكريلات الأم لكشف التدفق. (ج) يتم تجميعها العفن "البولي ميثيل ميثا اكريلات آخر" لسد العجز PDMS. يمثل الرقم الأحمر العمق. (الوحدة: مم) الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 2 . تصميم النبائط البلاستيك ميكروباتيرن المائية المحملة بالخلية. هناك فتحتين مع الأشكال المثلث (2 مم في السطر السفلي و 6.5 ملم في الطول) الاتصال بقنوات تدفق لتوريد مستنبت خلايا جديدة. (أ) النبائط البلاستيك هو المسمى بالبعد. الفترة دوائر متحدة المركز هو 400 نانومتر، ودورة العمل هو 50%. القطر من مركز الدائرة هو 2 مم. (ب) تخطيط النبائط، دون تسميات للطباعة الليزر على فيلم شفاف بلاستيك. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3. عمليات تصنيع التدرج سلالة خلية لادن المائية على طول اتجاه شعاعي في رقاقة فلويديك PDMS. (أ) النبائط بلاستيك الانحياز وعالقة تحت الرقاقة مع قناة فلويديك المغلفة تمسبما. إدراج مدخل رقاقة حقنه الجزئي مع الحل خلية prepolymer والمستخدمة لضخ حوالي 50 ميليلتر لملء القناة تدفق. (ب) يتم إغلاق منفذ قناة تدفق مع PDMS التوصيل ويتم حقن ميليلتر 40 إضافية من حل خلية بريبوليمير. أسفل الزجاج الأشعة فوق البنفسجية منقوشة على 30 s اختﻻق المائية دائرية متحدة المركز في رقاقة التدفق. (ج) صدر ضغط السائل في قناة تدفق قبل إلغاء توصيل المنفذ وجرفت هو خليط الأمم المتحدة-كروسلينكينج مع دببس. (د) تنطبق شريحة مع سلالة التدرج ثابتة متحدة المركز الهلاميات المائية المحملة بالخلية التي على استعداد لاستزراع خلية. أثناء عملية crosslinking الأشعة فوق البنفسجية، يتم تشكيل (ه) ارتفاع تدرج غير متواصلة المائية على طول نصف قطرها. (و) بعد إلغاء توصيل المنفذ، يصبح مسطح الغشاء PDMS ويطبق الإجهاد التدرج في الهلاميات المائية تغلف الخلية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 4. التدرج استطالة المائية النقية. استطالة خط العرض والنسبة المئوية للمائية الصرفة دون تغليف خلية في التدرج سلالة رقاقة في اليوم 3 مع (أ) 0-ميليلتر (مجموعة المراقبة) ووحدات حقن 40-ميليلتر (ب) . (ج) النسبة المئوية استطالة يحسب بقسمة قيمة خط عرض الفرق بين ميليلتر 40 و 0 ميليلتر عرض الخط من 40 ميكروليتر. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 5 . الفلورسنت الصور أكتين-نواة وصمة عار "تغليف الخلايا" 3T3 في "رقائق التدرج" في يوم 3. تكشف عن اتجاه محاذاة الخلية في خط (أ-ج) 1 والخط (د-و) 7 (ز-ط) السطر 12 شعاعي المحاذاة عشوائية، والمحاذاة التعميم، على التوالي. وتظهر الألوان الخضراء والزرقاء البقع أكتين ونواة، على التوالي. ويمثل خط أبيض منقط الحدود المائية. شريط الحجم: 200 ميكرومتر. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
التكميلية الرقم 1. حساب انحناء على شكل قبة PDMS. H(x): منحنى PDMS محدبة؛ H0: أقصى ارتفاع الفرق بين قبة PDMS قبل وبعد التشوه؛ r: نصف قطر القبة؛ الخامس: حجم الحقن الزائد من منطقة الأزرق، الذي يسبب تشوه PDMS كقبة. انظر التكميلية الملف 1 لمزيد من التفاصيل. اضغط هنا لتحميل هذا الرقم-
الملف التكميلي 1. اضغط هنا لتحميل هذا الملف.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
في هذه الورقة، ونحن تقريرا عن نهج بسيط لمقارنة السلوك محاذاة الخلية بعد التوجيه الشكل المائية وتمتد الشد. غشاء مرن PDMS يخلق انحناء على شكل قبة لتوليد مستويات مختلفة من الهلاميات المائية دائرية متحدة المركز. وبعد الإفراج عن الضغط، الغشاء PDMS يطبق تلقائياً قوة الهلاميات المائية الصغيرة المنقوشة لتشكيل سلالة/استطالة التدرج، مع حد أقصى في المركز والحد أدنى على الحدود الخارجية. كما تم تصميم تكوين سلالة التدرج بغشاء مرن PDMS والتعامل مع رقاقة فلويديك، هناك العديد من المعلمات الهامة التي ينبغي أن يحضر إلى: غشاء (ط) مراقبة دقيقة لسمك PDMS أمر حاسم لضبط قيمة إجهاد التدرج. إذا كان الغشاء سميك جداً، لن قادرة على توليد منحنى محدب سليم في غشاء PDMS ل crosslinking ارتفاع الخلية لادن الهلاميات المائية تدرج حتى حقن أقصى حجم الخلية بريبوليمير. على النقيض من ذلك، لا يمكن تطبيق غشاء PDMS رقيقة جداً قوة كافية الهلاميات المائية. الرجاء التأكد من أن وزن PDMS أونكوريد في القالب الغطاء PDMS حوالي 1.6-2.0 غرام لكل شريحة. (ثانيا) منع التلوث مهم جداً أثناء مناولة المائية المحملة بخلية في رقاقة فلويديك التشعب. قبل الخلية استزراع في الحاضنة ودقة الغسيل مع برنامج تلفزيوني معقمة في قناة فلويديك واستخدام 75% يمكن أن تساعد الإيثانول مسح سطح الرقاقة لتجنب مسألة التلوث. (ثالثا) تركيز فوتوينيتياتور وجرعة التعرض للأشعة فوق البنفسجية يجب أن تكون حذراً الخاضعة للرقابة وفي النطاق ~0.1%-2% (من المستحسن 0.5%). أكثر من كروسلينكينج المائية والجرعات إشعاع الأشعة فوق البنفسجية سيؤدي إلى بقاء الخلية منخفضة. (الرابع لا ينبغي أن تكون) عرض الخط من المائية منقوشة كبيرة جداً. خلاف ذلك، لن قادراً على دعم انتشار الخلايا بمعدل استبدال العناصر المغذية في الهلاميات المائية سميكة. عادة، ينصح بأقل من 300 ميكرون. التباعد بين اثنين من الدوائر المائية يمكن أن تختلف، ويوصي بدوره نسبة 50%. (ت) أثناء الغسيل أو إعادة الملء قناة تدفق مع الحل، وينبغي تجنب تشكيل فقاعات. بيبيتينج بلطف الحل في الرقاقة يمكن أن تساعد على إزالة الفقاعات.
يمكن أن تتم ترقية كذلك إلى تطبيق سلالات التدرج دينامية مفهوم التدرج الضغوط المتولدة عن انحناء مشوه PDMS ويمكن أن تكون متكاملة مع تحفيز الكيمياء الحيوية، التي يمكن أن تستفيد العديد من الدراسات على تجديد أنسجة وظيفية. يمكن الاستعاضة عن وحدة حقن فلويديك بسيطة مع المكونات PDMS أي نظام فلويديك متقدم للتحكم التجريبية الموسعة. يمكن أيضا استبدال العفن البولي ميثيل ميثا اكريلات العفن ميكروفابريكاتيد سو-8 أو العفن محفوراً جل سليكون.
يمكن أن تولد هذه الرقاقة سلالة التدرج مع المائية المحملة بخلية دائرية ثابتة قوة ضاغطة على هيدروجيل 3D دون الآلات الميكانيكية أو الكهربائية الخارجية. ولذلك، فإنه يوفر منبرا فحص سريع للتحقيق في سلوك الخلية في سلسلة من الشروط سلالة، دون المخاطرة بقضايا التلوث الناجم عن تشغيل الأجهزة الخارجية. التحفيز سلالة تسيطر على الوقت غير قابلة للتحقيق لأن الغشاء PDMS يولد ضغوطا حتى تدهور المائية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
Acknowledgments
بتأييد هذا المشروع قبل الخريجين الطالب دراسة الخارج البرنامج (NSC-101-2917-I-007-010)؛ برنامج الهندسة الطبية الحيوية (NSC-101-2221-E-007-032-MY3)؛ والبرنامج الوطني تقنية النانو (NSC-101-2120-M-007-001-)، المجلس الوطني للعلوم في R.O.C.، تايوان. الكتاب يود أن يشكر الأستاذ على خاديمهوسيني، كامسي [غلدن]-اونال، بول أرغيا، ورونجليه لياو في مدرسة هارفارد الطبية لتقاسم التكنولوجيا تغليف المائية والخلية.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1.5 mL black microcentrifuge tube | Argos Technologies | 03-391-161 | This one can be replaced with a neutral color of 1.5 mL tube covered with aluminun foil |
| 10x DPBS | Sigma-Aldrich | 56064C | |
| Alexa Fluor 488 phalloidin | Invitrogen | A12379 | |
| BSA | Sigma | A1595 | |
| Calcein | Molecular Probe | C1430 | For labeling viable cells |
| CCD | PCO. Imaging | Pixelfly qe | |
| Cell membrane permeating solution | Sigma-Aldrich | X100 | 0.5% Triton X-100 for permeating cell membrane |
| DAPI | Sigma-Aldrich | D8417 | Cell nucleus staining |
| Dialysis membrane | Sigma-Aldrich | D9527 | Molecular weight cut-off = 14,000 |
| DMEM | Gibco | 11995-065 | |
| Double-side tape | 3M | 8003 | |
| FBS | Hyclone | SH30071.03 | |
| Gelatin | Sigma-Aldrich | G2500 | gel strength 300, type A, from porcine skin |
| High frequency electronic corona generator | Electro-technic products | MODEL BD-20 | |
| Methacrylic Anhydride | Sigma-Aldrich | 276685 | |
| Micro syringe | Hamilton | 80501 | 50 μL |
| Microscope | Olympus | IX71 | Include two filter sets: LF405/LP-B-000 and LF488/LP-C-000 from Semrock |
| Oxygen plasma machine | Harrick plasma | PDC-001 | |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148 | For fixing cell |
| PDMS | DOW CORNING | Sylgard 184 | Mixture for PDMS chip cast-molding fabrication |
| Pen-Strep | Gibco | 10378-016 | penicillin/streptomycin |
| Photoinitiator | CIBA | Irgacure 2959 | |
| Propidium iodide | Sigma-Aldrich | P4170 | For labeling dead cells |
| Sterile Filtration cup | Millipore | SCGPT05RE | |
| TMSPMA | Sigma-Aldrich | 440159 | For hydrogel immobilization |
| Ultrasonicator | Delta | D150H | 150W, 43kHz |
| UV light | DAIHAN | WUV-L10 | |
| Freeze Dryer | FIRSTEK | 150311025 | |
| NIH3T3(fibroblast) | Food Industry Research and Development Institute(FIRDI) | 08C0011 | |
| MOXI Z Mini Automated Cell Counter | ORFLO | MXZ001 |
References
- Simmons, C. S., Petzold, B. C., Pruitt, B. L. Microsystems for biomimetic stimulation of cardiac cells. Lab Chip. 12 (18), 3235-3248 (2012).
- Aubin, H., et al. Directed 3D cell alignment and elongation in microengineered hydrogels. Biomaterials. 31 (27), 6941-6951 (2010).
- Guan, J., et al. The stimulation of the cardiac differentiation of mesenchymal stem cells in tissue constructs that mimic myocardium structure and biomechanics. Biomaterials. 32 (24), 5568-5580 (2011).
- Wan, C. R., Chung, S., Kamm, R. D. Differentiation of embryonic stem cells into cardiomyocytes in a compliant microfluidic system. Ann Biomed Eng. 39 (6), 1840-1847 (2011).
- Huh, D., et al. Reconstituting organ-level lung functions on a chip. Science. 328 (5986), 1662-1668 (2010).
- Li, X., Chu, J. S., Yang, L., Li, S. Anisotropic effects of mechanical strain on neural crest stem cells. Ann. Biomed. Eng. 40 (3), 598-605 (2012).
- Butcher, J. T., Barrett, B. C., Nerem, R. M. Equibiaxial strain stimulates fibroblastic phenotype shift in smooth muscle cells in an engineered tissue model of the aortic wall. Biomaterials. 27 (30), 5252-5258 (2006).
- Ramon-Azcon, J., et al. Gelatin methacrylate as a promising hydrogel for 3D microscale organization and proliferation of dielectrophoretically patterned cells. Lab Chip. 12 (16), 2959-2969 (2012).
- Park, S. H., Sim, W. Y., Min, B. H., Yang, S. S., Khademhosseini, A., Kaplan, D. L. Chip-Based Comparison of the Osteogenesis of Human Bone Marrow- and Adipose Tissue-Derived Mesenchymal Stem Cells under Mechanical Stimulation. PLoS One. 7 (9), e46689 (2012).
- Gould, R. A., et al. Cyclic Strain Anisotropy Regulates Valvular Interstitial Cell Phenotype and Tissue Remodeling in 3D Culture. Acta Biomater. 8 (5), 1710-1719 (2012).
- Kurpinski, K., Chu, J., Hashi, C., Li, S. Proc Anisotropic mechanosensing by mesenchymal stemcells. Natl Acad Sci USA. 103 (44), 16095-16100 (2006).
- Sim, W. Y., Park, S. W., Park, S. H., Min, B. H., Park, S. R., Yang, S. S. A pneumatic micro cell chip for the differentiation of human mesenchymal stem cells under mechanical stimulation. Lab Chip. 7 (12), 1775-1782 (2007).
- Vader, D., Kabla, A., Weitz, D., Mahadevan, L. Strain-Induced Alignment in Collagen Gels. PLoS One. 4 (6), e5902 (2009).
- Aguado, B. A., Mulyasasmita, W., Su, J., Lampe, K. J., Heilshorn, S. C. Improving viability of stem cells during syringe needle flow through the design of hydrogel cell carriers. Tissue Eng Part A. 18 (7-8), 806-815 (2012).
- Wan, J. Microfluidic-Based Synthesis of Hydrogel Particles for Cell Microencapsulation and Cell-Based Drug Delivery. Polymers. 4 (2), 1084-1108 (2012).
- Moraes, C., Wang, G., Sun, Y., Simmons, C. A. A microfabricated platform for high-throughput unconfined compression of micropatterned biomaterial arrays. Biomaterials. 31 (3), 577-584 (2010).
- Keung, A. J., Kumar, S., Schaffer, D. V. Presentation Counts: Microenvironmental Regulation of Stem Cells by Biophysical and Material. Cues. Annu Rev Cell Dev Biol. 26, 533-556 (2010).
- Segers, V. F., Lee, R. T. Stem-cell therapy for cardiac disease. Nature. 451 (7181), 937-942 (2008).
- Hsieh, H. Y., et al. Gradient static-strain stimulation in a microfluidic chip for 3D cellular alignment. Lab Chip. 14 (3), 482-493 (2014).
