Introduction
Evnen til at kombinere genetiske og biokemiske metoder har gjort Drosophila en særlig egnet organisme til biokemi og molekylær biologi undersøgelser 1-3. Disse undersøgelser kræver ofte store mængder af biologisk materiale, ikke kun fra voksne fluer, men også fra larver 4, pupper 5 og embryoner 6-8. For at opnå store mængder af materiale, forskere har dyrket fluer ved hjælp af store containere kendt som flyve "population bure". Disse bure består af en cylinder fremstillet af plast dækket af et net på begge sider til indføring af fødevarer inde i buret uden fluerne slipper ud. Disse bure kan være hjemmelavet 9-11 eller købt fra et selskab (se tabel specifikke materialer / udstyr).
En stor fordel ved at anvende dette system til at vokse stort antal fluer er, at den cyklus af bananfluen 12 kan styres på en måde, alle fluerne udvikle sig i en relatively synkroniseret måde. Denne synkronisering opnås ved at pode nye embryoner, fodring larver / fluer og ofre de voksne fluer på præcise tidspunkter. Ved hjælp af en synkroniseret flue befolkning er særlig anvendelig til udviklingsmæssige undersøgelser 13.
Starten på en ny befolkning bur fra et par fluer er en tidskrævende proces, der kræver mange cyklusser af forstærkning 9-11. Selv bruger større beholdere som flue kultur flasker eller minicages, kan hele processen vare i måneder. For at undgå denne tidskrævende trin, mange Drosophila laboratorier jævnligt opretholde sådanne bure. Det er mest praktisk at starte et nyt bur starter fra et foster samling fra en allerede etableret befolkning bur. Generelt de fleste laboratorier opretholde vildtype population bure, såsom Oregon R eller Canton S. manuskript indeholder en detaljeret protokol til at opretholde flyve population bure.
Protocol
1. Start af cyklus: Seeding embryoer
BEMÆRK: cyklus starter med 1,5 g af indsamlet materiale (en blanding af embryoner og / eller nogle første stadie larver) fra den foregående cyklus. Dette materiale vil blive placeret i en plastbeholder (se tabel specifikke materialer / udstyr) med en aktiv gær blandingen, indtil den puppe fase. Beholderen lukkes efter indførelsen af den biologiske blanding af embryoner og larver med låget for at undgå, at larverne at undslippe. Det er nødvendigt at lave huller i låget for at tillade luftcirkulation. For at undgå at larver undslippe gennem hullerne, anvendes skum propper. Endelig anbefales det at bruge handsker og kittel, ikke kun i dette afsnit, men også i hele protokol, at undgå at få beskidte eller farvning tøj med blegemiddel.
- Opsæt plastbeholder.
- Foretag tre firkantede huller med et barberblad i plastikbeholder låget på enpproximately 2,2 cm. Tilføj tape (3/4 tommer mærkning tape) til de fire hjørner af hvert hul for at sikre en stram egnet til skum propper (50 x 55 mm, DXL), og derefter placere en skum plug i hvert hul.
- Dække indersiden af plastikbeholder med plastfolie. Over denne film, tilføje et lag af bomuld til at dække bunden af plastbeholder. Riv bomuld med fingrene.
- Forbered fluen mad.
- Tilsættes 333 ml deioniseret vand i et 500 ml bægerglas. Under omrøring bægeret med en magnetisk bar, tilsættes 167 ul propionsyre og 1,08 ml phosphorsyre, fra stamopløsninger (99,96% og 85%, henholdsvis).
- Tilsæt langsomt 77,5 g tørgær, så man undgår store klumper. Efter opløsning af tørgær, tilsæt 38,8 g saccharose.
BEMÆRK: Saccharose bør være den sidste ingrediens skal tilføjes, fordi umiddelbart efter tilsætning denne komponent, vil gæringen begynde.
- Umiddelbart efter opløsning af saccharose, hældmad over bomuld, og sørg for at dække bomuld jævnt. Luk plastikbeholder med låget for at undgå undslap fluer i laboratoriet kontaminere fødevaren.
- Resuspender 1,5 g af de høstede embryoner (ikke dechorionated) fra den foregående cyklus med 5 ml 70% ethanol. Skær i halve to filter papirer og distribuere den biologiske blanding jævnt over de 4 stykker med en spartel eller en overførsel pipette med en bred spids (skåret om nødvendigt). Læg filteret papirer oven på gennemblødt bomuld og luk låget. Endelig inkuberes plastbeholderen ved stuetemperatur (24ºC) og fugtighed (35%), indtil puppe fase.
BEMÆRK: plastikbeholder bør ikke placeres i et fugtigt kammer, ellers dette vil fremme væksten af bakterier.
2. Fortsættelse af Cycle: Fra Embryoner til fluer.
BEMÆRK: Denne del af cyklussen går fra embryonerne placeret i plastbeholderen på dag 1 indtil 9 dage senere, når de voksne fluer vil dukkefra pupper. I løbet af disse 8 dage intet der skal gøres, men overvåge, at embryonerne fremskridt korrekt til de næste faser af Drosophila livscyklus indtil eclosion. Hvis larver begynder at dø og dreje sort i løbet af denne tid, skal du kontrollere, at skum propper ikke er for stramme, og at tilstrækkelig ventilation. Denne periode er en god tid til at rense fluen befolkning bur fra den foregående cyklus.
- Overhold embryoner bliver 1. stadie larver omkring 24 timer efter den voksne kvindelige deponerede dem i flue mad (se trin 3). Den resulterende larver vil foder fra fluen mad tilberedt i trin 1 i 4 dage, voksende og molting to gange i 2. og 3. stadiums larver.
- Rengør flue befolkning bur.
- Placer buret ved 4 * C i mindst 30 min at bremse aktiviteten af fluer. Fjern nettet, der dækker den ene side af buret, og med en hurtig bevægelse, cap den åbne side med en stor biohazard plasttaske. Hæld indholdet af buret i posen.
- Med biohazard taske stadig dækker den ene side af buret, placere buret lodret over en vask med den biohazard taske nedad. Fjern forsigtigt plasticposen at forhindre fluer undslippe og kassere det i en beholder til biologisk farligt affald.
- Åbn forsigtigt øvre net nok til at skabe et lille hul, skylles indersiden af buret med vand, hvilket vil vaske fluerne i vasken. Øg langsomt størrelsen af hullet og fjerne alle de fluer inde i buret.
- Rengør buret og begge redskaber med vand og sæbe. Mens garnene er stadig våd sikre dem på begge sider af den tørre rene bur, og endelig sat i et laboratorium soaker papir, som vil forhindre plastfolien fremstillet i trin 1.1.2 klistrer til buret. Nu buret er klar til næste cyklus.
- Fire dage efter den indledende opsætning, observere larverne forpupper sig. Larverne vil forblive i denne fase i 4 dage mere.
BEMÆRK: Dnder denne fase pupper vil dække hele bomuld overfladen inde i plastbeholder. - Under den puppe fase og før de første fluer frem, åbne plastbeholder og sæt plastfolien, der indeholder bomuld med al den pupper i laboratoriet soaker papir inde i ren befolkning buret. Luk nettet med en dobbelt knude og rengør plastbeholder og låget til den næste cyklus.
BEMÆRK: Pupper fastgjort til låget skal kasseres og destrueres ved autoklavering eller frysning før eclosion.
3. Voksen Fluer.
BEMÆRK: Efter de 4 dage i puppe fase de første fluer vil komme ud af pupper. Inden 24-48 timer alle fluer skulle have eclosed. I denne del af cyklussen, er det vigtigt at give dem mad med det formål at skabe det rette miljø for reproduktion.
- Forbered melassen bakker.
- Kombiner i en 1 liters kolbe 556,25 ml deioniseret H2O, 90 ml melasse, og 22 g agar. Autoklave med en omrører i 30 minutter, afkøles og tilsættes 9,25 ml 10% Tegosept i 95% EtOH.
- Hæld blandingen i en kød bakke af 21 x 14,5 cm. Sørg for, at lydstyrken er nok til at dække 15 - 17 bakker. Vent 10 - 20 min at størkne og dække hver bakke med en plastfilm for at undgå udtørring. Adskillige kolber med 1 L kan fremstilles samtidigt. Opbevar melasse bakker ved 4 ºC pakket ind i plastik, indtil den skal.
- Tilføj en melasse bakke dækket med vådt gær inde i buret med de voksne fluer.
- Før tilsætning af pladen, placere buret ved 4 * C i koldt rum i 30 min.
- Tilsæt 200 ml deioniseret H2O i et bægerglas og langsomt pour tørgær under omrøring med en ske. Stop med at tilføje tørgær når blandingen bliver tilnærmelsesvis sammenhæng i jordnøddesmør at forhindre fluer at få stukket i fødevaren.
BEMÆRK: Det er vigtigt ikke at tillade fødevarer løsning til at størkne det ellers vil være meget svært at dækkemelassen bakke og udtrække æggene ved høst (se afsnit 4.3). - Fjern plastfolien fra en melasse bakke og dække det med et lag af den friske fremstillede våde gær med en ske eller spatel. Vær sikker på, at hele overfladen er dækket.
- Mens buret er stadig i det kolde rum, åbne nettet og forsigtigt tilføje melasse bakke med vådt gær ind i buret. Luk nettet og placere buret ved RT.
BEMÆRK: Det kan være nyttigt at dække pladen med en tom kød bakke under indføring, men sørg for ikke at blokere adgangen for fluerne til melasse bakken.
- Skift tallerken hver 24 - 48 timer for at undgå, at gæren bliver for tør. Voksne fluer er meget følsomme over udtørring.
4. slutningen af cyklussen: Fangst af Embryoner
BEMÆRK: Den bedste flue fertilitet er 3 - 5 dage efter eclosion. Derfor vil høst i løbet af denne tid få den bedste embryo udbytte. Efter ønskede samlinger er kompleted, cyklussen er forbi. Fluerne skal ofres, og buret rengøres som angivet i trin 2.2.
- Typisk 2 dage efter flyve eclosion, introducere en ny melasse bakke med frisk vådfoder ind i buret, som forklaret i afsnit 3.2.5. At øge udbyttet af æg deposition, med hjælp af fingrene, gøre overfladen af den våde gær som uregelmæssig som muligt. Hvis en gammel mad bakken er til stede i buret, før du tilføjer den nye plade, forsigtigt fjerne det og kassere det ind i en biologisk farlige taske. Et andet tip til at øge udbyttet er at fjerne bomuld lag, så alle æg bliver lagt i maden. Oprethold buret ved RT.
- Overhold embryoner som små hvide prikker.
BEMÆRK: Æggene er klar til afhentning. For rutinemæssig vedligeholdelse af flyve bur, to døgn samling er den anbefalede tid. Denne samling vil indeholde det meste embryoner og få en st instar larver. Se repræsentative resultater for typiske udbytter af høstede embryoner til forskellige colleIndsatsen tidspunkter. - Høst embryoner
- Placer buret i kølerummet i ca. 30 min. I mellemtiden forberede plastbeholder og flyve mad til den næste cyklus som forklaret i afsnit 1.
- I en 8 L autoklave bakke tilsæt vand til ¼ af den samlede kapacitet og derefter tilsættes 1 ml 10% Triton X-100. Mens buret er i det kolde rum fjern forsigtigt den melasse plade og læg den i en biologisk farlige taske.
- Fjern skuffen fra posen og oversvømme det hurtigt (for at forhindre fluer i at slippe ud) i rengøringsmiddel i autoklaven bakken. Luk biohazard posen og sætte i en biologisk farligt container. Fluer vil ikke drukne i vand, der ikke indeholder detergent.
- Brug en stor pensel og destilleret vand pistol til at vaske embryoner og gær ud af melasse. Kassér plader og melasse i biohazard kassen.
- Hæld løsning forsigtigt gennem en tre si sæt (groveste si 30 på toppen, 40 i midten og 100 i bunden). Vask klumper on øverste niveau med destilleret vand pistol, indtil der ikke klumper tilbage.
BEMÆRK: De voksne fluer og 3. stadiums larver vil blive tilbageholdt i sigten 30.- Skyl autoklaven bakken med destilleret vand og hæld skyllevandet gennem soldene. Fjern øverste sigte og gentag processen, hvis gær klumper tilbage. De fleste af de 1. og alle af 2. stadiums larver forbliver i sigten 40.
- Fjern den anden sigte. Den gullige materiale i den tredje (nederst) sigte er blandingen af embryoner og små 1 m instar larver. Bruge destilleret vand pistol til at flytte alle æggene til den ene side af sigten. Saml dem med en spatel og vejes.
- Under disse cyklusser udbyttet indsamlingen af embryoner / larver svinger mellem 7 og 13 g. Brug kun 1,5 g af dette materiale til at starte en ny cyklus (afsnit 1). Bruge resten af embryonerne til videreforarbejdning eller kan kasseres.
5. YderligereForarbejdning
BEMÆRK: embryoner, der ikke anvendes til fortsættelse af befolkningen kan bruges med det samme i forsøg, eller alternativt kan fryses ved -80 ºC. For begge muligheder, kan embryonerne skal først være dechorionated.
- For dechorionation, vaske embryoner i 2 min i 50% blegemiddel løsning og skyl grundigt med destilleret vand.
- For at fryse embryoner, første tørre ved at trykke fast med et stykke køkkenrulle, og vejes og placere dem, ved hjælp af en spatel, i en 15 eller 50 ml konisk rør. Endelig nedsænkes konisk rør i flydende N2 i et par sekunder.
Representative Results
Opretholdelsen af en flue bur population er baseret på flue livscyklus. Derfor, efter at placere den initiale biologiske blanding af embryoner og larver i plastbeholderen (figur 1A) de befrugtede æg bliver larver i ikke mere end 2 dage og larverne vil vokse i 4 dage, relativt synkroniseret gennem de forskellige instar larver stadier ( se Figur 1 B).
Når æggene har afsluttet den 3. instar larvestadiet de vil pupate og dækker overfladen af bomuld inden i plastikbeholder med nogle på den indvendige overflade af låget (fig 1C). Denne pupation periode vil gå for de næste 4 dage indtil fluerne afslutte metamorfose processen. I denne periode anbefales det kraftigt at overføre fluerne ind i buret. Den første voksne fluer vil begynde at Eclose på dag 9 - 10 efter deninitiering af cyklen (Figur 1D) og ved dag 11 alle af dem vil have kommet ud af pupper.
Den bedste udbytte af embryonerne kollektionen fås 3 - 5 dage efter eclosion (dag 13 til 15) og endelig falder i dag 17 (7 dage efter eclosion). Derfor anbefales det at tilføje den sidste bakke af friske fødevarer på dag 13, og indsamle æg på dag 15 (figur 1E og F). Dette vil muliggøre opsamling af det maksimale antal embryoner. Tilføje en tredje ekstra dag før opsamling kan resultere i fødevarer bliver for tør, og derfor vil mindske udbyttet af indsamlede embryoner. Tabel 1 viser udbyttet af 6 på hinanden følgende cyklus samling, med et udgangsmateriale med 1,5 g i hver cyklus, og figur 2 er den anbefalede tidsplan for en hel cyklus samling.
Materialet høstet i to døgn60; perioder er for det meste består af embryoner. Men et lille antal larver er også til stede. For bur vedligeholdelse disse larver er ikke et problem, da der forventes en vis grad af asynchronicity. Alligevel for nogle biokemiske eksperimenter, renheden af disse embryoner er meget vigtig, men samtidig er det også nødvendigt at indsamle store mængder æg til at udføre disse forsøg. Af denne grund flere korte træk samlinger blev udført ved 1 time og 3 timer, efter hurtigt at tilføje ved stuetemperatur en ny plade med fødevarer, for at tilvejebringe et estimat af udbyttet og renheden, som kan opnås med denne fremgangsmåde (tabel 2 og figur 3) . 1 hr konsekutive samlinger startede med et meget lavt udbytte (14,5 mg), men derefter de mængder embryoner steg for hver gang opsamles men sidste gang. Det lave udbytte ved først kan skyldes fluer bliver understreget under processen med at ændre mad men senere acclimating. På den anden side, ingen larVAE blev observeret i de fem sekventielle samlinger (figur 3A), der viser, at kortere samlinger giver højere renhed. Hvis bomuld ikke fjernes fra buret, vil sandsynligheden for, at larverne fra tidligere tidspunkter forblive og indtaste den friske plade forøges. Selv når bomuld er fjernet, til tider larver vil vandre på den side af buret og indtast fødevarer under en samling.
For de 3 timers sammenhængende kollektioner, udbyttet varierede 840-1250 mg, hvilket er omkring 10 gange mere end de udbytter, der er opnået i de 1 time samlinger. Renheden af disse embryoner var nær 100% (figur 3B). Lejlighedsvis larver blev observeret. Nogle udviklingsmæssige undersøgelser kræver en meget stram synkronisering for embryoner. For at øge synkronisering renhed, anbefales det at kassere den første kollektion plade, fordi hvis betingelserne ikke er ideelle, kan hunner fastholde mere modne æg og deponerem når forholdene forbedres, såsom med indførelsen af en ny plade. Det er også vigtigt at vide, at ældre voksne fluer (> 6 dage) producerer mindre synkroniserede embryoner. For at verificere graden af synkronisering med høj nøjagtighed, anbefales en DAPI farvning af de indsamlede embryoner.
Figur 1. Drosophila melanogaster Life Cycle i en Fly Befolkning Cage. (A) Indledning af cyklen såning 1,5 g af embryoner i plastboks container. Som reference i det nederste panel, længden af filtrerpapiret er 8,5 cm. (B) Larverne vokser relativt synkroniseres 5 dage efter indledningen af cyklussen. (C) På dag 8 fleste af fluer er i puppe fase. De nederste paneler i B (B ') og C (C ') er forstørrelser af de angivne områder i de øvre paneler. (D) Voksne fluer fremgik af pupper 10 dage efter cyklus indvielse. (E) Voksen flyver inde befolkningen buret før du starter processen med at indsamle de embryoner, på dag 15. Den gullige materiale på flue mad er befrugtede æg. (F) Embryoner (og et par larver) opsamlet i bunden af den 100 groveste sigte, efter en hel bur cyklus. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2. Hele Cycle Collection Schedule. Figur 2 viser den anbefalede tidsplan for en komplet cyklus samling. t = "_ blank"> Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3. Renhed af 1 time og 3 timer i træk samlinger. Repræsentant billede af embryoner på 1 time (A) og 3 timer (B) efter tilsætning af en ny bakke af fødevarer. Klik her for at se en større version af dette tal.
| cyklusnummer | Udbytte (g) |
| 1 | 10.3 |
| 2 | 9.5 |
| 3 | 10.3 |
| 4 | 12.7 |
| 5 | 10 |
| 6 | 7.1 |
| Collection # | Længde af samling (hr) | Udbytte (mg) |
| 1 | 1 | 14.5 |
| 2 | 1 | 21,6 |
| 3 | 1 | 56,1 |
| 4 | 1 | 160,1 |
| 5 | 1 | 106,1 |
| 1 | 3 | 960 |
| 2 | 3 | 840 |
| 3 | 3 | 1250 |
Tabel 2. Udbytte af 1 time og 3 timer i træk samlinger. Tabel 2 viser udbyttet af 5 på hinanden følgende samlinger 1 time efter tilsætning ny mad og 3 på hinanden følgende samlinger 3 timer efter at placere en ny melasse plade.
Discussion
Startende med 1,5 g materiale man kan få et udbytte af opsamlede embryoner mellem 7 og 13 g per cyklus. For at få en sådan mængde materiale er det afgørende at fastholde de rette dyrkningsbetingelser for alle faser af fluen cyklus.
De vigtigste parametre er temperatur og fugtighed, som bør være 24 ºC og 35%. Hvis disse to parametre ikke kan holdes konstant i den normale miljø i laboratoriet, vil en mulighed være at placere fluen buret i en inkubator eller en miljømæssig kammer. Andre protokoller anbefaler 70% fugtighed og også en konstant 24 timers lys-mørke-cyklus for at forøge udbyttet af de producerede æg 9,10. Men at holde luftfugtigheden omkring 35% undgår bakteriel forurening, og da formålet med denne protokol er kun opretholdelsen af en befolkning bur, er fluerne opbevares i normalt lys miljø i laboratoriet.
Et andet vigtigt punkt er at holde disturbances til voksne fluer så lavt som muligt. Det kan være tilrådeligt at holde buret på et sted adskilt fra flyve plads til at undgå krydskontaminering fra andre fluer.
Dyrkningen af store populationer af transgene og mutant fluer kan ikke anbefales, da det er meget vanskeligt at opretholde deres renhed og de kan udvise markant abnorm parring adfærd i store befolkningsgrupper bure 14.
Et muligt problem, mens dyrkning Drosophila i store mængder, er tilstedeværelsen af andre organismer såsom mider og / eller skimmel, som vil konkurrere om mad og derfor reducere udbyttet af producerede æg. For at undgå dette, er det meget vigtigt at holde alt det udstyr rent, vaske buret, net og flyve kasser med vand og sæbe, og kassere den disponible materiale (skum propper) efter hver cyklus. For at reducere Skimmelsvamp vokser, er propionsyre og fosforsyre tilføjet i den våde gær ved udarbejdelsen fluen mad i trin1.2 og Tegosept ved udarbejdelsen melassen bakke i trin 3.1. Det er nogle gange praktisk at placere materialer såsom plast kasse eller sigter på -20 ˚C når tiden er kort og materialer kan ikke rengøres med det samme.
En hel samling cyklus forekommer i 14 - 15 dage, begyndende når embryonerne podes i fluen boksen og slutter med den sidste samling dage. I løbet af denne periode, anbefales det at organisere en tidsplan for at huske alle de nødvendige skridt til at opretholde en population flue bur (fig. 2), detaljerede i protokollen sektion. Fra den dag, at æggene podes, indtil de voksne fluer dukke, er det blot nødvendigt at inspicere plastkasse, og når pupation tilfælde at placere dem inde i buret. Efter dette, fluerne skal fodret hver 2 - 3 dage, indtil embryoner podes til en ny cyklus. I hele protokollen, den længste dag er under indsamling og såning af embryonerne for at starte en ny cyklus. ENs kommenteret i protokollen, den bedste æg udbyttet er 3 - 5 dage efter voksen eclosion, og endelig falder 2 dage senere. Dette giver os en vis fleksibilitet for at vælge, hvor høsten af æggene vil blive udført.
Hvis udbyttet af opsamlede embryoner eller anden grund, er mindre end den ønskede grundbeløb (1,5 g), man altid kan tilføje en ny melasse bakke og indsamle flere æg den næste dag. For konstante samlinger, anbefales det at opretholde 2 bure i parallel, og hvis der kræves større mængder af embryoner, er det også muligt at anvende større bure. Ved at gøre korte tid samlinger, en måde at forøge udbyttet er at drage fordel af æglægning burst om morgenen.
Der er mange fordele ved at indsamle store mængder af forskellige udviklingsstadier. For eksempel har indsamlet embryoner fra populations bure blevet anvendt med stor succes i immunopræcipitationsanalyser 6-8, masse Collection af larver væv fra dissocierede larver har vist sig at være en meget god kilde til 3C eksperimenter 4 og RNA-præparater 15, og hoveder fra voksne fluer er blevet brugt til CHIP eksperimenter 16. Desuden er voksne ofte behov for at gøre flyve ekstrakter til vævsdyrkning 17.
Et af de mest lovende anvendelser af buret er at tilvejebringe materiale til high-throughput assays, der tillader analyse og screening af gener, transkripter, proteiner og metabolitter som reaktion på eksponering af patogener, biologiske molekyler, kemiske stoffer og ioniserende stråling. I disse store analyser kræves et stort antal individer, og fluen befolkning buret beskrevet her kan være meget nyttigt for at få store mængder af materiale i de forskellige faser af Drosophila livscyklus for deres analyse og screening 18.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Bacto-Agar | Beckton Dickinson | 214010 | |
| Curity practical cotton roll | Kendall | 2287 | |
| Dry yeast | Affymetrix | 23540 | |
| Filter paper | GE Healthcare Life Science | 1001-085 | |
| Foam tube plugs | Jaece | L800-D2 | 50 mm Diameter x 55 mm Length |
| Fly population cage | Flystuff | 59-116 | 9″ Diameter x 14.4″ Length. Includes the nets for the cage. |
| Meat tray | Genpak | 1002S (#2S) | 8.25 x 5.75 x 0.5 inches |
| Molasses | Grandma´s | ||
| Plastic container | Rubbermaid | 4022-00 | |
| Plastic film | Glad | ||
| Phosphoric acid | Fisher Scientific | S 93326 | Toxic. Handle in Chemistry Hood |
| Propionic acid | Fisher Scientific | A258-500 | Toxic. Handle in Chemistry Hood |
| Stainless steel sieve #100 | VWR | 57324-400 | |
| Stainless steel sieve #40 | VWR | 57324-272 | |
| Stainless steel sieve #30 | VWR | 57324-240 | |
| Sucrose | MP | 152584 | |
| Tegasept | LabScientific | FLY5501 | |
| Triton-X100 | Fisher Scientific | BP151-500 |
References
- Lim, S. J., Boyle, P. J., Chinen, M., Dale, R. K., Lei, E. P. Genome-wide localization of exosome components to active promoters and chromatin insulators in Drosophila. Nucleic Acids Res. 41, 2963-2980 (2013).
- Ong, C. T., Van Bortle, K., Ramos, E., Corces, V. G. Poly(ADP-ribosyl)ation regulates insulator function and intrachromosomal interactions in Drosophila. Cell. 26, 148-159 (2013).
- Gonzalez, I., Mateos-Langerak, J., Thomas, A., Cheutin, T., Cavalli, G. Identification of regulators of the three-dimensional polycomb organization by a microscopy-based genome-wide RNAi screen. Mol Cell. 8, 485-499 (2014).
- Magbanua, J. P., Runneburger, E., Russell, S., White, R. A variably occupied CTCF binding site in the ultrabithorax gene in the Drosophila bithorax complex. Mol Cell Biol. 35, 318-330 (2014).
- Maksimenko, O. Two new insulator proteins, Pita and ZIPIC, target CP190 to chromatin. Genome Res. 25, 89-99 (2015).
- Lei, E. P., Corces, V. G. RNA interference machinery influences the nuclear organization of a chromatin insulator. Nat Genet. 38, 936-941 (2006).
- Matzat, L. H., Dale, R. K., Moshkovich, N., Lei, E. P. Tissue-specific regulation of chromatin insulator function. PLoS Genet. 8, e1003069 (2012).
- King, M. R., Matzat, L. H., Dale, R. K., Lim, S. J., Lei, E. P. The RNA-binding protein Rumpelstiltskin antagonizes gypsy chromatin insulator function in a tissue-specific manner. J Cell Sci. 1, 2956-2966 (2014).
- Sisson, J. C. Culturing large populations of drosophila for protein biochemistry. Cold Spring Harb Protoc. , (2007).
- Shaffer, C. D., Wuller, J. M., Elgin, S. C. Raising large quantities of Drosophila for biochemical experiments. Methods Cell Biol. 44, 99-108 (1994).
- Roberts, D. B., Standen, G. N. The elements of Drosophila biology and genetics. Drosophila: A practical approach. Roberts, D. B. , Oxford University Press. Oxford. 1-53 (1998).
- Ashburner, M., Roote, J. Culture of Drosophila: The laboratory setup. Cold Spring Harb Protoc. , (2007).
- Dahlberg, O., Shilkova, O., Tang, M., Holmqvist, P. H., Fb Mannervik, M. P-TEb, The super elongation complex and mediator regulate a subset of non-paused genes during early Drosophila embryo development. PLOS Genet. 13, e1004971 (2015).
- Zhang, S. D., Odenwald, W. F. Misexpression of the white (w) gene triggers male-male courtship in Drosophila. Proc Natl Acad Sci USA. 6, 5525-5529 (1995).
- Chak, L. L., Mohammed, J., Lai, E. C., Tucker-Kellogg, G., Okamura, K. A deeply conserved, noncanonical miRNA hosted by ribosomal DNA. RNA. 21, 375-384 (2015).
- Moshkovich, N., Lei, E. P. HP1 recruitment in the absence of argonaute proteins in Drosophila. PLOS Genet. 12, e1000880 (2010).
- Drosophila RNAi Screening Center [Internet]. , Available from: http://www.flyrnai.org/DRSC-PRC.html (2015).
- Pandey, U. B., Nichols, C. D. Human disease models in Drosophila melanogaster and the role of the fly in therapeutic drug discovery. Pharmacol Rev. 63, 411-436 (2011).
