Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Mantenimento di un Published: March 15, 2016 doi: 10.3791/53756

Introduction

La capacità di combinare approcci genetici e biochimici ha fatto Drosophila un organismo particolarmente adatto per biochimica e biologia molecolare studi 1-3. Questi studi spesso richiedono grandi quantità di materiale biologico, non solo da mosche adulte, ma anche da larve 4, pupe 5 e gli embrioni 6-8. Per ottenere grandi quantità di materiale, i ricercatori hanno mosche coltivate utilizzando grandi contenitori noti come volare "gabbie di popolazione". Queste gabbie sono costituiti da un cilindro di plastica coperta da una rete su entrambi i lati per consentire l'introduzione del cibo all'interno della gabbia senza le mosche fuga. Queste gabbie possono essere fatti in casa 9-11 o acquistati da una società (vedi tabella di materiali specifici / apparecchiature).

Un importante vantaggio di utilizzare questo sistema per coltivare un gran numero di mosche è che il ciclo della mosca della frutta 12 può essere controllato in modo che tutte le mosche sviluppano in un relatively sincronizzato maniera. Questa sincronizzazione si ottiene semina nuovi embrioni, alimentando larve / mosche e sacrificare le mosche adulte, a volte precisi. Utilizzando una popolazione mosca sincronizzato è particolarmente utile per studi di sviluppo 13.

L'inizio di una nuova gabbia popolazione da pochi mosche è un processo che richiede tempo molti cicli di amplificazione 9-11. Anche utilizzando contenitori più grandi, come le bottiglie di coltura mosca o minicages, l'intero processo può durare per mesi. Per evitare questo passaggio che richiede tempo, molti laboratori di Drosophila mantengono regolarmente tali gabbie. È più conveniente per iniziare una nuova gabbia a partire da una raccolta di embrioni da una gabbia popolazione già stabilito. In generale, la maggior parte dei laboratori mantengono gabbie popolazione di tipo selvatico, come Oregon R o Canton S. Questo manoscritto presenta un protocollo dettagliato per mantenere la mosca gabbie di popolazione.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Bacto-Agar Beckton Dickinson 214010
Curity practical cotton roll Kendall 2287
Dry yeast Affymetrix 23540
Filter paper GE Healthcare Life Science 1001-085
Foam tube plugs Jaece L800-D2 50 mm Diameter x 55 mm Length
Fly population cage Flystuff 59-116 9″ Diameter x 14.4″ Length. Includes the nets for the cage.
Meat tray Genpak 1002S (#2S) 8.25 x 5.75 x 0.5 inches
Molasses Grandma´s
Plastic container Rubbermaid 4022-00
Plastic film Glad
Phosphoric acid Fisher Scientific S 93326 Toxic. Handle in Chemistry Hood
Propionic acid Fisher Scientific A258-500 Toxic. Handle in Chemistry Hood
Stainless steel  sieve #100 VWR 57324-400
Stainless steel  sieve #40 VWR 57324-272
Stainless steel  sieve #30 VWR 57324-240
Sucrose MP 152584
Tegasept LabScientific FLY5501
Triton-X100 Fisher Scientific BP151-500

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Lim, S. J., Boyle, P. J., Chinen, M., Dale, R. K., Lei, E. P. Genome-wide localization of exosome components to active promoters and chromatin insulators in Drosophila. Nucleic Acids Res. 41, 2963-2980 (2013).
  2. Ong, C. T., Van Bortle, K., Ramos, E., Corces, V. G. Poly(ADP-ribosyl)ation regulates insulator function and intrachromosomal interactions in Drosophila. Cell. 26, 148-159 (2013).
  3. Gonzalez, I., Mateos-Langerak, J., Thomas, A., Cheutin, T., Cavalli, G. Identification of regulators of the three-dimensional polycomb organization by a microscopy-based genome-wide RNAi screen. Mol Cell. 8, 485-499 (2014).
  4. Magbanua, J. P., Runneburger, E., Russell, S., White, R. A variably occupied CTCF binding site in the ultrabithorax gene in the Drosophila bithorax complex. Mol Cell Biol. 35, 318-330 (2014).
  5. Maksimenko, O. Two new insulator proteins, Pita and ZIPIC, target CP190 to chromatin. Genome Res. 25, 89-99 (2015).
  6. Lei, E. P., Corces, V. G. RNA interference machinery influences the nuclear organization of a chromatin insulator. Nat Genet. 38, 936-941 (2006).
  7. Matzat, L. H., Dale, R. K., Moshkovich, N., Lei, E. P. Tissue-specific regulation of chromatin insulator function. PLoS Genet. 8, e1003069 (2012).
  8. King, M. R., Matzat, L. H., Dale, R. K., Lim, S. J., Lei, E. P. The RNA-binding protein Rumpelstiltskin antagonizes gypsy chromatin insulator function in a tissue-specific manner. J Cell Sci. 1, 2956-2966 (2014).
  9. Sisson, J. C. Culturing large populations of drosophila for protein biochemistry. Cold Spring Harb Protoc. , (2007).
  10. Shaffer, C. D., Wuller, J. M., Elgin, S. C. Raising large quantities of Drosophila for biochemical experiments. Methods Cell Biol. 44, 99-108 (1994).
  11. Roberts, D. B., Standen, G. N. The elements of Drosophila biology and genetics. Drosophila: A practical approach. Roberts, D. B. , Oxford University Press. Oxford. 1-53 (1998).
  12. Ashburner, M., Roote, J. Culture of Drosophila: The laboratory setup. Cold Spring Harb Protoc. , (2007).
  13. Dahlberg, O., Shilkova, O., Tang, M., Holmqvist, P. H., Fb Mannervik, M. P-TEb, The super elongation complex and mediator regulate a subset of non-paused genes during early Drosophila embryo development. PLOS Genet. 13, e1004971 (2015).
  14. Zhang, S. D., Odenwald, W. F. Misexpression of the white (w) gene triggers male-male courtship in Drosophila. Proc Natl Acad Sci USA. 6, 5525-5529 (1995).
  15. Chak, L. L., Mohammed, J., Lai, E. C., Tucker-Kellogg, G., Okamura, K. A deeply conserved, noncanonical miRNA hosted by ribosomal DNA. RNA. 21, 375-384 (2015).
  16. Moshkovich, N., Lei, E. P. HP1 recruitment in the absence of argonaute proteins in Drosophila. PLOS Genet. 12, e1000880 (2010).
  17. Drosophila RNAi Screening Center [Internet]. , Available from: http://www.flyrnai.org/DRSC-PRC.html (2015).
  18. Pandey, U. B., Nichols, C. D. Human disease models in Drosophila melanogaster and the role of the fly in therapeutic drug discovery. Pharmacol Rev. 63, 411-436 (2011).
Mantenimento di un<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Cage Popolazione
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Caravaca, J. M., Lei, E. P.More

Caravaca, J. M., Lei, E. P. Maintenance of a Drosophila melanogaster Population Cage. J. Vis. Exp. (109), e53756, doi:10.3791/53756 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter