Summary
מאמר זה מציג שיטה מהירה ופשוטה לניהול בליאומיצין ישירות לתוך קנה הנשימה העכבר באמצעות אינטובציה. יתרונות עיקריים של שיטה זו הם כי הוא מאוד לשחזור, קל לשלוט, ואינו דורשים ציוד מיוחד או פעמי החלמה ממושכות.
Introduction
למרות כמה הבדלים אנטומיים ופיסיולוגיים, 1 מודלים בעכברים להמשיך להיות יקר למידול ביולוגיה אנושית בהיווצרות מחלה. 2 מבחינה בעלי, עכברים קלים לטפל, יש זמן רבייה נמוך, אורך חיים מואץ, והם זולים יחסית לבית. עם התפתחות זנים ואסטרטגיות גנטיים שונים (למשל., ביטולי דפיקה על תנאי, עכברי כתב, גישות התחקות שושלת, וכו '), כמו גם המגוון הרחב של חומרים כימיים זמין (למשל., נוגדנים, חלבונים רקומביננטיים, מעכבים, וכו '), עכברים הפכו אורגניזם חוליות מודל חיוני לחשוף תהליכים הומאוסטזיס ומחלות של בני אדם. 3
עכברים כבר בעל ערך במיוחד עבור לחקור את תנאי ריאתי, כולל פגיעה ריאות חריפה (ALI) ופיברוזיס ריאתי. 4 עלי בבני אדם יכול להיגרם על ידי טראומה, פציעה, או אלח דם ומאופיין אפיתלדליפת האנדותל (כלומר., בצקת), דלקת, סיסטיק המתהווה. בחולים רבים, עליי מתקדם הצורה החמורה שלה, תסמונת מצוקה נשימתית החריפה (ARDS), עלולה לגרום סיסטיק ותמותה עקב אי ספיקה נשימתית. 5,6 פיברוזיס ריאתי הוא פתולוגיה פרוגרסיבי, קטלנית המאופיינת בתצהיר העודף של תאי מטריקס , בעיקר סוג I קולגן, שמוביל את תפקוד ריאות לקויות. 7,8 מנהל בליאומיצין (BLM) הוא מודל הנפוץ ביותר והטוב ביותר מאופיין גרימת ALI סיסטיק בחיות מעבדה. 9 למרות פיברוזיס ריאתי נגרמת BLM במכרסמים עושה לא לשחזר באופן מלא פנוטיפים fibrotic האדם, 10 מחקרי עכבר עם המודל הזה הובילו לגילוי של גורמים רבים חשובים המשפיע על ההופעה וההתקדמות של המחלה. 11
בעוד המנגנון המדויק (ים) מאחורי fibrogenesis הנגרמת BLM אינם ידועים, הפגיעה ייזוםהוא חשב לנבוע הפסקות גדיל DNA קשר תלויי לתאי האפיתל המצפים את דרכי הנשימה alveoli ניצוח, ובפרט, סוג 1 pneumocytes. 12 הצורך במגע ישיר בין BLM ואת אפיתל ריאתי מדגיש את החשיבות של מסלול משלוח חזקים גם, וחששות אלה רלוונטיים למגוון רחב של טיפולים הממוקדים אל דרך נשימת דיסטלי, כולל חלבונים רקומביננטיים, נוגדנים, siRNA, וירוס, חיידקים, חלקיקים, ועוד. שאיפת לוע תחתונה (OPA) כבר בשימוש נרחב למטרה זו 13, אבל רב סרן חסרון של OPA הוא אותו חלק חלק הסוכן נמסר עלול להיבלע לתוך מערכת העיכול, ולכן היא מובילה חוסר דיוק במינון המנוהל. גישה נוספת נפוצה היא החדרת transtracheal, שכרוכה הנשמה בהרדמה חזקה כדי לחשוף את הקנה הנשימה ההחדרה של סוכן ישירות לדרכי נשימה. 14 עם זאת, לא רק רשאית כזההליך להיות רצוי בשל invasivity שלה, אבל זה גם גוזל זמן דורש קצת הוגן של אימונים, וגורם לפגיעה חזקה אל דרך הנשימה. 15,16 פרוטוקולים פותחו מספר שקשור לניהול הישיר של הסוכנים לתוך קנה נשימה ללא צורך בהתערבות כירורגית, 16,17,18,19,20 אך שיטות אלו כוללות זמני התאוששות מורחבות הנגרמת על ידי הרדמה חזקה, השימוש בציוד יקר (כלומר., otoscope / לרינגוסקופ, לוחות הליך זמינים מסחרי, סיבים אופטיים חוטים, וכו '), עודף של מניפולציה של חלל הפה, ואי ודאות לגבי המינון.
מאמר זה מתאר שיטה קלה יחסית של הממשל באמצעות אינטובציה המאפשר חוקר במהירות, ובזול, ולטעת מגיב באופן מהימן לתוך הריאות בעכברים עם סיכון מוגבל של נזק שיורי אל הרקמות הסובבות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
הטיפול בבעלי החיים המוסדי השתמש הוועדה (IACUC) באונ' וושינגטון Cedars-Sinai Medical Center אשרה את עבודת החיה הכרחית ללימודים אלה.
1. הכנה
- לעקר הן מלקחי הסוף הבוטים החיטוי באמצעות depressor.
- שימוש ארון בטיחות ביולוגית, להכין מלאי העבודה של BLM ב PBS מן אבקת lyophilized. Sonicate הפתרון במשך 10 דקות ב 35 Khz כדי להבטיח ערבוב אפילו.
הערה: נפח כולל של בין 30 ל 45 μl מומלץ למנוע וריאצית pipetting בקצה נמוך, וחנק עם נפחים גדולים יותר. - הכינו סביבת עבודה נקייה הכוללת כ 1 מ '2 עבור ההליך עצמו, כמו גם במקומות המיועדים כלובים הן לפני ואחרי הניתוח.
- תקן את הבסיס של לוח ההליך לספסל מייד מול החוקר על ידי נחת 2 או 3 רצועות של סרט מעבדה ברחבי הבסיס underlיינג הספסל. ראה איור 1 עבור מפרטים נוספים על יצירת לוח.
- עניבת אורך יחיד של חוט תפירת גודל 4.0 בין שני ברגי המיצוב של לוח ההליך.
- צור spirometer מאולתר על ידי הסרת ולהשאיר את הבוכנה משלושה 1 מ"ל מזרקים, והפקדת 60 μl של PBS לתוך החלק העליון של כל חבית כדי ליצור חותם אטום. אבטח את הרכזת של הקטטר רופף לאחד מזרקים ולמקם אותו לצד אחד של הלוח.
- לשאוב 300 μl של אוויר לתוך מזרק 1 מ"ל ומניחים אותו בצד אחד של הלוח.
- לחתוך חתיכה נוספת של סרט כ 6 ס"מ באורך ומקום לצד אחד. זה ישמש כדי לאבטח את החיה ללוח בשלב 2.4.
- הגדרת תא isoflurane. צרף O 2, isoflurane, ואקום אל היציאות המתאימות משני תא החשיפה ואקום אישור. לחלופין, לנהל הרדמה בבית isoflurane תואם ביולוגיבארון בטיחות.
אינטובציה 2.
- להרדים את העכבר עם isoflurane בתא עד שהוא מאבד את ההכרה והנשימה מאט לקצב המתאים. חשיפה טיפוסית כולל 4 isoflurane% ו -2% O 2 במשך 3 עד 4 דקות, ואת התוצאה האידיאלית היא 2 עד 2.5 דקות של הרגעה. זה מתאים קצב נשימה של 1 נשימה כל 2 שניות.
- בזמן ההמתנה הרגעה כדי להגדיר, לשאוב בין 30 ל -45 μl של BLM לתוך פיפטור ומקום לצד אחד.
- כאשר מוכן, להשעות את העכבר מסומם על ידי החותכות העליונות שלה מן החוט מחובר ברגי המיצוב של פלטפורמת ההליך. ודא כי dorsum של חיה שוכב על משטח הפלטפורמה.
- נזהר שלא להגביל אוורור, במקום חתיכת סרט רופף ברחבי הנמוך (הזנב) החלק של חלל בית החזה, ממש מעל הסרעפת. מיקום צריך להיות חזק מספיק כדי לשמור על יישור נכון במהלך procedure, אבל לא כל כך חזק, כי זה מגביל נשימה.
- הפעל את הפנס כדי בין 80% ל- 100% עוצמת ו לכוון את מתכווננת כך שזה 1 עד 2 ס"מ מפני השטח של העור, ליד מקלעת השמש. לבדוק מדי פעם את הקצה מתכווננת עבור חום כדי לוודא שהוא אינו פוגע העכבר.
- עומד מאחורי הפלטפורמה, השתמש מלקחי סוף סטרילי, קהים כדי לאתר את הלשון. להיות זהירים, כדי למנוע חותכות התחתונות, בעדינות האחיזה לצייר את הלשון מתוך חלל הפה.
- שימוש ביד נותרת, הכנס במלחוץ ולהשתמש בו כדי לשטח את הלשון כנגד הרצפה של חלל הפה. שחרר את המלקחיים, אבל להשאיר את במלחוץ מקום על שני השלבים הבאים.
- אוריינט האור, כך קנה הנשימה גלוי על ידי המנחה את מתכווננת proximally מרמת מקלעת השמש עד שהוא מגיע לרמה של הסמפונות mainstem.
הערה: קנה הנשימה ניתן להבחין בקלות על ידי פעולה של הנשימה, WHIch גורם האור הנפלט להשתנות בעצמה. כאשר בצורה נכונה, מבנה זה יהיה להבחין במישור צירית כמו סיכה במיקום מרכזי של אור עם אור הסביבה מינימלי של חלל הפה עצמו. - זווית המזרק כך שהוא עוקב אחר נתיב טבעי של קנה הנשימה, ולהפחית את קצה הצנתר 22-G, עם המזרק המצורף המכיל את אגל, ישר לתוך לומן. בועת PBS תתחיל לעלות ולרדת עם כל נשימה על שמה מוצלחת.
הערה: פעולה זו עשויה להתעכב על ידי כמה שניות כתוצאת סדציה עמוקה. - להאכיל את הקטטר בתוך מ"מ 5 נוסף. הסר את depressor לשון.
- Shift את המזרק ביד השנייה, מרתק הרכזת, להסיר בעדינות את המזרק.
- הפקדה בין 30 ל 45 μl של BLM למרכז הפנים של רכזת קטטר, לצרף את המזרק השני ולחלק 300 μl של אוויר לרכזת.
- החזר את השנימזרק עם המכיל את הבועה הראשונה של PBS. הבועה תמשיך לעלות ולרדת אם ההליך בוצע בהצלחה.
טיפוח 3. פוסט-פרוצדורליים
- הסר את הקטטר ואת הקלטת, והמקום חי במקום חמים ויבש עד להכרתו - בדרך כלל בתוך כמה דקות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
עכברים מחוברים לצינור נוטר יומיים לירידה במשקל ומצוקה, והקריבו 4, 10 או 17 ימים לאחר מכן באמצעות זריקת intraperitoneal של 2.5% 2,2,2- tribromoethanol. ברונכואלוואולרית שטיפה (BAL) נאספה שלוש שוטף של PBS כמתואר במקום אחר 21 , ואת הריאה הימנית נקבע בפורמלין 10%, פרפין מוטבע, מוכתם Trichrome של מייסון ידי אוניברסיטת היסטולוגיה וושינגטון והדמיה Core 22.
עולה בקנה אחד עם המידע שהוקם, עכברים שטופלו BLM חוו ירידה במשקל שיא בין ימים 7 ו -10 שלאחר החשיפה 23 (איור 2 א). בנוסף, רמות גבוהות של IgM ב BAL מעכברים BLM שטופלו הקריב הפגינו עלייה משמעותית, תלוי זמן בחדירות ריאות, מעיד על אפיתל ו / או תפקוד לקוי של האנדותל המחסום (איור 2 ב).
= "jove_content" FO: keep-together.within-page = "1"> התגובה fibrogenic נמדדה באמצעות כתם trichrome של מייסון - סמן ומבוססת של תוכן קולגן הכולל 24. ריאות עכבר הוכתמו, ואת השטח הכולל ממוצע של trichrome מכתים לכל סעיף ריאה ימנית היו לכמת (איור 3 א). סעיפים נציג להראות ועיבוי טיפול תלוי וכתוצאה מכך של interstitium ריאתי ועליות בנגעים פיברוטית (איור 3 ב).
איור 1. פרמטרים כלליים להפקת לוח הליך עבודה. האורכים שהוצגו מצביעים על הממד המשוער הכרחי ליצירת מנגנון הליך עבודה. בניסויים אלה, מתכת אלומיניום סטנדרטי נחתך המידות הנכונות, אז מחוזק עם סוגר "T"."Target =" ftp_upload / 53,771 / 53771fig1large.jpg _ blank "> לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 2. ירידה במשקל וחוסר תפקוד מחסום לאחר נטילה של בליאומיצין. עכברים נוהלו 2.0 U / kg של BLM או נפח שווה של PBS. (א) ירידה במשקל מבוטא כאחוז של יום 0 המשקל (BLM: n = 21; PBS: 5). (ב) עכברים הוקרבו על 4 או 10 ימים לאחר חשיפה, וחלבון IgM ב BAL מריאות שנקטפו נמדד באמצעות ELISA. (PBS: n = 5; יום 4: n = 3; יום 10: n = 5). הנתונים מוצגים כממוצע ± SEM. * P <0.05 לעומת שליטת PBS. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 3. פיברוזיס ריאתי לאחר נטילה של בליאומיצין. (א) קולגן סה"כ, לכמת כמו מכתים trichrome של שינוי לקפל הכולל מאסון מפיקוח WT. (ב) נציג תמונות של trichrome חלקי ריאות מוכתמים נלקחים בהגדלת 5x. שליטת PBS מורכבת חיות נלקחות בין 5 ל 14 ימים לאחר טיפול-PBS (PBS: n = 5; יום 10: n = 5; יום 17: n = 3). הנתונים מוצגים כממוצע ± SEM. * P <0.05 לעומת שליטת PBS. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
במקרים שבהם aerosolization אינו מעשי בשל זמינות מגיב מוגבלת, בטיחות, או עלות, ממשל קנה נשימה ישירה הוא השיטה מעולה למסירה של סוכני אקסוגניים לריאות 16 החדרת Transtracheal כבר בשימוש נרחב כדי להשיג את זה.; עם זאת, כמו עם כל התערבות כירורגית, הוא גם נושא עמו פוטנציאל מסיבוכים שנגרמו בשל ההליך עצמו, ולאו דווקא הסוכן להיות החדירו. 13 מסיבות אלה, זה הפך להיות נפוץ יותר ויותר לניהול חומר ישירות לתוך קנה הנשימה באמצעות אינטובציה 16,17,18,19,20. עם זאת, שיטות אלה גם סובלים ממגבלות, כוללים זמני התאוששות מורחבים עקב שימוש של תרופות הרגעה חזקות כמו קטמין / xylazine, אי ודאות לגבי המיקום של הקטטר (כלומר., אל ושט ולא קנו נשימה), מניפולציה מיותרת של רקמות בעולם חלל הפה, ואת העלות הכרוכהעם רכישת מכשירים מיוחדים כגון אוטוסקופים / לרינגוסקופ.
לאחר שהוקמה, שהגישה המתוארת כאן מספק מספר יתרונות משמעותיים על פני פרוטוקולים אינטובציה אחרים. ראשית, שימוש isoflurane מאפשר הפחתה של הזמן הכולל שהושקע לכל עכבר. זה נובע בעיקר הזמן המופחת צורך בו חיות יכלו להכרתו הבאה הרגעת isoflurane לעומת חומרים מפוקחים כמו קטמין (כ -5 דקים 'מול לפעמים יותר מ -3 שעות). 14 בנוסף, spirometer המאולתר מבטיח ביטחון של הצלחה בכך שהוא מאפשר לחוקר כדי להמחיש את בועת PBS נדנוד, דבר שמצביע על מיקום נכון של החומר שניתן הן לפני ואחרי ההחדרה. לבסוף, על ידי ניצול מקור אור חיצוני במקום חוט otoscope או לרינגוסקופ ומדריך מגושם, החוקר הוא מסוגל להפחית את כמות הציוד בידיהם, תוך שיפור o לדעתם בו זמניתf חלל הפה והפחתת סיכוייהם של פגיעה ברקמות הרכות סביב קנה הנשימה.
חששות ספציפיים הקשורים בפרוטוקול זה הם מעטים, אבל רציני. לדוגמא, בעוד ששימוש isoflurane ניתן לצמצם את הזמן הקשורות אינדוקציה והתאוששות ההרגעה, זה גם דורש תצפית הנמרצת של מדינת ההרגעה של חיה. אי להסיר את החיה מן חדר isoflurane מבעוד מועד יכול לגרום למוות, במיוחד כבר חי מחל התערבות קודמת. לעומת זאת, מינון isoflurane מספיק ושעות פרוצדורליים מורחבות יכולים לגרום לחיה להכרתו במהלך ההליך עצמו, אשר יכול גם לגרום לפציעה. לכן, קיים הכרח הן עבור בטיחות הסוס ואת היושרה של הניסוי כי בעל החיים יוחזר לתא isoflurane עם הסימן הראשון של תודעה. מאז זה יכול להיות נפוץ כאשר לומד שיטה זו, מומלץ כיחוקרים מנוסים לאשר בניהול מוצלח של כל חיה לפני ההרדמה הבאה. בנוסף, החוקרים מתקשים יכול גם לבחור להאריך את החשיפה isoflurane כדי להאריך את משך הזמן הפרוצידורליים, ובלבד שהם לעקוב מקרוב אחר בעלי חיים moribundity.
חשש נוסף של שיטה זו הוא כי הנזק הקשורים טיפול. זה עשוי במיוחד במהלך שלושה שלבים: בעת הסרת הלשון מהפה, כאשר החדרת קטטר, וכאשר פירוק מזרקים מהרכזת לאחר הטיפול. מיקום קטטר הוא ללא ספק הכי המסוכן של השלבים הבאים. חשוב לציין, את הקטטר לא צריך להיכנס חלל הפה עד שהנוף קנה הנשימה הוא אידיאלי. אם קנה הנשימה לא ניתן להביא אל תוך שדה הראייה באמצעות מניפולציה של אחד מקור האור או במלחוץ, החוקר צריך לשחרר את הלשון ולנסות לבצע את ההליך. מניפולציה של הרקמות הרכות סביב i קנה הנשימהזה לא נחוץ או מומלץ. עם זאת, לאחר קטטר הושם כראוי, הטיפול צריך גם לנקוט כדי לשמור על הרכזת מלהתקדם רחוק מדי לתוך קנה הנשימה ניקוב הסמפונות העיקרי-גזע. זה יכול להימנע בדרך כלל על ידי הבטחה כי קטטר מחובר רק באופן רופף על חבית המזרק, ועל ידי מרענן לעומת המכיל את הקטטר נגד הלוח פרוצדורליים כך שהוא נשאר סטטי. ניואנסים אלה, יחד עם הצורך עתוי ודיוק, מדגישים את החשיבות של הכנה ותרגול לשכלל הליך זה. אף על פי כן, עם אימון זה צריך להיות אפשרי עבור חוקר טירון לטיפול 20 או יותר בעלי חיים במשך שעה, ועבור חוקרים מנוסים כדי להשלים כפליים או יותר.
העקביות הנחילה ידי בתצהיר קנה הנשימה ישירה הפכה אותה המסלול המועדף של הממשל בשנים האחרונות. למעשה, בשיטות דומות כבר דווחו עבור מספר רב של זוג מפורדריאל בדרך זו 19,25. עקבי עם פרוטוקולים כגון, מסירת בליאומיצין באופן המתואר כאן הביאה לתגובה fibrotic חזק בשתי הריאות, ובכל אונות, דבר המצביע על רמה דומה של עומק ואחידות הפצה. על בסיס זה, סביר להניח כי פרוטוקול זה מספק יתרונות ניסיוני דומה עבור מגוון של חומרים אחרים המסתמכים על קשר לתווך והשפעותיהם (למשל., פרמצבטיקה, נוגדנים, סוכנים בקטריאלי, וכן במערכות שינוי חלבון vivo כגון וקטורים lentiviral) , וכי, כמו בליאומיצין, היא תאפשר ניסויים כאלה גם להתנהל בביטחון, הוצאה קטנה, וטיפול שלאחר ניתוח מינימאלי.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
המחברים מודים בריאן ג'ונסון של היסטולוגיה והדמיה Core באוניברסיטת וושינגטון לעזרה עם מכתים trichrome וניתוח. עבודה זו נתמכה על ידי HL098067 ו HL089455 מענקים NIH.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Bleomycin For Injection, 30 units/vial | APP Pharmaceuticals, LLC | 103720 | For best results, BLM should be suspended in PBS, aliquoted, and stored as single use lyophilzed aliquots |
| Blunt End Forceps | |||
| Tongue Depressor (i.e. bent Valleylab Blade Electrode, 2.4") | Covidien | E1551G | Before use, create a 45 degree bend 1.5 cm from the blade tip. A suitable depressor can also be created from any metal implement of similar dimensions. |
| Exel Safelet Catheter 22G X 1" | Exel International | 26746 | |
| 1 ml Slip-tip Disposable Tuberculin Syringe (200/sp, 1600/ca) | BD | 309659 | |
| 0.2 ml Pipettor and Filter Tips | |||
| Fiber-Lite Illuminator. Model 181-1: Model 180 mated with Standard Dual Gooseneck illuminator | Dolan Jenner Industries, Inc. | 181-1 | Lower output LED illuminators are not recommended as they fail to suficiently illuminate the trachea. |
| Intubation Board | See Diagram 1. | ||
| Colored Label Tape: 0.5 in. Wide | Fisherbrand | 15-901-15A | |
| Oxygen | |||
| Phosphate-Buffered Saline, 1X | Corning | 21-040-CV | Product should be sterile |
| Non-Sterile Silk Black Braided Suture Spool, 91.4 m, Size 4-0 | Harvard Apparatus | 517698 | |
| Table Top Anesthesia Machine Isoflurane | Highland Medical Equipment | http://www.highlandmedical.net/ | |
| Slide Top Induction Mouse Isoflurane Chamber | MIP / Anesthesia Technologies | AS-01-0530-SM | |
| FORANE (isoflurane, USP) Liquid For Inhalation 100 mL | Baxter | 1001936040 | |
| Nanozoomer Digital Pathology system | Hamamatsu | ||
| IgM ELISA Quantification Kit | Bethyl Laboratories | E90-101 |
References
- Hyde, D. M., Hamid, Q., Irvin, C. G. Anatomy, pathology, and physiology of the tracheobronchial tree: emphasis on the distal airways. J Allergy Clin Immunol. 124, S72-S77 (2009).
- Rosenthal, N., Brown, S. The mouse ascending: perspectives for human-disease models. Nat Cell Biol. 9, 993-999 (2007).
- Peters, L. L., et al. The mouse as a model for human biology: a resource guide for complex trait analysis. Nat Rev Genet. 8, 58-69 (2007).
- Baron, R. M., Choi, A. J., Owen, C. A., Choi, A. M. Genetically manipulated mouse models of lung disease: potential and pitfalls. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 302, 485-497 (2012).
- Sharma, S. Acute respiratory distress syndrome. BMJ Clin Evid. 2010, (2010).
- Saguil, A., Fargo, M. Acute respiratory distress syndrome: diagnosis and management. Am Fam Physician. 85, 352-358 (2012).
- Wilson, M. S., Wynn, T. A. Pulmonary fibrosis: pathogenesis, etiology and regulation. Mucosal Immunol. 2, 103-121 (2009).
- Wuyts, W. A., et al. The pathogenesis of pulmonary fibrosis: a moving target. Eur Respir J. 41, 1207-1218 (2013).
- Mouratis, M. A., Aidinis, V. Modeling pulmonary fibrosis with bleomycin. Curr Opin Pulm Med. 17, 355-361 (2011).
- Moeller, A., Ask, K., Warburton, D., Gauldie, J., Kolb, M. The bleomycin animal model: a useful tool to investigate treatment options for idiopathic pulmonary fibrosis? Int J Biochem Cell Biol. 40, 362-382 (2008).
- Myllärniemi, M., Kaarteenaho, R. Pharmacological treatment of idiopathic pulmonary fibrosis - preclinical and clinical studies of pirfenidone, nintedanib, and N-acetylcysteine. European Clinical Respiratory Journal. 2, (2015).
- Reinert, T., Baldotto, C. S. dR., Nunes, F. A. P., Scheliga, A. A. dS. Bleomycin-Induced Lung Injury. Journal of Cancer Research. 2013, 1-9 (2013).
- Lakatos, H. F., et al. Oropharyngeal aspiration of a silica suspension produces a superior model of silicosis in the mouse when compared to intratracheal instillation. Exp Lung Res. 32, 181-199 (2006).
- Helms, M. N., Torres-Gonzalez, E., Goodson, P., Rojas, M. Direct tracheal instillation of solutes into mouse lung. J Vis Exp. , (2010).
- Osier, M., Oberdorster, G. Intratracheal inhalation vs intratracheal instillation: differences in particle effects. Fundam Appl Toxicol. 40, 220-227 (1997).
- Driscoll, K. E., et al. Intratracheal instillation as an exposure technique for the evaluation of respiratory tract toxicity: Uses and Limitations. Toxicol Sci. 55, 24-35 (2000).
- MacDonald, K. D., Chang, H. Y., Mitzner, W. An improved simple method of mouse lung intubation. J Appl Physiol (1985). 106, 984-987 (1985).
- Spoelstra, E. N., et al. A novel and simple method for endotracheal intubation of mice. Lab Anim. 41, 128-135 (2007).
- Cai, Y., Kimura, S. Noninvasive intratracheal intubation to study the pathology and physiology of mouse lung. J Vis Exp. , e50601 (2013).
- Starcher, B., WIlliams, I. A method for intratracheal instillation of endotoxin into the lungs of mice. Lab Anim. 23, 234-240 (1989).
- Daubeuf, F., Frossard, N. Performing bronchoalveolar lavage in the mouse. Curr Protoc Mouse Biol. 2, 167-175 (2012).
- Li, Y., et al. Severe lung fibrosis requires an invasive fibroblast phenotype regulated by hyaluronan and CD44. J Exp Med. 208, 1459-1471 (2011).
- Grazioli, S., et al. CYR61 (CCN1) overexpression induces lung injury in mice. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 308, L759-L765 (2015).
- Redente, E. F., et al. Tumor necrosis factor-alpha accelerates the resolution of established pulmonary fibrosis in mice by targeting profibrotic lung macrophages. Am J Respir Cell Mol Biol. 50, 825-837 (2014).
- Lawrenz, M. B., Fodah, R. A., Gutierrez, M. G., Warawa, J. Intubation-mediated intratracheal (IMIT) instillation: a noninvasive, lung-specific delivery system. J Vis Exp. , e52261 (2014).
