Summary
इस लेख के माध्यम से माउस इंटुबैषेण श्वासनली में सीधे bleomycin प्रशासन के लिए एक तेजी से और सरल विधि प्रस्तुत करता है। इस विधि का मुख्य लाभ कर रहे हैं कि यह मास्टर करने के लिए, अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने के लिए आसान है, और विशेष उपकरण या लंबा वसूली बार की आवश्यकता नहीं है।
Introduction
कुछ संरचनात्मक और शारीरिक मतभेद के बावजूद, 1 murine मॉडल मानव जीव विज्ञान और रोग रोगजनन। 2 मॉडलिंग एक पशुपालन दृष्टिकोण से लिए अमूल्य हो सकता है, चूहों, संभाल करने के लिए आसान कर रहे हैं एक कम प्रजनन के समय, एक त्वरित देता है, और अपेक्षाकृत सस्ती कर रहे हैं जारी घर। विविध आनुवंशिक तनाव और रणनीतियों (जैसे।, सशर्त तोड़े बहिष्कार, संवाददाता चूहों, वंश अनुरेखण दृष्टिकोण, आदि) के रूप में भी उपलब्ध अभिकर्मकों की व्यापक रेंज (जैसे।, एंटीबॉडी, पुनः संयोजक प्रोटीन, अवरोधकों के विकास के साथ, आदि), चूहों मानव homeostasis और रोग प्रक्रियाओं को उजागर करने के लिए एक आवश्यक मॉडल कशेरुकी जीव बन गए हैं। 3
चूहे गंभीर फेफड़ों की चोट (अली) और फेफड़े फाइब्रोसिस सहित फेफड़े की स्थिति, अध्ययन के लिए विशेष रूप से महत्वपूर्ण हो गया है। मनुष्यों में 4 अली आघात, चोट, या सेप्सिस की वजह से हो सकता है और उपकला के द्वारा होती है औरendothelial रिसाव (यानी।, सूजन), सूजन, और नवजात फाइब्रोसिस। कई रोगियों में, अली अपनी गंभीर रूप, तीव्र श्वसन संकट सिंड्रोम (ARDS) है, जो अक्सर सांस की विफलता के कारण फाइब्रोसिस और मौत में परिणाम के लिए प्रगति। 5,6 पल्मोनरी फाइब्रोसिस एक प्रगतिशील, घातक विकृति बाह्य मैट्रिक्स से अधिक जमाव के द्वारा होती है सबसे विशेष रूप से टाइप I कोलेजन, बिगड़ा फेफड़ों के समारोह के लिए अग्रणी। bleomycin (BLM) के 7.8 प्रशासन प्रायोगिक पशुओं में अली और फाइब्रोसिस उत्प्रेरण के लिए सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल किया जाता है और सबसे अच्छा विशेषता मॉडल है। 9 कृन्तकों में हालांकि BLM प्रेरित करता है फेफड़े फाइब्रोसिस पुनरावृत्ति नहीं पूरी तरह से मानव fibrotic phenotypes, इस मॉडल के साथ 10 माउस के अध्ययन में कई महत्वपूर्ण शुरुआत है और रोग की प्रगति को प्रभावित करने वाले कारकों की खोज हुई है। 11
सटीक व्यवस्था (s) BLM प्रेरित fibrogenesis के पीछे अज्ञात कर रहे हैं, की शुरुआत की चोटका आयोजन एयरवेज और एलवियोली और विशेष रूप से, टाइप 1 pneumocytes अस्तर उपकला कोशिकाओं में संपर्क निर्भर डीएनए किनारा टूट जाता है से उठता है सोचा है। 12 BLM और फेफड़े के उपकला के बीच सीधे संपर्क के लिए जरूरत है एक मजबूत वितरण मार्ग के महत्व पर प्रकाश डाला और इन चिंताओं को भी बाहर का एयरवेज को लक्षित उपचार की एक विस्तृत रेंज, पुनः संयोजक प्रोटीन, एंटीबॉडी, siRNA, वायरस, बैक्टीरिया, विविक्त, और अधिक सहित के लिए सार्थक कर रहे हैं। Oropharyngeal आकांक्षा (OPA) व्यापक रूप से इस उद्देश्य के लिए इस्तेमाल किया गया है 13 है, लेकिन OPA का एक प्रमुख एक कमी यह है कि जन्म दिया एजेंट के कुछ हिस्से को जठरांत्र पथ में निगल लिया जा सकता है, जिससे प्रशासित खुराक में अस्पष्टता के लिए अग्रणी है। एक और व्यापक रूप से इस्तेमाल किया दृष्टिकोण transtracheal टपकाना, जो मजबूत संज्ञाहरण के तहत ट्रेकियोस्टोमी शामिल सीधे श्वास नलिका में श्वासनली और एक एजेंट के टपकाना बेनकाब करने के लिए है। 14 हालांकि, न केवल इस तरह कर सकते हैंएक प्रक्रिया अपने invasivity के कारण अवांछनीय हो सकता है, लेकिन यह भी समय लगता है, प्रशिक्षण के एक निष्पक्ष बिट की आवश्यकता है, और श्वसन तंत्र। 15,16 कई प्रोटोकॉल विकसित किया गया है कि में एजेंटों के प्रत्यक्ष प्रशासन को शामिल करने के लिए एक शक्तिशाली चोट का कारण बनता है शल्य चिकित्सा हस्तक्षेप की आवश्यकता के बिना श्वासनली, 16,17,18,19,20 लेकिन इन तरीकों बढ़ाया शामिल वसूली बार शक्तिशाली anesthetics की वजह से, महंगे उपकरण के उपयोग (यानी।, ओटोस्काप / laryngoscope, व्यावसायिक रूप से उपलब्ध प्रक्रिया बोर्डों, फाइबर ऑप्टिक तार, आदि), मौखिक गुहा में हेरफेर की एक अतिरिक्त है, और अनिश्चितता की खुराक के बारे में।
इस पत्र के माध्यम से इंटुबैषेण प्रशासन के एक अपेक्षाकृत आसान तरीका है कि एक शोधकर्ता जल्दी से, सस्ते में, और मज़बूती से एक अभिकर्मक आसपास के ऊतकों को नुकसान अवशिष्ट की सीमित जोखिम के साथ murine फेफड़ों में टपकाना करने के लिए अनुमति देता है वर्णन करता है।
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Protocol
संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) वॉशिंगटन और देवदारों सिनाई मेडिकल सेंटर के विश्वविद्यालय में पशु काम इन अध्ययनों के लिए आवश्यक मंजूरी दे दी है।
1. तैयारी
- दोनों कुंद अंत संदंश और कष्टकारक के माध्यम से आटोक्लेव जीवाणुरहित।
- एक जैविक सुरक्षा कैबिनेट का प्रयोग, lyophilized पाउडर से पीबीएस में BLM का काम कर रहे एक शेयर तैयार करते हैं। 35 kHz पर 10 मिनट के लिए समाधान Sonicate यहां तक कि मिश्रण आश्वस्त करने के लिए।
नोट: 30 और 45 के बीच μl की कुल मात्रा के बड़ी मात्रा के साथ कम अंत पर pipetting भिन्नता, और घुटन को रोकने के लिए सिफारिश की है। - एक साफ कार्यक्षेत्र है कि प्रक्रिया में खुद के लिए लगभग 1 एम 2, साथ ही दोनों से पहले और प्रक्रिया के बाद पिंजरों के लिए निर्दिष्ट स्थानों में शामिल तैयार करें।
- आधार और underl भर में प्रयोगशाला टेप के 2 या 3 स्ट्रिप्स बिछाने से तुरंत शोधकर्ता के सामने बेंच करने के लिए प्रक्रिया में बोर्ड के आधार फिक्सबेंच यिंग। एक बोर्ड बनाने पर आगे की विशिष्टताओं के लिए चित्रा 1 देखें।
- प्रक्रिया बोर्ड की स्थिति दो शिकंजा बीच आकार 4.0 सीवन धागे का एक भी लंबाई बाँधो।
- हटाने और तीन 1 मिलीलीटर सीरिंज से सवार discarding, और प्रत्येक बैरल के शीर्ष में पीबीएस के 60 μl जमा एक airtight सील फार्म से एक अस्थायी Spirometer उत्पन्न करता है। शिथिल सीरिंज से एक के लिए कैथेटर का हब सुरक्षित और बोर्ड के एक तरफ करने के लिए जगह है।
- महाप्राण 300 1 मिलीलीटर सिरिंज में हवा की μl और बोर्ड के एक तरफ करने के लिए जगह है।
- एक तरफ टेप लंबाई और जगह में लगभग 6 इंच का एक अतिरिक्त टुकड़ा काट। यह 2.4 चरण में बोर्ड के लिए पशु सुरक्षित करने के लिए इस्तेमाल किया जाएगा।
- एक isoflurane कक्ष की स्थापना की। दोनों जोखिम चैम्बर और निकासी निर्वात पर उचित बंदरगाहों के लिए 2 हे, isoflurane, और वैक्यूम संलग्न। वैकल्पिक रूप से, में संवेदनाहारी प्रशासन एक isoflurane-संगत जैविकसुरक्षा कैबिनेट।
2. इंटुबैषेण
- कक्ष में isoflurane के साथ माउस anesthetize जब तक यह चेतना खो देता है और श्वसन एक उचित दर को धीमा कर देती है। एक ठेठ जोखिम 3 से 4 मिनट के लिए 4% isoflurane और 2% 2 हे शामिल है, और आदर्श परिणाम बेहोश करने की क्रिया के 2 से 2.5 मिनट है। यह 1 सांस हर 2 सेकंड की एक श्वसन दर से मेल खाती है।
- जबकि एक तरफ एक pipettor और जगह में BLM के 30 और 45 μl के बीच में स्थापित करने के लिए बेहोश करने की क्रिया, महाप्राण के लिए इंतज़ार कर रहे।
- जब तैयार है, धागा प्रक्रिया प्लेटफार्म की स्थिति शिकंजा से जुड़ी से इसकी ऊपरी कृन्तक से बेहोश माउस निलंबित। सुनिश्चित करें कि जानवर के पीठ मंच सतह के खिलाफ फ्लैट झूठ बनाओ।
- वेंटिलेशन को प्रतिबंधित करने के लिए सावधान होने के नाते, शिथिल वक्ष गुहा के निचले (दुम) के अंश भर में टेप का एक टुकड़ा जगह है, सिर्फ डायाफ्राम से ऊपर। प्लेसमेंट तंग पर्याप्त होना चाहिए proc के दौरान उचित संरेखण को बनाए रखने के लिएedure, लेकिन इतना तंग नहीं है कि यह श्वसन प्रतिबंधित।
- 80% के बीच है और 100% तीव्रता के प्रकाशक को चालू करें और gooseneck उन्मुख इतना है कि यह त्वचा की सतह से 1 से 2 सेमी, सौर जाल के पास है। समय समय पर गर्मी के लिए gooseneck की नोक जांच सुनिश्चित करने के लिए कि यह माउस घायल नहीं करता।
- मंच के पीछे खड़े होकर जीभ का पता लगाने के लिए बाँझ, कुंद अंत संदंश का उपयोग करें। कम कृन्तक, धीरे से पकड़ से बचने और मौखिक गुहा के बाहर जीभ आकर्षित करने के लिए सावधान होने के नाते।
- शेष हाथ का प्रयोग, कष्टकारक डालने और इसका इस्तेमाल मौखिक गुहा के फर्श के खिलाफ जीभ समतल करने के लिए। संदंश जारी है, लेकिन अगले दो चरणों के लिए जगह में कष्टकारक छोड़ दें।
- प्रकाश ओरिएंट इतना है कि श्वासनली सौर जाल के स्तर से proximally gooseneck मार्गदर्शक जब तक यह mainstem ब्रांकाई के स्तर तक पहुँच द्वारा दिखाई दे रहा है।
नोट: श्वासनली आसानी से श्वसन की कार्रवाई से प्रतिष्ठित किया जा सकता, whiचर्चा उत्सर्जित प्रकाश की तीव्रता में उतार चढ़ाव का कारण बनता है। जब सही ढंग से तैनात, इस संरचना मौखिक गुहा अपने आप में कम से कम परिवेश प्रकाश के साथ प्रकाश की एक केन्द्र स्थित पिन के रूप में अक्षीय विमान में discernable होगा। - कोण इतना है कि यह सीधे जुड़ी सिरिंज लुमेन में, छोटी बूंद युक्त साथ श्वासनली के प्राकृतिक पथ का अनुसरण, और 22-जी कैथेटर टिप कम, सिरिंज। पीबीएस बुलबुला वृद्धि और सफल नियुक्ति पर प्रत्येक सांस के साथ गिर करने के लिए शुरू हो जाएगा।
नोट: इस कार्रवाई गहरी बेहोश करने की क्रिया का एक परिणाम के रूप में कई सेकंड की देरी हो सकती है। - एक अतिरिक्त 5 मिमी में कैथेटर फ़ीड। जीभ हटाये कष्टकारक।
- सामने हाथ करने के लिए सिरिंज शिफ्ट, और हब मनोरंजक, धीरे सिरिंज को हटा दें।
- कैथेटर हब के इंटीरियर के केंद्र में BLM के 30 और 45 μl के बीच जमा, दूसरे सिरिंज देते हैं और केंद्र के रूप में हवा के 300 μl बांटना।
- दूसरी बदलेंपहले पीबीएस के साथ बुलबुला युक्त सिरिंज। बुलबुला वृद्धि और गिरावट है, तो प्रक्रिया को सफलतापूर्वक प्रदर्शन किया गया है करने के लिए जारी रहेगा।
3. पोस्ट-प्रक्रियात्मक की देखभाल
- कैथेटर और टेप निकालें, और एक सूखी गर्म स्थान में जानवरों की जगह जब तक यह चेतना आएगा - आम तौर पर कुछ मिनटों के भीतर।
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Representative Results
के रूप में कहीं वर्णित 21 intubated चूहों वजन घटाने और संकट के लिए दैनिक निगरानी की गई, और 2.5% 2,2,2- tribromoethanol की intraperitoneal इंजेक्शन के माध्यम से 4, 10 या 17 दिनों के बाद बलिदान कर दिया। ब्रोन्कोएल्वियोलर पानी से धोना (बाल) पीबीएस के तीन washes में एकत्र किया गया था और सही फेफड़ों 10% formalin में तय की गई थी, आयल एम्बेडेड, और मेसन की Trichrome वाशिंगटन प्रोटोकॉल और इमेजिंग कोर 22 के विश्वविद्यालय द्वारा के साथ दाग।
स्थापित डेटा के साथ रखने में, BLM इलाज चूहों अनुभव दिनों 7 और 10 पद जोखिम 23 (2A चित्रा) के बीच शिखर वजन घटाने। इसके अलावा, बलिदान कर BLM इलाज चूहों से बाल में आईजीएम का ऊंचा स्तर एक महत्वपूर्ण, समय पर निर्भर वृद्धि का प्रदर्शन फेफड़ों में पारगम्यता, उपकला और / या endothelial बाधा रोग (चित्रा 2 बी) का संकेत है।
= fo "jove_content": रख-together.within-पेज = "1"> fibrogenic प्रतिक्रिया मेसन के trichrome दाग का उपयोग करके मापा गया था - कुल 24 कोलेजन सामग्री की एक अच्छी तरह से स्थापित मार्कर। सही फेफड़ों दाग थे, और सही फेफड़ों अनुभाग प्रति trichrome धुंधला की औसत कुल क्षेत्रफल मात्रा निर्धारित की गई थी (चित्रा 3)। प्रतिनिधि वर्गों फेफड़े interstitium और fibrotic घावों (चित्रा 3 बी) में वृद्धि के परिणामस्वरूप उपचार पर निर्भर उमड़ना दिखा।
चित्रा 1. एक काम करने की प्रक्रिया बोर्ड के उत्पादन के लिए जनरल मापदंडों। लंबाई प्रस्तुत एक काम करने की प्रक्रिया तंत्र बनाने के लिए आवश्यक अनुमानित आयाम संकेत मिलता है। इन प्रयोगों में, मानक एल्यूमीनियम शीट धातु उचित आयामों को काटा, तो एक "टी" ब्रैकेट के साथ मजबूत बनाया गया था।ftp_upload / 53,771 / 53771fig1large.jpg "लक्ष्य =" _blank "> यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 2. वजन घटाने और बाधा रोग bleomycin के प्रशासन के बाद। चूहे 2.0 यू / BLM या पीबीएस के एक बराबर मात्रा किलो दिलाई गई। (ए) वजन घटाने के दिन 0 वजन के प्रतिशत के रूप में व्यक्त (BLM: N = 21; पीबीएस: 5)। (बी) के चूहे 4 या 10 दिनों के बाद जोखिम पर बलिदान किया गया है, और फेफड़ों से काटा बाल में आईजीएम प्रोटीन एलिसा के माध्यम से मापा गया था। (पीबीएस: N = 5; दिन 4: एन = 3; दिन 10: N = 5)। डेटा ± SEM के मतलब के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं। * पी <0.05 पीबीएस नियंत्रण की तुलना में। कृपया यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
पल्मोनरी फाइब्रोसिस चित्रा 3. bleomycin के प्रशासन के बाद। (ए) कुल कोलेजन, गुम्मट नियंत्रण से कुल गुना परिवर्तन मेसन के रूप में मात्रा निर्धारित trichrome धुंधला। (बी) 5x बढ़ाई लिया trichrome दाग फेफड़ों वर्गों के प्रतिनिधि छवियाँ। पीबीएस नियंत्रण 5 और 14 दिनों के बीच पद पीबीएस उपचार लिया जानवरों के होते हैं (पीबीएस: N = 5; दिन 10: N = 5; दिन 17: एन = 3)। डेटा ± SEM के मतलब के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं। * पी <0.05 पीबीएस नियंत्रण की तुलना में। कृपया यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
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Discussion
उदाहरण हैं जहां aerosolization सीमित अभिकर्मक उपलब्धता, सुरक्षा, या लागत की वजह से अव्यावहारिक है, प्रत्यक्ष सांस की नली प्रशासन फेफड़ों में exogenous एजेंटों के वितरण के लिए एक बेहतर तरीका है 16 Transtracheal टपकाना व्यापक रूप से यह पूरा करने के लिए इस्तेमाल किया गया है। हालांकि, सभी शल्य चिकित्सा हस्तक्षेप के साथ, यह भी इसके साथ प्रक्रिया ही की वजह से संभावित जटिलताओं के लिए किया जाता है, और जरूरी नहीं कि एजेंट डाले जा रहा है। 13 इन कारणों के लिए, यह इंटुबैषेण 16,17,18,19,20 के माध्यम से श्वासनली में सीधे एक पदार्थ प्रशासन के लिए तेजी से सामान्य हो गया है। हालांकि, इन तरीकों में भी बढ़ाया वसूली (और घेघा में अर्थात्।, नहीं श्वासनली) ketamine / xylazine जैसे शक्तिशाली बनी रहती के उपयोग के कारण बार, अनिश्चितता कैथेटर के स्थान के बारे में, में ऊतकों की अनावश्यक हेरफेर सहित सीमाओं से ग्रस्त हैं, मौखिक गुहा, और संबद्ध लागतऐसे otoscopes / laryngoscopes के रूप में विशेष उपकरणों की खरीद के साथ।
एक बार स्थापित, दृष्टिकोण यहाँ उल्लिखित अन्य इंटुबैषेण प्रोटोकॉल पर कई सार्थक लाभ प्रदान करता है। एक बात के लिए, isoflurane के उपयोग के कुल समय माउस प्रति खर्च में कमी के लिए अनुमति देता है। यह मुख्य रूप से ketamine तरह नियंत्रित पदार्थों की तुलना में isoflurane बेहोश करने की क्रिया के बाद होश में आने के लिए पशुओं के लिए आवश्यक समय को कम करने के लिए कारण है। इसके अलावा 14 (बनाम कभी कभी 3 घंटा से अधिक के बारे में 5 मिनट), अस्थायी Spirometer सफलता का विश्वास शोधकर्ता अनुमति देकर यह सुनिश्चित करता है दोलन पीबीएस बुलबुला, जो दोनों से पहले और बाद टपकाना प्रशासित पदार्थ का सही स्थान को इंगित करता है कल्पना करने के लिए। अंत में, एक भारी ओटोस्काप या laryngoscope और गाइड तार के बजाय एक बाहरी प्रकाश स्रोत के उपयोग के द्वारा, शोधकर्ता, उनके हाथ में उपकरणों की मात्रा को कम करने के लिए, जबकि एक साथ उनके विचार ओ सुधार में सक्षम हैमौखिक गुहा एफ और श्वासनली आसपास के कोमल ऊतकों को नुकसान पहुँचाए के अपने अवसरों को कम करने।
इस प्रोटोकॉल के साथ जुड़े विशिष्ट चिंताओं कुछ है, लेकिन गंभीर हैं। उदाहरण के लिए, जबकि isoflurane के उपयोग के समय प्रेरण और बेहोश करने की क्रिया से वसूली के साथ जुड़े कम कर देता है, यह भी जानवर के बेहोश करने की क्रिया राज्य के कठोर अवलोकन की आवश्यकता है। एक समय पर ढंग से isoflurane कक्ष से जानवर को दूर करने में विफलता मौत में परिणाम कर सकते हैं, विशेष रूप से जानवरों को पहले से ही पिछले हस्तक्षेप से उबरने में। इसके विपरीत, अपर्याप्त isoflurane खुराक और बढ़ाया प्रक्रियात्मक बार पशु प्रक्रिया ही है, जो भी चोट में परिणाम कर सकते हैं दौरान होश में परिणाम कर सकते हैं। इसलिए, यह दोनों जानवर की सुरक्षा और प्रयोग है कि पशु चेतना का पहला संकेत पर isoflurane चैम्बर को लौटा दी की अखंडता के लिए आवश्यक है। चूंकि यह आम है जब इस विधि सीखने हो सकता है, यह सिफारिश की है कि मेंअनुभवी शोधकर्ताओं अगले anesthetizing से पहले प्रत्येक जानवर के सफल प्रशासन की पुष्टि करें। इसके अलावा, कठिनाई हो रही शोधकर्ताओं ने यह भी प्रदान की जाती है कि वे बारीकी से नजर रखने के लिए जानवरों moribundity उपलब्ध प्रक्रियात्मक समय बढ़ाने के लिए isoflurane जोखिम का विस्तार करने के लिए चुन सकते हैं।
इस विधि का एक अतिरिक्त चिंता से निपटने के साथ जुड़े नुकसान की है। इस तीन चरणों के दौरान विशेष रूप से होने की संभावना है: जब मुंह से जीभ को हटाने, जब कैथेटर डालने, और जब इलाज के बाद केंद्र से सीरिंज dislodging। कैथेटर नियुक्ति के द्वारा अब तक इन चरणों का सबसे खतरनाक है। महत्वपूर्ण बात है, कैथेटर मौखिक गुहा में प्रवेश नहीं करना चाहिए जब तक श्वासनली के मद्देनजर आदर्श है। श्वासनली या तो प्रकाश स्रोत या कष्टकारक के हेरफेर के माध्यम से देखने में नहीं लाया जा सकता है, शोधकर्ता जीभ जारी है और प्रक्रिया reattempt चाहिए। श्वासनली मैं आसपास के कोमल ऊतकों का हेरफेरआवश्यक या सिफारिश नहीं है। हालांकि, एक बार कैथेटर को सही ढंग से रखा गया है, ख्याल भी श्वासनली में बहुत दूर आगे बढ़ रहा है और मुख्य स्टेम ब्रांकाई perforating से हब रखने के लिए लिया जाना चाहिए। आमतौर पर यह सुनिश्चित करना है कि कैथेटर केवल शिथिल सिरिंज प्रति बैरल से जुड़ा हुआ है से बचा जा सकता है, और हाथ प्रक्रियात्मक बोर्ड के खिलाफ कैथेटर युक्त ताल्लुक़ इतना है कि यह स्थिर बनी हुई है। इन बारीकियों, एक साथ समयबद्धता और परिशुद्धता के लिए जरूरत के साथ, इस प्रक्रिया को सुधारना में तैयारी और अभ्यास के महत्व पर प्रकाश डाला। फिर भी, प्रशिक्षण के साथ यह एक नौसिखिया के शोधकर्ता एक घंटे के पाठ्यक्रम पर 20 या उससे अधिक पशुओं का इलाज करने के लिए, और अनुभवी शोधकर्ताओं ने दो बार के रूप में कई या अधिक को पूरा करने के लिए के लिए संभव होना चाहिए।
स्थिरता प्रत्यक्ष सांस की नली बयान द्वारा दिया यह हाल के वर्षों में प्रशासन की एक पसंदीदा मार्ग बना दिया है। वास्तव में, इसी तरह के तरीकों को पहले से ही असमान दोस्त की एक भीड़ के लिए सूचित किया गया हैइस तरह से 19,25 में रियाल। इस तरह के प्रोटोकॉल के अनुरूप, ढंग से यहाँ रेखांकित में bleomycin की डिलीवरी दोनों फेफड़ों में एक शक्तिशाली fibrotic प्रतिक्रिया में हुई है, और सभी पालियों में, वितरण में गहराई और एकरूपता के एक समान स्तर का सुझाव दे। इस के आधार पर, यह संभव है कि इस प्रोटोकॉल (जैसे lentiviral वैक्टर उदाहरण के रूप में।, फार्मास्यूटिकल्स, एंटीबॉडी, बैक्टीरियल एजेंट, और इन विवो प्रोटीन संशोधन सिस्टम में) अन्य सामग्री है कि संपर्क पर भरोसा करते हैं उनके प्रभाव मध्यस्थता करने की एक सीमा के लिए तुलनीय प्रयोगात्मक लाभ प्रदान करता है और bleomycin की तरह है, यह इस तरह के प्रयोगों को भी विश्वास, कम खर्च और कम से कम पोस्ट ऑपरेटिव देखभाल के साथ आयोजित किया जा करने की अनुमति होगी कि।
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Acknowledgments
लेखकों trichrome धुंधला और विश्लेषण के साथ मदद के लिए प्रोटोकॉल के ब्रायन जॉनसन और इमेजिंग कोर वाशिंगटन विश्वविद्यालय में धन्यवाद। यह काम एनआईएच अनुदान HL098067 और HL089455 द्वारा समर्थित किया गया।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Bleomycin For Injection, 30 units/vial | APP Pharmaceuticals, LLC | 103720 | For best results, BLM should be suspended in PBS, aliquoted, and stored as single use lyophilzed aliquots |
| Blunt End Forceps | |||
| Tongue Depressor (i.e. bent Valleylab Blade Electrode, 2.4") | Covidien | E1551G | Before use, create a 45 degree bend 1.5 cm from the blade tip. A suitable depressor can also be created from any metal implement of similar dimensions. |
| Exel Safelet Catheter 22G X 1" | Exel International | 26746 | |
| 1 ml Slip-tip Disposable Tuberculin Syringe (200/sp, 1600/ca) | BD | 309659 | |
| 0.2 ml Pipettor and Filter Tips | |||
| Fiber-Lite Illuminator. Model 181-1: Model 180 mated with Standard Dual Gooseneck illuminator | Dolan Jenner Industries, Inc. | 181-1 | Lower output LED illuminators are not recommended as they fail to suficiently illuminate the trachea. |
| Intubation Board | See Diagram 1. | ||
| Colored Label Tape: 0.5 in. Wide | Fisherbrand | 15-901-15A | |
| Oxygen | |||
| Phosphate-Buffered Saline, 1X | Corning | 21-040-CV | Product should be sterile |
| Non-Sterile Silk Black Braided Suture Spool, 91.4 m, Size 4-0 | Harvard Apparatus | 517698 | |
| Table Top Anesthesia Machine Isoflurane | Highland Medical Equipment | http://www.highlandmedical.net/ | |
| Slide Top Induction Mouse Isoflurane Chamber | MIP / Anesthesia Technologies | AS-01-0530-SM | |
| FORANE (isoflurane, USP) Liquid For Inhalation 100 mL | Baxter | 1001936040 | |
| Nanozoomer Digital Pathology system | Hamamatsu | ||
| IgM ELISA Quantification Kit | Bethyl Laboratories | E90-101 |
References
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