Introduction
الكريات البيض في الانضمام إلى الشعيرات الدموية في الرئتين (أي marginating الرئوي (MP) الكريات البيض) عرضت 1 لعرض تكوين الكريات البيض متميزة وفريدة من نوعها النشاط بالمقارنة مع الكريات البيض من المقصورات المناعية الأخرى (على سبيل المثال، تداول والطحال ونخاع العظام) 2- 4. على سبيل المثال، معرض MP-الكريات البيضاء أعلى القاتلة الطبيعية (NK) الخلايا السمية الخلوية ضد الخلايا السرطانية المختلفة، بالمقارنة مع تعميم والطحال الخلايا القاتلة الطبيعية، وكذلك مستويات متباينة الرنا المرسال (مرنا)، وزيادة إفراز السيتوكينات المؤيدة والمضادة للالتهابات. ويختلف تكوين خلايا أيضا من الكريات البيض المتداولة كما MP-الكريات البيض لديهم نسبة أعلى من الفطرية مناعة / التكيف مقارنة تعميم الكريات البيض (50٪ مقابل 30٪ على التوالي). الهدف من الطريقة المعروضة هنا هو تمكين الحصاد الانتقائي للMP-الكريات البيض، من أجل دراسة هذه المقصورة المناعة هامة وفريدة (السكان الخلية)، وelucidate تأثير مختلف التلاعب (على سبيل المثال، تنشيط جهاز المناعة) على هذه الخلايا المحددة.
لفهم أهمية هذه الفئة من السكان فريدة من نوعها، من المهم أن نلاحظ أن نظام المناعة يمكن التحكم تعميم الخلايا السرطانية، micrometastases، والمرض المتبقية من خلال وظائف في الجسم الحي من مناعة خلوية (CMI). هذه القدرة هو واضح على الرغم من فشل سابقة من الجهاز المناعي للسيطرة على الورم الرئيسي، وبدعم من وافرة في دليل المجراة في مرضى السرطان والنماذج الحيوانية 5. الأهم من ذلك، هذه النتائج غالبا ما تكون متناسقة مع في المختبر، وبحكم الدراسات المجراة، التي تفيد أن معظم الخلايا السرطانية ذاتي مقاومة لسمية الخلايا من خلال تعميم الكريات البيض في عينات الدم من البشر والحيوانات (التي تقاس فحوصات السمية الخلوية) 6،7. ويمكن أن يعزى هذا التفاوت إلى وجود في الجسم الحي من السكان الكريات البيض متميزة، مثل السالفةالمذكور السكان الكريات البيض النائب، وعلى وجه التحديد في من السكان من الخلايا القاتلة الطبيعية تنشيط 3. في الواقع، عرضت خلايا الورم مسانج (MADB106)، التي وجدت لتكون مقاومة للتعميم والكريات البيض الطحال، إلى أن هي lysed الخلايا MP-NK 3،8. وبالتالي، يتم التحكم في "المقاومة NK 'يزعم خلايا MADB106 أن metastasize إلى الرئتين من fischer344 (F344) الفئران بخلايا MP-NK، ولكن ليس من خلال تعميم أو الخلايا القاتلة الطبيعية الطحال، والتي عادة دراستها نظرا سهولة وصولها.
النقاء ونشطة MP-الكريات البيض لا يمكن الوصول إليها من خلال أساليب الحصاد القياسية من الكريات البيض من الرئتين، والتي تقوم على طحن أنسجة الرئة أو التدهور البيولوجي 9. نهجنا واثنين من المزايا الرئيسية مقارنة بالنهج معالجة الأنسجة. أولا، النهج نضح يحصد انتقائي MP-الكريات البيض، التي تفصلها عن غيرها من الخلايا التي تنشأ من متني الرئة، بيني، وcompar النزلة السنخtments. ثانيا، تقنية نضح أفضل تحافظ على سلامة وبيئة الفسيولوجية MP-الكريات البيض، على عكس الطحن والمعالجة البيولوجية النهج التي تتلف الخلايا، يغير التشكل، وتحفز إنتاج وإطلاق العوامل المختلفة التي تعدل النشاط المناعي، وعلى وجه التحديد قمع NK السمسة 10.
الرئتين هي جهاز هدفا رئيسيا لورم خبيث من السرطان والأمراض المعدية المختلفة. كل الخلايا الخبيثة المنتشرة والخلايا المصابة تمر من خلال الشعيرات الدموية في الرئة، حيث أنها تحتاج إلى تشوه والتفاعل مع الخلايا البطانية الشعرية والكريات البيض المقيم. في ظل هذه الظروف، والخلايا المنتشرة يمكن أن تستهدف بسهولة عن طريق MP-الكريات البيض المقيم. وهكذا يبدو من المفيد من الناحية البيولوجية أن يكون الكريات البيض تفعيلها في هذا الحيز المناعة، وأنه من المهم دراسة هذه فريدة من نوعها MP-السكان في إعدادات البيولوجية، التجريبية، وسريرية مختلفة. ومن الجدير بالذكر أن سيتفعيل stemic المناعي عن طريق مختلف، استجابة معدلات البيولوجية (على سبيل المثال، حمض polyinosinic-polycytidylic (بولي الأول: C) أو oligodeoxynucleotides نوع C الدليل السياسي الشامل (الدليل السياسي الشامل-C ODN)) وقد ثبت أن تفعيل MP-الكريات البيض أكثر من تعميم الكريات البيضاء 3، 8،11.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
وقد تمت الموافقة على الإجراءات التي تجرى على الحيوانات من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسي (IACUC) في جامعة تل أبيب.
1. بروتوكول الجرذ
- الاستعدادات
- ترتيب 2 فراشة 21 الإبر G. اختياريا، وإعداد 2 فراشة 21 G الإبر ذو حدين صريحا عن طريق تقديم حافة حادة من الإبرة.
- تعقيم الأدوات الجراحية: 2 أزواج من مقص، ملقط اضعافها ذو حدين، مرقئ، ملقط الأسنان الأنسجة تعقيم بواسطة الأوتوكلاف في 121 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة على الأقل على وضع (الجاف) الجاذبية.
- إعداد heparinized برنامج تلفزيوني (30 وحدة / مل) وذلك بإضافة 30 وحدة من الهيبارين لكل مل من الفوسفات مخزنة المالحة (برنامج تلفزيوني 1X) حل. استخدام في RT. 35 مل هو حجم الحد الأدنى اللازم للحيوان.
- تيار heparinized برنامج تلفزيوني في خطوط مضخة تحوي والإبر فراشة لتجنب فقاعات الهواء.
- نضح من الرئتين وجمع MP-الكريات البيض
- الموت ببطء الحيوان جرعة زائدة من 8٪ الأيزوفلورين. تأكيد القتل الرحيم التي وقف مراقبة التنفس.
- على وقف التنفس، وفتح على الفور تجاويف البريتوني والصدر باستخدام مقص العقيمة وملقط الأسنان الأنسجة. إجراء شق البطن خط الوسط على طول البطن وصولا إلى عملية الخنجري.
- رفع القص باستخدام ملقط، وقطع بحذر القفص الصدري على كلا الجانبين، دون ثقب أي عضو داخلي أو الأوعية الدموية الكبيرة. المشبك مرقئ على القص، وrostrally أضعاف القفص الصدري لفضح مجمع القلب.
- اضافة الى وجود إبرة فراشة في البطين الأيمن من القلب، وخلال حوالي دقيقة وجمع حجم القصوى من الدم إلى حقنة (~ 6 مل من 250 غرام الحيوان).
- المشبك الوريد الأجوف مع مرقئ لتجنب نضح الوراء الكبد (انظر مناقشة).
- عقد إبرة فراشة داخل البطين الأيمن في حين استبدال حقنة تحتوي على الدم مع أنبوب تدفق عمضخة eristaltic.
- اضافة الى وجود إبرة فراشة الثانية متصلة حقنة حصاد 5 مل إلى البطين الأيسر، وتجنب اختراق الحاجز بين البطينين.
- بدوره على مضخة تحوي بسرعة حوالي 5 مل / دقيقة، وجمع بلطف في حقنة وملليلتر الأولى من الإرواء أن تكون ملوثة بالدماء. تستمر حتى يتحول لون سائل الإرواء من الظلام إلى شاحب اللون الأحمر. (تجاهل perfuste الملوثة بالدم).
- دون وقف ضخ تحوي استبدال بسرعة حصاد حقنة 5 مل مع حقنة 20 مل الحصاد وجمع 20 مل من سائل الإرواء الرئة يعمل بسرعة أعلى من نضح (ما يصل إلى 7 مل / دقيقة). تراقب باستمرار تدفق سائل الإرواء في حقنة جمع، مع تجنب تشكيل فراغ.
- وقف تدفق المضخة تحوي.
- الكريات البيض استخراج
- أجهزة الطرد المركزي سائل الإرواء لمدة 10 دقيقة في 400 × ز.
- نضح السوائل.
- إضافة 10 مل برنامج تلفزيوني أو المتوسطة، الطرد المركزي في 400 x ج لمدة 10 دقيقة، ونضح السوائل. كرر هذه الخطوة مرتين. استخدام برنامج تلفزيوني أو المتوسطة يعتمد على يترتب على ذلك من استخدام العينة.
- إضافة 20 مل برنامج تلفزيوني أو المتوسطة، الطرد المركزي في 400 x ج لمدة 10 دقيقة، ونضح السوائل.
- إعادة الخلايا إلى التركيز المطلوب، على أساس استخدام عينة (نظام مراقبة الأصول الميدانية، PCR، وما إلى ذلك).
2. بروتوكول ماوس
- الاستعدادات
- ترتيب 2 فراشة 25 الإبر G. اختياريا، وإعداد 2 ذو حدين صريحا فراشة 25 G الإبر عن طريق تقديم حافة حادة من الإبرة.
- تعقيم الأدوات الجراحية: 2 أزواج من مقص، ملقط اضعافها ذو حدين، مرقئ، ملقط الأسنان الأنسجة تعقيم بواسطة الأوتوكلاف في 121 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة على الأقل على وضع (الجاف) الجاذبية.
- إعداد heparinized برنامج تلفزيوني (30 وحدة / مل) وذلك بإضافة 30 وحدة من الهيبارين في مل من محلول برنامج تلفزيوني 1X. استخدام في RT. 25 مل هو حجم الحد الأدنى اللازم للحيوان.
- تعزيز بنية الشعأنا heparinized برنامج تلفزيوني في خطوط مضخة تحوي والإبر فراشة لتجنب فقاعات الهواء.
- نضح من الرئتين وجمع MP-الكريات البيض
- الموت ببطء الحيوان جرعة زائدة من 8٪ الأيزوفلورين. تأكيد القتل الرحيم التي وقف مراقبة التنفس.
- على وقف التنفس، وفتح على الفور تجاويف البريتوني والصدر باستخدام مقص العقيمة وملقط الأسنان الأنسجة. إجراء شق البطن خط الوسط على طول البطن وصولا إلى عملية الخنجري.
- رفع القص باستخدام ملقط، وقطع بحذر القفص الصدري على كلا الجانبين، دون ثقب أي عضو داخلي أو الأوعية الدموية الكبيرة. المشبك مرقئ على القص، وrostrally أضعاف القفص الصدري لفضح مجمع القلب.
- المشبك الوريد الأجوف مع مرقئ لتجنب نضح الوراء الكبد (انظر مناقشة).
- اضافة الى وجود إبرة فراشة متصلا أنابيب تدفق المضخة تحوي في فين الصحيحtricle من القلب، وإبرة فراشة الثانية متصلة حقنة حصاد 2 مل إلى البطين الأيسر من القلب، avoidingpenetration من الحاجز بين البطينين.
- بدوره على مضخة لسرعة حوالي 2 مل / دقيقة وجمع ملليلتر الأولى من الإرواء الملوثة الدم في حقنة الحصاد حتى يتحول سائل الإرواء من الظلام إلى شاحب اللون الأحمر (تجاهل perfuste الملوثة بالدم).
- دون وقف ضخ تحوي استبدال بسرعة حصاد حقنة 2 مل مع حقنة 10 مل الحصاد وجمع 10 مل من سائل الإرواء الرئة يعمل بسرعة أعلى من نضح (تصل إلى 4 مل / دقيقة). تراقب باستمرار تدفق سائل الإرواء في حقنة جمع، مع تجنب تشكيل فراغ.
- وقف تدفق المضخة تحوي.
- الكريات البيض استخراج
- أجهزة الطرد المركزي سائل الإرواء لمدة 10 دقيقة في 400 × ز.
- نضح السوائل.
- إضافة 10 مل برنامج تلفزيوني أو المتوسطة، الطرد المركزي في 400x ج لمدة 10 دقيقة، ونضح السوائل. كرر هذه الخطوة ثلاث مرات. استخدام برنامج تلفزيوني أو المتوسطة يعتمد على يترتب على ذلك من استخدام العينة.
- إضافة 10 مل برنامج تلفزيوني أو المتوسطة، الطرد المركزي في 400 x ج لمدة 10 دقيقة، ونضح السوائل.
- إعادة الخلايا إلى التركيز المطلوب، على أساس استخدام عينة (نظام مراقبة الأصول الميدانية، PCR، وما إلى ذلك).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
المعرض MP-المقصورة مختلف تكوين الكريات البيض فرعية مقارنة تعميم الكريات البيض. باستخدام تحليل التدفق الخلوي، وقد تم تحديد الفئات السكانية الكريات البيض وكميا لتحديد خصائص تكوين كلا تعميم والكريات البيض النائب. وقد تم تحديد المحببة والخلايا الليمفاوية استنادا إلى الأمام والجانب يفرق. داخل الخلايا الليمفاوية، وقد تم تحديد NKRP-1 خلايا مشرقة كما الخلايا القاتلة الطبيعية، CD3 + شكل خلايا T، RM1 + كما حيدات، وCD4 + / CD8 + / CD25 + استخدمت لتي تحديد الفئات السكانية الخلية. immunocytes الفطرية، بما في ذلك المحببة، وحيدات، والخلايا القاتلة الطبيعية، تشكل 52٪ (± 1.52٪) من السكان MP-الكريات البيض، مقارنة مع 27.9٪ (± 0.66٪) في الدورة الدموية (ف <0.05). العكس من ذلك، القطعان الخلايا التائية، بما في ذلك CD4 + خلايا CD4 + CD8 + T والتنظيمية (CD4 + CD25 +)الخلايا التائية، وكذلك الخلايا الجذعية، أظهرت نسبا أقل في مقصورة النائب بالمقارنة مع تداول (ع <0.005، ن = 8). العائد خلية في المقصورة النائب من هذه السلالة تشكل ما يقرب من 3 ملايين الكريات البيض (الشكل 1).
داخل الخلايا القاتلة الطبيعية، واثنين من القطعان واضحة، استنادا إلى حجم الخلية. استخدام مؤامرة مبعثر من مبعثر إلى الأمام من قبل NKRP-1 وضع العلامات، تم تقسيم الخلايا القاتلة الطبيعية إلى الخلايا القاتلة الطبيعية الصغيرة والكبيرة. مقصورة النائب المعارض على نسبة مئوية أعلى 3 أضعاف من الخلايا الكبيرة NK (~ 30٪) مقارنة مع الدورة الدموية (~ 10٪)، في حين أن العدد الكلي للخلايا NK مماثل (الشكل 2). وعلاوة على ذلك، وذلك باستخدام معيار 4 ساعات 51 ساعة معتمدة إطلاق الفحص، وقد تم قياس NK سمية الخلايا المضادة للورم ضد عدة خلايا الورم هدفا 8. بوقت قصير، هذا الاختبار يقيم مبلغ 51 ساعة معتمدة صدر من الخلايا السرطانية نتيجة للخلايا محددة من الخلايا القاتلة الطبيعيةالصورة. قدرة الخلايا القاتلة الطبيعية من المقصورة النائب ليز الخلايا السرطانية أكبر من تعميم الخلايا القاتلة الطبيعية (الشكل 3)، والواضح ضد كل من MADB106 خط الخلية مسانج (الشكل 3A)، وYAC-1 خط الخلية القياسي (الشكل 3B) . وبالإضافة إلى ذلك، التحفيز المناعي في الجسم الحي من خلال بولي الأول: الإدارة C تنتج تأثير أكثر عمقا على NK السمية الخلوية للخلايا MP-NK من التركيز على تعميم الخلايا القاتلة الطبيعية عند استخدام خط الخلية MADB106 الهدف (الشكل 3A).
الشكل 1. مختلف تكوين الكريات البيض فرعية يميز MP-مقصورة مقارنة مع الدورة الدموية في الفئران F344. في المقصورة النائب، وجزء من مناعة فطرية وأكبر بالمقارنة مع ما يعادلها في الدورة الدموية (52٪ مقابل 28٪)، في حين أن معدل انتشار خلايا T تظهر فرق المعاكس (ص0؛ 0.005. ن = 8). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2. زيادة النسبة المئوية للخلايا القاتلة الطبيعية الكبيرة في حجرة النائب بالمقارنة مع الدورة الدموية خلايا MP-NK أظهرت ثلاثة أضعاف نسبة أعلى من الخلايا القاتلة الطبيعية الكبيرة مقارنة تعميم الخلايا القاتلة الطبيعية (30٪ مقابل 10٪، على التوالي؛ ص < 0.05)، في حين أن العدد الكلي للخلايا NK مشابه. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 3. NK العالي السمية الخلوية في المقصورة النائب بالمقارنة مع الدورة الدموية.(A) MADB106 الخلايا المستهدفة - الخلايا القاتلة الطبيعية التي تحصد من حجرة النائب عرضت على السمية الخلوية ملحوظة ضد هذا الخط الخلية، في حين تشير تعميم الخلايا القاتلة الطبيعية لا السمية الخلوية في الجسم الحي تحفيز المناعة عن طريق بولي الأول: C يزيد NK السمية الخلوية في المقصورة النائب، ولكن ليس في الدورة الدموية. (ب) خلايا YAC-1 هدف - الخلايا القاتلة الطبيعية التي تحصد من حجرة النائب عرضت على السمية الخلوية أعلى بالمقارنة مع تعميم الخلايا القاتلة الطبيعية ضد هذا الخط الخلية القياسية. التحفيز المناعي عن طريق بولي الأول: C يزيد NK السمية الخلوية في كل من مقصورة النائب والتداول. كانت تسيطر عليها أعداد الخلايا القاتلة الطبيعية لتقييم السمية الخلوية. يتم التعبير عن البيانات كما يعني ± SEM. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
الطريقة المعروضة هنا تمكن حصاد انتقائي وتدرس من السكان فريدة من MP-الكريات البيض. مقارنة تعميم أو الكريات البيضاء الطحال، ويتميز سكان النائب كتبها متميزه وتكوينها من القطعان الكريات البيض، ومستويات أعلى تفعيل، وإطلاق سراح أعلى من مختلف السيتوكينات، ومستويات مرنا أعلى من المؤيدين والسيتوكينات المضادة للالتهابات 2،3. على وجه التحديد، لقد أظهرنا أن الخلايا MP-NK هي أكثر السامة للخلايا من الخلايا القاتلة الطبيعية في الدورة الدموية ضد مختلف الخلايا المستهدفة 3،4، وتعبر عن مستويات أعلى من الإنترفيرون γ. وعموما، تشير نتائجنا أن الكريات البيض MP-NK لها سمية الخلايا أكبر من تعميم الخلايا القاتلة الطبيعية، وبالتالي قد يدل على الأهمية البيولوجية أكبر في السيطرة على الانبثاث التي تنتقل عن طريق الدم والانبثاث الرئوي. ولذلك، ينبغي ألا تعتبر الكريات البيض الطحال أو تعميم كمعيار الذهب أو السكان الافتراضي لتعكس الحالة المناعية، والدراسات الإنسانية أن كومسائدا تعتمد فقط على تعميم الكريات البيض ينبغي تفسيرها بحذر. وعلاوة على ذلك، والأمراض المختلفة إلحاق تحديدا الرئتين، والحصانة يجب أن تدرس داخل هذا الجهاز، وينبغي التمييز بين مقصورة النائب عن البينية متني، ومقصورات الفرعي لبرونكو السنخية، والواقع هو الحال باستخدام نهج نضح لدينا.
لضمان نجاح هذا الإجراء، لا بد من (ط) فتح البطن وتجاويف الصدر بسرعة بعد وقف تام للتنفس، للحفاظ على ضغط الدم التي تمكن القصوى جمع الدم في القلب، و (ب) إلى الامتناع عن مبلغ إضافي غير مرغوب فيه ثقب في البطين القلب من خلال استخدام الإبر فراشة ذو حدين صريحا. عقبة رئيسية أخرى هي التلوث المحتمل من الدم في الإرواء الرئة. كما وتلوث ملليلتر الأولى من الإرواء الرئة مع الدم في القلب، وينبغي التخلص منها كما هو موضح. لتحقيق التوحيد بين العانيملس، ويستند إلى المعايير اللازمة لبدء جمع سائل الإرواء النائب على تحول لون من الأحمر الداكن إلى شاحب اللون الأحمر. وبالإضافة إلى ذلك، فمن المستحسن لكبح الوريد الأجوف مع مرقئ غير مسننة، لتجنب نضح الوراء في الكبد، وخاصة إذا كان أحد يرغب في جمع أيضا marginating خلايا الكبد من خلال نضح على التوالي من الكبد. في حين جمع سائل الإرواء من البطين الأيسر، فمن الأهمية بمكان عدم اختراق الحاجز بين البطينين. وأخيرا، والهيبارين في برنامج تلفزيوني يستخدم لنضح أمر بالغ الأهمية لفصل السكان MP-الكريات البيض من الشعيرات الدموية، وبالتالي يجب أن تستخدم.
قد تحدث عدة الأعطال عند تنفيذ هذا الإجراء، ولكن معظمهم من تصحيحه. إذا كان هناك تسرب من موقع اختراق الإبرة في القلب، يقترح أن يختم عضلة القلب تمزق باستخدام الملقط حادة الانف مع نصائح مسننة المحيطة إبرة فراشة. إذا إبرة ينزلق خارج، ستوص المضخة تحوي، وإعادة إدراج الإبرة في موقعها اختراق الأصلي، وإعادة تشغيل المضخة. إذا توقف تدفق جمع، ووقف جمع ضغط الفراغ، انتقال الإبرة داخل البطين، وإعادة جمع. إذا كان تضخم الأذين الأيسر، وليس عن طريق خفض جمع المستمر، وانخفاض معدل تدفق المضخة. بشكل عام، وارتفاع معدل تدفق تحوي قد يضر تشكيل الشعرية، ويمكن أن تصبح الرئتين وتورم.
الطريقة الموصوفة هنا تمكن الحصاد الانتقائي للسكان الكريات البيض النائب في إجراء بسيط نسبيا. وبالنظر إلى أن هذه الفئة من السكان يسلك خصائص فريدة بالمقارنة مع الكريات البيض من المقصورات المناعية الأخرى، وأن هذه الفئة من السكان قد الأهمية البيولوجية والسريرية للكائن الحي، نقترح استخدام هذه الطريقة عندما يكون ذلك ممكنا، وخصوصا عندما دراسة العمليات والأمراض المرتبطة الرئوية. فمن غير معروف حتى الآن ما إذا كانت الخلايا النائب، الذي يقيم في capill الرئةبرج الحمل على حصاد الخلايا، قد نضجت في الرئتين، أو ما إذا كانت ستبقي على خصائصها لدى خروجه من الرئتين. كما الكريات البيض من حجرات أخرى قد لا تعبر عن الملف الشخصى السكان النائب، وكما لا يمكن الوصول إليها في البشر، ونحن نقترح أيضا استخدام هذه الطريقة لتوضيح المؤشرات الحيوية تعميم المحددة التي ترتبط مع الخصائص النائب فريدة من نوعها.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
Acknowledgments
تم دعم المؤلفين وهذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة / NCI منحة # R01CA172138 (لSBE).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Autoclud Peristaltic pump | |||
| Butterfly needle | OMG | 26G | |
| Butterfly needle | OMG | 21G*3/4" | |
| Syringe | Pic solution | 1 ml | |
| Syringe | Pic solution | 2.5 ml | |
| Syringe | Pic solution | 5 ml | |
| Syringe | Pic solution | 10 ml | |
| Syringe | Pic solution | 25 ml | |
| Blunted-edged forceps | |||
| Scissors | |||
| hemostat | |||
| Tissue forceps | |||
| Heparin sodium porcine mucosa (perservative free) | Sigma Aldrich |
References
- Kuebler, W. M., Goetz, A. E. The marginated pool. Eur Surg Res. 34, 92-100 (2002).
- Benish, M., et al. The marginating-pulmonary immune compartment in mice exhibits increased NK cytotoxicity and unique cellular characteristics. Immunol Res. 58, 28-39 (2014).
- Melamed, R., et al. The marginating-pulmonary immune compartment in rats: characteristics of continuous inflammation and activated NK cells. J Immunother. 33, 16-29 (2010).
- Shakhar, G., et al. Amelioration of operation-induced suppression of marginating pulmonary NK activity using poly IC: a potential approach to reduce postoperative metastasis. Ann Surg Oncol. 14, 841-852 (2007).
- Smyth, M. J., Godfrey, D. I., Trapani, J. A. A fresh look at tumor immunosurveillance and immunotherapy. Nat Immunol. 2, 293-299 (2001).
- Talmadge, J. E., Meyers, K. M., Prieur, D. J., Starkey, J. R. Role of NK cells in tumour growth and metastasis in beige mice. Nature. 284, 622-624 (1980).
- Grimm, E. A., Mazumder, A., Zhang, H. Z., Rosenberg, S. A. Lymphokine-activated killer cell phenomenon. Lysis of natural killer-resistant fresh solid tumor cells by interleukin 2-activated autologous human peripheral blood lymphocytes. J Exp Med. 155, 1823-1841 (1982).
- Melamed, R., et al. Marginating pulmonary-NK activity and resistance to experimental tumor metastasis: suppression by surgery and the prophylactic use of a beta-adrenergic antagonist and a prostaglandin synthesis inhibitor. Brain Behav Immun. 19, 114-126 (2005).
- O'Dea, K. P., et al. Lung-marginated monocytes modulate pulmonary microvascular injury during early endotoxemia. Am J Respir Crit Care Med. 172, 1119-1127 (2005).
- Sorski, L., Melamed, R., Ben-Eliyahu, A unique role for marginating-pulmonary and marginating-hepatic NK cells in cancer anti-metastatic surveillance and in immunotherapy. Annual Meeting of the Psychoneuroimmunology Research Society, Philadelphia, USA.(2014, , (2014).
- Levi, B., et al. Continuous stress disrupts immunostimulatory effects of IL-12). Brain Behav Immun. 25, 727-735 (2011).
