Abstract
Внутриглазное путь введения лекарственного средства обеспечивает доставку высоких концентраций лекарственных препаратов, в то время как свести к минимуму их системной абсорбции. Некоторые лекарственные средства вводят в переднюю камеру или стекловидное тело, и внутриглазное инъекций является эффективным в лечении различных заболеваний интраокулярных. Кролик глаза широко используются для офтальмологических исследований, поскольку животное прост в обращении и экономичными по сравнению с другими млекопитающими, а размер глаз кролика похож на человеческий глаз. С помощью 30 G иглы, препараты могут быть введены в внутрикамерное и интравитреальных пространств глаз кролика. Глазные яблоки не будут затем замораживают до анализа, и можно разделить на водный юмор, стекловидное тело и сетчатку / хориоидеи. Стекловидного тела и сетчатки глаза / сосудистое образцы могут быть гомогенизируют и солюбилизировали перед анализом. Затем, иммунологические тесты могут быть выполнены для измерения концентрации внутриглазного препаратов в каждом отделении. Соответствующие модели фармакокинетики могут бытьиспользуется для вычисления нескольких параметров, таких, как период полураспада и максимальной концентрации лекарственного средства. Кролик глаз может быть хорошей моделью для исследования фармакокинетики внутриглазного препаратов.
Introduction
До появления внутриглазной доставки лекарственного средства, основной проблемой медицинской терапии внутриглазных заболеваний была эффективность, с которой препарат может проникать в глаза. Кровь-глазное барьер препятствует множество веществ, в том числе наркотиков, диффузию в глаза. Поэтому концентрации лекарственных средств, которые выше терапевтических уровней не могут быть легко получены. Метод внутриглазного введения лекарственного средства, в том числе внутрикамерное и интравитреальных инъекций, могут непосредственно обойти кровью глазное барьер 1-3, таким образом , что терапевтические концентрации препаратов могут быть достигнуты в глаза 4,5.
Соответственно, интравитреальную доставки лекарственных средств стала популярным методом лечения в течение нескольких внутриглазных заболеваний 5,6. Например, инъекция широко выполняется для связанных с возрастом дегенерация желтого пятна, диабетическая ретинопатия, вены сетчатки окклюзий и внутриглазных инфекций 7-10. В частности, так каквведение анти-VEGF препаратами, частота интравитреальных инъекций значительно вырос для лечения заболеваний сетчатки. Поэтому, важно, чтобы понять, внутриглазное фармакокинетику таких препаратов для оценки эффективности и безопасности медицинской терапии.
Хотя внутриглазное введение наркотиков считается крупным прорывом в медицинской терапии глазных заболеваний, мониторинг концентрации лекарственного средства в пределах глазного яблока является технически требовательным. Так как человеческий глаз содержат лишь небольшие количества внутриглазной жидкости (около 200 мкл) и стекловидные (около 4,5 мл, таблица 1), что технически трудно получить достаточное количество жидкости , глазное для измерения концентрации лекарственного средства. Кроме того, методы, которые используются для получения влаге глаза, такие, как стекловидное тело или постукивания передней камеры пункции, может привести к повреждению глазной ткани и привести к серьезным осложнениям, таким как катаракта, эндофтальмит, илиотслойка сетчатки 11,12. Соответственно, животные модели используются в фармакокинетических исследованиях , обычно используемых интраокулярных препаратов 13. Среди этих моделей на животных, кроликов или обезьян являются наиболее часто используются животные.
Кролики, которые являются мелкие млекопитающие отряда зайцеобразных в семье зайцевых, находятся в нескольких частях мира. Потому что кролики не агрессивны, они просты в обращении, использовать в эксперименте, и наблюдать. Более низкая стоимость, легкая доступность животного, подобного размера глаз для людей, и большая база данных информации для сравнения пользу проведения фармакокинетических исследований с использованием глаз кролика. В данной работе, протокол для фармакокинетических исследований интраокулярных препаратов в глаз кролика описано.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Наш протокол следует рекомендациям по Уходу за животными и использованию комитета (IACUC) Сеульского национального университета Бунданг больницы, который одобрил все процедуры животных и методов по уходу за животными, представленными в данном протоколе. IACUC находится в полном соответствии с восьмым изданием Руководства по уходу и использованию лабораторных животных (2011). Все процедуры были выполнены с соблюдением руководящих принципов Ассоциации по исследованиям в области зрения и офтальмологии Заявление по использованию животных в офтальмологических и Vision Research в животных. Отдельные клетки были использованы для размещения кроликов. Дополнительные операции или подготовка перед проведением этого эксперимента (то есть, стерилизация) может не потребоваться.
1. Внутриглазное введение препарата в глаза кролика
- Обезболить здоровых новозеландских белых кроликов весом 1,5-2 кг при внутримышечной инъекции смеси tiletamine гидрохлорида и zolazepamгидрохлорид (15 мг / кг) и гидрохлорид ксилазина (5 мг / кг). Проверка анестезии путем мониторинга (глазной рефлекс моргания) или на слух крайнем случае.
Примечание: Если внутриглазное препарат связывается с глазными пигментов, степень связывания может вызвать изменение глазного фармакокинетики препарата. Например, период полураспада пигмента-связывающего препарата в стекловидном и водных юморов пигментированных кроликов может быть увеличена по сравнению с , что в 14 - кроликов - альбиносов. В этом случае, данные, полученные из пигментированных глаз кроликов могут быть более похожи, и это применимо для человеческого глаза, как человеческие глаза имеют различную степень пигментации и альбинос глаз кролика не может представлять человеческие аналоги. Таким образом, принимая во внимание взаимодействие наркотиков пигмент, использование пигментных или кроликов-альбиносов должны быть тщательно продуманы и результаты следует интерпретировать вместе с деформацией (пигментация) кролика. Тем не менее, кроликов-альбиносов рекомендуются для использования в исследованиях, сравнивающих фармакокинетические свойства как DВзаимодействие ковер-пигмент может быть фактором, который мешает в сравнении.- Нанесите местный анестетик с 1% пропаракаина гидрохлорид офтальмологических глазных капель. Используйте ветеринарную мазь (2% гидроксипропилметилцеллюлоза), чтобы предотвратить глаз сухости до выхода из наркоза.
ПРИМЕЧАНИЕ: Никогда не оставляйте кролика без присмотра во время наркозом.
- Нанесите местный анестетик с 1% пропаракаина гидрохлорид офтальмологических глазных капель. Используйте ветеринарную мазь (2% гидроксипропилметилцеллюлоза), чтобы предотвратить глаз сухости до выхода из наркоза.
- Разбавить ученика с одной или двумя каплями фенилэфрина гидрохлорида и тропикамид.
- Для хирургической подготовки перед внутриглазной инъекции применяют 5-10% повидон-йод к периокулярная кожи с помощью ватного тампона 5. Поместите одну каплю 5-10% повидон-йода на конъюнктиву глаза.
- Администрирование внутриглазного препараты либо интравитрально или intracamerally с использованием асептических методов 5.
Примечание: Препарат всасывается в системный кровоток может также проникать парного глаза. Когда препарат вводят в оба глаза, концентрация лекарственного средства в одном глазу может влиять лекарственного препарата, введенногодругой глаз. Если подтвердится, что эффект контрлатеральной инъекции можно пренебречь в качестве лекарственного средства в системный кровоток не может проникнуть в другой глаз, использование обоих глаз для внутриглазных инъекций можно рассматривать, поскольку он экономичен и сводит к минимуму количество животных, умерщвленных для фармакокинетические исследования. Для исследования фармакокинетики на системной концентрации ниже внутриглазной инъекции, использование только одного глаза подходит.- Для интравитреальных инъекций, вводят препарат интравитрально 1 мм за хирургической лимба в superotemporal квадранта с использованием 30 G иглы и либо коммерческие 1 мл шприцы, шприцы для инсулина, или стеклянные шприцы перпендикулярно к поверхности склеры 5.
Примечание: Объем препарата используется для внутрикамерного и инъекции в стекловидное тело изменяется в зависимости от наркотиков под следствием. Для фармакокинетических экспериментов по анти-VEGF агентов с использованием глаз кролика, предыдущие исследования использовали 0,025, 0,05 (наиболее распространенный), или 0,1 мл бевацизумаб или ранибизумаба для внутрикамерного или инъекции в стекловидное тело. В наших предыдущих исследованиях по интраокулярных фармакокинетику анти-фактора роста эндотелия сосудов, 0,05 мл бевацизумаба 15, 0.025 мл ранибизумаба, или 0,03 мл VEGF-Trap 16 были использованы. Самый большой объем безопасным без пункции считается 0,1 мл, хотя было мало доказательств в поддержку этого 17. Если чрезмерный объем вводят либо intracamerally или интравитрально, внутриглазное давление значительно увеличивается. В дополнение к повреждения зрительного нерва непосредственно вызванного повышением внутриглазного давления (МИОП), а именно глаукомой повреждение зрительного нерва, в крайних случаях МИОП приводит к нарушению глазного перфузии и центральной окклюзии артерии сетчатки, которая является аналогом инсульта в головном мозге. - Для внутрикамерное инъекций, вводить препарат в переднюю камеру, вставив 30 г иглу через корнеосклеральный лимба с кромками вверх и вперед его рапо импульсу к радужной оболочке плоскости, чтобы свести к минимуму риск травмы для радужной оболочки или линзы.
Примечание: В зависимости от лекарственной формы, иглы больше, чем 30 G могут быть использованы. Условия, требующие большего калибра иглы включают в себя препараты, содержащие микросферы, большие белковые препараты, а также препараты с высокой вязкостью. - После инъекции, сжимают место инъекции стерильным ватным наконечником аппликатором, чтобы способствовать заживлению ран.
Примечание: Как правило, 30 сек достаточно для заживления ран, когда игла 30 G используется для внутриглазной инъекции. Тем не менее, если больший калибр игла используется для внутриглазной инъекции, более длительное время было бы целесообразно для раны уплотняющей, чтобы минимизировать утечку из раны склеротомия. Для того, чтобы проверить на наличие утечек склеротомия рану важно, чтобы гарантировать, что количество внутриглазного лекарственного средства, используемого сразу после внутриглазной инъекции является такой же, как впрыскиваемого количества, особенно, если используется больший калибр иглы.
- Для интравитреальных инъекций, вводят препарат интравитрально 1 мм за хирургической лимба в superotemporal квадранта с использованием 30 G иглы и либо коммерческие 1 мл шприцы, шприцы для инсулина, или стеклянные шприцы перпендикулярно к поверхности склеры 5.
- Соблюдайте подопытных кроликов ежедневно в течениене одну неделю, а раз в неделю после этого, любой признак тяжелой внутриглазного воспаления (конъюнктивальной инъекции и гипопионом) до эвтаназии.
ПРИМЕЧАНИЕ: Анальгетики после инъекции не требуется в качестве внутриглазной инъекции с использованием 30 G иглы является минимально инвазивной процедурой, которая не сопровождается послеоперационной боли. Не возвращать животное, которое перенес операцию на компании других животных, пока полностью не выздоровел.
2. Подготовка проб
- Для энуклеации, эвтаназии кроликов в различные моменты времени (например., 1 час или 1, 2, 5, 9, 14 или 30 дней) после внутриглазной инъекции наркотиков.
Примечание: Эти моменты времени зависят от препарата интереса и известных профилей фармакокинетики. Для каждой временной точки, использовать по крайней мере два глазных яблок 13. Для надежного качества данных, отбор проб время следует выбирать тщательно, по крайней мере четыре временных точках со сбалансированной выборки по крайней мере временной промежуток двух периодов полураспада препарата 13 18, в частности, более чем 1 раз точка в течение первых 24 часов имеет решающее значение. Соответственно, для макромолекулы (> 1000 Da) 18, период выборки , такие как 1 час и 1, 2, 5, 9, 14 и 30 дней 19 может быть хорошим вариантом. Для малых молекул (≤1,000 Da), 1, 2, 4 и 8 ч и 1, 3 и 7 дней может быть одним из вариантов 20. В зависимости от молекулярной массы, период дискретизации может быть дополнительно модифицирован.- Для эвтаназии, администрирование 10 мл 15% внутривенной KCl быстро после того, как обезболивающее кроликов с внутримышечной инъекцией смеси tiletamine гидрохлорид, гидрохлорид zolazepam (15 мг / кг) и гидрохлорида ксилазина (5 мг / кг).
- Откройте глазная щель с втягивающим веко. Сделать 360 ° конъюнктивы разрез 2-3 мм кзади от лимба и расширить его кзади от рассечения грonjunctiva и Тенонова капсула из земного шара.
- Вырезать мышц глазного яблока, близкие к их вставки в мире. Хомут зрительного нерва с изогнутыми щипцами, а затем перерезать нерв между щипцами и земного шара. Удалить сам глазного яблока, оставляя окружающие ткани нетронутыми. После энуклеации, немедленно заморозить глазные яблоки и хранить их при температуре -80 ° С.
ПРИМЕЧАНИЕ: Там может быть два варианта немедленного замораживания. Если концентрация лекарственного средства измеряется на очень ранней стадии (то есть. Менее 1 ч), жидкий азот может быть более подходящим для обеспечения более своевременного замораживания глазного яблока. Тем не менее, в течение последующих периодов, лед может быть использован, чтобы немедленно охладить глазное яблоко, а затем морозильная камера может быть использована для хранения глазных яблок при -80 ° С. - После получения глазных яблок для всех временных точках, отделить замерзшие глазные яблоки на три отсека, стекловидное тело, водянистой влаге, и сетчатка / сосудистое. Отделить эти отсеки перед defrosтин.
Примечание: Наиболее важным моментом для разделения на три отсека является скорость процедуры. Глазное яблоко следует отделить очень быстро, прежде чем размораживании и процедура может быть выполнена на льду, чтобы задержать оттаивание.- Чтобы открыть весь земной шар, сделать надрез в роговице лимба (300 ° или выше) с скальпелем. Получение замороженного отсека перед радужной оболочки глаза, водянистой влаге.
- Удалите замороженный радужной оболочки и линзы, потянув и раздражающие ткани с помощью пинцета. Когда стекловидное тело становится доступным, получение замороженного стекловидного тела, отделяя его от остальных тканей (Сетчатка / сосудистое / склеры).
- Используя лезвие скальпеля № 15, отделить сетчатку / сосудистое ткани от основного склеры.
- Для иммуноанализа, разморозить водные образцы юмора, и измерить объем каждого образца. Измерение веса замороженных образцов путем вычитания веса пустой трубки от диаметра трубки, содержащей тон заморожен образец.
Примечание: Поскольку удельный вес замороженных образцов составляет приблизительно 1, вес каждого образца может быть использован для вычисления объема образца. - Взвесить стекловидных образцов, размораживать образцы, и растворять их в 1,0 мл фосфатно-буферном солевом растворе, содержащем 1% бычьего сывороточного альбумина на ротатор в течение ночи при 4 ° С. Затем центрифугировать образцы при 387 мкг в течение 10 мин 21.
- Взвесьте замороженные сетчатки глаза / сосудистое образцы для гомогенизации. Добавьте реагент экстракции белка соотношении ткани и реагента 1:10 (1 г ткани / 10 мл реагента). Однородный ткани с использованием предварительно охлажденных microhomogenizer. Центрифуга лизированных образца в течение 10 мин при 12,000-20,000 XG и передавать супернатант в охлажденной EPP трубки.
3. иммуноферментный
Примечание: несколько аналитических методик могут быть использованы для измерения концентрации белка. Выберите подходящий количественный метод, depending на дальности обнаружения. В кратком изложении, выбранный режим мониторинга ионов ВЭЖХ может обнаружить уровни пикограммовых молекулы, в то время как ЖХ-МС / МС может обнаружить нанограммовые и пикограммовых уровни белка для профилирование с режимом МРМ / PRM, соответственно. Предел обнаружения ELISA считается на уровне пикограммовом.
- Для непрямого твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) для измерения концентрации анти-VEGF-агентов, используют наборы ELISA в 96-луночные планшеты для обнаружения препарата интереса и получения стандартной кривой известных концентраций лекарственного средства.
- Развести стекловидный, водный юмор, и сетчатке / сосудистое образцы с 0,1% бычьего сывороточного альбумина в 1X фосфатно-буферном солевом растворе (PBS) до концентрации, которые находятся в пределах линейного диапазона, и использовать их для анализа.
- Разделить образцы на аликвоты на пластине в количестве 100 мкл / лунку. Инкубируют в течение ночи при температуре 4 ° С, а затем моют Пластину трижды по 200 мкл промывочного раствора 0.05% Tween20 в 1x PBS.
Примечание: Настоящий анти-VEGF-в образце, действует в качестве первичного антитела для ELISA; Поэтому дополнительное использование первичного антитела не является необходимым. - Разведите вторичные антитела до 1: 20000 в 0,1% BSA в 1x PBS и добавляют 100 мкл разбавленного раствора на лунку. После инкубации планшет с разбавленным вторичными антителами в течение ночи при температуре 4 ° С, измеряют оптическую плотность при длине волны 450 нм. Вычтите средней нулевой стандарт оптической плотности от среднего дублирующих показаний для каждого стандарта и образца.
- Создать стандартную кривую, основанную на относительной светового сигнала из растворов препарата с известной концентрацией путем уменьшения данных с использованием компьютерного программного обеспечения, способные генерировать четыре логистическому а (4-PL) аппроксимации кривой, такой как Софтмакс Pro. Для создания стандартной кривой, кривая подходит 4-PL можно получить, нажав на [4-параметра] в [Standard Curve] - [Fit].
- Вычислить концентрацию лекарственного средства в образцах фром стандартной кривой.
Примечание: Пределы обнаружения (LOD) анти-VEGF препаратов были исследованы в нашем эксперименте. LOD бевацизумаба был 0.024-3.125 нг / мл и у афлиберцепта был 0.039-10 нг / мл.
4. Методы фармакокинетического анализа
ПРИМЕЧАНИЕ: Для анализа ПК можно использовать либо полигамное или без полигамное анализа. В полигамное анализе, диспозиция поведение молекул можно объяснить с помощью уравнения (модели). Таким образом, анализ полигамное PK может предсказать концентрацию в любой момент времени т, тогда как не-полигамное модель не может визуализировать или предсказать профили концентрации времени для других режимов дозирования. Тем не менее, установка из полигамное моделей может быть сложным и длительным процессом. В отличие от этого, предположения менее ограничительным в не полигамное модели. , Не полигамное метод прост и обычно используется для расчета фармакокинетических параметров, таких как период полураспада, клиренс и объем распределения.Мы выбрали полигамное модели для фармакокинетических исследований по анти-VEGF агентов.
- Проанализировать данные о концентрации лекарственного средства с полигамное моделей с использованием программного обеспечения моделирования, таких как программное обеспечение Phoenix WinNonlin.
- Нажмите [модель PK] в [WNL5 классического моделирования] и карта времени наблюдения, вводимой дозы и концентрации лекарственного средства в меню [Setup].
- Выберите полигамное модель (например, количество отсеков) во вкладке [Выбор модели], и нажмите кнопку [Execution] для расчета параметров модели.
- После анализа, выберите конечную модель отсека , которая наилучшим образом описывает данные о концентрации лекарственного средства на основе следующих критериев: (. , Например, стандартная ошибка) (1) Akaike информационный критерий, (2) точность оценок параметров, и (3) графический анализ (например., СОГЛАСИИ участков).
- Вычислить фармакокинетические параметры , представляющие интерес, такие как период полураспада (Т 1/2) и площади под временным ConcentraКривая ция (AUC), от параметров модели и уравнений, приводимых в действие полигамное модели.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Процедура , которая используется для проведения Интравитреальная инъекции препарата интереса глаз кролика стерильными методами показана на рисунке 1. Обработанные глаза энуклеировали в запланированное время и хранили при -80 ° С. Для анализа, три отсека, водянистой влаге, стекловидное тело и сетчатку / хориоидеи, отделяются от замороженных глаз кролика, как показано на рисунке 2. Образцы отсеков готовятся к ELISA. После инкубации с вторичным антителом, измеряют оптическую плотность в 96-луночный планшет, который содержит известные концентрации препарата интереса к стандартной кривой , и образцы из трех отсеков , которые были собраны в различные моменты времени после инъекции в стекловидное тело (рис 3). Данные концентрации , которая рассчитывается по стандартной кривой (Дополнительный рисунок 1) может быть установлен на pharmacokineкрестики модель, и фармакокинетические параметры могут быть определены из подобранной линии (рисунок 4). На рисунке 4, фармакокинетики интравитрально вводили бевацизумаб в vitrectomized и не-vitrectomized глаза оценивали и сравнивали. Полигамное анализ ПК был выполнен, в котором содержится следующее уравнение для объяснения поведения PK.
C (T) = C 1 ехр (- к 1 т) + C '2 ехр (- к 2 т)
С (мкг / мл): Концентрация в любой момент времени Т (час)
C 1, C 2: задняя экстраполированные перехватывает фазы распределения и выведения
K 1, K 2: константы скорости при йРаспределение е и фазы выведения
Как показано на рисунке 4, расчетная концентрация в соответствии с подобранной модели подобраны достаточно хорошо , чтобы фактические измеренные значения. Там не было никаких существенных различий в стекловидное концентрации бевацизумаб и фармакокинетические параметры, такие как период полураспада между с и без витрэктомии. Этот эксперимент показывает, что роль стекловидного тела в распределении и клиренс бевацизумаба незначительна.
Рисунок 1:. Процедура выполнения Интравитреальная инъекциями интраокулярных наркотиков в глаз кролика под наркозом Асептические методы используются с применением 5% повидон-йод капель и путем подготовки кожи, а также инъекции в стекловидное препарата интереса осуществляется с помощью шприца , снабженного остроумиега 30 G игла. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рис . 2: Разделение Студеного Кролик Eyeball на три отсеками После разреза склеры с хирургическим скальпелем и удаление радужной оболочки, водный юмор и стекловидного тела могут быть разделены. Впоследствии, сетчатка / сосудистое могут быть тщательно отделены от склеры, который является белый наружный слой глазного яблока. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 3: твердофазный иммуноферментныйСорбент анализа (ELISA) внутриглазного лекарственного средства в образцов , представляющих три отсека. На этом рисунке показана 96-луночного планшета, который используется для иммуноферментного анализа. После инкубации с вторичным антителом, изменение цвета отмечается в скважинах. Оптическая плотность цвета зависит от концентрации препарата , представляющего интерес. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рис . 4: Установка наблюдаемыми данными в Фармакокинетические модели В этом эксперименте для сравнения фармакокинетики бевацизумаба в vitrectomized и не vitrectomized глаза, фактическая интравитреальную концентрация бевацизумаба представлена в виде точек. Подобранные кривые для данных концентраций, которые приводятся в движение фармакокинетическимимодель, которые представлены двумя линиями, рисуются и используются для расчета фармакокинетических параметров, таких, как период полураспада препарата. Столбики ошибок указывают 95% доверительные интервалы. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Дополнительное Рисунок 1:. Стандартная Кривая ELISA используется для обнаружения бевацизумаба Это достигается с помощью программного обеспечения , способного генерировать четыре параметра логистической кривой приспособит. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы загрузить этот файл.
| вид | стекловидный | Скользкий юмор | обращатьсяENCE |
| мышь | 5.3 мкл | 4,4 мкл | 22 |
| крысиный | 50-55 мкл | 13,6 мкл | 22, 24 |
| Кролик | 1.15-1.7 мл | 350 мкл | 23, 27, 28 |
| Обезьяна | 3,0-4,0 мл | 102 мкл | 23, 26, 28 |
| Человек | 3,0-5,0 мл | 144 - 247 мкл | 23, 20, 21, 28 |
Таблица 1: Стекловидное и водный раствор Юмор Объем в различных видах 17,22-30.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Zoletil | Virbac Laboratories, Carros Cedex, France | ||
| Xylazine hydrochloride | Fort Dodge Laboratories, Fort Dodge, IA | ||
| Proparacaine hydrochloride (Alcaine) | Alcon laboratories, Fort Worth, TX | ||
| Phenylephrine hydrochloride and tropicamide | Santen Pharmaceutical, Co., Osaka, Japan | ||
| Recombinant Human VEGF 165 | R&D systems | 293-VE-050 | |
| Carbobate-Bicarbonate buffer | SIGMA | C3041-50CAP | |
| Nunc Microwell 96F w/lid Nunclon D Si | Thermo SCIENTIFIC | 167008 | 96 well plate |
| Bovine Serum Albumin (BSA) 25 g(Net) | BOVOGEN | BSA025 | |
| Phosphate Buffered Saline (PBS) pH 7.4 (1x), 500 ml | gibco | 10010-023 | |
| Sheep anti-Human IgG Secondary Antibody, HRP conjugate | Thermo SCIENTIFIC | PA1-28652 | |
| Goat Anti-Human IgG Fc(HRP) | abcam | ab97225 | |
| Goat anti-Human IgG, Fab'2 Secondary Antibody, HRP conjugate | Thermo SCIENTIFIC | PA1-85183 | |
| CelLytic MT Cell Lysis Reagent | SIGMA | C3228-50ML | lysis buffer |
| 100 Scalpel Blades | nopa instruments | BLADE #15 | |
| 100 Scalpel Blades | nopa instruments | BLADE #10 | |
| Feather surgical blade stainless steel | FEATHER | 11 | |
| 1-StepTM TMB-Blotting substrate solution, 250 ml | Thermo SCIENTIFIC | 34018 | |
| Stable Peroxide Substrate Buffer (10x), 100 ml | Thermo SCIENTIFIC | 34062 | |
| Softmax Pro | Molecular Devices | v.5.4.1 | software for generating standard curve |
| SAAM II | Saam Institute, Seattle, WA | software for pharmacokinetic modeling | |
| Phoenix WinNonlin | Pharsight, Cary, NC | v. 6.3 | software for pharmacokinetic modeling |
| Avastin (bevacizumab) | Genentech |
References
- Urtti, A. Challenges and obstacles of ocular pharmacokinetics and drug delivery. Adv Drug Deliv Rev. 58, 1131-1135 (2006).
- Geroski, D. H., Edelhauser, H. F. Drug delivery for posterior segment eye disease. Invest Ophthalmol Vis Sci. 41, 961-964 (2000).
- Ghate, D., Edelhauser, H. F. Ocular drug delivery. Expert Opin Drug Deliv. 3, 275-287 (2006).
- Del Amo, M. E., Urtti, A. Current and future ophthalmic drug delivery systems. A shift to the posterior segment. Drug Discov Today. 13, 135-143 (2008).
- Avery, R. L., et al. Intravitreal injection technique and monitoring: updated guidelines of an expert panel. Retina. 34, Suppl 12. S1-S18 (2014).
- Kim, Y. C., Chiang, B., Wu, X., Prausnitz, M. R. Ocular delivery of macromolecules. J Control Release. 190, 172-181 (2014).
- Group, C. R., et al. Ranibizumab and bevacizumab for neovascular age-related macular degeneration. N Engl J Med. 364, 1897-1908 (2011).
- Campochiaro, P. A., et al. Sustained benefits from ranibizumab for macular edema following central retinal vein occlusion: twelve-month outcomes of a phase III study. Ophthalmology. 118, 2041-2049 (2011).
- Brown, D. M., et al. Ranibizumab for macular edema following central retinal vein occlusion: six-month primary end point results of a phase III study. Ophthalmology. 117, 1124-1133 (2010).
- Diabetic Retinopathy Clinical Research Network. Aflibercept, bevacizumab, or ranibizumab for diabetic macular edema. N Engl J Med. 372, 1193-1203 (2015).
- McCannel, C. A. Meta-analysis of endophthalmitis after intravitreal injection of anti-vascular endothelial growth factor agents: causative organisms and possible prevention strategies. Retina. 31, 654-661 (2011).
- Meyer, C. H., et al. Incidence of rhegmatogenous retinal detachments after intravitreal antivascular endothelial factor injections. Acta Ophthalmol. 89, 70-75 (2011).
- Del Amo, E. M., Urtti, A. Rabbit as an animal model for intravitreal pharmacokinetics: Clinical predictability and quality of the published data. Exp Eye Res. 137, 111-124 (2015).
- Hughes, P. M., Krishnamoorthy, R., Mitra, A. K. Vitreous disposition of two acycloguanosine antivirals in the albino and pigmented rabbit models: a novel ocular microdialysis technique. J Ocul Pharmacol Ther. 12, 209-224 (1996).
- Ahn, J., et al. Pharmacokinetics of Intravitreally Injected Bevacizumab in Vitrectomized Eyes. J Ocul Pharmacol Ther. , (2013).
- Park, S. J., et al. Intraocular pharmacokinetics of intravitreal vascular endothelial growth factor-Trap in a rabbit model. Eye (Lond). 29, 561-568 (2015).
- Jager, R. D., Aiello, L. P., Patel, S. C., Cunningham, E. T. Risks of intravitreous injection: a comprehensive review. Retina. 24, 676-698 (2004).
- Durairaj, C., Shah, J. C., Senapati, S., Kompella, U. B. Prediction of vitreal half-life based on drug physicochemical properties: quantitative structure-pharmacokinetic relationships (QSPKR). Pharm Res. 26, 1236-1260 (2009).
- Ahn, S. J., et al. Intraocular pharmacokinetics of ranibizumab in vitrectomized versus nonvitrectomized eyes. Invest Ophthalmol Vis Sci. 55, 567-573 (2014).
- Mochizuki, K., et al. Intraocular kinetics of ceftazidime (Modacin). Ophthalmic Res. 24, 150-154 (1992).
- Bakri, S. J., et al. Pharmacokinetics of intravitreal ranibizumab (Lucentis). Ophthalmology. 114, 2179-2182 (2007).
- Kondo, T., Miura, M., Imamichi, M. Measurement method of the anterior chamber volume by image analysis. Br J Ophthalmol. 70, 668-672 (1986).
- Toris, C. B., Yablonski, M. E., Wang, Y. L., Camras, C. B. Aqueous humor dynamics in the aging human eye. Am J Ophthalmol. 127, 407-412 (1999).
- Remtulla, S., Hallett, P. E. A schematic eye for the mouse, and comparisons with the rat. Vision Res. 25, 21-31 (1985).
- Barza, M. Animal models in evaluation of chemotherapy of ocular infections. Experimental Models in Antimicrobial Chemotherapy. Zak, O., Sande, M. A. , Harcourt Brace Jovanovich. 187-211 (1986).
- Hughes, A. A schematic eye for the rat. Vision Res. 19, 569-588 (1979).
- Maurice, D. M., Mishima, S. Ocular pharmacokinetics. 69, Springer Verlag. (1984).
- Greenbaum, S., Lee, P. Y., Howard-Williams, J., Podos, S. M. The optically determined corneal and anterior chamber volumes of the cynomolgus monkey. Curr Eye Res. 4, 187-190 (1985).
- Ruby, A. J., Williams, G. A., Blumenkranz, M. S. Vitreous humor. Foundations of Clinical Ophthalmology. , Lippincott Williams & Wilkins. (2006).
- Jaffe, G. J., Ashton, P., Andrew, P. Intraocular Drug Delivery. , Taylor & Francis. (2006).
- Iyer, M. N., et al. Clearance of intravitreal moxifloxacin. Invest Ophthalmol Vis Sci. 47, 317-319 (2006).
- Fauser, S., et al. Pharmacokinetics and safety of intravitreally delivered etanercept. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 242, 582-586 (2004).
- Scholes, G. N., O'Brien, W. J., Abrams, G. W., Kubicek, M. F. Clearance of triamcinolone from vitreous. Arch Ophthalmol. 103, 1567-1569 (1985).
- Stastna, M., Behrens, A., McDonnell, P. J., Van Eyk, J. E. Analysis of protein composition of rabbit aqueous humor following two different cataract surgery incision procedures using 2-DE and LC-MS/MS. Proteome Sci. 9, 8 (2011).
- Sinapis, C. I., et al. Pharmacokinetics of intravitreal bevacizumab (Avastin(R)) in rabbits. Clin Ophthalmol. 5, 697-704 (2011).
- Gaudreault, J., Fei, D., Rusit, J., Suboc, P., Shiu, V. Preclinical pharmacokinetics of Ranibizumab (rhuFabV2) after a single intravitreal administration. Invest Ophthalmol Vis Sci. 46, 726-733 (2005).
- Maurice, D. Review: practical issues in intravitreal drug delivery. J Ocul Pharmacol Ther. 17, 393-401 (2001).
- Laude, A., et al. Intravitreal therapy for neovascular age-related macular degeneration and inter-individual variations in vitreous pharmacokinetics. Prog Retin Eye Res. 29, 466-475 (2010).
- Christoforidis, J. B., Carlton, M. M., Knopp, M. V., Hinkle, G. H. PET/CT imaging of I-124-radiolabeled bevacizumab and ranibizumab after intravitreal injection in a rabbit model. Invest Ophthalmol Vis Sci. 52, 5899-5903 (2011).
- Sangwan, V. S., Pearson, P. A., Paul, H., Comstock, T. L. Use of the Fluocinolone Acetonide Intravitreal Implant for the Treatment of Noninfectious Posterior Uveitis: 3-Year Results of a Randomized Clinical Trial in a Predominantly Asian Population. Ophthalmol Ther. 4, 1-19 (2015).
- Bajwa, A., Aziz, K., Foster, C. S. Safety and efficacy of fluocinolone acetonide intravitreal implant (0.59 mg) in birdshot retinochoroidopathy. Retina. 34, 2259-2268 (2014).
- Sanford, M. Fluocinolone acetonide intravitreal implant (Iluvien(R)): in diabetic macular oedema. Drugs. 73, 187-193 (2013).
- Haller, J. A., et al. Dexamethasone intravitreal implant in patients with macular edema related to branch or central retinal vein occlusion twelve-month study results. Ophthalmology. 118, 2453-2460 (2011).
- Boyer, D. S., et al. Three-year, randomized, sham-controlled trial of dexamethasone intravitreal implant in patients with diabetic macular edema. Ophthalmology. 121, 1904-1914 (2014).
- Patel, S. R., et al. Targeted administration into the suprachoroidal space using a microneedle for drug delivery to the posterior segment of the eye. Invest Ophthalmol Vis Sci. 53, 4433-4441 (2012).
- Makadia, H. K., Siegel, S. J. Poly Lactic-co-Glycolic Acid (PLGA) as Biodegradable Controlled Drug Delivery Carrier. Polymers (Basel). 3, 1377-1397 (2011).
