Introduction
תאי גזע אנטיגן 1 (Sca1, או Ly6A / E) זוהה לראשונה כסמן פני התא הביע על ידי תאים hematopoietic ו גזע mesenchymal 5,6. השבר וסקולרית סטרומה (SVF) של רקמת שומן המתקבלת מאגרי שומן עכבר הוא אוכלוסייה הטרוגנית של תאים הכוללים פיברובלסטים, מקרופאגים, תאי אנדותל של כלי דם, תאים עצביים, ועל ובתאים adipocyte 7. ובתאי adipocyte, או תאי גזע שמקורם שומן (ASCs) הם תאים שאינם שומנים-לאדן כי מתגוררים מטריקס perivascular עשיר קולגן (ECM) 8. כ -50% של SVF מורכב ASCs, המאופיינים שלילי השושלת (לין -) ו CD29 +: CD34 +: Sca1 + 9. רוב של תאים אלה הם Sca1 +: CD24 - אבות adipocyte, המסוגלים בידול adipocyte במבחנה; עם זאת, רק חלק קטן של תאים (0.08% של SVF) מהווה Sca1
בתחום השמנת יתר וסוכרת, סיסטיק לרקמות ודלקת לשחק תפקיד קריטי בפיתוח ותחזוקה של סוכרת מסוג 2 3. לאחרונה, Tokunaga et al. הראה כי תאי גבוה Sca1 המבודד מפשעתי (או תת עורית, SQ) ו perigonadal (או קרבי, VIS) מאגרי שומן C57BL6 / J להפגין חתימות גנטיות שונות שיפוץ ECM במבחנה 10. MMP14 (MT1-MMP), חבר אבטיפוס של-t הממברנהמטלו מטריקס ype (MMP) המשפחה מתווכת בפיתוח שומן לבן (WAT) דרך פעילותה collagenolytic 1.
דוגמאות של ניסויים שעלולים להתנהל עם התאים מבודדים והעשירו באמצעות הפרוטוקול הבא כוללות תרבות תלת ממדים, מחקרי בידול, מבחני שפלת קולגן, ו- RNA רצף 10,11. מבחני שפלה צריכים להתנהל עם קולגן חומצת חילוץ כדי להבטיח את השימור של telopeptide 11,12. הפרוטוקול הבא יהיה להדגים את השיטות לבודדות תאי סטרומה וסקולרית ראשית ממנהל מאגרי שומן שונים ולהעשיר ובתאי adipocyte באמצעות פרדת תא immunomagnetic. תוקפו של מיון התא יוערכו עם זרימת cytometry ובאמצעות באמצעות עכברים Sca1-GFP המבטאים GFP ב Sca1 + תאים, מונע על ידי האמרגן Sca1 13.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
משפט ואתיקה: אוניברסיטת מישיגן ועדת על השימוש והטיפול של בעלי חיים (UCUCA) ואישר את כל שיטות ופרוטוקולים בהתאם מדריך לטיפול ושימוש בחיות מעבדה (המכון מעבדה בבעלי חיים למחקר, המועצה הלאומית למחקר). עכברים נשמרות ביבר אוניברסיטת מישיגן מקבלים גישה חופשית למזון ומים ושמר על מחזור 12 שעות חושך / אור.
1. הכנות
- כן תקשורת התרבות העיקרית עם DMEM, 10% FBS, 1x P / S / G ו- 1x אנטיביוטיקה / antifungals. זה ישמש כדי לשמור רקמות לעיכול לפני. מניח מניות aliquot באמבט מים 37 ºC.
- כן חמישה מיליליטר של תמיסת collagenase Type III ב 5 מג / מיליליטר מומס HBSS (+ Ca, Mg +) עבור כל סוג של כרית שומן מבודדת, עד חמישה עכברים. לדוגמה, כאשר לבודד SQ ו VIS מ גנוטיפ יחיד, לעשות 10 מ"ל, אם סוג-בר SQ מוטנטים VIS, לעשות 20 מ"ל. התאם ל- pH 7.4 ו STEלהרגיז מסנן. Aliquot לתוך צינורות 50 מ"ל. מניחים בצד הרחק מאור.
- השתמש 70% אתנול לחיטוי בתחום כירורגית. נגב ולכסות עם כרית כחולה. לרסס קצת אתנול על כרית כחולה.
- השתמש 22 מחטי G כדי להצמיד כרית ספיגה ללוח הקלקר לקצץ במספריים. תרסיס כרית עם אתנול ולאחר מכן להגדיר את הלוח על כרית כחולה ומכסים כרית כחולה אחרת עד תחילת לנתיחה.
- מלאו שני צינורות 50 מ"ל עם אתנול ומניחים עמדה סמוך בתחום כירורגית. מניח את מספרי מלקחיים של אתנול.
- מלאו אחר צינור 50 מ"ל עם PBS בתוספת 1x אנטי-אנטי לשטיפה אתנול מחוץ כלים כירורגיים.
- ב למכסה המנוע, מנות התווית 60 מ"מ לכל סוג רקמה ולמלא עם התקשורת והתרבות חימם עד 37 ºC. מניח את הצלחות סמוכות לאזור כירורגית.
בידוד 2. של תת עורי (SQ) רפידות שומן
- להרדים עכבר עם ממנת יתר של isoflurane ו pneumothorax.
- בעדינותלרסס עכבר עם 70% אתנול ושכב פרקדן. הצמד את הכפות אל קאפה עם 22 מחטים G.
- ביצוע חתך קטן בעור של הבטן התחתונה. החזקת החלק העליון של החתך עם מלקחיים, לקחת את המספריים ולהפריד את העור מפני הצפק.
- לאחר העור מופרד הצפק מן הבטן אל החזה, לשקף את העור הרחק הצפק לכיוון הראש על ידי ביצוע חתכים לרוחב בעור לאורך צדי הגוף.
- לשקף את העור שנותר מחזיק את השומן מפשעתי מהגוף להצמיד ללוח עם 22 מחטים G.
- Switch to מספרי מלקחיים בסדר. תפוס את כרית השומן מפשעתי עם מלקחיים בראשית הצירים ליד הצפק לגזוז בין עור ושומן מפשעתי התקדמות לקראת במפשעה הימנעות זיהום SQ עם העור.
- מניחים את כרית השומן מפשעתי insolated בצלחת שכותרתו 60 מ"מ.
3. בידוד של הקרביים (VIS) רפידות שומן
- באופן דומה לשלב 2.5, לחתוך הצפק פתוח לחשוף את רפידות ובמעיים שומן הקרביים.
- הזז את הבטן משם לכיוון בית החזה.
- תפוס את כרית השומן VIS בקצה הדיסטלי ולמשוך בעדינות. לנתח את כרית שומן VIS תוך הקפדה שלא לכלול epididymal (או רחם, אם באמצעות נקבת עכברים) רקמות.
- מקום בצלחת שכותרתו וחזור על שלב 3.3 עבור כרית VIS הנותרים.
4. עיכול Collagenase של רפידות שומן
- הזז 60 מ"מ צלחות למכסה המנוע בתרבית רקמה ו לשאוב את התקשורת.
- לרכך את רפידות שומן עם מספריים מעוקל מכן להוסיף לפתרון collagenase. הקפידו לשטוף את המספריים מלקחיים בין סוגי רקמות עם אתנול PBS.
- Shake ב 300 סל"ד ו -37 ºC עבור 10-20 דקות עד רקמות מתעכלות. מקובל אם כמה חתיכות של SQ עדיין גלויות. זה יטופל בשלב מאוחר יותר.
- הוסף 25 מ"ל של התקשורת בתרבות לפתרון collagenase לעצור את collagטיפול enase, ו פיפטה למעלה ולמטה 10 פעמים עם טפטף סרולוגיות 10 מיליליטר לפזר את הרקמות המעוכלות.
- תאי זנים באמצעות מסננת תא 100 מיקרומטר. צנטריפוגה במשך 10 דקות ב g 300 x.
- בזהירות למזוג את התקשורת לא להפריע גלולה ולהוסיף 5 מ"ל של מים סטריליים כדי גלולה ו פיפטה בעדינות להשעות תאים. חכה 2 דקות כדי lyse אריתרוציטים.
- הוסף 25 מ"ל של התקשורת עם תאים FBS ומתח 10% דרך מסננת תא חדש 100 מיקרומטר.
- צנטריפוגה במשך 10 דקות ב g 300 x. התקשורת למזוג ו resuspend גלולה ב 1 מ"ל של התקשורת והתרבות.
- ספירת תאים עם hemocytometer באמצעות 1: 1 trypan כחול.
- פלייט 1 x 10 6 תאים היטב אחד על צלחת 6 באר.
5. הפרדת Cell מגנטית
- לאחר כ -4 עד 6 שעות של הידבקות התא, לשטוף תאים פעמיים עם HBSS (-Ca, -Mg). לנתק תאים חסידים באמצעות טריפסין 0.05%. לדלל השעית תא טריפסין חיץ הפרדה 1 מיליליטר ספין עבור5 דקות ב g 300 x.
- לשאוב supernatant. תאי Resuspend במאגר 500 μl. הסרת aliquot 10 μl ולספור תאים באמצעות hemocytometer.
- ספין תאים למשך 5 דקות ב 300 x גרם.
- לשאוב supernatant לחלוטין. תאי Resuspend ב 90 חיץ μl. הוסף 10 μl נוגדן ראשוני נגד Sca1-FITC. מערבבים היטב דגירה במשך 10 דקות ב 4 מעלות צלזיוס בחושך.
- שטפו תאים עם 1 מ"ל חיץ תאים צנטריפוגות במשך 5 דקות ב g 300 x. הסר supernatant לחלוטין.
- תאי Resuspend ב 80 חיץ μl. הוסף 20 μl microbeads אנטי FITC. מערבבים היטב דגירה במשך 15 דקות ב 4 מעלות צלזיוס בחושך.
- שטפו תאים עם 1 מ"ל חיץ תאים צנטריפוגות במשך 5 דקות ב g 300 x.
- הסר supernatant ו resuspend גלולה במאגר 500 μl.
- מקום עמודה בעל מגנטית ולשטוף טור עם 500 חיץ μl.
- הוסף השעית תא לעמודה. הימנע בועות תוך pipetting.
- אסוף את Sca1 ללא תווית - </ Sup> תאים ולשטוף פעמים בטור 3 עם 500 חיץ μl. רק להוסיף למאגר חדש כאשר המאגר ריק. הימנע בועות תוך pipetting.
- הסר עמודה מבעל מגנטי ומקום לתוך צינור חרוטי 15 מ"ל.
- הוסף 1 מ"ל חיץ לעמודה ו elute Sca1 + על ידי דחיפת הבוכנה המסופק באמצעות המאגר טור.
- ספין למטה שברי תא במשך 5 דקות ב 300 x ז. תאים Resuspend בתקשורת תרבות 1 מ"ל.
- הסרת aliquot 10 μl מן השברים שכותרתו ללא תווית ולספור תאים באמצעות hemocytometer.
- פלייט כל שבריר תא 1 גם צלחת 6 באר.
6. אימות של הפרדת immunomagnetic של ACSs Sca1 הגבוה עם cytometry הזרימה
- יש לשטוף את התאים פעמיים עם HBSS (-Ca, -Mg) ו לנתק תאים באמצעות טריפסין 0.05%.
- תאי צנטריפוגה XG ב 300 במשך 5 דקות. תאים Resuspend בתקשורת תרבות 1 מ"ל ולספור באמצעות hemocytometer.
- השג> 10 6
- הסר צעד supernatant וחזור 6.3 פעמיים נוספות.
- תאים Resuspend עם 1 מ"ל של סרום עיזים 2% + 2% BSA ולחסום במשך 30 דקות ב RT.
- תאי צנטריפוגה XG ב 300 במשך 5 דקות.
- הסר חסימת פתרון.
- להוסיף עכברוש IgG2a אלקסה פלואוריד 647 (0.25 מיקרוגרם, 1: 400) או אנטי-Sca1 אלקסה פלואוריד 647 (0.25 מיקרוגרם, 1: 400), ב 100 μl של PBS עם 2% נסיוב עז ו -2% BSA + PBS ב 4 ° C במשך 30 דקות בחושך.
- הוסף 1 מ"ל של קר PBS לתאים. צנטריפוגה XG 300 במשך 5 דקות ב 4 ° C.
- הסר צעד supernatant וחזור 6.9 פעמיים נוספות.
- תאים Resuspend ב 1 מ"ל PBS. Pass השעיות התא דרך מסננת התא 100 מיקרומטר כהכנה ניתוח תזרים cytometric.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
העשרה של ASCs הגבוהה Sca1 מ רפידות שומן שונות.
תאי סטרומה וסקולרית המבודדים תצוגת שומן SQ פיברובלסטים דמויים, נמתחו צורת תא ללא קשר לרמת ביטוי Sca1 (איור 1 א). מצד השני, VIS (eWAT נגזרת) תאי נמוך Sca1 גבוה Sca1 להדגים הבדל מובהק בצורת התא שלהם. כמו SQ (iWAT נגזרת) תאים גבוהים Sca1, VIS (eWAT נגזרת) תאים גבוהים Sca1 לתצוגה נמתחת, צורת תא דמוי פיברובלסטים, ואילו תאים נמוכים VIS Sca1 להפגין צורת epithelioid. תאים גבוה Sca1 מבודדים מעכברים-GFP Sca1 מזוהים בקלות כמו GFP חיובי תאים בתרבית רקמה (איור 1B). כאשר תאים אלו הוערכו עם זרימת cytometry, רוב תאי GFP החיוביים אושרו לבטא חלבוני Sca1 על פני התא כפי שזוהה עםנוגדן ti-Sca1 (תרשים 1C). תאים גבוהים Sca1 נגזרו כרית שומן מפשעתי שומרים גדלו קיבולת של בידול adipocyte ואילו תאים גבוהים Sca1 הנגזרות eWAT קשים יותר להתמיין adipocyte עם תערובת adipogenic קונבנציונלית 10.
דיפו תלוי שומן ביטוי גנים של ASCs הגבוהה Sca1 (איור 2).
הגנום כולו transcriptome ניתוחי עם רצף RNA הפגין להעשרת גנים הקשורים חלבונים תאים מטריקס מכפילים (GO: 0,031,012, GO: 0,005,578) באותם ASCs הגבוה Sca1 10. יחד עם בזמן אמת מנתח PCR, הצלחנו להדגים את הביטוי ההפרש של MMPs collagenolytic (MMP2, MMP8, MMP13, MMP14) בין iWAT- ו eWAT הנגזרות Sca1 גבוהה ASCs. כאשר שכותרתו והעמסה מהסוג I קולגן ג'ל שמש t o להעריך פעילות שפלת pericellular, צפינו בפעילות שיפוץ קולגן גדלה במידה הניכרת בתיווך VIS Sca1 הגבוהה ASCs 10.
איור 1: ההפרדה immunomagnetic של ASCs גבוהה Murine Sca1 מ מאגרי שומן שונים (א) Sca1 גבוהה Sca1 נמוך ASCs מבודד SQ (iWAT) ו VIS (eWAT).. סולם = 100 מיקרומטר. (ב) בתאים-GFP Sca1 מבודד iWAT של עכברים SCA-GFP. סולם = 100 מיקרומטר. (C) ביטוי פני התא של Sca1 בתאים Sca1-GFP חיובי העריכו עם cytometry הזרימה. (משמאל) שליטה עכברוש IgG (מימין) נוגדן אנטי Sca1. ציר ה- X, עוצמת GFP. ציר ה- Y, Alexa פלואוריד 647. פאנל הראו בעבר ב Tokunaga, M. et al., (2014).ig1large.jpg "target =" _ blank "> לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 2:. שומן דיפו-Dependent ביטוי של Collagenolytic MMPs, TIMPs, ו collagens (א) ביטוי גנים דיפרנציאלי של ECMS מכפילי ECM ב Sca1 הגבוהה ASCs מבודד מאגרי שומן שונים. (ב) פעילות שפלה קולגן מוגברת של VIS (eWAT נגזרת) ASCs הגבוהה Sca1. ביזוי של קולגן מוצג היעלמות אותות ניאון (חיצים וראשי החץ). הבלעה היא תמונה מוגדלת של השפלה קולגן ממוקד בתיווך תא יחיד של ASCs SQ. התאים היו בתרבית למשך 72 שעות. הנתונים המוצגים בעבר Tokunaga, M. et al., (2014). נא ללחוץ כאן נiew גרסה גדולה יותר של דמות זו.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
בזאת אנו מדגימים את הבידוד והפרדה תא immunomagnetic של ASCs בעכברים מ רפידות שומן שונים והשימוש בהם לניסויים במבחנה. השיטה המוצגת היא יעילה עבור הבידוד המהיר של מספר רב של ASCs Sca1 החיובי, המהווה יתרון על FACS בתיווך מורכב ויקר טכניים הבידוד של ASCs 9,14. בניגוד FACS, הפרדת תא immunomagnetic אינה מאפשרת את השימוש של אנטיגן המרובה לאיתור אוכלוסיית תא המטרה. אף על פי כן, אם אנטיגן השטח היטב מאופיין, שימוש פרדת immunomagnetic מגדיל את מספר התאים להיות מנותח ללא הסתמכות על השימוש במכשירי FACS 15, אשר עדיין אינו נגיש לחוקרים ביולוגיים רבים במוסדות קטנים ללא מתקני ליבה .
ישנם כמה היבטים קריטיים של ההליך כי יש להקפיד על מנת להבטיח תוצאה מוצלחת. הרכש של ADIPOSE שמקורם בתאי גזע דורש הבידוד כירורגית של מחסני רקמת שומן עכבר. לכן, את המהירות והדיוק של חזר רקמה הכרחית כדי להניב מספר גבוה של תאי קיימא. בנוסף, השמירה על שדות ומכשירי ניתוח נקיים חיונית התוצאה של ההליך על ידי מניעת זיהום מיקרוביאלי של דגימות תאים ורקמות. רקמות השומן גזור חייב להיות מנותק enzymatically בתמיסה collagenase מסוג II. הרכב ECM שונה בין SQ ו VIS רפידות שומן 10,16, שבו VIS מכילים פחות collagens מ SQ. לכן, משך עיכול כרית שומן VIS דורש כמחצית פרק הזמן כפי SQ. מקובל לעצור עיכול רקמות לאחר תקופת הדגירה המוצהרת גם אם חלקיקים קטנים של רקמות עדיין נוכח הפתרון collagenase. יצירות אלה ניתן ניתק מכאני עם pipetting פעם תקשורת ותרבות נוספה לעכב פעילות collagenase. למרות זאת, ניתן להמשיךישירות מיון immunomagnetic הבא בידוד SVF, זרעי קבוצתנו 1 x 10 6 תאים ממוינים על צלחות פלסטיק עבור 4 עד 6 שעות על לפני שתמשיך עם מיון תא. למרות צעדי סינון מרובים במהלך בידוד SVF, פסולת עדיין תהיה נוכחת בתוך השעית התא. ציפוי התא לפני שתמשיך הפרדת תא immunomagnetic מספק הזדמנות לשטוף פסולת תאים פנויים משם, ובכך מאפשר מיון מגנטי להיות מיושם רק תאי חסיד המכילים ובתאי adipogenic.
בעוד Sca1 לא נמצא הגנום אנושי, זיהוי והאימות של אנטיגנים פני תא אלטרנטיבה הביעו על תאי גזע שומן אנושי דיפו תלוי שומן 17, כאשר יחד עם טכניקת הפרדת תא זה, עשוי לעזור לנו להגדיר את הביולוגיה של תאי גזע שומן אנושיים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
החוקרים אין לי מה לחשוף.
Acknowledgments
עבודה זו נתמכת על ידי NIH DK095137 (עד THC). אנו מודים לחברי המעבדה בהווה ובעבר אשר תרמו להתפתחות והתחכום של השיטות שתוארו.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Type 3 Collagenase | Worthington Biochemical | LS004182 | Tissue digestion |
| DMEM | Gibco | 11965-092 | High-glucose culture medium |
| Pen/Strep/Glutamine (100x) | Gibco | 10378-016 | Media antibiotic |
| Anti-anti (100x) | Gibco | 15240-062 | Media antifungal |
| FBS | Gibco | 16000-044 | |
| PBS (1x, pH 7.4) | Gibco | 10010-023 | |
| Trypsin (0.05%) | Gibco | 25300-054 | |
| Cell strainer | BD Bioscience | 352360 | 100-μm cell strainer |
| 60 mm plates | BD Falcon | 353004 | |
| Scissors | FST | 14001-12 | Large |
| Scissors | FST | 14091-11 | Fine, curved tip |
| Large Forceps | FST | 11000-12 | |
| Fine Forceps | Any vendor | ||
| 25G 5/8” needles | BD | 305122 | |
| 22G 1.5” needles | BD | 305159 | |
| 15 ml conical tubes | BD Falcon | 352097 | |
| 50 ml conical tubes | BD Falcon | 352098 | |
| MACS separation columns | Miltenyi Biotec | 130-042-201 | |
| Anti-Sca1 microbead kit (FITC) | Miltenyi Biotec | 130-092-529 | FITC-anti-Sca1 1ºAb and anti-FITC microbeads 2ºAb |
| AutoMACS running buffer | Miltenyi Biotec | 130-091-221 | |
| MiniMACS separator | Miltenyi Biotec | 130-042-102 | |
| MACS MultiStand | Miltenyi Biotec | 130-042-303 | |
| Blue chux pads | Fisher | 276-12424 | |
| Absorbent pads | Fisher | 19-165-621 | |
| Styrofoam board | Use from 50 ml tubes | ||
| 70% ethanol | |||
| Isoflurane | Any vendor | ||
| Rat IgG2a Alexa Fluor 647 | Invitrogen | R2a21 | |
| Rat IgG2a anti-mouse Sca1 Alexa Fluor 647 | Invitrogen | MSCA21 | |
| Rat IgG2a R-PE | Invitrogen | R2a04 | |
| Rat IgG2a anti-mouse F4/80 R-PE | Invitrogen | MF48004 | |
| Round-bottom tube | BD Falcon | 352058 | |
| HBSS (–Ca, –Mg) | Gibco | 14175-095 | |
| HBSS (+Ca, +Mg) | Gibco | 14025-092 | For collagenase solution |
| Type I collagen (2.7 mg/ml in 37mm acetic acid | Prepare in house12 | ||
| 10x MEM | Gibco | 11430-030 | |
| 1 M HEPES | Gibco | 15630-080 | |
| 0.34 N NaOH | Prepare in house | ||
| Cover slips | Corning | 2870-22 | |
| Alexa Fluor 594 carboxylic acid, succinimidyl ester, mixed isomers | Invitrogen | A-20004 | |
| 0.89 M NaHCO3 | Gibco | 25080-094 |
References
- Chun, T. H., et al. A pericellular collagenase directs the 3-dimensional development of white adipose tissue. Cell. 125 (3), 577-591 (2006).
- Chun, T. H., et al. Genetic link between obesity and MMP14-dependent adipogenic collagen turnover. Diabetes. 59 (10), 2484-2494 (2010).
- Chun, T. H. Peri-adipocyte ECM remodeling in obesity and adipose tissue fibrosis. Adipocyte. 1 (2), 89-95 (2012).
- Sun, K., Tordjman, J., Clement, K., Scherer, P. E. Fibrosis and adipose tissue dysfunction. Cell Metab. 18 (4), 470-477 (2013).
- Spangrude, G., Heimfeld, S., Weissman, I. Purification and Characterization of Mouse Hematopoietic Stem Cells. Science. 241, 58-62 (1988).
- Welm, B. E., et al. Sca-1(pos) cells in the mouse mammary gland represent an enriched progenitor cell population. Dev Biol. 245 (1), 42-56 (2002).
- Gesta, S., Tseng, Y. H., Kahn, C. R. Developmental origin of fat: tracking obesity to its source. Cell. 131 (2), 242-256 (2007).
- Tang, W., Zeve, D., Suh, J. M., Bosnakovski, D., Kyba, M., Hammer, R. E., Tallquist, M. D., Graff, J. M. White fat progenitor cells reside in the adipose vasculature. Science. 322, 583-586 (2008).
- Rodeheffer, M. S., Birsoy, K., Friedman, J. M. Identification of white adipocyte progenitor cells in vivo. Cell. 135 (2), 240-249 (2008).
- Tokunaga, M., et al. Fat depot-specific gene signature and ECM remodeling of Sca1(high) adipose-derived stem cells. Matrix Biol. 36, 28-38 (2014).
- Chun, T. H., Inoue, M. 3-D adipocyte differentiation and peri-adipocyte collagen turnover. Methods Enzymol. 538, 15-34 (2014).
- Rajan, N., Habermehl, J., Cote, M. F., Doillon, C. J., Mantovani, D. Preparation of ready-to-use, storable and reconstituted type I collagen from rat tail tendon for tissue engineering applications. Nat Protoc. 1 (6), 2753-2758 (2006).
- Ma, X., Robin, C., Ottersbach, K., Dzierzak, E. The Ly-6A (Sca-1) GFP Transgene is Expressed in all Adult Mouse Hematopoietic Stem Cells. Stem Cells. 20 (6), 514-521 (2002).
- Berry, R., Rodeheffer, M. S. Characterization of the adipocyte cellular lineage in vivo. Nat Cell Biol. 15 (3), 302-308 (2013).
- Jeffery, E., Church, C. D., Holtrup, B., Colman, L., Rodeheffer, M. S. Rapid depot-specific activation of adipocyte precursor cells at the onset of obesity. Nat Cell Biol. 17 (4), 376-385 (2015).
- Mori, S., Kiuchi, S., Ouchi, A., Hase, T., Murase, T. Characteristic Expression of Extracellular Matrix in Subcutaneous Adipose Tissue Development and Adipogenesis; Comparison with Visceral Adipose Tissue. Int J Biol Sci. 10 (8), 825-833 (2014).
- Ong, W. K., et al. Identification of Specific Cell-Surface Markers of Adipose-Derived Stem Cells from Subcutaneous and Visceral Fat Depots. Stem Cell Reports. 2 (2), 171-179 (2014).
