Summary
이 연구의 목적은 쥐의 지방과 설탕의 소설 섭취 후 도파민 경로 및 터미널 사이트에서 동시에 변화를 측정하기 위해 휴대 C-FOS 활성화를 사용하여 신뢰할 수있는 면역 조직 기술을 서술하여 보상 관련 분산 뇌 네트워크를 식별하는 것입니다.
Abstract
이 연구는 쥐의 뇌의 도파민 (DA) 경로에 지방과 설탕의 소설 섭취의 효과를 평가하기 위해 휴대 C-FOS 활성화를 사용합니다. 당분과 지방의 섭취는 타고난 매력뿐만 아니라 학습 환경에 의해 매개된다. 뇌의 도파민, 특히 메조 - 변연계와 복부 피개 영역 (VTA)에서 메조 - 대뇌 피질 돌기,이 무식하고 배운 응답 모두에 관여하고있다. 여러 사이트와 송신기 / 펩티드 시스템 상호 뇌 상기 분산 네트워크의 개념은 기호성 식사량을 매개하는 것이 제안되었지만, 그러한 실험적 작업을 보여주는 제한된 증거가있다. 따라서, 설탕 섭취는 DA 출시 및 증가 C-FOS와 같은 핵 중격 의지 (NAC), 편도체 (AMY)를 포함하여 개인 VTA DA 투영 영역에서 면역 (FLI)과 전두엽 피질 (mPFC)뿐만 아니라 등쪽 선조체을 내측을 이끌어. 이 사이트에 선택적 DA 수용체 길항제 또한, 중앙 관리설탕이나 지방에 의해 유도 조절 맛을 환경 설정의 수집 및 발현을 감소 차등이야. 에 의해 하나의 방법이 사이트는 평가를 동시에하는 것입니다 설탕이나 지방 섭취에 대한 응답으로 분산 두뇌 네트워크로 상호 작용 여부를 결정하는 여부 VTA 및 주요 mesotelencephalic의 DA 투사 영역 (prelimbic와 NAC의 infralimbic mPFC, 코어와 쉘, 기저 및 중앙 cortico-중간 AMY)뿐만 아니라 등쪽 선조체는 조정 디스플레이 것이며, 옥수수 기름 (3.5 %), 포도당 (8 %), 과당 (8 %)과 사카린의 경구, 무조건 섭취 후 동시 FLI 활성화 (0.2 %) 솔루션을 제공합니다. 이 방법은 설치류의 맛이 음식의 섭취에 보상 관련 학습을 연구하기 위해 관련 뇌 사이트에서 동시에 휴대 C-FOS 활성화를 사용하는 가능성을 식별 성공적으로 첫 번째 단계입니다.
Introduction
뇌의 도파민 (DA)를 통해 맛이 설탕의 섭취 중앙 응답에 관련 된 제안 쾌락 1, 2, 3, 노력과 관련된 3과 행동의 4,5 메커니즘을 습관 기반. 이러한 효과에 연루 차 DA 경로는 복부 피개 영역 (VTA)에서 유래하고, 핵 중격 의지 (NAC) 코어와 쉘의 기저 및 중앙 cortico-내측 편도 (AMY) 및 prelimbic 및 infralimbic 중간에 프로젝트 전두엽 피질 (mPFC) (리뷰 6,7 참조). VTA는 자당 섭취 8,9에 연루되었으며, DA 릴리스는 NAC 10-15, AMY 16, 17 및 mPFC 18 ~ 20에 다음과 설탕 섭취를 관찰된다. 지방 섭취는 또한 DA NAC (21)를 해제 자극하고, 등쪽 선조체 (미상 - 피질)에 또 다른 DA-풍부한 투사 영역은 DA-매개 22, 23 먹이와 연결되었습니다. 켈리 24-27이 여러 프로젝트 제안이 DA-중재 시스템의 이온 영역은 광범위하고 친밀한 상호 28-34을 통해 통합과 상호 작용하는 분산 두뇌 네트워크를 형성했다.
당 35-37과 지방 38-40의 섭취를 줄일 DA D1 및 D2 수용체 길항 물질의 능력에 더하여, DA 시그널링은 당 및 조건부 맛 선호도를 생성하기 위해 지방 (CFP)의 기능을 매개에 관여 한 41- 46. NAC, AMY 또는 mPFC 47-49로 DA D1 수용체 길항제의 Microinjections는 위장 내 포도당에 의해 유도 CFP 취득을 제거한다. mPFC에 DA D1이나 D2 중 하나 수용체 길항제의 microinjections은 과당 CFP (50)의 획득을 제거하는 반면, 인수 및 과당 CFP의 발현은 차등 NAC 및 AMY (51, 52)의 DA 길항제에 의해 차단된다.
는 C-FOS 기술 (53, 54)는 신경 activatio을 조사하기 위해 사용되어왔다n은 맛 섭취와 신경 활성화에 의해 유도. 용어 "C-FOS 활성화"원고 전반에 걸쳐 사용되며, 운영 체제는 신경 세포의 탈분극 동안 C-FOS를 증가 전사에 의해 정의된다. 자당 섭취는 NAC 55-57 중, VTA뿐만 아니라 쉘 아니라 코어 중앙 AMY 핵에 FOS 같은 면역 (FLI)를 증가. 가짜 먹이 쥐에서 자당 섭취하는 반면 크게 AMY와 NAC에 FLI 증가가 아닌 VTA (58), 위장 자당이나 포도당 주입 크게 NAC 및 AMY 59, 60의 중앙 및 기저 핵에 FLI 증가했다. 예약 차우 액세스 자당의 반복 첨가는 NAC 쉘 및 코어 (61)뿐만 아니라 mPFC에 FLI 증가했다. 수크로오스 농도 시프트 패러다임 가장 FLI 증가는 기저 AMY과 NAC 발생 밝혀 아닌 VTA 62. 다음은 에어컨, 설탕 관련 자연 rewa의 소멸번째 행동은 기저 AMY와 NAC (63)에 FLI 증가했다. 또한, 톤 페어링 설탕 여부는 이후 기저 AMY 64 FLI 수준을 증가 톤의 결과. 높은 지방 섭취는 NAC 및 mPFC 사이트 65-67에서 FLI 증가했다.
이전에 인용 된 연구의 대부분은 보상 관련 분산 뇌 네트워크 24-27의 식별에 대한 정보를 제공하지 않는 하나의 사이트에서 C-FOS 활성화에 설탕과 지방이 효과를 조사 하였다. 또한, 연구의 대부분은 또한 상대 (기저 및 중앙 cortico-중간) NAC (코어와 쉘), 에이미와 mPFC의 하위 영역의 기여를 서술하지 않았다 (prelimbic 및 infralimbic) 잠재적으로 검사 할 수있는 C-68에 Fos 매핑 우수한 공간적 단일 세포 분석을 이용. 우리의 실험실 (69)는 최근 VTA DA 경로와 그 프로에서 C-FOS 활성화와 동시에 측정 변경을 사용이 켜졌 영역 (NAC, AMY 및 mPFC) 쥐의 지방과 당분의 소설 섭취 후. 본 연구는 동시에 차등 NAC, AMY의 하위 영역에 FLI을 활성화할지 여부 급성 여섯 가지 솔루션에 노출 (옥수수 기름, 포도당, 과당, 사카린, 물, 지방 유제 제어) 분석 절차 및 방법 론적 단계에 대해 설명합니다, mPFC뿐만 아니라 등쪽 선조체. 차이점이 동시 검출에 각 사이트 및 결정에 FLI에 심각한 영향의 확인을 허용할지 여부함으로써 분산 뇌 네트워크 24-27에 대한 지원을 제공하는 관련 사이트의 변화와 상관 하나의 특정 사이트의 변화. 시험이 절차는 VTA의 prelimbic 및 infralimbic mPFC의 NAC의 핵심과 쉘, 그리고 기저 및 중앙 cortico-중간 AMY)뿐만 아니라 등쪽 선조체 여부를 조정 디스플레이 것이고, 구강, 무조건 섭취 후 동시 FLI 활성화 글루코스 (8 %), 과당 (8 %), 옥수수 기름 (3.5 %) 및 사카린 (0.2 %) 용액.
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Protocol
이 실험 프로토콜은 모든 주제 및 절차는 국가 관리를위한 건강 가이드의 연구소 및 실험 동물의 사용을 준수하고 있음을 인증 기관 동물 케어 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다.
1. 주제
- 구매 및 / 또는 번식 수컷 흰쥐 (260~300g).
- 개별적으로 와이어 메쉬 케이지 하우스 쥐. 쥐 차우와 물 사용 가능한 광고 무제한와 12시 12분 시간 빛 / 어둠주기를 유지한다.
- 적절한 샘플 크기를 지정 (예를 들어, N ≈ 6-8) 무작위로 그룹으로.
2. 시험 장치 및 접수 절차
- 고무 마개 보정 원심 관을 사용하여 45 ° 각도 금속 sipper 튜브 제시된 용액 (0.1 ml를 ±) 정확한 측정을 제공한다. 교정의 가시성을 허용하는 팽팽 금속 스프링에 의해 홈 케이지에 고정합니다.
- ~ (식량 배급을 제한쥐의 15 / g / 일)는 해결책을 소비하는 의욕을 높일 원래 체중의 85 %의 무게를 감소시킨다. 참고 : 체중 감소는 3 사이에해야 - 오일.
- 쥐가 짧은 (1 미만인 분) 대기 시간 후의 시험 용액을 샘플링 할 가능성을 최대화하기 위해 1 시간 세션 위에 4 일 동안 0.2 % 사카린 사전 훈련 용액 (10 ㎖)을 제공한다.
- 몇 방울을 흘리고하여 원심 분리 관을 통해 흐름을 확인합니다.
- 섭취량 측정을 획득하기 전에 각 세션 후 튜브의 무게를.
- A) 물, b)는 새로운 맛 (0.05 % 체리 맛) 0.2 % 사카린, C) 8 % 과당, D) 8 : 흡기 여섯 솔루션 중 하나를 수신 하위 그룹의 다섯 번째 날에 시험 (10 ㎖, 1 시간)을 수행 % 글루코스, 예) 0.3 % 잔탄 검에 현탁하고 3.5 % 옥수수 오일, 및 F) 0.3 % 잔탄 검.
- 영양 솔루션 isocaloric 있는지 확인; 따라서, 3.5 % 옥수수 오일 농도가 8 % 설탕 솔루션 isocaloric이다.
- 일 확인짧은 대기 시간 (이하 1 분)와 쥐 샘플 솔루션에서. 이 요건이 충족되지 않으면, 연구 주제를 버린다.
3. 조직 준비
- 각 시험 용액 초기 노출 후 90 분 펜토 바르 비탈의 복강 내 주사에 의해 각 동물을 마취. 동물이 제대로 동물이 더 이상 깊은 날개 자극에 떨고 직접 각막 압력 또는 머리를 다음 깜박 발 핀치에 철수 등의 반사에 응답임을 입증되지 의해 마취되어 있는지 확인합니다.
- 이전 69 설명 된대로로 transcardially 각 동물을 관류.
- 나트륨 펜 토바 비탈 (65 ㎎ / ㎏)의 과다 복용으로 쥐를 마취, 흉곽을 제거하고 심장 (69)에 무료로 액세스를 위해 가슴을 노출.
- 왼쪽 심장 판막의 정점에 바늘을 배치하고, 대정맥을 잘라. 인산염 완충 정착액 CO 다음 인산염 완충액 (PBS, ~ 180 ml)에 관리4 % 파라 포름 알데히드 (~ 180 ml)에 ntaining.
- 동물이 실제로 액체는 코, 입, 생식기 영역과 같은 다른 공동을 떠나는 여부를 검사하여 올바르게 관류되고 있는지 확인합니다. 참고 : 파라 포름 알데히드와 적절한 고정은 큰 근육 운동을 동반한다. 이 발생하지 않으면, 반응이 일어날 때까지 바늘을 다시 조정한다.
- 빨리 떨어져 두개골에서 모피와 피부를 절단하여 두개골에서 뇌를 제거합니다. 균열 및 후면에서 전면으로 이동 뇌에서 뼈를 제거하는 rongeurs을 사용합니다. rongeur은 뼈와 수막 피아 교인 사이에 보장 아래와 소뇌 뒤에 지역에서 처음 작업. 두개골 상부 및 측면이 제거되고 나면,베이스의 뇌 리프트 작은 주걱을 사용하고, 작은 가위 뇌신경을 자르지. 뼈를 제거하는 동안 뇌 손상되지 않도록주의하십시오.
- 밤새 4 ° C에서 4 % 파라 포름 알데히드 용액에 머리를 고정합니다.이들이 용기의 바닥에 침전 될 때까지 실온에서 30 % 수크로오스 / 70 % PBS 용액에 뇌를 놓는다.
- 뇌 차단
- 후각 망울에 횡 방향으로 꼬리를 절단 뇌의 주동이의 부분을 제거합니다.
- 소뇌와 뇌교의 수준에서 횡 방향으로 절단 뇌의 꼬리 부분을 제거합니다.
- mPFC을 통해 슬라이딩 마이크로톰의 무대에 고정 된 꼬리 부분 coronally 뇌를 탑재, 절단 관상 섹션 (40 μm의) (2.86 - 브레 그마에 2.20 mm의 주동이)는 NAC 코어와 쉘과 등쪽 선조체 (+ 1.76-1.60 mm의 브레 그마에 주동이)는 AMY (-2.12 - 브레 그마에 -2.92 mm의 꼬리) 및 VTA (-5.20 - -5.60 mm의 꼬리 정수리하기). 지침은 쥐의 뇌지도 책 (70)를 사용합니다.
- 최종 면역 조직 화학 분석 (71)에 대한 PBS로 가득 찬 24 웰 플레이트의 각 웰에 무료 부동 섹션을 수집합니다. 24 우리를 밀봉 파라 필름을 사용하여LL 플레이트는 PBS가 컨테이너에 증발 뇌를 건조하지 않도록합니다. 4 ° C가 뇌 조직을 저장합니다.
4. C-FOS 프로 시저 (71에서 적응)
- 5 % 정상 염소 혈청 5 ml의 0.2 % 트리톤 X-100을 PBS에 1 시간 동안 각 섹션을 처리합니다.
- PBS 1 ㎖를 함유하는 웰에서 36 시간 동안 39 ° C에서 : 일차 항체로 처리 섹션 (5000 토끼 항 - C-FOS 1) 부화.
- 린스 섹션을 10 분마다 PBS (5 ㎖)로 3 배.
- 이차 항체와 인큐베이션 (오티 닐화 염소 항 - 토끼, 1 : 200)을 RT에서 2 시간 동안 PBS 1 ㎖를 함유하는 웰.
- 10 분 각각 PBS의 각 섹션의 3 배 (5 ㎖)을 씻어.
- PBS 5ml에 Avadin DH (100 μL) 및 양 고추 냉이 퍼 옥시 다제 바이오틴 H (100 μL)로 이루어진 세트에 제공 시판의 아비딘 - 고추 냉이 퍼 옥시 다제의 혼합물을 2 시간 세정 섹션을 인큐베이션.
- 다시 씻어 섹션은 PB에 3 배S 10 분마다 (5 mL)을 첨가 하였다.
- DAB 용액 5 ㎖를 함유하는 웰에서의 조직의 반응성에 따라, 10 분 - 5 0.0015 %의 H 2 O (2)의 존재하에 0.05 %의 디아 미노 벤지딘 (DAB)가있는 부분을 반응한다.
- 두 번에 라벨 VTA 섹션. 밤새 4 ° C에서 PBS (5 ㎖) : 티로신 수산화 (TH) 항체 (2,000 토끼 항 - 쥐 TH, 1)으로 그들을 품어.
- 헹구고 섹션을 10 분마다 PBS (5 ㎖)로 3 배.
- 이차 항체와 인큐베이션 (오티 닐화 염소 항 - 토끼, 1 : 200) PBS (5 ㎖)을 실온에서 2 시간 동안.
- 헹구고 섹션을 10 분마다 PBS (5 ㎖)로 3 배.
- 이차 항체 - 퍼 옥시 다제 복합체를 사용하여 항체를 시각화합니다. DAB / NiCl 용액 5 ㎖를 함유하는 웰에서의 조직의 반응에 따라, 10 분 - 5 0.05 % DAB의 조합 및 0.3 %의 황산 니켈 수용액으로 반응한다.
- DAB 솔루션은 그것에서 컬러 우유 빛 녹색인지 확인0.3 %의 니켈과 황산의 반응. 용액이 너무 녹색 인 경우, 반응이 너무 어두운 것.
- 젤라틴 코팅 슬라이드 상에 모든 섹션을 탑재합니다. 톨루엔 기반 솔루션 (TBS)의 몇 방울과 미끄럼 방지를 커버 한 다음 그들에게 건조 하룻밤을 보자,하고.
- 실험 조건은 관찰자에 알 수 있도록 코드 슬라이드.
C-FOS 5. 결정은 면역이 카운트
- prelimbic mPFC, infralimbic mPFC, NAC 코어, NAC 쉘, 기저 AMY 핵, 중앙 cortico-중간 AMY, 등쪽 선조체 및 VTA : 관심이 영역 (ROI)에에 Fos 양성 신경 세포를 계산하는 공정한 관찰자의 쌍을 지정합니다. . C-에 Fos 면역이 TH +와 VTA에서 TH-세포의 존재 여부를 묘사 한 현미경에서 NAC의 화면 캡처 사진을 제공 그림.
- 시험의 모든 조건에서 모든 동물에 공통적으로 사이트 당 적어도 세 개의 대표 조각을 분석합니다.
- 개요 (도 1)를 추적하여 각 ROI 영역에 대한 전체를 분석하는 소프트웨어, 광학 현미경을 사용한다.
- 특정 사이트의 경우, 응용 프로그램을 열고 인수 드롭 다운 메뉴를 클릭하고 "라이브 이미지"를 클릭합니다. 포커스로 ROI를 가져와 기준점을 설정하는 화면을 클릭. 그런 다음 TR가이드로 격자를 사용하여 선택된 뇌 영역 에이스. 추적이 완료되면, 세포를 (- 5.3.1.3 5.3.1.1 단계) 계산합니다.
- 소프트웨어 아이콘을 두 번 클릭합니다. "취득"다음 "라이브 이미지"를 클릭, 메뉴 표시 줄로 이동합니다. 포커스로 ROI를 가져와 기준점을 설정하는 화면을 클릭.
- 그리드 도구 모음에 가서는 "그리드"과 "사용 그리드 라벨"을 클릭합니다. 소정의 추적과 ROI를 설명합니다.
- C-FOS 세포의 수를 유지하기 위해 왼쪽 사이드 바에서 "+"를 선택, 각각의 투자 수익 (ROI) 지역에 세포를 계산합니다. 카운트를 등록 단독으로 각 셀을 클릭합니다. 정의 된 어두운 빨간색 원은 (그림 1) 관찰 될 때 C-FOS에 대한 긍정적 인 셀을 고려하십시오.
- 각 사이트에 대해이 과정을 반복합니다.
- 레코드는 실험실 노트북 및 향후 분석을 위해 컴퓨터에서 계산합니다. 추적 및 수를 저장하기 위해 "저장 데이터 파일" "파일"을 클릭, 메뉴 표시 줄로 이동합니다.
- 각 ROI의 각 섹션에 대해 두받지 평가자의 (계수의 상관 관계를 이용하여) 그 간 평가자의 신뢰성을 확인 항상 0.8를 초과합니다.
6. 통계
- 일 1, 2, 3, 4 (69)의 당질 섭취를 비교 한 회 반복 측정을 변동 (ANOVA)의 1 방향 분석을 사용하여 처음 네 일 기준 사카린 섭취를 평가한다.
- 무작위 블록 2 웨이 ANOVA 69를 사용하여 여섯 그룹의 테스트 섭취 (5 일)과 사카린 섭취량 (4 일)를 비교합니다.
- 개별 심각한 영향 69을 결정하기 위해 Tukey에 비교 하였다 (p <0.05)를 사용합니다.
- 간 평가자의 신뢰성을 결정하고 공통 관찰자의 카운트를 사용한다.
- 각 사이트 69 세 대표 조각의 평균 C-FOS 계산됩니다.
- 여섯 용액 (3.5 % 옥수수 오일, 8 % 글루코스, 과당 8 %, 0.2 %, 맛 사카린, XA의 섭취에 의해 유도 된 C-FOS 활성화의 1 웨이 ANOVA를 수행윤부 주위의 mPFC 69 nthan 껌 제어 및 물).
- infralimbic mPFC, NAC 코어, NAC 쉘, 기저 AMY, 중앙 cortico-중간 AMY, VTA와 등쪽 선조체의 여섯 그룹의 반복 병렬 분석. 개별 심각한 영향 69을 나타 내기 위해 Tukey에 비교 하였다 (p <0.05)를 사용합니다.
- 그 현탁 제의 물 섭취량 및 섭취, 산탄 검 모두 옥수수 기름 섭취를 비교합니다. 물 섭취와 비 영양 감미료, 사카린의 섭취 모두 과당과 포도당 섭취를 비교합니다.
- 사이트의 각 솔루션 섭취와 C-FOS 활성화 사이에 상당한 관계가 페로 니 r에 상관 관계 (P <0.05)을 사용하여 관찰되었다 여부를 설정합니다.
- 체계적으로 3.5 % 옥수수 기름 그룹의 각 동물에 대한 윤부 주위와 infralimbic 사전 전두엽 피질에서 C-FOS 수를 비교합니다.
- 여섯 사이트의 각 쌍의 체계적 병렬 분석을 반복 (VTA, 등쪽 선조체, infralimBIC mPFC, 윤부 주위의 mPFC 3.5 % 옥수수 기름, NAC 코어, NAC 쉘, 기저 AMY, 중앙 cortico-중간 AMY).
- 다른 다섯 실험 흡입 조건 (8 % 포도당, 8 % 과당, 0.2 % 맛 사카린, 산탄 검 제어 및 물)에 대한이 여섯 사이트 체계적으로 병렬 분석을 반복합니다.
- 용액 상태 내에 동일 동물 솔루션간에 및 페로 니를 사용하여 각 용액에서 C-FOS 활성화 사이에 상당한 관계를 결정하여 전체 사이트를 평가 하였다는 사실을 활용은 상관 관계 (p <0.05) r에.
- 특정 사이트의 경우, 응용 프로그램을 열고 인수 드롭 다운 메뉴를 클릭하고 "라이브 이미지"를 클릭합니다. 포커스로 ROI를 가져와 기준점을 설정하는 화면을 클릭. 그런 다음 TR가이드로 격자를 사용하여 선택된 뇌 영역 에이스. 추적이 완료되면, 세포를 (- 5.3.1.3 5.3.1.1 단계) 계산합니다.
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Representative Results
아래에 설명 된 모든 대표적인 결과는 이전에 69를 발표되었으며,이 기술의 효과를 나타내는에서 "개념의 증거"를 지원하기 위해 여기에 다시 표시됩니다.
솔루션 섭취
기준 사카린 섭취에 유의 한 차이는 모든 동물 (F (3,108) = 57.27, P <0.001) 섭취와 (주 1 처음 네 일 동안 관찰되었다 : 1.3 (0.2 ±) ml의 날 2 : 3.9 (0.4 ±) ml의 ; 주 3 : 5.9 ㎖ (0.6 ±), 주 4 : 7.1 (0.6 ±) ml)로 유의하게 (P <0.05, Tukey에 HSD 시험) 및 점진적으로 증가. 크게 5 일에 과당과 포도당 섭취,하지만 옥수수 기름 또는 사카린 섭취량 (p <0.05, Tukey에 HSD 검사)는 4 일 사카린 섭취량에 비해 증가 하였다 (p <0.05, Tukey에 HSD 시험) 과당 (9.6 (0.4 ±) mL를 ) 및 SACC보다 훨씬 높은 포도당 (9.4 (± 0.6) mL) 중harin 섭취. 또한, 옥수수 기름 흡입구 (7.4 (± 0.6) ml)을 현저 하였다 (p <0.05, Tukey에 HSD 시험) 크 산탄 검 섭취량보다.
이러한 결과는 솔루션 섭취 자체가 사이트의 어느 관찰 된 C-FOS 활성화를 설명 할 수있는 가능성을 제기했다. 이를 조사하기 위해, 본 페로 니 (R)의 상관 관계가있는 다섯 용액의 섭취 여섯 사이트 각각 C-FOS 활성화에 관련이 수행되었다. 상당한 상관 관계가 코어 솔루션 섭취와 C-FOS 활성화 사이에 관찰하는 데 실패 (R (29) = 0.186), 쉘 (R (29) = 0.029) 또는 총 (R (29) = 0.10) NAC의 prelimbic ( R (29) = 0.23), infralimbic (R (29) = 0.30) 또는 총 (R (29) = 0.14) mPFC의 VTA (R (29) = 0.10), 등쪽 선조체 (R (29) = 0.14 ) 또는 기저 (R (29) = 0.47), 센트 - cortico - 중간 (R (29) = 0.48) 또는 총 (R (29) = 0.409) AMY. 섭취와 AMY의 C-FOS 활성화, 더 correla 사이의 높은 상관 관계를 감안할 때TIONS는 각 용액에 대하여 수행 하였다. 유의 하였다 (p <0.05, Tukey에 HSD 테스트) 관계는 과당에 대한 섭취와 AMY FLI 사이에 관찰하는 데 실패 (기저 (R = 0.15), 센트로 - cortico - 중간 (R = 0.13), 총 (R = 0.13)), 포도당 (기저 (R = 0.17), 센트로 - cortico - 중간 (R = 0.17), 총 R = 0.13)), 사카린 (기저 (R = 0.42), 센트로 - cortico - 중간 (R = 0.42), 총 (R = 0.42)) 또는 옥수수 기름 (기저 (R = 0.54), 센트로 - cortico - 중간 (R = 0.59), 총 (R = 0.64)). 유의 한 (p <0.05, Tukey에 HSD 시험) 음의 상관 관계가 크 산탄 검 섭취 총 AMY FLI (R = 0.94) 사이에 관찰되었다.
mPFC의 C-에 Fos 활성화
크게 옥수수 기름 (P <0.05, Tukey에 HSD 시험) 증가 총 (그림 2A), infralimbic (그림 2B) 및 prelimbic (그림 2C) mPFC C-에 Fos 물 (*) 또는 산탄 검 컨트롤을 기준으로 계산(#). 상당히 과당 (p <0.05, Tukey에 HSD 시험) 전체 또는 prelimbic mPFC 카운트를 물 (*) 또는 사카린 (+) (도 2B)에 infralimbic mPFC 상대적으로 C-에 Fos 카운트를 증가 아니지만. 반면, 포도당 또는 사카린은. 총 윤부 주위 또는 infralimbic mPFC C-에 Fos 수를 변경할 물 증가 옥수수 기름에 의한 FLI 상대를 보여주는 동물의 3 표시 대표 mPFC 부분도 못했습니다.
그림 2. 지방 또는 설탕 섭취는 차등 내측 전두엽 (mPFC)에 C-FOS 활성화 증가합니다. C-FOS 활성화의 변화는 (SEM ± 평균) 전체 mPFC (패널 A)의 infralimbic mPFC 영역에 설명되어 있습니다 (패널 B) 및 prelimbic mPFC 영역 (패널 C)은 다음 소비 (1 시간)의 물, 사카린 (0.2 %), 산탄 검 (옥수수 오일 컨트롤), 글루코스 (8 %), 과당 (8 %), 또는 옥수수 기름 (3.5 %). (이전에 69을 발표했다.) 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 3. 지방과 설탕에 따라 실제 mPFC의 C-FOS 활성화. C-FOS 활성화는 상당히 컸다 옥수수 기름 (패널 A (4 배 확대) 및 C (10 배 확대))의 섭취에 노출 된 동물에서 관찰되었다 물 (패널 B (4 배 확대) 및 D (10 배 확대))의 섭취보다. t의 일부로서 Prelimbic (PL) 및 infralimbic (IL) mPFC의 묘사 하위 영역의 표현은 패널 A (옥수수 기름)와 C (물)에 도식화되어있다해당 패널의 10 배 배율 (B와 D)을 확대 호스 패널 (A 및 C). 패널 C와 D의 화살표는 대표적인 C-FOS 양성 세포를 나타냅니다. 모든 스케일 바는 100 μm의 수 있습니다. (이전에 69을 발표했다.) 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
AMY의 C-에 Fos 활성화
크게 옥수수 기름 (p <0.05, Tukey에 HSD 테스트) 총 AMY (그림 4A), 기저 (그림 4B) 및 중앙 cortico-내측 증가 (그림 4C) 하위 영역 AMY C-에 Fos 물을 기준으로 계산 (*) 또는 산탄 검 제어 (#). 포도당도 크게 (P <0.05, Tukey에 HSD 테스트) 증가 총 (그림 4A), 기저 (그림 4B) 및 중앙 cortico - 중간 (
그림 4. 지방 또는 설탕 섭취는 차등 편도 (AMY)에서 C-FOS 활성화 증가합니다. C-FOS 활성화의 변화 (SEM ± 평균) 전체 AMY (패널 A)에 설명되어의 기저 AMY 영역 (패널 B) , 물, 사카린, 산탄 검, 포도당, 과당 또는 옥수수 기름의 소비 (1 시간) 다음 중앙 cortico-중간 AMY 영역 (패널 C). 에이미의 기저 영역에서 기록한 중요한 변화는 각각의 기저 및 측면 AMY 핵에서 관찰되었다. 에이미의 중앙 cortico-중간 영역에서 기록한 중요한 변화는 각각의 대뇌 피질, 중앙 및 내측 AMY 핵에서 관찰되었다. (이전 69을 발표했다.) 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
지방과 설탕 다음 그림 5. 실제 AMY의 C-FOS 활성화가. C-FOS 활성화 옥수수 기름 (패널 A (4 배 확대), D (10 배 확대) 및 G의 섭취에 노출 된 동물에서 관찰되었다 (60 배 배율)), 포도당 (패널 B보다 유의하게 높았다 (4 배 확대)와 E (10 배 확대)), 과당 (패널 C (4 배 확대) 및 F (10 배)) 물 (패널 H (4 배 확대) 및 I (10 배 확대))의 섭취. 의 표현중앙-cortico - 중간 (CMC) 및 기저 (BLA) AMY의 묘사 하위 영역은 패널 A (옥수수 기름), B (포도당)에 도식화되어, C (과당)과 H (물)는 부분이기 때문에 해당 패널 (D, E, F 및 I)에서 ~ 10 배의 배율을 확대 이들 패널 (A, B, C 및 H)의. 패널 D의 묘사 하위 영역 (옥수수 기름, 10 배 배율) 패널 D, E, F, G에 패널 D. 화살표 60 배 배율로 확대되고 내가 대표 C-FOS 양성 세포를 나타냅니다. 모든 규모의 바는 패널 G (50 μm의)를 제외하고 100 μm의 수 있습니다. (이전에 69을 발표했다.) 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
NAC의 C-에 Fos 활성화
옥수수 기름 유의하게 (P <0.05, Tukey에 HSD 테스트) 증가 총 (그림 6A)와 코어 (
그림 6. 지방 또는 설탕 섭취는 차등 NAC에 C-FOS 활성화 증가합니다. C-FOS 활성화의 변화 전체 NAC (패널 A)의 NAC 코어 (패널 B) 및 NAC 셸 ((± SEM을 의미)물, 사카린, 산탄 검, 포도당, 과당 또는 옥수수 기름의 소비 (1 시간) 다음 패널 C). (이전에 69을 발표했다.) 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 7. 실제 NAC 코어, 그러나 NAC 셸 지방과 설탕 다음의 C-FOS 활성화합니다. C-FOS 활성화 옥수수 기름 (패널 A (4 배 확대), D (10 배 배율의 섭취에 노출 된 동물에서 관찰되었다 ) 및 G (60 배 확대)) 및 포도당 (패널 B (4 배 확대) 물 섭취보다 유의하게 높았다 E (10 배 확대)) (패널 C (4 배 확대) 및 F (10 배 그니기)). NAC 코어와 NAC 쉘의 윤곽이 하위 영역의 표현은 패널 A (옥수수 기름)으로 도식화되며, B (글루코스) 및 C (물) 이들 패널 (A, B, C 및 H)의 일부로서 확대 ~ 10 배 해당 패널의 배율 (D, E 및 F). 패널 D의 묘사 하위 영역 (옥수수 기름, 10 배 배율) 패널 D, E의 패널 G. 화살표 60 배 배율로 확대되어, F 및 G는 대표적인 C-FOS 양성 세포를 나타냅니다. 모든 스케일 바는 100 μm의 수 있습니다. (이전에 69을 발표했다.) 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
등쪽 선조체의 C-에 Fos 활성화
크게 옥수수 기름 (P <0.05, Tukey에 HSD 시험) 물 (*) 또는 산탄 검 (#) (Figur에 등쪽 선조체 상대적에 C-에 Fos 수를 증가전자 8A). 포도당 또는 과당 유의 하였다 (p <0.05, Tukey에 HSD 시험) 사카린 (+) (도 8A)에 등쪽 선조체 FLI 상대적으로 증가했다. 반면, 사카린은 등쪽 선조체 C-에 Fos 활성화를 유도 물 다를 못했습니다. 증가 옥수수 석유, 물에 포도당 또는 과당에 의한 FLI 상대를 보여주는 동물의 9 표시 대표 등의 선조체 부분을 그림.
VTA의 C-에 Fos 활성화 
그림 8. 지방이나 설탕 섭취가 차등 등쪽 선조체 및 복부 피개 영역에서 C-FOS 활성화를 증가시킵니다. 도설 atriatal (패널 A) 및 변경은 C-FOS 활성화에 언급 된 복부 피개 영역 (패널 B) (평균 ± SEM) 다음 물, 사카린, 산탄 검, 포도당, 과당 또는 옥수수 기름의 소비 (1 시간). (이전에 69을 발표했다.) 
그림 9. 지방과 설탕에 따라 실제 등쪽 선조체의 C-FOS 활성화. C-FOS 활성화 옥수수 기름 (패널 A (4 배 확대), D (10 배 확대) 및 G의 섭취에 노출 된 동물에서 관찰되었다 (60 -fold 배율)), 포도당 (패널 B (4 배 확대)와 E (10 배 확대)), 과당 (패널 C (4 배 확대) 및 F (10 배 확대))의 물을 섭취보다 유의하게 높았다 (패널 H (4 배 확대) 및 I (10 배 확대)). 묘사 서브-A패널 A (옥수수 기름)의 등쪽 선조체의 REAS는 B (포도당)을, C (과당)과 H (물) 해당 패널 (D, E, F 및 I)에서 ~ 10 배의 배율을 확대하는 것이 표시됩니다. 패널 D의 묘사 하위 영역 (옥수수 기름, 10 배 배율) 패널 D, E의 패널 G. 화살표 60 배 배율로 확대되어, F 및 G는 대표적인 C-FOS 양성 세포를 나타냅니다. 모든 규모의 바는 패널 G (50 μm의)를 제외하고 100 μm의 수 있습니다. (이전에 69을 발표했다.) 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
옥수수 크게 오일 (p <0.05, Tukey에 HSD 테스트)는 잔탄 검 제어 (#) (도 8b)에 비해 TH + VTA 세포에서 C-에 Fos 수를 증가했다. 대조적으로, 글루코스, 프럭 토스 또는 사카린은 VTA 상대적으로 C-에 Fos 수를 변경하는 데 실패 물에하는 것은. (10) 표시를 대표 TH + 및 TH-물에 증가 옥수수 기름에 의한 FLI 상대를 보여주는 동물의 C-에 Fos 활성화 VTA 세포를 그림. 
지방과 설탕에 따라 그림 10. 실제 복부 피개 영역 C-FOS 정품 인증. VTA는 C-FOS 활성화는 옥수수 기름 (패널 A (4 배)와 C (10 배)) 및 물 (패널 B에 노출 된 동물에서 관찰되었다 (4 배) 및 D (10 배)). 회색 화살표는 셀 대표 C-FOS를 표시하면서 검은 색 화살표는 대표적인 두 번 표시 TH / C-FOS 양성 세포를 나타냅니다. 모든 스케일 바는 100 μm의 수 있습니다. (이전에 69을 발표했다.) 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
prelimbic mPFC 사이 옥수수 기름에 노출 된 동물에서 C-에 Fos 카운트의 패턴은 NAC 코어와 NAC 쉘 중 하나를 사이에 유의 한 (P <0.05) 양의 상관 관계를 밝혀 (R = 0.971) 또는 전체 mPFC (R = 0.670), 기저 외측 및 중앙 cortico-중간 AMY 사이의 infralimbic mPFC와 등쪽 선조체 사이의 어느 infralimbic mPFC (R = 0.940) 또는 등쪽 선조체 (R = 0.849), (R = 0.749), (R = 0.999), 그리고 사이 등쪽 선조체와 VTA (r은 = 0.723). 대조적으로, 옥수수 기름에 노출 된 동물에서 C-에 Fos 카운트의 패턴이 기저 AMY과 NAC 코어 중 하나 사이에 유의 한 (p <0.05), 마이너스의 상관 관계를 밝혀 (R = -0.712) 또는 쉘 (R = -0.708) 및 중앙-cortico-중간 AMY와 NAC의 핵심 중 하나 사이 (R = -0.712) 또는 쉘 (R = -0.710) C-FOS를 국지적 인 패턴 동물 전자의 계산등쪽 선조체 및 중 하나 VTA 사이 prelimbic 및 infralimbic mPFC (R = 0.930) 사이 밝혀 상당한 (P <0.05) 양의 상관 관계를 포도당에 xposed (R = 0.821), 기저 (R = 0.910) 또는 중앙 cortico-내측 (R = 0.911) AMY 및 기저 및 중앙 cortico-중간 사이 (R = 0.999) AMY. NAC 쉘 간의 과당에 노출 된 동물에서 C-에 Fos 카운트의 패턴은 NAC 코어와 NAC 쉘 중 하나를 사이에 유의 한 (P <0.05) 양의 상관 관계를 밝혀 (R = 0.969) 또는 prelimbic mPFC (R = 0.740)에서, prelimbic mPFC (R = 0.733)에 prelimbic과 infralimbic mPFC 사이 (R = 0.959) 및 기저 및 중앙 cortico-중간 AMY 사이 (R = 0.996) 노출 된 동물에서 C-에 Fos 카운트의 국지적 인 패턴이 밝혀 사카린하기 NAC 껍질과 지느러미 줄무늬 사이에 유의 한 (P <0.05)에 NAC 코어와 NAC 쉘 사이에 양의 상관 관계 (R = 0.792), (R = 0.715) 및 prelimbic mPFC a를 사이에차 infralimbic mPFC (R = 0.999).
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Discussion
이 연구의 목적은 소스 (VTA)과 전뇌 투사 대상 DA 보상 관련 뉴런의 (NAC, AMY, mPFC)을 동시에 쥐의 지방과 설탕의 소설 섭취 후 활성화 된 경우 휴대 C-FOS 기술을 사용하여 결정하는 것이 었습니다 . 본 연구는 이전에 발표 된 연구 (69)의 프로토콜에 대한 상세한 설명이다. 그것은 VTA에서, prelimbic 및 infralimbic mPFC의 NAC의 핵심과 쉘과 기저 및 중앙 cortico-중간 AMY뿐만 아니라 등쪽 선조체에 주요 투사 영역이 분산 뇌 네트워크 (24)의 역할을 것이라고 가정했다 -27 및 디스플레이 코디 동시 FLI 글루코스 (8 %), 과당 (8 %), 또는 옥수수 기름 (3.5 %), 사카린 (0.2 %), 물 및 기타 제어 솔루션에 대한 해결책에 대하여 신규 흡기 다음. 옥수수 기름, 포도당과 과당,하지만 VTA의 prelimbic 및 infralimbic MP의 섭취 생산 상당한 및 차등 FLI 활성화를 사카린하지FC, 코어와 NAC의 기저 및 중앙 cortico-중간 AMY의 껍질과 지느러미 줄무늬. 는 C-FOS 기술 이외에, 당, 지방, 인공 감미료 섭취 행동 수단을 채용 하였다.
하나의 중요한 단계함으로써 사이트에서 C-FOS 활성화에 차이가 솔루션이 오히려 섭취의 패턴 또는 크기를 소비되는으로 인해 있다고 보장, 그들은 비교적 동일 할 것 같은 것을 섭취의 적절한 샘플링을 포함. 기준선 사카린 섭취 나흘 음식 제한 동물 빨리 해결책을 샘플링하여 비특이적 효과를 최소화하는 것이 보장. 두 번째 중요한 단계는 흡입 형의 감정적 인 원자가 독립적 인 변화는 또한 C-FOS 활성화를 생산할 수있는대로 절차는 동물에 최소한의 스트레스 나 새로운 원인이었다. 따라서, 결과는 관련이 방법과 프로토콜의 효과에 대한 확신 "개념의 증거"를 제공급성 지방에 노출 (예를 들어, 옥수수 기름), 설탕 (포도당과 과당)과 비 영양 감미료 (사카린) 솔루션을 동시에 조정 분산 뇌 시스템 24-27의 암시 방식으로 DA-매개 투자 수익 (ROI)의 활성화 여부를 확인합니다.
최적의 C-에 Fos 활성화는 시간에 민감한 반응을 필요로하기 때문에 전에 1 시간 시험에서 짧은 대기 시간 이전에 검증 절차, 42, 44 극대화 솔루션 샘플링을 51, 52을 희생합니다. 따라서, 음식 제한 래트 4 일 동안 0.2 % 사카린 솔루션 (10 ㎖, 1 시간)을 훈련 다섯 번째 날에 시험 용액이 부여되었다. 기준 사카린의 섭취가 크게 점진적으로 증가하고, 다섯째 날에 과당과 포도당,하지만 옥수수 기름 또는 사카린 섭취량은 넷째 날 사카린 섭취량보다 유의하게 높았다. 따라서, 증가 FLI 크게 증가 (포도당, 과당)와 연관되거나 (옥수수 기름) 재 섭취에 영향을 미치지 못한 솔루션이전 사카린 훈련에 lative 및 보상 관련 행동 인센티브 메커니즘을 통해 매개 될 것으로 보입니다. 주의 깊은 고려 사항은 샘플링과 행동의 평등을 보장하기 위해주의 할 필요가있다. 다른 연구자들은 효과적으로 적응과 학습에 관련된 메커니즘을 이해하는 패러다임의 변화를 새로운 솔루션의 다른 유형을 연구하거나 소개하는이 절차를 사용할 수 있습니다.
본 프로토콜의 장점은 잘 연구 당류 (과당, 포도당)과 지방의 효과를 비교 (옥수수 기름)와 (중요한 컨트롤의 이상과 비 영양 감미료, 사카린을 효과를 활성화 자신의 C-FOS 비교하는 기능입니다 제어 유화제 후, 크 산탄 검 및 물)와 여섯 관련된 뇌 부위에 걸쳐 이러한 효과를 검토한다. 이 방법은 다른 물질의 기호성 뇌 사이트에서 동시에 시험을 허용에서 명백한 장점이 있지만, 그것은 잠재적 천문 데이터 세트를 제조하는 단점이있다신경 식을 표시하는 세포. 이 더 관리 할 수 있도록하기 위해, 우리는 시험의 모든 조건에서 모든 동물에 공통적으로 사이트 당 세 대표 코로나 조각을 분석하는 방법을했다. 이것은 물론 이들 세 개의 섹션으로 각 ROI의 적절한 수준을 선택할 수있는 단서를 수반한다. 에이미, NAC, mPFC, 등쪽 선조체 및 VTA의 넓은 rostro - 꼬리 정도를 감안할 때,이주의해야 할 점은 가볍게해서는 안된다. 또한, 다음 연구자의 의무 정확하게 모든 사이트에서 모든 동물에 걸쳐 세 가지 대표 섹션 각각 선정에 일치하는 것이다. 이 선택에 사소한 실수 "오탐 (false positive)"과 "거짓 부정"으로 이어질 수 있습니다. 계산 효율도 중요한 변수이다. 이 잠재적 인 혼란에 대한 우리의 솔루션은 각 ROI의 각 섹션에 대해 두받지 평가자을 할당 한 다음 (계수의 상관 관계를 이용하여) 그 간 평가자의 신뢰성 항상 0.8을 초과을 보장하는 것이 었습니다. 이 방법, 동안 DUPL간 평가자의 신뢰성이 쉽게 최소한의 기준을 초과로 icative, 우리에게 정확성에 대한 훨씬 더 큰 확신을 주었다. NAC의 하위 영역 (셀 대 코어), AMY (중앙 cortico-중간 대 BASO - 측면)과 mPFC (윤부 주위의 대 infralimbic)을 분석 하였다. 이 지역은 또한 특히 개인 AMY 핵, 등쪽 선조체의 패치 및 매트릭스 구획 및 NAC 쉘 (정점, 아치, 콘, 중간 영역)을 분류 할 수있다. NAC 쉘이 지속적으로 옥수수 기름, 포도당 또는 과당 다음 FLI의 변화를 표시하는 데 실패했기 때문에,이 구조의 더 하위 분석은 수행되지 않았습니다. 등쪽 선조체의 패치 및 매트릭스 영역의 확실한 검사는 본 연구에 사용되지 않은 추가 면역 조직 화학 기술을 필요하지만 중요한 후속 연구 할 것이다. 각 하위 영역 내에서 개별 AMY 핵의 분석은 또한 추가로 미래 연구 될 것이다.
이전의 연구는 SUC 나타났다장미 흡기은 NAC 중, VTA뿐만 아니라 쉘 아니라 코어 중앙 AMY 핵에 FLI 증가하면서도 경구 또는 IG 사카린 주입은 55-57, 60-62 크게 효과적이다. 중앙-cortico-중간 AMY과 등쪽 선조체의 NAC 코어와 기저 AMY의 이전 효과에 효과, 그리고 infralimbic mPFC에서 후자의 효과가 모두 포도당과 과당 섭취는 FLI에 설탕 별 효과를 이끌어 냈다. 당질 섭취는 물에 대한 사이트 상대에 FLI의 변경을 유도하는 데 실패했습니다. 지방 섭취는 또한 이전 연구 65-67에서 accumbal 및 mPFC 사이트에 FLI 증가하고 VTA, infralimbic 및 prelimbic mPFC, 등쪽 선조체, NAC 코어에서 동시에 중요한 활성화를 생산하고 기저 및 중앙 cortico-중간 AMY.
이전의 연구는 설탕과 지방 섭취가 체계적으로, 본 연구를 전뇌의 메조 - corticolimbic 및 nigro - 선조체 DA 시스템의 FLI을 유도 것을 증명하지만옥수수 기름, 과당, 포도당 또는 사카린의 급성 흡입 다음과 같은 평가를 동시에 FLI의 기저 VTA의 활성화 및 중앙 cortico-중간 AMY, 등쪽 선조체, prelimbic 및 infralimbic mPFC, NAC 코어와 쉘. FLI 상당한 증가는 매우 설탕 섭취량을 매개 분산 뇌 네트워크 활성화의 개념을 지원하는 전뇌 사이트에서 서로 관련되었다. 여러 뇌 궤적의 동시 변경을 식별 이러한 프로토콜은 만성 마시고 떠들 조건뿐만 아니라 시설과 환경에서 이용 될 수있다. 이 연구는 강한 해부학 적 상관 관계가 (C-FOS) 효과적으로 여러 뇌 사이트에서 사용할 수있는 동시에 비만, 당뇨병과 관련된 인간 건강 상태 및 기타 섭식 장애에 대한 통찰력을 제공 할 수있다 동물의 입에 섭취 및 환경 설정을 매개 후보를 식별하는 것을 보여 .
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Disclosures
저자는 더 경쟁 재정적 이해 관계가 없습니다.
Acknowledgments
이 프로젝트에 자신의 노력에 대한 다이애나 이카 - Culaki, 크리스탈 샘슨과 신학 Theologia Karagiorgis 감사합니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| Sprague-Dawley rats | Charles River Laboratories | CD-1 | |
| Wire Mesh Cages | Lab Products, Seaford, DE | 30-Cage rack | |
| Rat Chow | PMI Nutrition International | 5001 | |
| Taut Metal Spring | Lab Products, Seaford, DE | n/a | |
| Rat Weighing Scale | Fisher Scientific Company | n/a | |
| Nalgene Centrifuge Tubes | Lab Products, Seaford, DE | 10-0501 | |
| Rubber Stopper | Lab Products, Seaford, DE | n/a | |
| Metal Sippers | Lab Products, Seaford, DE | n/a | |
| Saccharin | Sigma Chemical Co | 82385-42-0 | |
| Kool-Aid, Cherry | Kool-Aid | Commerical | |
| Kool-Aid, Grape | Kool-Aid | Commercial | |
| Fructose | Sigma Chemical Co | F0127 | |
| Glucose | Sigma Chemical Co | G8270 | |
| Corn Oil | Mazzola | Commerical | |
| Xanthan Gum | Sigma Chemical Co | 11138-66-2 | |
| Sliding Microtome | Microm International | n/a | |
| Neurolucida Camera | MBF Bioscience | Software application | |
| Gelatin-coated Slides | Fisher Scientific Company | 12-550-343 | |
| Cover glass | Fisher Scientific Company | 12-545-M | |
| Golden Nylon Brushes | Loew-Cornell | 2037 | |
| Natural Hair Sable | Loew-Cornell | 2022 | |
| 24 Well Plates | Fisher Scientific | 3527 | |
| 6 Well Plates | Fisher Scientific | 3506 | |
| 1 L Pyrex bottles | Fisher Scientific | 1395-1L | |
| Tissue insert (tissue strainer) | Fisher Scientific | 7200214 | |
| Eagle pipettes | World Precision Instruments | E10 for 1-10μl | |
| Eagle pipettes | World Precision Instruments | E100 for 20-100μl | |
| Eagle pipettes | World Precision Instruments | E200 for 50-200μl | |
| Eagle pipettes | World Precision Instruments | E1000 for 100-1000μl | |
| Eagle pipettes | World Precision Instruments | E5000 for 1000-5000μl | |
| Universal Tips .1-10 μl | World Precision Instruments | 500192 | |
| Universal Tips 5-200 μl | World Precision Instruments | 500194 | |
| Universal Tips 500-5,000 μl | World Precision Instruments | 500198 | |
| Blade Vibroslice 100 | World Precision Instruments | BLADE | |
| DPX Mounting Medium | Electron Microscopy | 13510 | |
| 15 ml centrifuge tubes | Biologix Research Co. | 10-0501 | |
| Slide Boxes | Biologix Research Co. | 41-6100 | |
| Orbital Shaker | Madell Corporation | ZD-9556 | |
| weigh boats | Fisher Scientific | 02-202-100 | |
| 5 ml disposable pipettes | Fisher Scientific | 13-711-5AM | |
| Stereo Investigator Software | Micro Bright Field | Software application | |
| Name | Company | Catalog number | Comments |
| Reagents | |||
| Paraformaldehyde Granular | Fisher Scientific | 19210 | |
| NaCl | Fisher Scientific | S271-1 | |
| Sodium Phophate Monobasic | Fisher Scientific | S468-500 | |
| Sodium Phosphate Diphasic | Fisher Scientific | BP332-500 | |
| Hydrogen Peroxide | Fisher Scientific | H324-500 | |
| SafeClear II | Fisher Scientific | 23-044-192 | |
| Methanol | Fisher Scientific | A412-1 | |
| Normal Goat Serum | Vector | S-1000 | |
| Biotinylated Anti-Rabbit IgG (H+L) | Vector | BA-1000 | |
| ABC Kit Peroxidase Standard | Vector | PK-4000 | |
| Anti-cFos (Ab-5) Rabbit | EMD chem/Cal Biochem | PC38 | |
| Triton X 100 | SigmaAldrich | X-100 | |
| 3,3' diaminobenzidine tetra hydrochloride | SigmaAldrich | D5905 | |
| Sodium Hydroxide | SigmaAldrich | 5881 | |
| Primary TH anti body | EMD Millipore | AB152 | |
| Euthosol | Virbac AH |
References
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