Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

Exosomal miRNA analyse i ikke-småcellet lungekræft (NSCLC) Patienter 'plasma Gennem qPCR: En gennemførlige Liquid biopsi værktøj

Published: May 27, 2016 doi: 10.3791/53900
Automatic Translation
*1,2, *2,3, 4, 3, 5,6, 7,3, 8,3, 2,3
1Department of Biopathology and Medical Biotechnology, Section of Biology and Genetics, University of Palermo, 2Phase I-Early Clinical Trials Unit, Oncology Department, Antwerp University Hospital (UZA), 3Center for Oncological Research (CORE), Antwerp University, 4Department of Surgical, Oncological and Oral Sciences, Section of Medical Oncology, University of Palermo, 5Flemish Institute for Technological Research (VITO), 6CORE, Campus Groenenborger, Antwerp University, 7Molecular Pathology, Pathology Department, Antwerp University Hospital (UZA), 8Oncology Department, Antwerp University Hospital (UZA)
* These authors contributed equally

Introduction

Den lave overlevelse i NSCLC (ikke-småcellet lungekræft) patienter skyldes primært den begrænsede effekt af behandlinger i fremskreden sygdom og dårlig tidlig påvisning 1. Aktiverende mutationer i EGFR-genet, som er blevet opdaget i en subpopulation af NSCLC-patienter, er kendt for at bibringe følsomhed for tyrosinkinaseinhibitorer (TKI'er). Desværre har de fleste af EGFR muterede NSCLC patienter udvikler TKI resistens 2. Især i denne sammenhæng en korrekt diagnose er obligatorisk. Generelt skyldes lokalisering af tumorer, opnåelse biopsi væv i NSCLC ikke altid er muligt. Derfor pågår der bruger ikke-invasive metoder til at få disse biologiske data flere undersøgelser. Exosomer er beskrevet som flydende biopsi komponenter, der kunne undersøges for at opnå diagnostiske og prognostiske værdier med ikke-invasive teknikker 3.

Exosomer er nanovesicles (40-100 nm diameter) af endocytic oprindelse, der er udgivet af forskellige celletyper i både fysiologiske og patologiske tilstande 4. De kan bære protein, lipider, mRNA og microRNA. Desuden har flere undersøgelser tyder en pleiotropisk rolle tumorafledte exosomer, der kan påvirke væksten og overlevelsen af tumorceller, angiogenese, stromale og ekstracellulær matrix remodellering og lægemiddelresistens 5.

MikroRNA'er (miRNA) er korte ikke-kodende RNA, som er involveret i post-transkriptionel regulering, binding 3'-UTR af mål-mRNA'er og lede mRNA til nedbrydning eller til en ikke-translation 6. Selektiv sortering af miRNA i exosomer er blevet beskrevet. I denne forbindelse blev for nylig demonstreret, in vitro og in vivo, en selektiv pakning af MIR-21 (en kendt miRNA med onkogene virkninger) i exosomer frigivet af kronisk myeloid leukæmi-cellelinier efter curcumin behandling 7.

Detexosomal miRNA profil svarer til miRNA profil af den primære tumor og denne funktion kan udnyttes på tidlig diagnose og prognose 3. Specifikt er der en mulighed for at karakterisere ved real-time PCR, udvalgte miRNA korrelerede med den molekylære profil sygdom, eg., EGFR mutationer blandt andre 8.

Her er analysen af et udvalgt panel af NSCLC-korreleret miRNA 8-9 beskrevne, der blev isoleret fra exosomer frigivet i blodet hos NSCLC-patienter. Efter opnåelse af den underrette samtykke rapport fra patienterne, plasma fra 12 NSCLC-patienter og 6 raske kontroller, blev analyseret. Exosomet isolation blev udført med kommercielt kit ifølge producentens protokol. Før exosom isolation, blev plasmaprøver behandlet med RNAse, for at nedbryde kontaminerende cirkulerende miRNA. Vi besluttede at udføre denne analyse med et kommercielt kit grund af den begrænsede standardisering af andre techniques (f.eks., ultracentrifugering) hvilket er særligt vigtigt, når man arbejder med kliniske prøver. Dette sæt indeholder en proteinase K behandling, hvilket vil forringe RNAse, og dermed nedsætter risikoen for at nedbryde exosomal miRNA efter exosome lyse. MicroRNA analyse blev udført ved følsomme og realtids-PCR-analyse; mir-1228-3p blev anvendt som en endogen kontrol og data blev normaliseret i overensstemmelse med formlen 2 - ΔΔct. Kontrolværdier anvendes som baseline og resultaterne er vist i en logaritmisk skala.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. exosome Isolering

Bemærk: Isolering af exosomer fra plasmaprøver, blev udført med et kommercielt kit, ifølge producentens protokol og ved at tilføje RNAse behandling: (alle disse trin skal udføres med personlige og miljø beskyttende udstyr og følgende specifik juridisk procedure for manipulation af biologiske prøver ).

  1. Tag 1 ml plasma af hver prøve, lagret ved -80 ° C, og læg den på is.
  2. Centrifugeres prøven ved 2000 x g i 20 minutter ved stuetemperatur; denne passage er obligatoriske for at fjerne celler og debris.
  3. Overfør supernatanten indeholdende den rene plasma i et nyt 1,5 ml rør.
  4. Centrifugeres nye rør ved 10.000 x g i 20 minutter ved stuetemperatur.
  5. Overfør supernatanten indeholdende den rene plasma i et nyt 1,5 ml rør.
  6. Tilsættes 100 ng / ml RNAse til supernatanten og inkuberes røret ved 37 ° C i 10 minutter iFor at nedbryde cirkulerende RNA'er.
  7. Overfør hele det behandlede plasma til en ny 2 ml rør, og der tilsættes 0,5 volumen 1x PBS.
  8. Vortexes prøven for at blande opløsningerne.
  9. Tilføj 0,05 volumener proteinase K-opløsning (omslutte i sættet) til prøven.
  10. Vortex prøven og derefter inkuberes ved 37 ° C i 10 min.
  11. Tilsæt 0,2 rumfang exosome nedbør puffer til prøven og blandes opløsningerne ved inversion.
  12. Prøven inkuberes ved 2 ° C til 8 ° C i 30 minutter og centrifugeres prøven ved 10.000 x g i 5 minutter ved stuetemperatur.
  13. Aspirer og kassér supernatanten. Pelleten indeholder de isolerede exosomer.
  14. Føj valgte buffer til exosomet pillen for at resuspendere exosomer. Udvælgelsen af ​​bufferen afhænger af den nedstrøms analyse planlagt, i dette tilfælde:
    1. Tilsæt 100 pi 1x PBS for at udføre TEM analyse.
    2. Tilføj 346,5 pi specifik lyse buffer til RNA ekstraktion (fra kommercielt kit) (ADVARSEL: kemisk fare).
    3. Tilsæt 100 pi lysisbuffer for protein ekstraktion (Tris-HCI 50 mM pH 7,6 - NaCl 300 mM - Triton X-100 0,5% - PMSF 1 mM - leupeptin / Aprotinin 10 ug / ml) for at udføre Western Blotting analyse. (ADVARSEL: kemiske farer).
  15. Opbevar de resuspenderede exosomer ved -20 ° C.

2. exosomet Karakterisering af Western blot-analyse

Bemærk: For at karakterisere de isolerede nanovesicles, anbefales western blotting med antistoffer mod ALIX og TSG101 (velkendte exosomal markører).

  1. Efter resuspension af exosomet pellet i lysepuffer, placere den på is i 1 time for at opløse exosomal membran.
  2. Centrifugeres lysatet ved 12.000 g i 10 min og overføre supernatanten til et nyt rør uden at forstyrre pelleten.
  3. Bestemme den samlede exosomal protein content ved Bradford-assay eller andre metoder og belastning 50 ug af proteiner per brønd i en Tris / Glycine SDS - 8% polyacrylamidgel. (ADVARSEL: kemiske farer).
  4. Adskil proteiner (og et passende molekylvægtmarkør) i 8% SDS-PAGE-gelelektroforese med rindende puffer (25 mM Tris, 192 mM glycin, 0,1% SDS) i 1 time og 30 minutter ved 120 V. (Advarsel: kemiske farer ).
  5. Overfør proteinet til en nitrocellulosemembran ved elektroblotting med 4 ° C kold transfer buffer (25 mM Tris, 192 mM glycin, 20% methanol) i 1 time ved konstant 50 V. (ADVARSEL: kemiske farer).
  6. Blokere membranen i 1 time i langsom omrøring med 5% fedtfri tørmælk i 1x TBS -Tween 0,1%.
  7. Vask membranen 4 gange i 5 minutter i hurtig omrøring med 1x TBS - Tween 0,1%.
  8. Tilføj de primære antistoffer mod ALIX og TSG101 (én pr membran) i passende buffer (tilsvarende til antistoffet datablad fra producenten) og inkuberes membranen O / N; I langsom omrøring.
  9. Vask membranen 5 gange i 5 minutter i hurtig omrøring med 1x TBS - Tween 0,1% for at fjerne overskydende antistof.
  10. Derpå tilsættes en passende sekundært antistof i passende buffer (tilsvarende til antistoffet datablad fra producenten) og inkuber membranen i 1 time i langsom omrøring.
  11. Vask membranen 5 gange i 5 minutter i hurtig omrøring med 1x TBS - Tween 0,1% for at fjerne overskydende antistof.
  12. Detektere det valgte protein ved chemiluminescens-analyse 11.

3. exosomet karakterisering af TEM Analysis

Bemærk: For at visualisere de isolerede exosomer, udførtes TEM (Transmission Electron Microscopy) analyse.

  1. Place ~ 10 ug (tidligere kvantificeret ved Bradford assay) af prøve af intakte exosomer resuspenderet i 1x PBS på en parafilm og sat på prøve droppe en Formvar kulstof belagt nikkel gitter i 1 time.
    2. <li> Vask gitteret 3 gange ved at placere den på tre 40 pi 1x PBS dråber.
  2. Vask gitteret 5 gange ved at placere den på fem 30 pi ultrarent vand dråber.
  3. Fix prøven ved at tilføje en dråbe 2,5% glutaraldehyd (ADVARSEL: kemisk fare) i 10 min.
  4. Vask gitteret 3 gange ved at placere den på tre 40 pi 1x PBS dråber.
  5. Tilføj en dråbe 2% uranylacetat (ADVARSEL: kemiske farer) og sætte gitteret på toppen af ​​det i 15 minutter for at kontrastere prøven.
  6. Indlejre prøven på en dråbe 0,13% methylcellulose (ADVARSEL: kemiske farer) og 0,4% uranylacetat og inkuber gitteret oven på dråben i 10 minutter.
  7. Fjern forsigtigt flydende overskydende med en absorberende papir og tørre gitteret i 5 minutter med den coatede side opad.
  8. Undersøg gitteret ved transmission elektron mikroskop 12.

4. Exosomal RNA Extraction og Kvantificering

Bemærk: Vi besluttede at perfOrm den samlede RNA ekstraktion fra exosomal prøver ved hjælp af et kommercielt kit, ifølge producentens protokol: (ADVARSEL: kemiske farer, gennemgå producentens protokol og retningslinjer).

  1. Efter resuspension af exosomet pellet i 346,5 pi lysisbuffer, tilsættes 3,5 ul β-mercaptoethanol (ADVARSEL: kemiske farer) og vortex kraftigt; denne passage er obligatoriske for at ødelægge lipid membraner.
  2. Tilsæt lysat til vaskekolonnen i et opsamlingsrør og der centrifugeres ved 11.000 x g i 1 min. Efter centrifugering kasseres kolonnen og overføre filtratet til en ny 1,5 ml RNase-fri rør.
  3. Tilføj 350 ul 70% ethanol (ADVARSEL: kemiske farer) og vortexes i 5 sek.
  4. Læg lysatet i løsningen kolonnen og centrifuger i 30 sek ved 8000 × g. Efter centrifugering kasseres gennemstrømning og overføre kolonnen til en ny opsamlingsrør.
  5. Læg 350 ul afsaltning buffer og centrifugeres ved 11.000 x g i 1 min. Efter centrifugering kasseres gennemstrømning og returnere søjlen i den samme opsamlingsrør.
  6. Tilføj 95 pi DNase I-reaktionsblanding (10 pi rekonstitueret DNase I + 90 pi DNase-buffer, for hver prøve) på silica membran af søjlen og inkuberes ved stuetemperatur i 15 minutter ved stuetemperatur. (ADVARSEL: kemisk fare)
  7. Tilsæt 200 pi vaskebuffer (ADVARSEL: kemisk risiko) til søjlen, og der centrifugeres ved 11.000 x g i 1 min. Kolonnen anbringes i en ny opsamlingsrør.
  8. Tilsættes 600 pi vaskebuffer til søjlen og centrifugeres ved 11.000 x g i 1 min. Efter centrifugering, kassere gennemstrømning og placer søjlen i den samme samling rør.
  9. Tilsættes 250 pi vaskebuffer til søjlen og centrifugeres ved 11.000 x g i 2 min. Kolonnen anbringes i et 1,5 ml RNAse-frit rør.
  10. Eluering af RNA i 40 pi RNAse-frit vand og centrifugeres ved 11000 5; g i 1 min, for at have en høj RNA koncentration i denne lille volumen.
  11. Anbring straks elueres RNA på is for at forhindre potentielle nedbrydning eller opbevares ved -80 ° C.
  12. Kvantificere RNA indhold. Bemærk: Her blev RNA'et kvantisering udført ved anvendelse af 1 pi prøven gennem spektrofotometer.

5. Retrotrascription af Exosomal miRNA

Bemærk: På grund af den beskrevne begrænset mængde miRNA indhold i exosomer, blev det besluttet at udføre revers transskription af udvalgte miRNA gennem et kommercielt kit under anvendelse af en individuel analyse for hver miRNA, ifølge producentens protokol. For hver prøve blev 8 miRNA korreleret til NSCLC status er valgt (miR-30b, miR-30c, miR-103, miR-122; miR-195, miR-203; miR-221, miR-222, og miR-1228- 3p som endogen kontrol).

  1. Forbered Reverse transskription mester mix (RT mix). For hver reaktion forberede 7 pi RT-blanding, som beskrevet ihttps://www.jove.com/files/ftp_upload/53900/Table1.xlsx">Table 1 (klik her for at downloade) (ADVARSEL: kemisk fare).
    Bemærk: I dette eksperiment blev 9 forskellige RT blanding fremstillet for hver prøve.
  2. Bland forsigtigt og gemme RT mix på is. Tilføj 7 pi RT mix pr reaktionsglas.
  3. Tilsæt 5 pi prøve-RNA (10 ug totalt RNA) pr reaktionsrør og bland forsigtigt.
  4. Tilsæt 3 pi af 5x reverse transskription primere (ADVARSEL: kemisk fare) fra hver analyse sat ind i den tilsvarende reaktion røret.
  5. Bland langsomt, luk glasset og inkuber på is i 5 minutter.
  6. Indlæse reaktionsrøret i det termiske cyklusapparat og start revers transkriptionsreaktion ved anvendelse af de følgende parameterværdier (HOLD ved 16 ° C i 30 min; HOLD ved 42 ° C i 30 min; fastholdelse ved 85 ° C i 5 minutter; HOLD ∞ 4 ° C).

6. Real Time PCR analyse af Exosomal miRNA

Bemærk: Denne analyse varudføres ved hjælp af et kommercielt kit til Real Time PCR (qPCR), med tre biologiske og tekniske replikater per prøve.

  1. For hver reaktion, forberede 17,67 pi Real Time PCR-blanding (10 pi PCR Master Mix + 7,67 ul nuklease-frit vand), bland det og lagt på is. (ADVARSEL: kemisk fare)
  2. Tilsæt 1 pi, for hver PCR-rør, af 20x qPCR primere (ADVARSEL: kemisk fare).
  3. Placer 18.67 pi af qPCR mix i hver brønd-plade.
  4. Tilføj 1,33 pi af revers transkriptionsproduktet i korrespondent well-plade.
  5. Luk pladen og spinde det (300 gx 5 sek).
  6. Sæt pladen i en Real Time PCR-system og start kørslen ved anvendelse af følgende PCR-betingelser: HOLD ved 95 ° C i 10 min; 40 cykler af 15 sekunder ved 95 ° C og 60 sekunder ved 60 ° C. Proces og normalisere data efter formlen 2 - ΔΔct 13.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

I alt 12 plasma fra NSCLC-patienter og 6 raske kontroller blev behandlet med kommercielt kit for exosom isolering fra plasma. Hver prøve blev behandlet ved Western Blot-analyse for at vurdere den exosomal markører ALIX (96 kDa) og TSG101 (43 kDa). Et eksempel på disse resultater er vist i 3 prøver i figur 1, hvilket indikerer, at exosom isolation fra plasmaprøver er muligt med denne protokol.

For at biofysisk karakterisering exosomal prøver, blev udført TEM-analyse. TEM har vist, at de opnåede ved denne isolation protokol nanovesicles har en størrelse gennemsnit i intervallet exosomal størrelse, mellem 40 - 100 nm (figur 2).

Efter exosome isolering og karakterisering, vi undersøgte deres miRNA indhold. Vi valgte 8 specifikke miRNA, der vides at være deregulated i NSCLC. Som intern kontrol, brugte vi miR-1228, der tidligere er blevet valideret som en stabil og effektiv endogene kontrol i forskellige tumortyper 10. Ifølge disse resultater miR-1228 er en pålidelig og stabil endogen kontrol. Når ekspressionsniveauet af 8 valgte miRNA mellem raske donorer og lungekræft patienter blev sammenlignet, blev det konstateret, at disse miRNA er stærkt dereguleret i de analyserede kliniske prøver. I figur 3 ekspressionsmønsteret for de 8 udvalgte miRNA er vist på en logaritmisk skala for de 12 analyserede prøver (PAD1-12). Ikke alle miRNA var påviselige i alle prøver og på grund af den begrænsede mængde af prøver kan vi ikke statistisk analyse.

figur 1
Figur 1. Western blot-analyse i 3 Exosomal Prøver til ALIX og TSG101. The Western Blot viser tilstedeværelse afde velkendte exosomal markører, Alix og TSG-101, i de analyserede prøver. Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 2
Figur 2. TEM Analyse af Exosomal Prøver Disse resultater viser, at de isolerede nanovesicles har en gennemsnitlig diameter, mellem 40 -.. 100 nm, inde i exosomal rækkevidde Klik her for at se en større version af dette tal.

Figur 3
Figur 3. Expression Profil af 8 Udvalgte miRNA i Exosomal prøver. Disse data, der er vist i logaritmisk skala, viser, at through denne protokol er muligt at se op- eller nedregulering af udvalgte exosomal miRNA fra kliniske NSCLC plasma patienter (PAD1-12), hvilket fører til potentiel opdagelse af exosomal biomarkører for NSCLC. Data er vist som fold udtryksform i forhold til raske kontrolpersoner. Klik her for at se en større version af dette tal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Med denne kombinerede protokol var det muligt at udføre en exosomal miRNA-analyse fra plasma af NSCLC patienter. Disse data kan afspejle status sygdom, men dette skal bekræftes ved yderligere undersøgelse.

Den protokol, der anvendes i denne artikel var baseret på et kommercielt kit til exosome isolation. Grunden var, at de andre kendte isoleringsmetoder procedurer (f.eks., Densitetsgradientultracentrifugering) kræver mere manuelle procedurer, der fører til en begrænset standardisering. Alligevel en af ​​begrænsningerne ved denne protokol er, at i sammenligning med densitetsgradientultracentrifugering for exosom isolation, densitetsgradientultracentrifugering stadig en meget nyttig teknik i exosom isolation, der udnytter den specifikke densitet af exosomer (mellem 1,13 - 1,19 g / ml). En potentiel modifikation er en blanding af begge procedurer, som kan være en guld standard på dette område.

Muligheden for at behandle klinisk Samples med RNase behandling har givet os rene prøver uden forurening af cirkulerende miRNA. Tilstedeværelsen af ​​RNase enzymer i prøverne kunne påvirke mængden af ​​exosomal miRNA efter exosome lysis. Derfor valgte vi et kit med proteinase K-behandling, for at fjerne cirkulerende kontaminerende proteiner og til at nedbryde RNase enzymer.

Efter standardisering af alle isolation procedurer, kan den fremtidige karakterisering og miRNA analyse af disse data danner et nyttigt redskab til at opdage biomarkører i en ikke-invasiv måde under den indledende diagnose og opfølgning.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Total exosome isolation kit (from plasma)  Invitrogen 4484450 Use Proteinase K treatment
Ribonuclease A Sigma-Aldrich R4875-100MG
ALIX Antibody (3A9) Cell Signaling 2171S
TSG-101 Antibody (C-2) SantaCruz Biotecnology SC-7964 
Anti-Mouse HRP 1 ml   Cell Signaling 7076P2
RNAspin Illustra mini kit 50 GE HealthCare 25-0500-71
Taqman MicroRNA Reverse Transcription Kit Life Technologies 4366596
hsa-miR-1228-3p TaqMan MicroRNA assay Life Technologies 002919
hsa-miR-30b TaqMan MicroRNA assay Life Technologies 000602
hsa-miR-30c TaqMan MicroRNA assay Life Technologies 000419
hsa-miR-122 TaqMan MicroRNA assay Life Technologies 002245
hsa-miR-195 TaqMan MicroRNA assay Life Technologies 000494
hsa-miR-203 TaqMan MicroRNA assay Life Technologies 000507
hsa-miR-103 TaqMan MicroRNA assay Life Technologies 000439
hsa-miR-221 TaqMan MicroRNA assay Life Technologies 000524
hsa-miR-222 TaqMan MicroRNA assay Life Technologies 002276
TaqMan Universal Master Mix II, no UNG Life Technologies 4440043

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Jemal, A., Siegel, R., Ward, E., Hao, Y., Xu, J., Thun, M. J. Cancer statistics. Cancer J Clin. 59, 225-249 (2009).
  2. Rolfo, C., et al. Novel therapeutic strategies for patients with NSCLC that do not respond to treatment with EGFR inhibitors. Cancer Treat Rev. 40, 990-1004 (2014).
  3. Rolfo, C., et al. Liquid biopsies in lung cancer: the new ambrosia of researchers. Biochim Biophys Acta. 1846, 539-546 (2014).
  4. Thery, C., Zitvogel, L., Amigorena, S. Exosomes: composition, biogenesis and function. Nat Rev Immunol. 2, 569-579 (2002).
  5. Fontana, S., Saieva, L., Taverna, S., Alessandro, R. Contribution of proteomics to understanding the role of tumor-derived exosomes in cancer progression: state of the art and new perspectives. Proteomics. 13 (10-11), 1581-1594 (2013).
  6. Taverna, S., et al. Exosomal shuttling of miR-126 in endothelial cells modulates adhesive and migratory abilities of chronic myelogenous leukemia cells. Mol Cancer. 11, (2014).
  7. Taverna, S., et al. Curcumin inhibits in vitro and in vivo chronic myelogenous leukemia cells growth: a possible role for exosomal disposal of miR-21. Oncotarget. , (2015).
  8. Garofalo, M., et al. MicroRNA signatures of TRAIL resistance in human non-small cell lung cancer. Oncogene. 27, 3845-3855 (2008).
  9. Rabinowits, G., Gerçel-Taylor, C., Day, J. M., Taylor, D. D., Kloecker, G. H. Exosomal microRNA: a diagnostic marker for lung cancer. Clin Lung Cancer. 10 (1), 42-46 (2009).
  10. Hu, J., et al. Human miR-1228 as a stable endogenous control for the quantification of circulating microRNAs in cancer patients. Int J Cancer. 135 (5), 1187-1194 (2014).
  11. Alessandro, R., et al. Effects of carboxyamidotriazole on in vitro models of imatinib-resistant chronic myeloid leukemia. J Cell Physiol. 215, 111-121 (2008).
  12. Zhao, Y., et al. Exosomes Derived from Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells Relieve Acute Myocardial Ischemic Injury. Stem Cells Int. 2015, (2015).
  13. Yoko, T., et al. Up-regulation of MDR'1and induction of doxorubicin resistance by histone deacetylase inhibitor depsipeptide (FK228) and ATRA in acute promyelocytic leukemia cells. Blood. 107 (4), 1546-1554 (2006).

Tags

Medicin Exosomer miRNA NSCLC Liquid biopsi Cancer Biomarkør
Exosomal miRNA analyse i ikke-småcellet lungekræft (NSCLC) Patienter &#39;plasma Gennem qPCR: En gennemførlige Liquid biopsi værktøj
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Giallombardo, M., Chacártegui… More

Giallombardo, M., Chacártegui Borrás, J., Castiglia, M., Van Der Steen, N., Mertens, I., Pauwels, P., Peeters, M., Rolfo, C. Exosomal miRNA Analysis in Non-small Cell Lung Cancer (NSCLC) Patients' Plasma Through qPCR: A Feasible Liquid Biopsy Tool. J. Vis. Exp. (111), e53900, doi:10.3791/53900 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter