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खरगोशों में subretinal सर्जरी के लिए कदम प्रोटोकॉल द्वारा एक कदम

Published: September 13, 2016 doi: 10.3791/53927
Automatic Translation
1, 1, 1,2, 1, 1, 3, 3, 5, 4, 1,6
1Department of Ophthalmology, University of Bonn, 2Department of Ophthalmology, National University of Singapore, 3Geuder AG, 4Department of Ophthalmology, University of Münster, 5Section on Epithelial and Retinal Physiology and Disease, National Eye Institute/National Institutes of Health, 6Surgical Retina Department, Singapore National Eye Centre

Summary

रेटिना वर्णक उपकला (RPE) प्रतिस्थापन रणनीतियों और जीन आधारित चिकित्सा कई रेटिना अपक्षयी स्थितियों के लिए माना जाता है। नैदानिक ​​अनुवाद के लिए, बड़े आंख पशु मॉडल शल्य चिकित्सा रोगियों में लागू तकनीकों का अध्ययन करने के लिए आवश्यक हैं। यहाँ हम RPE प्रत्यारोपण, जो बहुमुखी और लागत प्रभावी है की दिशा में सक्षम subretinal सर्जरी के लिए एक खरगोश मॉडल प्रस्तुत करते हैं।

Abstract

उम्र से संबंधित धब्बेदार अध: पतन (एएमडी), रेटिनाइटिस पिगमेंटोसा और अन्य RPE संबंधित रोगों औद्योगिक रूप से विकसित देशों में वयस्कों में दृष्टि के अपरिवर्तनीय नुकसान के लिए सबसे आम कारण होते हैं। RPE प्रत्यारोपण, एक होनहार चिकित्सा के रूप में के रूप में यह, बेकार RPE की जगह ले सकती अपने कार्य, और इस तरह दृष्टि बहाल प्रकट होता है।

यहाँ हम खरगोश की subretinal अंतरिक्ष (एसआरएस) में एक पाड़ पर एक सुसंस्कृत RPE monolayer रोपाई के लिए एक विधि का वर्णन है। बाद vitrectomy xenotransplants एक कस्टम मेड एक polytetrafluoroethylene (PTFE) लेपित सवार के साथ एक 20 गेज धातु नोक से मिलकर शूटर का उपयोग एसआरएस में कर दिया गया था। मौजूदा तकनीक 6 वर्ष से अधिक 150 से अधिक खरगोश सर्जरी में विकसित हुआ। पोस्ट ऑपरेटिव अनुवर्ती ऐसे वर्णक्रमीय डोमेन ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी (एसडी अक्टूबर) छिड़काव तय ऊतक विज्ञान के द्वारा पीछा के रूप में गैर-आक्रामक और vivo इमेजिंग में दोहराव का उपयोग कर प्राप्त किया जा सकता है।

गुई विधि आसान सीखने और उच्च सफलता दर के लिए अच्छी तरह से परिभाषित कदम है। खरगोश एक बड़ी आंख पशु मॉडल नैदानिक ​​अनुवाद के लिए preclinical अध्ययन में उपयोगी माना जाता है। इस संदर्भ में खरगोश अन्य बड़े आंख पशु मॉडल के लिए एक लागत प्रभावी और शायद सुविधाजनक विकल्प हैं।

Introduction

के रूप में यह केंद्रीय दृष्टि की हानि का कारण बनता है उम्र से संबंधित धब्बेदार अध: पतन (एएमडी), औद्योगिक रूप से विकसित देशों में 50 वर्ष की आयु या पुराने वयस्कों में दृश्य हानि का सबसे आम कारण है। इन रोगियों के बारे में 15% की बीमारी की "गीले" फार्म, जिसमें neovascularization रंजित से निकलती है और रेटिना समारोह 1 बाधित से पीड़ित हैं। इस प्रकार antiangiogenic दवाओं 2 के दोहराया इंट्रा-vitreal इंजेक्शन के साथ एक अत्यधिक प्रभावी चिकित्सा द्वारा इलाज किया जा सकता है। हालांकि, रोगियों (~ 85%) के विशाल बहुमत सूखी रूप है, जो बाह्य जमा (जैसे, drusen) रेटिना वर्णक उपकला (RPE) के तहत की विशेषता है से पीड़ित हैं। ये जमा मैक्युला में रेटिना शोष के लिए अग्रणी RPE शिथिलता के कारण। किसी भी उपचारात्मक चिकित्सीय विकल्पों की कमी को देखते हुए, एएमडी एक अधिकता के विकास अनुसंधान के क्षेत्र में, जहां कई अलग अलग उपचारात्मक चिकित्सकीय दृष्टिकोण का परीक्षण किया जा रहा है में विकसित हुआ। सर्जिकल RPE प्रतिस्थापन हैएक आकर्षक भविष्य संभावना इस दुर्बल करने वाली बीमारी को हराने के लिए 3।

ऑटोलॉगस subretinal RPE प्रत्यारोपण मैक्युला में बेकार या खो RPE की जगह है, और संभावित अपनी शारीरिक समारोह 4-9 बहाल करने के लिए है। इस शल्य चिकित्सा तकनीक मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं (hESC) और प्रेरित pluripotent स्टेम सेल (IPSC) से RPE भेदभाव प्रोटोकॉल के विकास के साथ एक सफलता थी, प्रत्यारोपण के लिए 10 वैज्ञानिक RPE के एक असीमित स्रोत सेल दे रही है। RPE प्रत्यारोपण अब स्टेम सेल व्युत्पन्न चिकित्सा विज्ञान के लिए एक आकर्षक प्रथम मानव आवेदन के रूप में मान्यता प्राप्त है। आंख उत्कृष्ट शल्य चिकित्सा का उपयोग और इन विवो निगरानी उपकरण 11-13 में परिष्कृत प्रदान करता है।

RPE प्रत्यारोपण के लिए, एक ही रास्ता एक न्यूनतम इनवेसिव वितरण के लिए एक सेल निलंबन, आरती फाई सामाजिक वाहक substr का उपयोग कर, वैकल्पिक रूप से, बेहतर RPE विशेषताओं और प्रत्यारोपण समारोह को संरक्षित करने के साथ हैAtes (scaffolds) RPE प्रतिस्थापन के लिए 4,14,15 माना जा रहा है। बड़े पशु मॉडल preclinical सत्यापन, अभी तक जानवर से निपटने और सर्जिकल तकनीक तिथि 16-23 के लिए याद आ रही है पर विस्तृत तकनीकी जानकारी के लिए आवश्यक हैं।

हम और दूसरों 11,24 विपरीत 25 के लिए कुछ सबूत होने के बावजूद, एक कठोर अभी तक लोचदार वाहक सब्सट्रेट के उपयोग का सुझाव के रूप में यह सुरक्षित हैंडलिंग प्रदान करता है, monolayer अखंडता और कार्यक्षमता को बरकरार रखता है। समय के साथ हम subretinal अंतरिक्ष (एसआरएस) में सेल वाहक समर्थित RPE प्रत्यारोपण के आरोपण के लिए कई कस्टम डिजाइन उपकरणों और सहायक तकनीकों का परीक्षण किया है। हम intraoperative वीडियो रिकॉर्डिंग उपयोग किया, विवो स्कैनिंग लेजर आरोपण सफलता 14,26,27 का मूल्यांकन करने के वर्णक्रमीय डोमेन ऑप्टिकल जुटना टोमोग्राफी (SLO / SD अक्टूबर), और ऊतक विज्ञान के साथ संयुक्त ophthalmoscopy में। यहाँ हम खरगोशों में subretinal RPE प्रत्यारोपण के लिए हमारे वर्तमान सिफारिश प्रदान करते हैंजो 150 से अधिक प्रक्रियाओं में 5 अलग अलग खरगोश तनाव, 7 सेल वाहक सामग्री और 4 RPE सेल स्रोतों में परीक्षण किया गया।

Protocol

नेत्र अनुसंधान के क्षेत्र में जानवर से निपटने की नैतिकता: हम मेडिकल संकाय, बॉन विश्वविद्यालय की आचार समिति से अनुमोदन प्राप्त किया, और दिशा निर्देशों के विजन में अनुसंधान और नेत्र विज्ञान के लिए एसोसिएशन (ARVO) द्वारा कहा गया है का पालन करें। इसके अलावा, सभी प्रक्रियाओं नॉर्थ राइन वेस्टफेलिया के राज्य नियामक अधिकारियों द्वारा अनुमोदित किया गया। 20 डिग्री सेल्सियस, नियमित रूप से दिन के उजाले के लिए जोखिम, भोजन और पानी के लिए स्वतंत्र पहुँच के साथ मानकीकृत व्यक्ति पिंजरों में - पशु 18 के बीच तापमान के साथ एक वातानुकूलित कमरे में एक विशेष सुविधा में घर के अंदर आयोजित की गई।

नोट: जानवरों ऑपरेटिव समानता सुनिश्चित करने के लिए, एक पशु स्वास्थ्य स्कोर शीट का पालन किया जो निम्नलिखित निश्चित पशु बहिष्कार मापदंड शामिल है: 20% वजन घटाने के प्रवेश पर वजन की तुलना में; जानवर की स्पष्ट नीलिमा; पशु बुख़ार, ऐंठन है या समन्वय में कदम नहीं कर सकते हैं; । गतिभंग / paresthesia, जैसे, paralyzes; उदासीनता; चरम ऑटो विकृति (त्वचा घाव, कटे अंग)।

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1. साधन बंध्याकरण

  1. अल्ट्रासोनिक स्नान में पुन: प्रयोज्य उपकरणों रखें।
  2. 500 मिलीलीटर आसुत जल और साधन कीटाणुनाशक के 2 मिलीलीटर जोड़ें।
  3. स्वच्छ वाद्ययंत्र 15 मिनट के लिए झाडू समारोह का उपयोग।
  4. अल्ट्रासोनिक स्नान से उपकरणों निकालें और 5 मिनट के लिए आसुत जल का उपयोग कर अच्छी तरह कुल्ला।
  5. आटोक्लेव में उपकरणों डालें और (20 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस के तहत उपकरणों की नसबंदी) मानक कार्यक्रम का उपयोग करें।

2. साधन तैयारी

  1. स्थापना और एक बाँझ क्षेत्र बनाए रखने के लिए, एक बंद कमरे में काम कर रहे, शल्य चिकित्सा scrubs, मुखौटा और बाल कवर पहन कर। बाँझ सर्जिकल दस्ताने पहने से पहले हाथों को कीटाणुरहित। विस्तृत दृष्टिकोण के लिए 28 देखें।
  2. एक बाँझ कपड़ा पर निष्फल उपकरणों रखें।
  3. 1 मिलीलीटर 40 मिलीग्राम इंजेक्शन के लिए एक 27 जी सुई, शेष नमक के घोल (बीएसएस) के साथ 10 मिलीलीटर सिरिंज से जुड़ी triamcinolone के साथ भरा सिरिंज, और 5 मिलीलीटर सिरिंज ओ रखेंकपड़ा पर च स्नेहक।
  4. 3-0 रेशम, 7-0 vicryl, नेत्र चिपक (conjunctival / scleral रक्तस्राव को रोकने के लिए), ट्विस्टर धुंध स्पंज, घाव बंद स्ट्रिप्स (vitrectomy टिप ट्यूबिंग fixate करने के लिए), और झूमर endoillumination फाइबर एक कपड़ा पर तार रखें।
  5. 25 जी झूमर endoilluminator खोलना और प्रकाश मशीन बाँझ तकनीक का उपयोग करने के लिए कनेक्ट (2.1 कदम देखें)। vitrectomy मशीन बाँझ तकनीक का उपयोग करने के लिए उच्च गति vitrector और वेंचुरी कैसेट सहित vitrectomy सेट कनेक्ट (2.1 कदम देखें)।
  6. 500 मिलीलीटर बीएसएस बोतल खोलने और निर्माता के निर्देशों के अनुसार वेंचुरी कैसेट का हल कनेक्ट।

3. संज्ञाहरण और जानवर के पोजिशनिंग की तैयारी

  1. पशु वजन सटीक दवा की खुराक सुनिश्चित करने के लिए।
  2. इंट्रामस्क्युलर (आईएम) संज्ञाहरण 27 जी सुई शुरू करने के लिए 0.35 मिलीग्राम / किग्रा ketamine और 0.25 मिलीग्राम / किग्रा medetomidine युक्त के साथ 1 सिरिंज का उपयोग कर तैयार करें। सिरिंज मिश्रण करने के लिए पलटें।
  3. 1/3 टी के साथ 2 सीरिंज तैयारवह आपरेशन के दौरान संज्ञाहरण बनाए रखने के लिए खुराक।
  4. 5% ग्लूकोज समाधान और एक अंतःशिरा निषेचन के विकल्प के रूप में चमड़े के नीचे इंजेक्शन के लिए 18 जी सुई के 20 मिलीग्राम से युक्त सिरिंज तैयार करें।
  5. Mydriatic आंख की पुतली 3 एक्स 1 बूंद फैलने के लिए vitrectomy से पहले ड्रॉप दीजिए।
  6. कंबल के साथ कवर खरगोश संज्ञाहरण इंजेक्शन से पहले शांत करने के लिए, 30 सेकंड के लिए हिंद अंग (gluteal मांसपेशी) और इंजेक्शन स्थल के आसपास मालिश में इंजेक्षन।
    नोट: आईएम संज्ञाहरण के पहले शॉट के बारे में 1 रहता है - 2 घंटा। खरगोश के आकार, दवा सहिष्णुता, मोटी परत, तनाव और शरीर के तापमान पर निर्भर करता है। 45 मिनट - संज्ञाहरण दूर लुप्त होती का पहला संकेत एक अक्षिदोलन, बाद में इंजेक्शन के बारे में पिछले 30 (सर्जन द्वारा निगरानी की जानी चाहिए)।
  7. सम्मोहन, hyporeflexia, पीड़ानाश और जानवर की मांसपेशी छूट की पुष्टि करने से, उचित संज्ञाहरण की पुष्टि करें।
  8. , गर्दन की त्वचा गुना में चमड़े के नीचे इंजेक्शन (पं। 3.3) दे एक बार खरगोश बेहोश है।
  9. methylc जोड़ेellulose स्नेहक हर 5 - संचालित आंख में 10 मिनट, गैर संचालित आंखों में चिकनाई और टेप पलकों जोड़ें।
  10. शल्य चिकित्सा की मेज एक कवर के साथ लिपटी पर कवर खरगोश इस तरह के एक इष्टतम स्थिति में एक कपास कंबल के रूप में जगह (नाक से थोड़ा कंबल की एक मोल्ड के माध्यम से उठाया, तो यह आंख की सतह के साथ स्तर है) सर्जिकल माइक्रोस्कोप के नीचे। आंख सीधा संरेखित उद्देश्य माइक्रोस्कोप के लिए।
  11. उचित शरीर कोर तापमान सुनिश्चित गुदा थर्मामीटर (normothermia 39 ± 1 डिग्री सेल्सियस), 29 का उपयोग कर।
  12. कैंची (ब्लेड पर कुछ मरहम) का उपयोग कर काट eyelashes पश्चात संक्रमण को कम करने के लिए।
  13. topically 1 मिनट के लिए 0.1 ग्राम / एमएल povidone आयोडीन के 3 बूँदें और बाँझ बीएसएस से कुल्ला - आंख 2 का उपयोग कर कीटाणुरहित।
  14. आंख के लिए बीच में पूर्व में कटौती खोलने के साथ बाँझ कपड़ा के साथ आंख को कवर और फिर (चिपचिपा) शल्य चीरा टांगना 12 x 17 सेमी के साथ कवर।

4. vitrectomy

  1. Proptose और निवेश संबंधी निर्णय का उपयोग करते हुए 3-0 से रेशम के साथ सुरक्षित आंखerted कैलीपर और, एक conjunctival peritomy प्रदर्शन करते हैं।
    1. रक्त वाहिकाओं से किनारी के करीब है, लेकिन काफी दूर तक एक vannas कैंची (~ 1 मिमी दूरी) के साथ कंजाक्तिवा काटकर अलग कर देना।
    2. एक "टी-कट" बनाने के द्वारा कंजाक्तिवा काटना। 7 मिमी - सबसे पहले कैंची समानांतर के साथ peritomy किनारी और उसके बाद के बारे में 6 के लिए एक "टी" के रूप में खड़ी कंजाक्तिवा काटकर अलग कर देना बढ़ाना है। ध्यान से कंजाक्तिवा दो टूक अलग।
  2. ध्यान से ऑप्टिक तंत्रिका की ओर दिशा में ब्लेड के तेज टिप डालने से दाहिनी आंख / आयुध डिपो (बाईं आंख / ओएस पर 4 बजे के) पर 8 बजे एक sclerotomy एक 23 जी microvitreoretinal (एमवीआर) ब्लेड का उपयोग कर प्रदर्शन करना। धीरे-धीरे एक ही दिशा में ब्लेड वापस लेना और sclerotomy विस्तार से बचें।
  3. डालें और सिवनी कस्टम पक्ष पोर्ट-अर्क प्रवेशनी 27 24 एमएमएचजी पर 7-0 रेशम सिवनी और सेट intraocular दबाव (आईओपी) का उपयोग।
  4. आयुध डिपो (10 ओ 'पर 2 बजे 25 जी फ्लैट सिर trocar के साथ एक sclerotomy प्रदर्शन करना; ओएस पर घड़ी) चरण के लिए 4.2 समान है।
  5. फ्लैट सिर trocar में 25 जी झूमर प्रकाश डालें, चिपचिपा टेप के साथ fixate और सीए 30% पर प्रकाश स्रोत पर कर देते हैं।
  6. यदि आवश्यक हो, बेहतर intraocular दृश्य के लिए एक # 20 स्केलपेल का उपयोग edematous कार्निया उपकला को हटा दें।
  7. आयुध डिपो पर 10 बजे (2 ओएस पर बजे), (पूर्व) जगह यू के आकार गाँठ बांधने के बिना sclerotomy के आसपास 7-0 टांके, और डालने vitrectomy कटर नोक पर 4.2 कदम करने के लिए एक समान sclerotomy प्रदर्शन करना।
  8. Vitrectomy 30 प्रविष्टि बंदरगाह के आसपास शुरू करो, तो ऑप्टिक डिस्क और fibrae medullares अधिकतम पर छोटे टुकड़ों में कांच का हास्य काटने से उच्च गति vitrector का उपयोग करने पर जारी है। 2,000 - 3,000 कटौती / मिनट, मैक्स पर aspirating। Vitrectomy मशीन के घोषित पैरामीटर सेटअप का उपयोग कर 200 एमएमएचजी (तालिका 1)
  9. पीछे ध्रुव एक से अधिक उच्च गति vitrector धारण करके एक पीछे कांच का टुकड़ी (पीवीडी) रेटिना से कांच का हास्य अलग से प्रदर्शन करनाएन डी (यदि संभव धीरे) डिस्क 31 जबकि केवल अधिकतम पर श्वास के बेहतर। काटने के बिना 200 एमएमएचजी।
  10. Intravitreally vitrectomy दौरान कल्पना और सुविधाजनक बनाने के (कुल के पास) को पीछे ध्रुव और midperiphery पर तैरते शीशे को हटाने के सीए 50 μl (20 मिलीग्राम) triamcinolone या पतला fluorescein (सीए 0.1 मिलीग्राम / एमएल) इंजेक्षन। लेंस के तहत पार करने से बचें। एक (कुशल) सहायक द्वारा परिधीय शीशे दाढ़ी बनाने के लिए खरोज अगर गैस तीव्रसम्पीड़न वांछित है की सिफारिश की है।
  11. समानांतर या कदम 4.10 बाद में बीएसएस आसव समाधान में 0.001 मिलीग्राम / एमएल के अंतिम एकाग्रता के लिए 20 इकाइयों / एमएल हेपरिन और 0.5 मिलीग्राम एपिनेफ्रीन जोड़ें।
    नोट: के रूप में हेपरिन / एपिनेफ्रीन intraocular इंजेक्शन नहीं कर रहे हैं उनके प्रभाव अर्क प्रवाह की दर के आधार पर देरी कर रहे हैं।

निशानेबाज 5. लोड हो रहा है

नोट: काम यहाँ बताया हेलसिंकी की घोषणा के सिद्धांतों के तहत गिर नहीं करता है; यह मानव रोगियों को शामिल नहीं किया था। इधर, एसटीएndard RPE कोशिकाओं भ्रूण मानव आंखों, सुसंस्कृत और uncoated 10 माइक्रोन मोटी पॉलिएस्टर पर भेदभाव (पीईटी) हमारे पहले प्रकाशित प्रोटोकॉल के अनुसार 14 आवेषण से अलग थे। मानव भ्रूण सामग्री के साथ काम करने की अनुमति बॉन विश्वविद्यालय की आचार समिति से प्राप्त हुई थी। वैकल्पिक रूप से, वह-RPE Skottman लैब (। प्रस्तुत करने में पांडुलिपि) है, जहां वे तकनीक Vaajasaari एट अल द्वारा वर्णित के अनुसार सुसंस्कृत थे से भेज दिया गया है 32। इन कोशिकाओं के लिए एक अनुमति आर कॉख संस्थान, बर्लिन, जर्मनी से प्राप्त किया गया है।

  1. नेत्र ग्रेड बीएसएस के साथ प्रत्यारोपण 3x की तैयारी से पहले सेल संस्कृति कुल्ला।
  2. एक मानक सेल संस्कृति 10 मिलीलीटर नेत्र ग्रेड बीएसएस के साथ (100 x 20 मिमी) पकवान भरें।
  3. बीएसएस में सेल संस्कृति डालने जोड़ें और एक प्रकाश माइक्रोस्कोप के तहत पकवान केंद्र।
  4. एक कुंद, अंडाकार, कस्टम बनाया सुई के साथ एक 2.4 x 1.1 मिमी प्रत्यारोपण बाहर पंच एक फ्लैट, सेम के आकार सब्सट्रेट प्राप्त करने के लिएदो लंबे किनारों और दो गोल किनारों के साथ।
  5. धीरे बीएसएस भरा कस्टम मेड लोडिंग स्टेशन (चित्रा 1) में समाविष्ट बाहर निकलवाने के लिए बीएसएस के साथ दूसरे बंदरगाह के माध्यम से सुई बाढ़।
  6. वैकल्पिक रूप से, प्रत्यारोपण (<0.5 मिमी) का एक दौर अंत में कटौती सिर्फ एक तिहाई बढ़त प्राप्त करने के लिए।
  7. सुनिश्चित करें कि प्रत्यारोपण सुनिश्चित करना है कि monolayer सेल वाहक पर उल्टा है के द्वारा सही ओरिएंटेशन में है सुनिश्चित करें। ध्यान से दो नलियां का उपयोग स्थिति को बदलने के लिए।
  8. सुई धारक का उपयोग कर जब तक प्रत्यारोपण के सभी टिप के अंदर सुरक्षित है शूटर साधन में धीरे से और पूरी तरह से प्रत्यारोपण पुश। सवार मुकर रहना चाहिए।
  9. आरोपण के क्षण तक बीएसएस के तहत लोडिंग स्टेशन में "लोड" शूटर टिप रखें।

6. आरोपण

  1. लचीला 41 जी subretinal इंजेक्शन एक gastight सिरिंज से जुड़ा सुई के साथ तंत्रिका रेटिना दृष्टिकोण (सुनिश्चित करें कि सभी हवाई बुलबुले को निकाल लिया गया हैट्यूबिंग से!)।
  2. बीएसएस (कैल्शियम और मैग्नीशियम / मुख्यमंत्री के साथ) इंजेक्षन subretinally और इस तरह के बारे में 2 की एक छाला रेटिना टुकड़ी (बीआरडी) बनाने के लिए - 3 डिस्क व्यास (डीडी)। आंख प्रति दो बीआरडी सुरक्षित रूप से उठाया जा सकता है।
  3. खड़ी 23 जी वी.आर.-कैंची के साथ 1.5 मिमी के लिए retinotomy बढ़ाना है। subretinal अंतरिक्ष अब आरोपण या आगे की चालों के लिए सुलभ है।
  4. sclerotomy (ठीक) 20 जी दृष्टिकोण के लिए एक 1.4 मिमी चीरा चाकू से बढ़ाएँ।
  5. एक 20 जी शूटर डमी का उपयोग कर sclerotomy से गुजर प्रयास, विस्तार के रूप में चिकनी, लोड शूटर की अभी तक सुखद संक्रमण सुनिश्चित करने की जरूरत है।
  6. 24 एमएमएचजी पर आदर्श sclerotomy के माध्यम से भरी हुई शूटर 27 के साथ गुजरती हैं।
  7. बढ़त retinotomy दृष्टिकोण और एक epiretinal स्थिति से subretinally प्रत्यारोपण बाहर निकालें।
  8. यकीन है कि यह यथोचित retinotomy से दूर retina- अंतर्गत अच्छी तरह से तैनात है बनाने के लिए आधा बंद 23 जी कैंची, संदंश या 41 जी सुई के साथ प्रत्यारोपण को समायोजित करें।

7।ऑपरेशन खत्म होने वाली

  1. 25 जी झूमर और अर्क प्रवेशनी निकालें।
  2. सभी sclerotomies सिवनी।
  3. 8 बजे के sclerotomy (पूर्व suturing पिछले sclerotomy के लिए) द्वारा 25 μl (10 मिलीग्राम) triamcinolone इंजेक्षन।
  4. चेक / टटोलने का कार्य द्वारा IOP को समायोजित करने और के माध्यम से 30 जी सुई / सिरिंज बीएसएस इंजेक्षन, अगर जरूरत है।
  5. 7-0 vicryl साथ सीवन कंजाक्तिवा।
  6. proptosing 3-0 रेशम गोफन धीरे धीरे निकालें (गहरी कक्षीय शिरापरक जाल से बचें!)।
  7. ढक्कन के तहत dexamethasone / एंटीबायोटिक मलहम जोड़ें।
  8. 1 घंटे के लिए स्थिति संचालित आंख (w / ओ गैस) नीचे सामना करना पड़ रहा है, या (हवा / गैस के साथ) के साथ कंबल के साथ कवर किया।
  9. पशु छोड़ पहुंच से बाहर है जब तक यह स्टर्नल लेटना बनाए रखने के लिए पर्याप्त होश आ मत करो।
  10. पहले संज्ञाहरण पूरी तरह से fades खरगोश परिवहन मत करो, यह medetomidine इंजेक्शन लगाने दिया medetomidine की राशि के बराबर एजेंट पीछे से तेजी जा सकता है।

8. पोस्ट ऑपरेटिव पशु की देखभाल

  1. रखनाउपयुक्त परिस्थितियों (तापमान, प्रकाश, भोजन, पानी, अंतरिक्ष, आदि।) और एक विशेष सुविधा में करीब से निगरानी के तहत खरगोश।
  2. सुनिश्चित करें कि पशु खैर, विश्राम किया जाता है अर्थात्।, भोजन या पानी के अभाव का कोई विस्तारित अवधि के।
  3. किसी भी घाव या चोट के लिए देखो, विशेष रूप से इंजेक्शन साइटों पर।
  4. घाव में संक्रमण को रोकने के लिए सूखा रखें। 1 मिलीग्राम / जी, neomycin सल्फेट 3,500 आइयू / जी, polymyxin बी सल्फेट 6,000 आइयू / जी मरहम नेत्र सतह पर 1 सप्ताह के पश्चात के लिए दिन में दो बार लागू किया गया था dexamethasone: एंटीबायोटिक्स देना जब संक्रमण का संदेह है।
  5. बेहतर सतह नेत्र उत्थान और कम पोस्ट ऑपरेटिव दर्द के लिए दिन में दो बार अगले 7 दिनों के पश्चात के लिए dexamethasone / एंटीबायोटिक मलहम जोड़ें।
  6. प्रणालीगत दर्दनाशक दवाओं में एल्बम (Carprofene 4 मिलीग्राम / किग्रा में दो बार) प्रारंभिक 48 घंटे के लिए।
  7. एक जानवर की पहुंच से बाहर छोड़ जब तक यह पर्याप्त होश आ गया है स्टर्नल लेटना बनाए रखने के लिए नहीं है।
  8. एक जानवर वापस नहीं है किजब तक पूरी तरह से बरामद अन्य जानवरों की कंपनी के लिए सर्जरी आया है।
  9. अनावश्यक संकट के लिए जानवरों का खुलासा नहीं करते।

9. SLO / एसडी अक्टूबर गाइडेंस

  1. तैयार है और इंजेक्षन इंट्रामस्क्युलर (आईएम) संज्ञाहरण 27 जी सुई शुरू करने के लिए 0.175 मिलीग्राम / किग्रा ketamine और 0.125 मिलीग्राम / किग्रा medetomidine युक्त के साथ 1 सिरिंज का उपयोग। सिरिंज मिश्रण करने के लिए पलटें।
  2. एक स्नेहक आंख moisturize और स्पष्ट एसडी अक्टूबर इमेजिंग बनाए रखने के लिए जोड़े में कम से कम हर 5 मिनट, वैकल्पिक रूप से एक कस्टम संपर्क लेंस का इस्तेमाल किया जा सकता है।
  3. आवश्यक स्थिति में पशु को स्थिर करने के लिए एक headrest स्टील मंच संलग्न।
  4. स्टील मंच पर खरगोश की जगह, जांच के लिए सीधा अपनी आंख रखकर।
  5. कम गाल की हड्डी (mandibula) श्वासनली से बचने से खरगोश के सिर पकड़ो।
  6. मोटे तौर पर 45 डिग्री एसडी अक्टूबर जांच की दिशा द्वारा झुकाव पशु के सिर प्रत्यारोपण पर देखने के कोण अनुकूलन करने के लिए।
  7. एक 30 डिग्री लेंस और चुनते के लिए निम्न पैरामीटर का उपयोगIMAL अक्टूबर इमेजिंग [एच एस]: एकल लाइन के लिए 30 डिग्री सेटिंग्स 100 (औसत) के लिए सेट कला मोड और कला 15 के लिए सेट मोड के साथ मात्रा स्कैन के लिए 20 x 20 डिग्री सेटिंग्स के साथ स्कैन करता है; उच्च संकल्प मोड की आवश्यकता नहीं है।
  8. SLO अवरक्त reflectance इमेजिंग का उपयोग प्रत्यारोपण (छवि 2A।) के फोकल हवाई जहाज़ खोजने के लिए; इष्टतम फोकस तक पहुँच जाता है जब (सभी) प्रत्यारोपण किनारों तेज 14 हैं।
  9. ढक्कन के तहत dexamethasone 1 मिलीग्राम / जी, neomycin सल्फेट 3,500 आइयू / जी, polymyxin बी सल्फेट 6,000 आइयू / जी मरहम जोड़े जब समाप्त हो गया।

Representative Results

Subretinal आरोपण के लिए वर्णित विधि से परिणाम तालिका 2 engraftment में दिखाया जाता है के तहत रेटिना जब एक कोर vitrectomy प्रदर्शन किया गया था सीए की सफलता दर 61% थी और 76%, जब पीछे कांच का टुकड़ी प्रेरित किया गया था करने के लिए गुलाब। इन नंबरों को जानवरों, जो या तो intraoperatively या पहले 3 दिनों पश्चात में मारे गए 21% सीए शामिल हैं। इस तकनीक को एक साथ एक आंख में विभिन्न क्षेत्रों रेटिना पर दो मचानों प्रत्यारोपण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।

खरगोश के रूप में Stanzel एट अल द्वारा वर्णित विवो में पश्चात एसडी अक्टूबर और histologic प्रसंस्करण ऊपर का पालन कराना पड़ा। 27 (चित्रा 2)। अंजीर। 2A एक सीधी प्रत्यारोपण के बाद एक पॉलिएस्टर झिल्ली (पीईटी) पर प्रत्यारोपित सुसंस्कृत RPE की स्कैनिंग लेजर नेत्रदर्शक अवरक्त reflectance छवि को दर्शाता है।प्रत्यारोपण के आसपास प्रभामंडल शोष फोटोरिसेप्टर से मेल खाती है। अंजीर। 2 बी, इसी एसडी अक्टूबर, सूचना रेटिना, मुख्य रूप से बाहरी परमाणु परत (ONL) thinning, पर प्रत्यारोपण ऊपर एसडी अक्टूबर हाइपर चिंतनशील बैंड से पता चलता है, जबकि तंत्रिका रेटिना प्रत्यारोपण से सटे लगभग सामान्य प्रतिबिंब बैंड से पता चलता है। इन परिणामों के एक atraumatic वितरण सुझाव देते हैं। अंजीर। -2 सी चलता Hematoxiline / eosin (एच / ई) प्रत्यारोपण जो subretinal scarring और retinotomy साइट चिकित्सकजनित हेरफेर का एक परिणाम के रूप में की संभावना के आसपास ONL शोष चलता का दाग, पीईटी के ऊपर एक सन्निहित अभी तक अनियमित pigmented परत। प्रत्यारोपण के नीचे Bruch झिल्ली भी सन्निहित हो दिखाई दिया, और रंजितपटलकोशिका कुछ बिखरे एरिथ्रोसाइट्स में शामिल है। ये शब्द के भागों परिणाम एसडी अक्टूबर को तुलना कर रहे हैं और एक atraumatic वितरण की थीसिस को मजबूत।

आकृति 1
अंजीर Ure 1: पीईटी सेल वाहक पर मानव IPSC-RPE संवर्धित के साथ निशानेबाज लोड हो रहा है। ए) एक प्रत्यारोपण कस्टम मेड सुई। बी) सेल संस्कृति से काट बीन के आकार का प्रत्यारोपण का उपयोग कर बाहर छिद्रण दिखाता है। सी) प्रत्यारोपण की स्थिति पहले से लोड हो। डी) प्रत्यारोपण के साथ शूटर लोड हो रहा है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

चित्र 2
चित्रा 2: सभ्य मानव जब HES-RPE पालतू पर सेल वाहक खरगोश subretinal अंतरिक्ष में 4 सप्ताह। ए) शो SLO अवरक्त reflectance छवि, हरे रंग की लाइन पार अनुभाग छवि में दिखाया गया demarcates। 2 बी। बी) इसी एसडी अक्टूबर। सी) एच / ई दाग, पाठ या 26,27 जानकारी के लिए देखते हैं।ove.com/files/ftp_upload/53927/53927fig2large.jpg "लक्ष्य =" _blank "> यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

पैरामीटर खेतों में सेटिंग्स
vitrectomy 6000 में कटौती / मिनट
शून्य स्थान 200 एमएमएचजी
उठने का समय 1 सेकंड
वायु 24 एमएमएचजी
सिंचाई 24 CMH 2 हे
DiathErmy 30%

तालिका 1: vitrectomy मशीन के पैरामीटर सेटअप।

vitrectomy प्रत्यारोपण खरगोश संचालित सफल प्रत्यारोपण विफल प्रत्यारोपण मौत सफलता दर%
कोर vitrectomy पीईटी 30 19 4 7 63.33
पालतू + RPE 70 42 12 16 60
पीवीडी, w / पीपीवी plasmin ± पीईटी 28 21 2 5 75
पालतू + आर.पी.ए 22 17 2 3 77.27

तालिका 2: पिछले 150 विधि और प्रत्यारोपण प्रकार सहित संचालन का सारांश।

Discussion

एक खरगोश मॉडल का उपयोग करना, एक सुरक्षित और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य विधि एक कस्टम डिजाइन शूटर यंत्र के साथ subretinal अंतरिक्ष में सेल वाहक पर संवर्धित RPE के transvitreal प्रसव के लिए प्रस्तुत किया है। वर्णित विधि आसान सीखने के लिए एक छोटे / अनुकूलित सर्जिकल तकनीक प्रदान करता है, के रूप में यह subretinal युद्धाभ्यास के साथ vitrectomy में मानक तकनीक शामिल है। परिणाम काफी एक साफ vitreoretinal इंटरफेस है, और intraocular अर्क कि आरोपण साइट पर तरल पदार्थ अशांति से बचा जाता है, कम IOP में छाला रेटिना टुकड़ी (बीआरडी) उत्प्रेरण रेटिना और सूखापन के माध्यम से श्वेतपटल क्षति, और खरगोश की उचित स्थिति को रोकने के द्वारा मदद की है।

लेकिन हम चेतावनी देते हैं किसी भी समय हो सकता है कई इंट्रा-ऑपरेटिव जटिलताओं के रूप में, आरोपण की सफलता निरोधक, उदाहरण के लिए इंट्रा नेत्र bleedings, संज्ञाहरण, इस तरह के आरोपण के रूप में महत्वपूर्ण चरणों के दौरान बंद लुप्त होती साधन हेरफेर या नेत्र hypotony के कारण बीआरडी के ढहने, आरabbit hypoxic मस्तिष्क क्षति, या अतिताप के कारण लंबे ऑपरेशन के दौरान एनेस्थीसिया, कम रक्तचाप की अत्यधिक खुराक के कारण मौत। अभी तक इन जटिलताओं समय के साथ कम के रूप में वे जल्दी से घेरने की कोशिश की और सर्जिकल टीम के अनुभव को बढ़ाने के द्वारा हल कर रहे हैं।

कुछ जटिलताओं के कुछ सरल, अभी तक महत्वपूर्ण चरणों का पालन करके कम किया जा सकता है। आपरेशन के दौरान कार्निया, scleral और conjunctival नुकसान को रोकने के लिए, और बनाए रखने के लिए एक स्पष्ट intraocular मीडिया, सूखे के रूप में / काला श्वेतपटल घाव स्फुटन का एक कारण है, जो बारी में नेत्र hypotony और की ओर जाता है हो सकता है 10 मिनट - स्नेहक हर 5 जोड़ा जाना चाहिए / या sclerotomies से intraoperative रिसाव। हेपरिन कि विशेष रूप से subretinal आरोपण चुनौतीपूर्ण और एक साथ जोड़ने एपिनेफ्रीन हेपरिन 16 के तहत रक्तस्राव को कम करने के लिए बनाता है एक आतंच फिल्म के गठन को रोकने के लिए जोड़ा जाना चाहिए। बहुत लंबा हेपरिन / एपिनेफ्रीन जोखिम बार (> 1 घंटा) कार्निया Ede को रोकने के लिए बचा जाना चाहिएendothelial क्षति 33, उच्च रक्तचाप से ग्रस्त संकट या विपत्ति intraoperative द्वारा मा। सावधानीपूर्वक शीशे हटाने के उपकरण (प्रवेश) बंदरगाह पर प्रदर्शन किया जाना चाहिए रेटिना और / या choroidal टुकड़ी से बचने के लिए। Intraocular लेंस के साधन स्पर्श (चिकित्सकजनित मोतियाबिंद गठन का कारण बनता है) या (प्रवेश साइट) रेटिना क्षति से बचने के पीछे ध्रुव की ओर इशारा किया जाना चाहिए। एक intraocular पक्ष बंदरगाह अर्क प्रवेशनी, इस्तेमाल किया जाना चाहिए, क्योंकि यह आरोपण क्षेत्र के आसपास जेट स्ट्रीम attenuates, इस प्रकार retinotomy के अनियंत्रित फाड़, और बीआरडी के पतन को रोकने। midline में बीआरडी प्रेरण (ऑप्टिक नर्व से ऊर्ध्वाधर अक्ष) या ऑप्टिक फाइबर medullar के करीब व्यापक चिकित्सकजनित रेटिना टुकड़ी को रोकने के लिए बचा जाना चाहिए। अंत में, पिछले नहीं बल्कि कम से कम बीआरडी कम IOP पर प्रेरित किया जाना चाहिए, अत्यधिक प्रवाह की दर जो एक रेटिना को नुकसान हो सकता है का उपयोग कर (जैसे।, खींच द्वारा) subretinal बीएसएस इंजेक्शन से बचने के लिए।

इस तरह के सेल कैरी के रूप में कई अध्ययन चरआर वेरिएंट, भ्रूण, वयस्क या सेल व्युत्पन्न RPE सेल के सूत्रों स्टेम, immunosuppressants के लिए विकल्प, आदि।, 14,26,27,34 का पता लगाया जा सकता है। इस तरह के सीरम मुक्त RPE संस्कृति तरीकों, subretinal अंतरिक्ष में xenoRPE के लक्षण वर्णन, मेजबान RPE परत 14 या प्रत्यारोपण लंगर के लिए रणनीति को हटाने के रूप में आगे सुधार का कार्य प्रगति पर वर्तमान काम कर रहे हैं।

तिथि करने के लिए वर्णित तकनीक चिनचिला कमीने, चिनचिला कमीने / KBL संकर, न्यूजीलैंड व्हाइट / रेड क्रॉस, न्यूजीलैंड व्हाइट (सूरजमुखी मनुष्य) और डच बज सहित 5 अलग अलग खरगोश उपभेदों, पर इस्तेमाल किया गया है। दोनों पुरुष और महिला खरगोश, पर संचालित खरगोशों के साथ कम से कम 1.5 किलो या उम्र के 2 महीने (प्रजातियों पर निर्भर करता है) कर रहे थे। 3 किलो - सबसे सर्जरी 2.5 के बीच वजन के साथ pigmented खरगोश (चिनचिला कमीने या चिनचिला कमीने संकर) पर थे।

खरगोश उपभेदों हम साथ काम करने का अवसर मिला है सब के सब कुछ peculiarities करने लगते हैं। exclus को देखते हुए2009-13 में जर्मनी में चिनचिला कमीने तनाव के pigmented खरगोश की Ive उपलब्धता, हम इन जानवरों के साथ सबसे ज्यादा अनुभव एकत्र किया है। दुर्भाग्य से यह अब उपलब्ध नहीं है, क्योंकि प्रजनन बंद कर दिया गया है, लेकिन अधिक लाभप्रद मोटा श्वेतपटल और बाद में बड़ी मात्रा में आंख को छोड़कर न्यूजीलैंड व्हाइट / रेड क्रॉस के लिए बहुत अच्छी तरह से तुलना करती है। चिनचिला कमीने संकर महत्वपूर्ण intraoperative आतंच गठन किया है और जैसा कि ऊपर उल्लिखित सफल subretinal युद्धाभ्यास सुनिश्चित करने के लिए हेपरिन / एपिनेफ्रीन उपयोग की आवश्यकता है। इस प्रोटोकॉल भी, हालांकि विशेष रूप से बीआरडी सृजन गैर pigmented सूरजमुखी मनुष्य खरगोश (न्यूजीलैंड व्हाइट) में प्रदर्शन किया गया है और subretinal आरोपण कम विपरीत प्रशंसा दिया और अधिक चुनौतीपूर्ण है। एक पीछे कांच का टुकड़ी उत्प्रेरण की व्यवहार्यता खरगोश तनाव हमारे हाथ में निर्भर नहीं मालूम था।

Transvitreal subretinal प्रसव होने की संभावना चुनाव के भविष्य के लिए शल्य चिकित्सा की रणनीति को देखते हुए यह सबसे कॉम है मार्ग पर आजकल चिकित्सकीय रेटिना का उपयोग करने के लिए। एक परिणाम के रूप में कई अन्य समूहों के वाहक पशु काम 11,15,23,35 में समर्थन करता है पर सुसंस्कृत RPE के लिए इस तरह की तकनीक प्रस्तुत किया है। Aramant एट अल। 36 एक साधन है, जो स्थानों के बजाय अपनी subretinal लक्ष्य साइट के लिए अपनी हाइड्रोजेल समझाया मुलायम प्रत्यारोपण धक्का है। Thumann एट अल के डिजाइन। एक खोखले रंग है, जो इसे अस्थायी बंद तरल पदार्थ इंजेक्शन के माध्यम से 19 से वाहक समर्थित भ्रष्टाचार विज्ञप्ति का इस्तेमाल करता है। दोनों पूर्व रणनीतियों साधन है, जो हमारे विचार में, अधिक जटिलताओं का खतरा है जब एक epiretinally appositioned साधन की तुलना में subretinal प्रविष्टि की आवश्यकता है। Montezuma एट अल। 22 सूअरों में subretinal चिप प्रत्यारोपण के वितरण के लिए एक subretinal inserter साधन वर्णित है, लेकिन आगे कोई काम हमारे ज्ञान का सबसे अच्छा करने के बाद से प्रकाशित किया गया है। हम सुअर के लिए कुछ संशोधन के साथ वर्णित तकनीक का विस्तार करने में सक्षम है।

jove_content "> हमारे पसंदीदा सेल वाहक 10 माइक्रोन मोटी पॉलिएस्टर terephthalate (पीईटी) झिल्ली कर रहे हैं। एक शल्य चिकित्सा के नजरिए से इस सामग्री, अनुकूल कठोरता और लोच पैरामीटर है सेल संस्कृति प्रयोगों के दौरान इसकी व्यापक बहुमुखी प्रतिभा के अलावा। हम विस्तार tetrafluoroethylene के साथ इसी तरह का अनुभव पाया जब लैक्टिक-सह-एसिड (पीएलजीए), साथ ही समग्र nanofiber (पीएलजीए या पीईटी) और Ultrathin पीईटी 26 - (ePTFE) पीईटी, पाली लैक्टिक / capronolactic एसिड (PLCL) या पाली से Electrospun 37 या nanofiber झिल्ली। पीईटी झिल्ली हमारे धातु शूटर यंत्र के साथ इस्तेमाल कर रहे हैं, वे एक सामयिक प्रवृत्ति है electrostatic प्रभारी, जो शूटर 27। Ultrathin polyimide झिल्ली हमारे हाथ में ऊपर उल्लिखित प्रोटोकॉल के साथ subretinal अंतरिक्ष में नहीं प्रत्यारोपित किया जा सकता से उनकी इजेक्शन चुनौतियों के प्रदर्शन करने के लिए ( तैयारी में पांडुलिपि)।

Marmor एट अल। व्यवस्थित सहज Reso का अध्ययन किया हैचिकित्सकजनित स्थानीय रेटिनल डिटेचमेंट 38-41 में subretinal तरल पदार्थ की rption। यहाँ तक कि subretinal अंतरिक्ष में हेरफेर के बाद इन ऊंचा नीचा सर्जरी में पश्चात दिन 4 से reabsorbed जा पाए गए। लेजर retinopexy retinotomy के किनारों को सुरक्षित करने के लिए नहीं किया जाता है। हालांकि counterintuitive जब मानव सर्जरी की तुलना में, हवा / गैस तीव्रसम्पीड़न की आवश्यकता नहीं है। जब तक परिधीय कांच की सावधानीपूर्वक हटाने प्राप्त किया जा सकता है, विशेष रूप से बेहतर चक्र में, यह वास्तव में विशाल रेटिना retinotomy साइट से होने वाले आँसू में परिणाम हो सकता है। यह केवल intraoperative चिकित्सकजनित रेटिनल डिटेचमेंट या मामले में एक विशेष प्रत्यारोपण स्थिति सुरक्षित होने की जरूरत के निस्तारण करने के बाद 20% SF6 गैस तीव्रसम्पीड़न के साथ तरल पदार्थ हवा विनिमय प्रदर्शन करने की सिफारिश की है।

हालांकि तंत्रिका रेटिना की यंत्रवत् प्रेरित पृथक खरगोश 42,43 में RPE और फोटोरिसेप्टर नुकसान हो सकता है, इसकी हद तक बहुत (यहां तक कि नियमित बीएसएस) के साथ बदलता रहता है deऐसे जिससे प्रेरित रेटिना के साथ प्रयोग किया IOP, सिरिंज प्रकार, इंजेक्शन की मात्रा खींच, आदि जैसे कारकों पर लंबित है। हम यह भी परीक्षण किया है अक्सर सिफारिश सीए / एमजी से मुक्त बीएसएस मदद की टुकड़ी 42-44, लेकिन पाया कि यह intraoperative लेंस अपारदर्शन (विशेष रूप से ऊंचा तापमान के साथ) का कारण बनता है, और काफी देरी या यहां तक कि रेटिना फिर से लगाव 27 impairs। 20 की धीमी subretinal इंजेक्शन - एक 100 μl सिरिंज के साथ नियमित रूप से बीएसएस के 30 μl मात्रा इसलिए सिफारिश की है, इंजेक्शन सुई आंदोलनों तो यह चारों ओर retinotomy जवानों कम से कम हो सकता है और Bruch झिल्ली क्षति को रोकने चाहिए। चिकित्सकजनित क्षति के कुछ RPE घाव भरने करके हल किया जा सकता है, और reattachment के बाद ONL मोटाई का मनाया रिश्तेदार संरक्षण, पता चलता है कि RPE / फोटोरिसेप्टर जटिल इस हानि बर्दाश्त कर सकते हैं के रूप में भी दूसरों के 45 से वर्णित है,।

सेल आधारित चिकित्सा विज्ञान या रेटिना कृत्रिम अंग preclinical एनिमा की आवश्यकता होती हैएल परीक्षण नियामक की मंजूरी से पहले और मानव सुरक्षा अध्ययन शुरू। पूर्व देश से देश के लिए अलग अलग। खरगोश मॉडल यहाँ वर्णित की स्थापना या यहां तक ​​कि नियामक अधिकारियों द्वारा सभी आवश्यकताओं को बाहर ले जाने के लिए एक लागत प्रभावी और कम चुनौतीपूर्ण मंच के रूप में सेवा कर सकते हैं। इसके अलावा, यह बाद में अंतिम multicenter क्लिनिकल परीक्षण या जिस तरह से साथ तकनीक के आगे सुधार में सर्जनों के प्रशिक्षण के लिए सेवा कर सकते हैं।

Disclosures

आरबी, BVS, ZL, पूर्वोत्तर और Geuder एजी शूटर पर एक यूरोपीय पेटेंट आवेदन दायर किया है। एनबी Geuder एजी के एक कर्मचारी है। इस वीडियो लेख के लिए प्रकाशन फीस Geuder एजी द्वारा भुगतान किया गया।

Acknowledgments

2008 और 2010 (BVS), BONFOR / Gerok छात्रवृत्ति हे 137.0015 (BVS), BONFOR / Gerok छात्रवृत्ति हे 137.0019 (एफटी), ड्यूश Forschungsgemeinschaft / DFG (BVS) एसटीए 1135 / 2-1, चीनी में Rüdiger फाउंडेशन अनुदान द्वारा समर्थित छात्रवृत्ति परिषद नं 2008627116 (zł) और Geuder एजी, हीडलबर्ग (छवि। 2) द्वारा एक अप्रतिबंधित अनुदान। एच Skottman की प्रयोगशाला के सदस्य, टाम्परे फिनलैंड के विश्वविद्यालय कृतज्ञता ली गई 2 छवि में दिखाया गया है RPE जब HES उपलब्ध कराने के लिए स्वीकार कर रहे हैं।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
s30 ultrasonic cleaning unit Elmasonic 100 4631 2.75 L
DE-23  autoclave Systec C 2209 23 L
Syringe  BD  300013
300995 
301285
300294
300330 		 1 ml x3
2 ml x3
5 ml x1
10 ml x1
20 ml x1
Needle  BD 305196
305136		 18 G x1 
27 G x5
Scalpel Feather 2975#20 blade#20 x3
Surgical drape HARTMANN
LOHMANN & RAUSCHER		 277 502
25 440		 60 x 40 cm x2
12 x 17 cm
Ocular sticks LOHMANN & RAUSCHER 16 516 66 x 5 mm
Twister gauze sponges HARTMANN 481 274 x2
Closure strips HARTMANN 540 686 x4
Opmi Visu CS Microscope Zeiss N/a incl. fundus imaging system BIOM II
Chandelier endoillumination Geuder G-S03503 +
G-S03504		 25 G incl. trocar
Light machine Geuder G-26033 Xenotron III
Vitrectomy machine Geuder G-60000 MegaTRON S4 S4/ HPS
Vitrector Geuder G-46301 MACH2 vitreous cutter 23 G
Venturi cassette  Geuder G-60700
Sideport-infusion cannula Geuder custom  23 G x1
3-0 silk suture ETHICON V546G x1
Caliper Geuder G-19135 x2
Vannas scissors Geuder G-19777 x1
Sclerotomie blade Ziemer 21-2301 1x 23 G
1x 20 G
7-0 silk suture ETHICON EH6162H x1
Needle holder Geuder G-32320 x2
Iris forceps Geuder G-18910 x1
Colibri forceps Geuder G-18950 x1
Extendible subretinal injection needle DORC 1270.EXT 41 G
VR scissor Geuder G-36542 25 G
Grieshaber forceps holder Alcon 712.00.41 23 G
Curved scissor forceps tips Alcon 723.52 23 G
Implant loading station Dow Corning 3097358-1004 SYLGARD 184 Silicone Elastomer Kit
Blunt oval implant trephine  Geuder custom-made  2.4 x 1.1 mm 
Shooter dummy Geuder G-32227 x1
Shooter Geuder G-S03443 x1
Flute needle DORC 1281.SD 20 G (Vacuum)
Manual microliter syringe Hamilton 24535 100 µl
Tissue culture plates Greiner bio-one  664160 100 x 20 mm
Spectralis Multi-Modality
Imaging System		 Heidelberg
Engineering		 N/a Spectralis HRA
 + OCT
Drugs and solutions
Name Company Active agent Comments
Mucadont-IS Merz Hygiene virucidal instrument disinfectant  2 L
Mucocit T Merz Hygiene Aldehyde-free instrument disinfectant 2 L
Ketamin 10% WDT Ketamine  10 ml (100 mg/ml)
Domitor Orion Pharma Medetomidine hydrochloride 10 ml (1 mg/ml)
Antisedan Orion Pharma Atipamezole hydrochloride 10 ml (5 mg/ml)
Neosynephrin POS 10% URSAPHARM Phenylephrine HCl 10 ml
Mydriacyl Alcon Tropicamid 10 ml (5 mg/ml)
Methocel 2% Omni Vision hydroxypropyl methylcellulose 10 g
PURI CLEAR ZEISS Balance salt solution (BSS)  500 ml
Glucose 5%   B.Braun Glucose 5%  solution 100 ml
Heparin-Natrium-25,000 Ratiopharm Heparin 5 ml (2,500 unit/ml)
Suprarenin SANOFI Epinephrine 1 ml (1 mg/ml)
Triamcinolone University of Bonn pharmacy preservative-free Triamcinolone  1 ml (40 mg/ml) 
Isoptomax eye ointment Alcon dexamethasone 1 mg/g
neomycin sulfate 3,500 IU/g
polymyxin B sulfate 6,000 IU/g		 10 ml
Betaisodona Mundipharma Povidon-Iod 30 ml (1 g/10 ml)
Optive ALLERGAN sodium carboxymethylcellulose glycerol 10 ml

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References

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चिकित्सा अंक 115 उम्र से संबंधित धब्बेदार अध: पतन सेल वाहक सेल प्रतिस्थापन एसडी अक्टूबर स्टेम सेल खरगोश रेटिना वर्णक उपकला vitreoretinal सर्जरी प्रत्यारोपण ऊतक इंजीनियरिंग vitrectomy।
खरगोशों में subretinal सर्जरी के लिए कदम प्रोटोकॉल द्वारा एक कदम
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Al-Nawaiseh, S., Thieltges, F., Liu, Z., Strack, C., Brinken, R., Braun, N., Wolschendorf, M., Maminishkis, A., Eter, N., Stanzel, B. V. A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits. J. Vis. Exp. (115), e53927, doi:10.3791/53927 (2016).

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