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Medicine

Visualisation des vasculaire et parenchymateuse Régénération après 70% hépatectomie partielle chez des souris normales

doi: 10.3791/53935 Published: September 13, 2016

Abstract

Un procédé d'injection de silicone modifié a été utilisé pour la visualisation de l'arbre vasculaire hépatique. Cette procédure est composée d' une injection in vivo du composé de silicone, par l' intermédiaire d' un cathéter 26 G, dans le portail ou la veine hépatique. Après l' injection de silicone, les organes ont été explantées et préparés pour les micro-CT (μCT) à balayage ex vivo. La procédure d'injection de silicone est techniquement difficile. La réalisation d'un résultat positif nécessite une vaste expérience de microchirurgie du chirurgien. L'un des défis de cette procédure consiste à déterminer le taux de perfusion adéquate pour le composé de silicone. Le taux de perfusion du composé de type silicone doit être définie sur la base de l'hémodynamique du système vasculaire d'intérêt. débit de perfusion inappropriée peut conduire à une perfusion incomplète, la dilatation artificielle et rupture des arbres vasculaires.

La reconstruction en 3D du système vasculaire a été basée sur des tomodensitogrammes et a été réalisée en utilisantun logiciel pré-clinique tel que HepaVision. La qualité de l'arbre vasculaire reconstruit était directement liée à la qualité de silicone perfusion. paramètres vasculaires suite calculés indiquant la croissance vasculaire, tels que le volume vasculaire total ont été calculées sur la base des reconstructions vasculaires. Contrastant l'arbre vasculaire avec du silicone permis ultérieure histologique travail-up de l'échantillon après la numérisation μCT. L'échantillon peut être soumis à des coupes sériées, l'analyse histologique et de numérisation de diapositives ensemble, et par la suite à la reconstruction en 3D des arbres vasculaires à partir d'images histologiques. Ceci est la condition sine qua non pour la détection d'événements moléculaires et de leur distribution par rapport à l'arbre vasculaire. Ce procédé d'injection de silicone modifiée peut également être utilisée pour visualiser et reconstruire les systèmes vasculaires des autres organes. Cette technique a le potentiel d'être largement appliquée à des études concernant l'anatomie vasculaire et la croissance dans différents animaux undes modèles de maladies nd.

Introduction

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La régénération du foie est souvent déterminée en mesurant l'augmentation du poids du foie et de volume et en évaluant le taux de prolifération des hépatocytes 16. Cependant, la régénération du foie est non seulement induit la régénération parenchymateuse mais aussi la régénération vasculaire 6. Par conséquent, la croissance vasculaire doit être étudiée plus avant en ce qui concerne son rôle dans la progression de la régénération du foie. Visualisation du système vasculaire hépatique est essentielle pour faire progresser notre compréhension de la régénération vasculaire. De nombreuses méthodes indirectes ont été développées pour étudier les mécanismes moléculaires sous-jacents de la régénération vasculaire hépatique. Traditionnellement, la détection des cytokines (facteur de croissance vasculaire endothéliale, VEGF) 14, les chimiokines et leurs récepteurs (CXCR4 / CXCR7 / CXCL12) 4 ont été le pilier pour étudier la régénération vasculaire. Cependant, un modèle 3D conjointement avec l'analyse quantitative de la vasculature ajouterait anatomique critiqueinformations pour acquérir une meilleure compréhension de la relation importante entre parenchyme hépatique et la régénération vasculaire.

Pour visualiser le système vasculaire du foie, ce qui nécessite contrastante les arbres vasculaires, les souris ont reçu une injection d'un agent de contraste radio-opaque caoutchouc de silicone directement dans le portail ou un arbre vasculaire veineux hépatique. Après polymérisation de la silicone et de l'explantation de l'organe, les échantillons de foie ont été soumis à un balayage μCT en utilisant un scanner CT. Les analyses ont donné lieu à voxel images représentations de la silicone d'injection 9 spécimens.

Pour le contrôle qualité, le système vasculaire a été visualisé en premier en 3D en utilisant le logiciel pré-clinique. La segmentation a été effectuée en fixant un seuil entre l'intensité des tissus mous et l'intensité de la cuve. Le masque de cuve résultant a été visualisé en utilisant le rendu de surface. Le logiciel a également permis la détermination manuelle de deux paramètres de vasculcroissance ar: longueur maximale du navire et le rayon.

Un logiciel préclinique a été ensuite utilisé pour la reconstruction 3D des arbres vasculaires et le calcul ultérieur des territoires vasculaires alimentant ou drainant 13. De plus, ce logiciel détermine automatiquement certains paramètres de la croissance vasculaire, tels que la longueur totale de toutes les structures vasculaires visibles également connu sous le nom de longueur d'arête ou le volume total de la cuve totale.

La procédure de silicone de perfusion a été réalisée chez des souris naïves et chez les souris ayant subi une hépatectomie partielle de 70% (PH). Les foies ont été prélevés à différents temps d'observation après résection pour l'analyse vasculaire et parenchymateuse régénération du foie en utilisant la technique de visualisation et de quantification précitée.

Les objectifs principaux de ce film sont les suivants: (1) démontrer l'injection technique délicate nécessaire pour atteindre contraste optimal et (2) montrent le potentiel fr profit qui en résulteom une analyse détaillée de l'échantillon résultant en utilisant μCT et coupes en série histologiques. Après avoir vu ce film, le lecteur devrait avoir une meilleure compréhension de la façon d'injecter composé de silicone dans un système vasculaire spécifique et de l'utilité et l'applicabilité de la technique.

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Protocol

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Les procédures impliquant des sujets animaux ont été approuvés par Thüringer Landesamt für Verbraucherschutz Abteilung Tiergesundheit und Tierschutz, Allemagne. Étant donné que le système veineux porte a été visualisée séparément du système veineux hépatique, des animaux séparés ont été nécessaires pour les différents arbres vasculaires.

1. Réactifs Préparation

  1. solution saline Héparine
    1. Ajouter 0,1 ml d'héparine dans 10 ml de sérum physiologique (5 UI / ml).
  2. mélange de composés de silicone
    1. Ajouter 2 ml MV-120 dans un tube de 5 ml. Diluer MV-120 en ajoutant 3 ml de diluant MV résultant en une solution à 40%.

Injection 2. Portal Venous système silicone

  1. laparotomie
    1. Placer la souris dans la chambre d'induction de l'anesthésie et anesthésier avec 2% d'isoflurane et de 0,3 L / min d'oxygène.
    2. Fixer la souris anesthésiée sur la table d'opération en utilisant du ruban à l'inhalation continue de 2% estoflurane et 0,3 L / min d'oxygène. Vérifiez l'orteil-pincement réflexe de retrait de la souris et lancez l'opération si le réflexe est absent.
    3. Faire une incision transversale sur l'abdomen à l'aide de ciseaux pour la couche de peau et un coagulateur électrique pour la couche musculaire. Déplacer les intestins sur le côté gauche à l'aide des conseils de coton et de couvrir les intestins avec une solution saline gaze imbibée.
  2. l'insertion du cathéter
    1. Disséquer la veine porte sous le microscope en utilisant des micro-pinces. Placer une suture de soie 6-0 sous la veine extrahépatique, dans environ 1 mm de distance de sa bifurcation et l'attacher lâchement pour une utilisation ultérieure.
    2. Injecter solution préparée à l'héparine-solution saline via pénienne veine (mâle) ou veine cave inférieure (femelle) pour héparinisation systémique pendant 5 min.
    3. Insérez la jauge 26 (26 G) cathéter avec aiguille dans la veine porte et le fixer avec une pince
  3. Heparin-solution saline et composé de silicone perfusion
    1. Charge héparine-solution saline solution dans 5 ml seringue et tourner sur le dispositif de perfusion. Remplir complètement le cathéter avec une solution saline à l'héparine pour éviter les bulles d'air.
    2. Raccorder le tube d'extension au cathéter et les fixer fermement. Démarrer la perfusion saline à l'héparine avec un débit de 0,4 ml / min de perfusion.
    3. Ligaturer suture 6-0 soie pré-placée pour fixer le double du cathéter et bloquant le flux sanguin de la veine splénique et de la veine mésentérique. Euthanatize la souris par exsanguination par perfusion sous anesthésie.
    4. Rincez le foie en utilisant une solution saline pendant toute la procédure de perfusion afin de le garder humide.
    5. Ajouter 0,1 ml durcisseur dans le tube MV-120. Changer la seringue d'héparine-solution saline à la seringue de silicone.
    6. Lancer silicone perfusion avec un débit de perfusion de 0,2 ml / min pendant environ 1 min à préremplir le système de cathéter et pour remplir le système de la veine porte. Arrêtez silicone perfusion lorsque les vaisseaux à la surface deviennent bleus.
  4. Échantillonnage
    1. Gardez le foie in situ until le silicone est polymérisée complètement au bout d'environ 15 à 30 min. Disséquer ligaments reliant le foie et les organes adjacents avec soin de garder le foie intact. Explanter le foie et le mettre dans le formol pour la fixation.

Injection 3. hépatique système veineux silicone

  1. Effectuer laparotomie comme effectué à l'étape 2.1 et exposer champ opératoire entièrement.
  2. l'insertion du cathéter
    1. Disséquer la veine porte sous le microscope en utilisant des micro-pinces. Placer une suture de soie 6-0 sous la veine extrahépatique, dans environ 1 mm de distance de sa bifurcation et l'attacher lâchement pour une utilisation ultérieure.
    2. Injecter solution préparée à l'héparine-solution saline via pénienne veine (mâle) ou veine cave inférieure (femelle) pour héparinisation systémique pendant 5 min.
    3. Insérez un 26 G cathéter (cathéter 1) avec l'aiguille dans la veine porte et le fixer avec une pince. Insérez un autre 26 G cathéter (cathéter 2) avec l'aiguille dans la veine cave inférieure et le fixer avec une pince.
    4. Ligaturer les branches de la veine cave inférieure (y compris les veines rénales gauche et droite) et son extrémité distale à l'aide 6-0 synthétique monofilament, polypropylène non absorbable suture.
  3. Heparin-solution saline et composé de silicone perfusion
    1. Chargez une solution d'héparine-solution saline dans 5 ml seringue et tourner sur le dispositif de perfusion. Remplir complètement le cathéter 1 avec une solution saline à l'héparine pour éviter les bulles d'air. Raccorder le tube d'extension pour cathéter 1 et le fixer solidement. Lancer héparine-solution saline perfusion à un débit de 0,4 ml / min.
    2. Ligaturer suture 6-0 soie pré-placée pour fixer le double du cathéter et bloquant le flux sanguin de la veine splénique et de la veine mésentérique. Euthanatize la souris par exsanguination par perfusion sous anesthésie.
    3. Rincez le foie en utilisant une solution saline pendant toute la procédure de perfusion afin de le garder humide. Ajouter 0,1 ml durcisseur dans le tube MV-120. Échange héparine-solution saline seringue avec une seringue de silicone.
    4. Placez une pince sur le suprahepatic veine cave inférieure pour obstruer l'écoulement du foie.
    5. Connecter le tube d'extension au cathéter 2 et commencer silicone perfusion avec un débit de perfusion de 0,2 ml / min pendant environ 2 min pour atteindre un volume vasculaire hépatique objectif tel que rapporté. Arrêtez silicone perfusion lorsque les vaisseaux à la surface deviennent bleus.
  4. Échantillonnage
    1. Disséquer ligaments hépatiques évitant toute blessure au foie. Explanter le foie et le mettre dans le formol pour la fixation.

4. Micro-CT (μCT) Numérisation

Pour analyser l'échantillon de foie explanté utilisant μCT, les étapes suivantes sont nécessaires.

  1. Prélever l'échantillon de foie de la solution de fixation. Placez le foie sur le lit μCT. Mettez le lit μCT avec l'échantillon de foie dans le μCT.
  2. Acquérir topogramme avant de commencer l'analyse. Utilisez un sous-balayage pour le petit échantillon de foie et deux sous-balayages pour les grands échantillons.
  3. Sélectionner un81; le protocole CT avec une résolution élevée (par exemple, HQD-6565-390-90). Ce protocole acquiert 720 projections avec 1032 x 1012 pixels au cours d'une rotation complète avec le temps de 90 s par sous-balayage balayage. Démarrez le scan μCT.

5. Les articles série histologiques

  1. Incluez l'échantillon de foie dans la paraffine dans son ensemble après la numérisation μCT. Découper l'échantillon de paraffine dans l'ensemble des sections de 4 pm, conduisant à une série de 2 000 à 2 500 parties.
  2. sections de tache avec la technique de coloration appropriée pour visualiser les événements moléculaires d'intérêt tels que Ki-67 comme marqueur de prolifération et HMGB1 comme marqueur des lésions ischémiques. Déterminer la séquence de la coloration à l'égard à la question scientifique.
  3. Utilisez tout un scanner de diapositives à digitaliser les coupes colorées.
  4. Effectuer 3D-reconstruction de l'arbre (s) vasculaire (déjà possible) et de visualiser en 3D la distribution d'événements moléculaires en ce qui concerne l'arbre vasculaire (recherche en cours).

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Representative Results

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Critères de qualité

La qualité de l'injection de silicone peut être évaluée à l'oeil nu pendant la procédure. Les petits vaisseaux à la surface du foie se remplissent progressivement avec le composé bleu. Si la structure vasculaire normale a été observée sur la surface du foie, la qualité de l'injection de caoutchouc de silicone était bonne. Si le volume de perfusion était insuffisant, les petits vaisseaux de la surface du foie ne sont pas complètement remplis. En revanche, au-dessus de remplissage provoqué une rupture vasculaire, comme indiqué par des taches bleues irrégulières sur la surface de l'organe. Les deux sont à l'origine des difficultés sur reconstruction 3D finalement rendu une procédure un échec.

Pour une meilleure évaluation de la qualité de l'injection, la numérisation μCT suivie d'une reconstruction vasculaire 3D en utilisant un logiciel pré-clinique a été réalisée. Injection a été déterminée à wh réussieen segmentation conduit à la visualisation d'un arbre vasculaire complet intact, sans structures rompues indiquées par extravasation visible. Si l'arbre vasculaire est apparu incomplet (Fig. 1A), le volume de perfusion était insuffisante. Si plus d'un arbre vasculaire est apparu ou extravasation a été vu (Fig. 1B), le volume ou la pression de perfusion était inadéquate. Ce fut la raison la plus probable d'un échec. La pression de perfusion peut théoriquement varier légèrement en fonction de la viscosité de la solution. La viscosité dépend du temps de polymérisation écoulé entre le mélange du composé et l'injection dans le système vasculaire. Étant donné que certaines manipulations sont nécessaires pour le mélange et l'injection, l'intervalle de temps peut varier légèrement entre 3 min à 5 min.

Si la solution est de faible viscosité, la pression de perfusion est faible. Dans ce cas, le composé peut transférer dans l'arbre non injecté via le système vasculaire sinusoïdalconduisant à un volume de perfusion légèrement supérieure. Si la solution est encore polymérisé conduisant à une viscosité plus élevée, la pression de perfusion va augmenter, ce qui provoque la rupture des vaisseaux et une extravasation.

Détermination de l' objectif Volume Perfusion

Depuis une perfusion inadéquate ou hyperperfusion provoquerait l'échec de l'injection, la normalisation du volume de perfusion a été envisagée. Tel que rapporté 2, 6% du volume hépatique est occupée par le sang et 44% du sang dans le foie réside dans les gros vaisseaux (par exemple, l' artère hépatique, la veine porte). Le volume du foie chez les souris est d' environ 1,3 ml 11. Par conséquent, le volume vasculaire totale dans le système veineux portal chez la souris normale a été estimée entre 0,03 ml et 0,04 ml. Le débit a été fixé à 0,2 ml / min et le temps total de perfusion a été fixée à environ 1 minute, résultant en un volume total injectéd'environ 0,2 ml.

Ce qui semble grand volume est nécessaire, étant donné que le système de cathéter doit être remplie au préalable, ce qui prend environ 0,1 à 0,15 ml. Un volume supplémentaire de 0,05 ml est nécessaire pour remplir la veine porte proximale entre hile du foie et de la ligature du cathéter. Débit pour l'injection de la veine hépatique a également été fixé à 0,2 ml / min, mais le temps de perfusion totale a été prolongée à 2 min, résultant en un volume total supérieur d'environ 0,4 ml. le volume vasculaire total intrahépatique a été supposé être similaire au volume total vasculaire de la veine porte. Cependant, le volume nécessaire pour remplir la veine cave intrahépatique entre la ligature des sous-hépatique et la pince sus-hépatique a été estimée à 0,2 ml.

Taux de réussite

Au total, 49 animaux ont été soumis à l'injection de silicone: 22 animaux dans le système PV et 27 animaux dans ee système HV. Notre taux d'injection de réussite était de 55% (12/22) dans le groupe PV et 89% (24/27) dans le groupe HV. Tenant compte du fait que le groupe PV a été utilisé pour déterminer la technique d'injection de silicone dans le début (n = 4), le taux de réussite de l'injection pour le système PV doit effectivement être supérieure à 55%. Cependant, les images μCT obtenues à partir de ces injections ont été adaptés pour la reconstruction 3D et l'analyse quantitative. De plus, les arbres vasculaires de PV soit ou HV de 36 souris pourraient être reconstruites avec le logiciel Imalytics Préclinique.

Parenchymateuse and Vascular Régénération

Un temps résolu μCT série d'échantillons de foie de souris après hépatectomie a été soumis à une analyse qualitative. Parenchymateuse régénération est composée de la croissance 3D du foie reste. régénération vasculaire a été défini comme un tissu qui a montré une augmentation de lalongueur et le diamètre de la tige vasculaire, avec ses branches principales et excroissance de branches terminales supplémentaires, tant veineux portail et l'arbre veineux hépatique.

Actuellement, plusieurs paramètres quantitatifs appropriés pour décrire la croissance vasculaire et la relation entre la régénération hépatique parenchymateux et la régénération des vaisseaux sont à l'étude. Ceux - ci incluent des paramètres représentatifs de la croissance vasculaire, y compris la longueur maximale vasculaire (fig. 2), le rayon vasculaire et la densité vasculaire en termes de rapport longueur / volume du foie vasculaire ou le volume total du volume / foie vasculaire.

le volume total du foie et le volume des lobes du foie sélectionnés ont été calculés. Dans le foie normal, le volume total du foie variait de 1,2 ml à 1,6 ml (n = 6, y compris à la fois le groupe PV et le groupe HV). Il a diminué de 0,6 à 0,7 ml après avoir effectué une résection hépatique étendue en enlevant la gauche latral et le lobe médian. Le volume du foie n'a cessé d'augmenter au cours de la croissance du foie. Le jour post-opératoire 7 (POD 7), le volume du foie a augmenté à environ 88% de son volume initial, soit de 2,6 fois. L'augmentation du volume du foie en corrélation avec la récupération de la masse du foie.

Le total des volumes vasculaires du système PV et le système HV ont été calculées. le volume vasculaire total du système HV était plus élevé que dans le système de PV, parce qu'une partie de l'intrahépatique la veine cave inférieure a été inclus. le volume vasculaire total du système PV variait de 0,05 à 0,08 ml chez les souris normales. Il est tombé à 0,03 à 0,04 ml après 70% hépatectomie partielle. 7 par le POD, le volume vasculaire total du foie restant a augmenté à 100% du volume initial. le volume vasculaire total de haute tension variait de 0,14 à 0,16 ml. le volume vasculaire a diminué à 0,08 à 0,09 ml après résection. Dans la première semaine post-opératoire, le volume vasculaire total du foie restant augmenté by 94% de la valeur originale.

Comme le rapport entre les résultats obtenus, l'augmentation du volume vasculaire et du volume parenchymateux, une densité vasculaire a été calculée, et plus précisément la fraction volumique vasculaire (volume vasculaire divisé par le volume du foie). Cette étude a révélé que la fraction volumique vasculaire est resté relativement stable tout au long du processus de régénération.

Visualisation 3D des événements moléculaires

Après CT-scanner les échantillons sélectionnés ont été soumis à des coupes sériées, cédant à jusqu'à 2000 diapositives, qui étaient entièrement digitalisée et utilisée pour reconstruire le portail, ainsi que l'arbre veineux hépatique 12. Ceci est la condition sine qua non pour l'avenir visualisation 3D d'événements moléculaires lors de la régénération par rapport à l'arbre vasculaire de plus en plus.

Figure 1. Contrôle de la qualité de l' injection de silicone. Un remplissage. Incomplète inférieure droite veine (flèche dans la gauche) et le portail caudé veine (flèche dans la droite) ont été visualisées dans le logiciel Imalytics Préclinique comme discontinuités de l'arbre vasculaire. Ceci indique une pression ou une perfusion du volume de perfusion insuffisante ou l'existence de bulles d'air. B. Extravasation de droite inférieure veine a été visualisé qui indiquait la perturbation d'un navire en raison de la pression ou hyperperfusion insuffisante. S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.

Figure 2
Figure 2. Mesure de la longueur maximale de la cuve de droiteinférieure veine porte. Pour déterminer la longueur du navire maximale, un point de départ et un point final ont été placés à la racine et l' extrémité distale de la droite veine porte inférieure (RIPV) du masque vasculaire (des marqueurs de balle bleu et magenta) dans le logiciel préclinique. La longueur du trajet vasculaire du RIPV (10,95 mm) a été obtenu dans le cadre de l' évaluation du "Chemin tortuosité". S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.

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Discussion

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Contrastante l'arbre vasculaire par injection de silicone et de balayage μCT a été introduit dans des modèles de tumeurs et des modèles de maladies neurologiques fréquemment pour étudier la progression angiogénique 5,7,8,10. Améliorations à la méthode de l'injection de silicone ont été faites dans la présente étude pour la visualisation et la quantification de la croissance vasculaire après hépatectomie partielle chez la souris.

Il y a un certain nombre d'étapes critiques nécessitant une attention particulière pour obtenir une bonne qualité de perfusion. Tout d'abord, une héparinisation systémique est fortement recommandé avant de rincer le foie avec de l'héparine ou du sérum physiologique afin d'éviter la coagulation du sang dans le foie. L'élimination des bulles d'air du tube est également important d'obtenir une bonne qualité de silicone perfusion. La détermination du débit et la pression de perfusion doit d' abord être basée sur des paramètres hémodynamiques physiologiques 17. temps de Perfusion reflète le volume injecté total et est estimée en l'intravasculaire prévule volume et le volume de pré-remplissage du système de cathéter en compte.

Le silicone est un composé très visqueux qui diffère du sang ou du sérum physiologique. Par conséquent, plusieurs essais sont nécessaires pour ajuster le taux et la pression de perfusion. Le maintien du débit d'injection constante et la pression est nécessaire pour empêcher la dilatation grave ou même la rupture de petits vaisseaux. le temps de perfusion est réglée en fonction du volume d'injection nécessaire estimée. Cependant, la perfusion doit être immédiatement arrêtée lorsque le composé bleu devient visible dans les vaisseaux sur la surface du foie. Dans le cas contraire, le silicone peut drainer en sinusoïdes et dans un autre système vasculaire qui va interférer avec la reconstruction et une analyse ultérieure.

En règle générale, la silicone est perfusé systématiquement par le ventricule gauche dans les rapports les plus publiés 1,3,15. Le ventricule gauche est facile à exposer pour permettre le libre accès au site d'injection. Cependant, l'inconvénient est que cet itinéraire rather indirecte parce que l'agent de contraste doit subir la circulation avant d'atteindre le site d'intérêt. Par conséquent, la procédure chirurgicale de la technique d'injection de silicone a été modifié dans cette étude. Contrairement à la voie indirecte fréquemment sélectionnée de l'application exécutée par d'autres, le composé de silicone a été injecté directement dans le système vasculaire d'intérêt, au lieu d'opposer le corps entier. De cette manière, la vitesse et le volume de la perfusion peuvent être mieux contrôlées. Le système de la veine porte et de systèmes veineux hépatique peuvent être perfusées et reconstruites séparément pour l'analyse individuelle ultérieure, comme illustré dans la vidéo.

La limitation de ce mode opératoire modifié est la difficulté technique. Il est difficile de réaliser avec succès une injection intraporte en utilisant le composé très visqueux dans des souris, parce que la structure vasculaire est si délicate. Il est assez facile de détruire les vaisseaux pendant la procédure. Ainsi, la dissection de la veine porte et le cathéter insertion doit être effectuée en douceur.

Contrastant des arbres vasculaires et l'imagerie μCT subséquente des foies explantés est un outil utile pour la visualisation et la quantification de la régénération vasculaire après hépatectomie partielle. les paramètres vasculaires quantitatifs peuvent être utilisés pour une meilleure compréhension de la cinétique de la croissance vasculaire dans la progression de la régénération du foie. En outre, la reconstruction 3D des deux systèmes vasculaires hépatiques basés sur des coupes en série est techniquement réalisable, mais qui représente une énorme charge de travail.

Cette technique peut être appliquée dans plusieurs modèles dans lesquels la visualisation et la quantification de la croissance vasculaire est importante. De plus, la visualisation 3D d'événements moléculaires à l'égard de l'arbre vasculaire sous-jacente est à portée. Des exemples d'événements moléculaires d'intérêt pourrait être la détection du marqueur de prolifération tels que Ki-67 ou des marqueurs de lésions ischémiques tels que HMGB1. Évaluation de la ev moléculaire résolue spatialementents dans le voisinage de l'arbre vasculaire régénérant dans le parenchyme hépatique régénérant est la condition préalable à la pointe de modélisation multi-échelle de biologie des systèmes. Cette technique d'injection de silicone est une étape expérimentale en vue d'atteindre cet objectif.

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
PERFUSOR® VI B.BRAUN 87 222/0
Pipetus®-akku Hirschmann 9907200
Pipets Greiner 606180
micro scissors Fine Science Tools (F·S·L) No. 14058-09
micro serrefine Fine Science Tools (F·S·L) No.18055-05
Micro clamps applicator Fine Science Tools (F·S·L) No. 18057-14
Straight micro forceps Fine Science Tools (F·S·L) No. 00632-11
Curved micro forceps Fine Science Tools (F·S·L) No. 00649-11
needle-holder Fine Science Tools (F·S·L) No. 12061-01
1 ml syringe B.Braun 9161406V
5 ml syringe B.Braun 4606051V
extension and connection lines B.Braun 4256000 30 cm, inner ø 1.2 mm
6-0 silk (Perma-Hand Seide) Ethicon 639H
6-0 prolene Ethicon 8711H
Microfil® MV diluent FLOW TECH, INC
Microfil® MV - 120 FLOW TECH, INC MV - 120 (blue)
MV curing agent FLOW TECH, INC
Heparin 2500 I.E./5 ml Rotexmedica ETI3L318-15
Saline Fresenius Kabi Deutschland GmbH E15117/D DE
Imalytics Preclinical software Experimental Molecular Imaging, RWTH Aachen University, Germany
HepaVision Fraunhofer MEVIS, Bremen, Germany
NanoZoomer 2.0-HT Digital slide scanner Hamamatsu Electronic Press, Japan  C9600
Tomoscope Duo CT  CT Imaging GmbH, Erlangen, Germany TomoScope® Synergy

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Visualisation des vasculaire et parenchymateuse Régénération après 70% hépatectomie partielle chez des souris normales
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Xie, C., Wei, W., Schenk, A., Schwen, L. O., Zafarnia, S., Schwier, M., Gremse, F., Jank, I., Dirsch, O., Dahmen, U. Visualization of Vascular and Parenchymal Regeneration after 70% Partial Hepatectomy in Normal Mice. J. Vis. Exp. (115), e53935, doi:10.3791/53935 (2016).More

Xie, C., Wei, W., Schenk, A., Schwen, L. O., Zafarnia, S., Schwier, M., Gremse, F., Jank, I., Dirsch, O., Dahmen, U. Visualization of Vascular and Parenchymal Regeneration after 70% Partial Hepatectomy in Normal Mice. J. Vis. Exp. (115), e53935, doi:10.3791/53935 (2016).

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