Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Визуализация сосудистой и паренхиматозных регенерации после того, как 70% частичной гепатэктомии у нормальных мышей

doi: 10.3791/53935 Published: September 13, 2016

Abstract

Модифицированная процедура инъекции силиконовое использовалась для визуализации печени сосудистого дерева. Эта процедура состояла из в естественных условиях введения силиконового соединения, через 26 G катетер, в портал или печеночной вены. После инъекции силикона, органы были эксплантировали и подготовлены для экс-естественных условиях микро-КТ (μCT) сканирования. Процедура инъекции силикона является технически сложной задачей. Достижение успешных результатов требует обширных микрохирургического опыта от хирурга. Одна из задач этой процедуры заключается в определении адекватной скорости перфузии для силиконового соединения. Скорость перфузии для силиконового соединения должна быть определена на основе гемодинамических сосудистой системы, представляющей интерес. Неуместный скорость перфузии может привести к неполному перфузией, искусственное расширение и разрыв сосудистых деревьев.

3D реконструкция сосудистой системы была основана на КТ и была достигнута с помощьюдоклинические программного обеспечения, таких как HepaVision. Качество восстановленного сосудистого дерева была непосредственно связана с качеством силиконового перфузией. Впоследствии, вычисляемые сосудистые параметры, указывающие роста сосудов, такие как общего сосудистого объема, были рассчитаны на основе сосудистых реконструкций. Контрастные сосудистого дерева с силиконом, предоставляемое для последующего гистологического работы вверх образца после сканирования μCT. Образец может быть подвергнут серийному секционирования, гистологического анализа и целого сканирования слайдов, а затем в 3D-реконструкция сосудистых деревьев, основанных на гистологических изображениях. Это является предпосылкой для обнаружения молекулярных событий и их распределение по сосудистого дерева. Эта модифицированная процедура инъекции силикон также может быть использован для визуализации и реконструкции сосудистой системы других органов. Этот метод имеет потенциал, чтобы быть широко применяется для исследований в отношении сосудистой анатомии и роста в различных животных аМодели болезни НД.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Регенерации печени часто определяется путем измерения увеличения веса печени и объема , и путем оценки скорости пролиферации гепатоцитов 16. Тем не менее, регенерация печени не только вызывая регенерацию паренхимы , но и регенерации сосудистой 6. Таким образом, рост сосудов следует провести дальнейшее расследование в отношении его роли в прогрессии регенерации печени. Визуализация печеночной сосудистой системы имеет решающее значение для углубления нашего понимания сосудистой регенерации. Многочисленные косвенные методы были разработаны для изучения молекулярных механизмов, лежащих в основе печеночной сосудистой регенерации. Традиционно, обнаружение цитокинов (фактор роста эндотелия сосудов, VEGF) , 14, хемокинов и их рецепторов (CXCR4 / CXCR7 / CXCL12) 4 был основой для изучения регенерации сосудов. Тем не менее, 3D-модель вместе с количественным анализом сосудистую добавило бы критическую анатомическиеИнформация, чтобы получить лучшее представление о важной взаимосвязи между печеночной паренхимы и регенерации сосудов.

Для визуализации печени сосудистой системы, которая требует контрастный сосудистых деревьев, мышам вводили рентгеноконтрастного силиконового каучука контрастного вещества непосредственно в портал или печеночной венозного сосудистого дерева. После полимеризации силикона и УВК органа, образцы печени были подвергнуты сканированию μCT использованием томограф. Сканирование привело к воксельных представлений изображений из кремнийорганической инъекции образцов 9.

Для контроля качества, сосудистая система была впервые визуализируется в 3D с использованием доклинических программного обеспечения. Сегментация была выполнена путем установки порога между интенсивностью мягких тканей и интенсивности сосуда. Полученная маска судно визуализировали с использованием визуализации поверхности. Программное обеспечение также разрешено для ручного определения двух параметров vasculаг роста: максимальная длина судна и радиус.

Затем Доклинические программное обеспечение было использовано для 3D реконструкции сосудистых деревьев и последующего расчета питающих или дренирующих сосудистых территорий 13. Кроме того, это программное обеспечение автоматически определены некоторые параметры роста сосудов, такие как общая длина всех видимых сосудистых структур, известных также как общая длина кромок или общего объема сосуда.

Процедура силиконовый перфузию проводили в простых мышей и у мышей, которые подверглись 70% частичной гепатэктомии (PH). Печени собраны в различные моменты времени наблюдения после резекции для анализа сосудистой и паренхиматозной регенерации печени с использованием вышеупомянутого визуализации и количественного определения техники.

Основными целями этого фильма являются: (1) демонстрируют хрупкое литьевого технику, необходимое для достижения оптимального контрастирование и (2) показывают потенциальные выгоды в результате фром детальный анализ полученных образцов с использованием μCT и гистологические серийных срезов. После просмотра этого фильма, читатель должен иметь лучшее понимание того, как придать силиконовое соединение в специфическую сосудистую систему и полезности и применимости методики.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Процедуры с участием субъектов животных были одобрены тюрингер Landesamt für Verbraucherschutz Abteilung Tiergesundheit унд Tierschutz, Германия. Поскольку портал венозная система визуализировали отдельно от печеночной венозной системы, необходимы отдельные животные для различных сосудистых деревьев.

1. Реагенты Приготовление

  1. Гепарин-солевой раствор
    1. Добавить 0,1 мл гепарина в 10 мл физиологического раствора (5 МЕ / мл).
  2. Силиконовая смесь соединений
    1. Добавить 2 мл MV-120 в одном из 5 мл трубки. Развести MV-120 путем добавления 3 мл MV разбавителя, что приводит к 40% -ного раствора.

2. Система воротной вены Инъекции силикона

  1. лапаротомия
    1. Поместите мышь в анестезии индукции камеры и анестезию его с 2% изофлуран и 0,3 л / мин кислорода.
    2. Закрепите обезболены мышь на операционном столе с помощью липкой ленты с непрерывной ингаляции от 2%oflurane и 0,3 л / мин кислорода. Проверьте схождение пинч снятие рефлекс мыши и начать работу, если рефлекс отсутствует.
    3. Сделайте поперечный разрез на животе с помощью ножниц для слоя кожи и электрический коагулятор для мышечного слоя. Выдвигайтесь кишечники в левую сторону, используя ватные палочки и покрывают кишечник с солевым пропитанной марли.
  2. Катетер вставки
    1. Рассеките воротной вены под микроскопом с помощью микро-пинцета. Поместите один 6-0 шелковый шов под внепеченочных портальной вены, примерно 1 мм расстояние до его раздвоения и связать его свободно для последующего использования.
    2. Вводят приготовленный гепарин-физиологический раствор через вену в половом члене (мужчины) или нижней полой вены (женщина) для системного гепаринизацией в течение 5 мин.
    3. Вставьте 26 калибра (26 г) катетер с иглой в портальную вену и закрепить его с помощью зажима
  3. Гепарин-солевой раствор и силиконовое соединение перфузия
    1. Нагрузка гепарин-физиологический раствор зольв 5 социологическое загрязнение мл шприц и включите перфузионного устройства. Заполните катетер полностью с гепарин-физиологический раствор, чтобы избежать воздушных пузырей.
    2. Подключение удлинительной трубки к катетеру и закрепите их плотно. Запуск гепарин-физиологический раствор перфузия со скоростью перфузии 0,4 мл / мин.
    3. Перевязывать предварительно помещают 6-0 шов шелковой нитью для двойной фиксации катетера и блокирующий кровоток из селезеночной вены и брыжеечной вены. Euthanatize мышь путем обескровливания с помощью перфузии под наркозом.
    4. Промыть печень с использованием солевого раствора в течение всей процедуры перфузионного для того, чтобы держать его влажным.
    5. Добавить 0,1 мл ОТВЕРДИТЕЛЕМ, в МВ-120 трубки. Изменение гепарин-физиологический раствор шприц силиконового шприца.
    6. Запуск силиконовый перфузию со скоростью перфузии 0,2 мл / мин в течение примерно 1 мин до предварительного заполнения катетерной системы и для заполнения системы воротной вены. Прекратить силиконовый перфузию, когда сосуды на поверхности синеть.
  4. отбор проб
    1. Держите печени в месте ЕНТIL силикон полностью полимеризуется после того, как приблизительно от 15 до 30 мин. Рассеките связки, соединяющие печень и соседние органы с осторожностью, чтобы сохранить печень неповрежденной. Эксплантата печень и поместить его в формалин для фиксации.

3. печеночного венозного Система впрыска силикона

  1. Выполните лапаротомии, как выполняется на этапе 2.1 и полностью разоблачить операционное поле.
  2. Катетер вставки
    1. Рассеките воротной вены под микроскопом с помощью микро-пинцета. Поместите один 6-0 шелковый шов под внепеченочных портальной вены, примерно 1 мм расстояние до его раздвоения и связать его свободно для последующего использования.
    2. Вводят приготовленный гепарин-физиологический раствор через вену в половом члене (мужчины) или нижней полой вены (женщина) для системного гепаринизацией в течение 5 мин.
    3. Вставьте один 26 G катетер (катетер 1) с иглой в портальную вену и закрепить его с помощью зажима. Вставьте другой 26 G катетер (катетер 2) с иглой в нижнюю полую вену и закрепить его с помощью зажима,
    4. Перевязывать ветви нижней полой вены (в том числе левой и правой почечной вены) и ее дистального конца, используя 6-0 синтетические, мононити, невсасывающихся полипропилен швом.
  3. Гепарин-солевой раствор и силиконовое соединение перфузия
    1. Загрузить гепарин-физиологический раствор в 5 мл шприц и включите перфузионного устройства. Заполните катетер 1 полностью с гепарин-солевой раствор, чтобы избежать воздушных пузырей. Подключение удлинительной трубки к катетеру 1 и зафиксировать его плотно. Запуск гепарин-физиологический раствор перфузия со скоростью 0,4 мл / мин.
    2. Перевязывать предварительно помещают 6-0 шов шелковой нитью для двойной фиксации катетера и блокирующий кровоток из селезеночной вены и брыжеечной вены. Euthanatize мышь путем обескровливания с помощью перфузии под наркозом.
    3. Промыть печень с использованием солевого раствора в течение всей процедуры перфузионного для того, чтобы держать его влажным. Добавить 0,1 мл ОТВЕРДИТЕЛЕМ, в МВ-120 трубки. Обмен гепарин-физиологический раствор шприц с силиконом шприца.
    4. Поместите зажим на suprahepatIC нижней полой вены, чтобы препятствовать оттоку печени.
    5. Подключение удлинительной трубки к катетеру 2 и начать силиконовую перфузию со скоростью перфузии 0,2 мл / мин в течение приблизительно 2 мин, чтобы достичь объективного печеночный сосудистый объем, как сообщалось. Прекратить силиконовый перфузию, когда сосуды на поверхности синеть.
  4. отбор проб
    1. Проанализируйте печени связок во избежание любого повреждения печени. Эксплантата печень и поместить его в формалин для фиксации.

4. Микро-КТ (μCT) Сканирование

Для сканирования эксплантировали пробы печени с помощью μCT, необходимы следующие шаги.

  1. Возьмем пробы печени из раствора фиксации. Поместите печень на кровать μCT. Поместите слой μCT с образцом печени в μCT.
  2. Приобретать топограмма перед началом сканирования. Используйте один субсканирования для небольшого образца печени и два subscans для больших образцов.
  3. Выберите81; протокол КТ с высоким разрешением (например, HQD-6565-390-90). Этот протокол приобретает 720 проекций с 1032 х 1,012 пикселей в течение одного полного оборота со временем сканирования 90 сек на субсканирования. Запустите сканирование μCT.

5. Гистологические Серийные срезы

  1. Вставить образец печени в парафин в целом после сканирования μCT. Вырезать весь образец парафином на секции 4 мкм, что приводит к серии 2000 до 2500 секций.
  2. Пятно секции с соответствующей техникой окрашивания, чтобы визуализировать молекулярные события, представляющие интерес, такие как Ki-67 в качестве маркера пролиферации и HMGB1 в качестве маркера ишемического повреждения. Определить последовательность окрашивания в отношении научного вопроса.
  3. Используйте весь сканер слайдов оцифровать Окрашенный секции.
  4. Выполнение 3D-реконструкция сосудистой сети (ов) (уже возможно) и визуализировать 3D-распределение молекулярных событий, в отношении сосудистой сети (исследование продолжается).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Критерии качества

Качество инъекции силикона можно судить невооруженным глазом во время процедуры. Небольшие сосуды на поверхности печени постепенно заполняют с голубым соединением. Если нормальная сосудистая структура наблюдалась на поверхности печени, качество впрыска силиконовой резины была хорошей. Если объем перфузии был недостаточен, небольшие сосуды на поверхности печени не были полностью заполнены. В отличие от этого, в течение заполнения вызвало разрыв сосудов как обозначено нерегулярными синих точек на поверхности органа. Оба вызывают трудности при 3D-реконструкции в конечном счете, что делает процедуру сбоя.

Для лучшей оценки качества инъекции, проводили μCT сканирование с последующей 3D-сосудистой реконструкции с использованием доклинических программного обеспечения. Инъекция была определена, чтобы быть успешным ВГан сегментации привело к визуализации неповрежденной полного сосудистого дерева без разорванных структур, указанных видимым кровоподтек. Если сосудистое дерево оказалось неполным (рис. 1А), объем перфузии был недостаточным. Если более чем один сосудистое дерево появилось или кровоизлияние было видно (рис. 1В), объем перфузии или давление было недостаточным. Это было наиболее вероятной причиной сбоя. перфузионное давление теоретически может незначительно меняться в зависимости от вязкости раствора. Вязкость зависит от времени, прошедшего с момента полимеризации смешением соединения и инъекции в сосудистую систему. Так как некоторые манипуляции требуется для смешивания и инъекции, интервал времени может немного изменяться от 3 мин до 5 мин.

Если раствор низкой вязкости, перфузионное давление низкое. В этом случае соединение может передать в нераскопаном впрыскивается сосудистого дерева с помощью синусоидальной системычто приводит к несколько более высоким объемом перфузии. Если раствор дополнительно полимеризуется, ведущие к более высокой вязкостью, то перфузионное давление будет расти, вызывая разрушение сосудов и кровоподтек.

Определение цели Perfusion тома

Поскольку неадекватной перфузии или гиперперфузии бы привести к отказу инъекции, стандартизацию считался объем перфузии. Как сообщалось 2, 6% печеночного объема занимают крови и 44% крови в печени находится в крупных сосудах (например, печеночной артерии, воротной вены). Объем печени у мышей составляет около 1,3 мл 11. Таким образом, суммарный объем в сосудистой системе воротной вены у нормальных мышей оценивалась в диапазоне от 0,03 мл и 0,04 мл. Скорость потока была установлена ​​в 0,2 мл / мин и общее перфузионного время было установлено равным приблизительно 1 минуту в результате чего общий объем впрыскиваетсяв размере около 0,2 мл.

Это, казалось бы, большой объем необходим, так как система катетер должен быть занесено в соответствующее поле, который занимает около 0,1-0,15 мл. Дополнительный объем 0,05 мл необходимо заполнить проксимального воротной вены между рубчика печени и перевязки катетера. Расход для инъекций печеночной вены также был установлен в 0,2 мл / мин, а общее время перфузия продлена до 2 мин, что приводит к увеличению общего объема около 0,4 мл. Общий объем внутрипеченочного сосудистого предполагалась аналогичен общему воротной вены объема сосудов. Тем не менее, объем необходимых для заполнения внутрипеченочный полая вена между infrahepatic перевязки а suprahepatic зажим оценивался 0,2 мл.

Шанс успеха

В общей сложности 49 животных были подвергнуты инъекции силикона: 22 животных в фотоэлектрической системе и 27 животных в гое HV системы. Процент успеха инъекции составила 55% (12/22) в группе PV и 89% (24/27) в группе HV. Принимая во внимание, что группа PV была использована для создания техники инъекции силикона в начале (п = 4), вероятность успеха впрыска для системы PV должна эффективно быть выше, чем 55%. Тем не менее, μCT изображения, полученные из этих инъекций были пригодны для 3D-реконструкции и количественного анализа. Кроме того, сосудистые деревья из любой PV или HV 36 мышей может быть восстановлена ​​с программным обеспечением Imalytics доклинической.

Паренхимы и сосудистый Регенерация

Время решен ряд μCT мышиных образцов печени после гепатэктомии была подвергнута качественному анализу. регенерация паренхимы состояла из 3D роста остатка печени. Сосудистый регенерации была определена как ткани, отображаемом увеличениюДлина и диаметр сосудистого ствола, с его основными ветвями и разрастание дополнительных терминальных ветвей, в обоих воротной вены и печеночной венозного дерева.

В настоящее время несколько количественных параметров, подходящих для описания роста сосудов и взаимосвязь между печеночной паренхимы регенерации и регенерации сосудов находятся под следствием. Они включают в себя параметры , указывающие роста сосудов, в том числе максимальной длины сосудов (рис. 2), радиус и плотность сосудистой сосудистой с точки зрения общей сосудистой длины / объема печени или сосудистого объема объем / печени.

рассчитывались Общий объем печени и объем выбранных долей печени. В нормальных печени, общий объем печени составляла от 1,2 мл до 1,6 мл (N = 6, в том числе как PV группы и группы HV). Он снизился до 0,6 до 0,7 мл после выполнения расширенной резекции печени путем удаления левой латрального и медианная лопасть. Объем печени постоянно увеличивается в процессе роста печени. По послеоперационный день 7 (POD 7), объем печени увеличилась примерно до 88% от его первоначального объема, т.е. 2,6 раза. Увеличение объема печени коррелирует с восстановлением веса печени.

рассчитывались Всего сосудистые объемы фотоэлектрической системы и системы высокого напряжения. Общий объем сосудистой системы HV была выше, чем в системе PV, так как часть внутрипеченочного нижней полой вене была включена. Общий объем сосудистой системы PV колебалась от 0,05 до 0,08 мл у нормальных мышей. Он снизился до 0,03 до 0,04 мл после 70% частичной гепатэктомии. К СОД 7, суммарный сосудистый объем остатка печени увеличена до 100% от первоначального объема. Общий объем сосудистого HV колебалась от 0,14 до 0,16 мл. Сосудистый объем снизился до 0,08 до 0,09 мл после резекции. В течение первой недели после операции, общий объем сосудистого остатка печени увеличилась бу 94% от исходного значения.

Поскольку соотношение между результатами, увеличение сосудистого объема и объема паренхимы, сосудистый плотность рассчитывали, точнее сосудистую объемную долю (сосудистый объем, деленное на объем печени). Это показало, что сосудистый объемная доля оставалась относительно стабильной в течение всего процесса регенерации.

3D Визуализация молекулярных событий

После того, как КТ-сканирования выбранных образцов подвергали серийному секционирования, уступая до 2000 слайдов, которые были полностью оцифрованы и использованы для восстановления портала, а также печеночного венозного дерева 12. Это является предпосылкой для будущего 3D-визуализации молекулярных событий в процессе регенерации в отношении растущего сосудистого дерева.

Рисунок 1. Мониторинг качества инъекции силикона. A. Неполное заполнение правой нижней воротной вены (стрелка слева) и хвостатое воротной вены (стрелка вправо) визуализировали в программном обеспечении Imalytics доклинических , как разрывами сосудистого дерева. Это указывало на недостаточную перфузию давления или перфузии объема или наличие пузырьков воздуха. B. Экстравазация правой нижней воротной вены визуализируется который показал разрушение судна из - за недостаточного давления или гиперперфузии. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

фигура 2
Рисунок 2. Измерение максимальной длины судна праваниже портальной вены. Для определения максимальной длины судна один начальной точки и одной конечной точки были помещены в корень и дистальным концом правого нижнего воротной вены (ПНЛВ) сосудистой маски (синего и пурпурного маркеров шара) в доклинической программном обеспечении. Сосудистый длина пути ПНЛВ (10,95 мм) была получена в рамках оценки "Path извитость". Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Контрастные сосудистого дерева путем инъекции силикона и сканирования μCT была введена в опухолевых моделях и неврологических моделях болезни часто для изучения кровеносных сосудов прогрессирование 5,7,8,10. Улучшения в методологии инъекции силикона были сделаны в настоящем исследовании для визуализации и количественной оценки роста сосудов после частичной резекции печени у мышей.

Есть целый ряд важных шагов, которым необходимо уделить внимание, чтобы добиться хорошего качества перфузии. Во-первых, системный гепаринизация настоятельно рекомендуется перед промывкой печени с гепарином или физиологическим раствором, чтобы избежать свертывания крови внутри печени. Устранение пузырьков воздуха из трубки также имеет важное значение для достижения хорошего качества силикона перфузией. Определение скорости перфузии и давления должны быть сначала основаны на физиологических гемодинамических параметров 17. Время Перфузия отражает общее Вводимый объем и оценивается принимая ожидаемый внутрисосудистогообъем и объем prefilling системы катетера во внимание.

Силикон представляет собой крайне вязкую соединение, которое отличается от крови или физиологического раствора. Таким образом, несколько испытаний необходимы для корректировки скорость перфузии и давления. Поддержание постоянной скорости потока и давления впрыска необходимо предотвратить серьезное растяжение или даже разрыв мелких сосудов. Время Перфузия устанавливается в соответствии с предполагаемыми необходимого объема впрыска. Тем не менее, перфузию следует немедленно прекратить, когда синее соединение становится видимым в сосудах на поверхности печени. В противном случае, силикон может стекать в синусоид и в другую сосудистую систему, которая будет мешать последующего восстановления и анализа.

Как правило, силикон перфузировались систематически с помощью левого желудочка в большинстве опубликованных отчетах 1,3,15. Левый желудочек легко разоблачить, чтобы позволить свободный доступ к месту инъекции. Однако недостатком является то, что этот маршрут является раTher косвенным, поскольку контрастный агент должен пройти циркуляцию до достижения сайт интереса. Таким образом, хирургическая процедура техники инъекции силикон был модифицирован в данном исследовании. В отличие от часто выбранного косвенным путем применения выполненного другими, силиконовое соединение непосредственно вводят в сосудистую систему интересов, а не контрастные все тело. Таким образом, скорость и объем перфузии может быть лучше контролировать. Портальной венозной системы и печеночной венозной системы могут быть перфузию и реконструировано отдельно для последующего индивидуального анализа, как показано на видео.

Ограничение этого модифицированного процедуры является техническая сложность. Это является сложной задачей, чтобы успешно выполнить внутрипортальной инъекции с использованием высоковязкой соединения у мышей, потому что сосудистая структура настолько деликатна. Это довольно легко уничтожить судов во время процедуры. Таким образом, портал рассечение вены и катетер InSertion следует проводить осторожно.

Контрастные сосудистых деревьев и последующего μCT визуализации эксплантированной печени является полезным инструментом для визуализации и количественной оценки регенерации сосудов после частичной резекции печени. Количественные сосудистые параметры могут быть использованы для лучшего понимания кинетики роста сосудов в прогрессировании регенерации печени. Кроме того, 3D-реконструкция обоих печеночных сосудистой системы на основе серийных срезов технически осуществимо, хотя и представляющий огромную рабочую нагрузку.

Этот метод может быть применен в нескольких моделях, где визуализация и количественное определение сосудистого роста имеет важное значение. Кроме того, 3D визуализация молекулярных событий в отношении основного сосудистого дерева находится в досягаемости. Примеры молекулярных событий, представляющих интерес может быть обнаружение маркера пролиферации, таких как Ki-67 или маркеров ишемического повреждения, такие как HMGB1. Оценка пространственно разрешенное молекулярного эвEnts в непосредственной близости от регенерирующего сосудистого дерева в регенерирующей печеночной паренхимы является необходимым условием для продвинутых многомасштабном систем биологии моделирования. Этот метод инъекции силикона является одним экспериментальным шагом на пути к достижению этой цели.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
PERFUSOR® VI B.BRAUN 87 222/0
Pipetus®-akku Hirschmann 9907200
Pipets Greiner 606180
micro scissors Fine Science Tools (F·S·L) No. 14058-09
micro serrefine Fine Science Tools (F·S·L) No.18055-05
Micro clamps applicator Fine Science Tools (F·S·L) No. 18057-14
Straight micro forceps Fine Science Tools (F·S·L) No. 00632-11
Curved micro forceps Fine Science Tools (F·S·L) No. 00649-11
needle-holder Fine Science Tools (F·S·L) No. 12061-01
1 ml syringe B.Braun 9161406V
5 ml syringe B.Braun 4606051V
extension and connection lines B.Braun 4256000 30 cm, inner ø 1.2 mm
6-0 silk (Perma-Hand Seide) Ethicon 639H
6-0 prolene Ethicon 8711H
Microfil® MV diluent FLOW TECH, INC
Microfil® MV - 120 FLOW TECH, INC MV - 120 (blue)
MV curing agent FLOW TECH, INC
Heparin 2500 I.E./5 ml Rotexmedica ETI3L318-15
Saline Fresenius Kabi Deutschland GmbH E15117/D DE
Imalytics Preclinical software Experimental Molecular Imaging, RWTH Aachen University, Germany
HepaVision Fraunhofer MEVIS, Bremen, Germany
NanoZoomer 2.0-HT Digital slide scanner Hamamatsu Electronic Press, Japan  C9600
Tomoscope Duo CT  CT Imaging GmbH, Erlangen, Germany TomoScope® Synergy

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Bearden, S. E., Segal, S. S. Neurovascular alignment in adult mouse skeletal muscles. Microcirculation. 12, (2), 161-167 (2005).
  2. Brown, R. P., Delp, M. D., Lindstedt, S. L., Rhomberg, L. R., Beliles, R. P. Physiological parameter values for physiologically based pharmacokinetic models. Toxicol.Ind.Health. 13, (4), 407-484 (1997).
  3. Dai, D., et al. Elastase-Induced Intracranial Dolichoectasia Model in Mice. Neurosurgery. (2015).
  4. Ding, B. S., et al. Inductive angiocrine signals from sinusoidal endothelium are required for liver regeneration. Nature. 468, (7321), 310-315 (2010).
  5. Downey, C. M., et al. Quantitative ex-vivo micro-computed tomographic imaging of blood vessels and necrotic regions within tumors. PLoS.One. 7, (7), 41685 (2012).
  6. Ehling, J., et al. CCL2-dependent infiltrating macrophages promote angiogenesis in progressive liver fibrosis. Gut. (2014).
  7. Ehling, J., et al. Micro-CT imaging of tumor angiogenesis: quantitative measures describing micromorphology and vascularization. Am.J.Pathol. 184, (2), 431-441 (2014).
  8. Ghanavati, S., Yu, L. X., Lerch, J. P., Sled, J. G. A perfusion procedure for imaging of the mouse cerebral vasculature by X-ray micro-CT. J.Neurosci.Methods. 221, 70-77 (2014).
  9. Gremse, F., et al. Hybrid microCT-FMT imaging and image analysis. J.Vis.Exp. (100), (2015).
  10. Jing, X. L., et al. Radiomorphometric quantitative analysis of vasculature utilizing micro-computed tomography and vessel perfusion in the murine mandible. Craniomaxillofac.Trauma Reconstr. 5, (4), 223-230 (2012).
  11. Melloul, E., et al. Small animal magnetic resonance imaging: an efficient tool to assess liver volume and intrahepatic vascular anatomy. J.Surg.Res. 187, (2), 458-465 (2014).
  12. Schwier, M., Bohler, T., Hahn, H. K., Dahmen, U., Dirsch, O. Registration of histological whole slide images guided by vessel structures. J.Pathol.Inform. 4, ((Suppl)), 10 (2013).
  13. Selle, D., Preim, B., Schenk, A., Peitgen, H. O. Analysis of vasculature for liver surgical planning. IEEE Trans.Med.Imaging. 21, (11), 1344-1357 (2002).
  14. Shergill, U., et al. Inhibition of of VEGF- and NO-dependent angiogenesis does not impair liver regeneration. Am.J.Physiol Regul.Integr.Comp Physiol. 298, (5), 1279-1287 (2010).
  15. Sueyoshi, R., Ralls, M. W., Teitelbaum, D. H. Glucagon-like peptide 2 increases efficacy of distraction enterogenesis. J.Surg.Res. 184, (1), 365-373 (2013).
  16. Wei, W., et al. Rodent models and imaging techniques to study liver regeneration. Eur.Surg.Res. 54, (3-4), 97-113 (2015).
  17. Xie, C., Wei, W., Zhang, T., Dirsch, O., Dahmen, U. Monitoring of systemic and hepatic hemodynamic parameters in mice. J.Vis.Exp. (92), e51955 (2014).
Визуализация сосудистой и паренхиматозных регенерации после того, как 70% частичной гепатэктомии у нормальных мышей
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Xie, C., Wei, W., Schenk, A., Schwen, L. O., Zafarnia, S., Schwier, M., Gremse, F., Jank, I., Dirsch, O., Dahmen, U. Visualization of Vascular and Parenchymal Regeneration after 70% Partial Hepatectomy in Normal Mice. J. Vis. Exp. (115), e53935, doi:10.3791/53935 (2016).More

Xie, C., Wei, W., Schenk, A., Schwen, L. O., Zafarnia, S., Schwier, M., Gremse, F., Jank, I., Dirsch, O., Dahmen, U. Visualization of Vascular and Parenchymal Regeneration after 70% Partial Hepatectomy in Normal Mice. J. Vis. Exp. (115), e53935, doi:10.3791/53935 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter