Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Visualisering av Vascular och parenkymal Regeneration efter 70% partiell hepatektomi hos normala möss

doi: 10.3791/53935 Published: September 13, 2016

Abstract

En modifierad silikon injektionsproceduren användes för visualisering av lever vaskulära trädet. Detta förfarande bestod av in-vivo injektion av silikonföreningen, via en 26 G kateter, till den portala eller lever ven. Efter silikon injektion var organ explanterades och förberedd för ex vivo mikro CT (μCT) skanning. Silikoninjektionsproceduren är tekniskt utmanande. Uppnå ett framgångsrikt resultat kräver omfattande mikro erfarenhet från kirurgen. En av utmaningarna i detta förfarande innebär att bestämma lämplig perfusionshastighet för silikonförening. Den perfusionshastighet för silikonföreningen måste definieras baserat på den hemodynamiska av det vaskulära systemet av intresse. Olämplig perfusionshastighet kan leda till en ofullständig perfusion, artificiell dilatation och bristning av vaskulära träd.

3D-rekonstruktion av kärlsystemet baserades på datortomografi och uppnåddes med hjälp avpreklinisk program som HepaVision. Kvaliteten på det rekonstruerade vaskulära trädet var direkt relaterad till kvaliteten på silikon perfusion. Därefter beräknade vaskulära parametrar för kärltillväxt, såsom total kärlvolymen, beräknades baserat på kärlrekonstruktioner. Kontrasterande det vaskulära trädet med silikon tillåtet för efterföljande histologisk upparbetning av provet efter μCT skanning. Provet kan utsättas för seriesnitt, histologisk analys och hela diabilder, och därefter till 3D-rekonstruktion av kärl träd baserade på histologiska bilder. Detta är en förutsättning för detektion av molekylära händelser och deras fördelning i förhållande till det vaskulära trädet. Denna modifierade silikon injektionsproceduren kan också användas för att visualisera och rekonstruera kärlsystem i andra organ. Denna teknik har potential att användas i stor utsträckning studier om vaskulära anatomin och tillväxt i olika djur enND sjukdomsmodeller.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Leverregenerering bestäms ofta genom att mäta ökningen av levervikten och volymen och genom att bedöma hepatocytproliferation hastigheten 16. Dock är leverregenerering inte bara inducera parenkymal förnyelse men också vaskulär regeneration 6. Därför bör vaskulär tillväxt undersökas vidare med avseende på dess roll i utvecklingen av leverregenerering. Visualisering av leverkärlsystemet är avgörande för att öka kunskaperna om vaskulär regeneration. Ett stort antal indirekta metoder har utvecklats för att studera de bakomliggande molekylära mekanismerna för lever vaskulär förnyelse. Traditionellt, detektering av cytokiner (vaskulär endotelial tillväxtfaktor, VEGF) 14, kemokiner och deras receptorer (CXCR4 / CXCR7 / CXCL12) 4 har varit stöttepelaren för att studera vaskulär regenerering. Men skulle en 3D-modell tillsammans med kvantitativ analys av kärl lägga kritiska anatomiskainformation för att få en bättre förståelse för den viktiga relationen mellan parenkymal och vaskulär förnyelse.

För att visualisera den hepatiska kärlsystemet, vilket kräver kontrasterande de vaskulära träd, injicerades möss med en radiopak silikongummi kontrastmedel direkt in i portalen eller lever venös vaskulära trädet. Efter polymerisation av silikon och explantation av organ ades leverprov utsattes för μCT scanning med hjälp av en CT-scanner. Skannar resulterade i voxel bildrepresentationer av silikon injektion prover 9.

För kvalitetskontroll, var kärlsystemet först visualiseras i 3D med hjälp preklinisk programvara. Segmentering utfördes genom att sätta en tröskel mellan den mjuka vävnaden intensitet och fartyget intensitet. Den resulterande fartyg mask synliggjordes med användning ytrendering. Programvaran tillät också för manuell bestämning av två parametrar för vascular tillväxt: maximal fartygets längd och radie.

En preklinisk programvara användes sedan för 3D-rekonstruktion av kärl träd och efterföljande beräkning av leverans eller dränerande vaskulära områden 13. Dessutom har denna mjukvara bestäms automatiskt vissa parametrar i vaskulär tillväxt, såsom den totala längden av alla synliga kärlstrukturer även känd som den totala kantlängden eller den totala kärlvolymen.

Silikon perfusion Förfarandet utfördes på naiva möss och hos möss som undergick 70% partiell hepatektomi (PH). Lever samlades vid olika observations tidpunkter efter resektion för att analysera vaskulär och parenkymal leverregenerering med hjälp av den tidigare nämnda visualisering och kvantifiering teknik.

De viktigaste målen för denna film är att: (1) visar den känsliga injektionsteknik som krävs för att uppnå optimal kontrasterande och (2) visar den potentiella nyttan resulterande frOm en detaljerad analys av de resulterande prov med μCT och histologiska seriesnitt. Efter att ha sett denna film, bör läsaren ha en bättre förståelse för hur man injicerar silikonförening i en specifik kärlsystemet och användbarhet och användbarheten av tekniken.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Förfaranden med djurförsök har godkänts av Thüringer Lande für Verbraucherschutz Abteilung Tiergesundheit und Tierschutz, Tyskland. Eftersom portalen venösa systemet visualiserades separat från levern vensystemet har separata djur som behövs för de olika vaskulära träd.

1. Reagens Förberedelse

  1. Heparin-saltlösning
    1. Lägga 0,1 ml heparin i 10 ml koksaltlösning (5 lU / ml).
  2. Silikonföreningsblandning
    1. Tillsätt 2 ml MV-120 i ett 5 ml rör. Späd MV-120 genom att tillsätta 3 ml MV utspädningsmedel resulterade i en 40% -ig lösning.

2. Portal vensystemet Silikon Injection

  1. laparotomi
    1. Placera musen i anestesi induktion kammare och söva den med 2% isofluran och 0,3 l / min syre.
    2. Fäst bedövade musen på operationsbordet med tejp med kontinuerlig inandning av 2% äroflurane och 0,3 l / min syre. Kontrollera toe-nypa tillbakadragande reflex av musen och starta driften om reflexen är frånvarande.
    3. Gör en tvärgående snitt på buken med hjälp av sax för ytskiktet och en elektrisk koagulatorn för muskellagret. Flytta ut tarmarna till vänster sida med hjälp av bomull tips och täcka tarmarna med saltlösning indränkt gasbinda.
  2. katetrar
    1. Dissekera portvenen i mikroskop med hjälp av mikro pincett. Placera en 6-0 silke sutur under extrahepatisk portvenen, i ungefär 1 mm avstånd till dess förgrening och knyta den löst för senare användning.
    2. Injicera beredda heparin saltlösning via penis ven (manlig) eller nedre hålvenen (hona) för systemisk heparinisering under 5 min.
    3. Sätt i 26-gauge (26 G) kateter med nålen i portådern och fixa det med en klämma
  3. Heparin-saltlösning och silikonförening perfusion
    1. Last heparin-saltlösning solution i 5 ml spruta och sätt på perfusionsanordning. Fylla katetern fullständigt med heparin-koksaltlösning för att undvika luftbubblor.
    2. Anslut förlängningsröret till katetern och fäst dem ordentligt. Starta heparin-saltlösning perfusion med en perfusions-hastighet av 0,4 ml / min.
    3. Ligera pre-placerade 6-0 siden sutur för dubbel fastställande av katetern och blockerar blodflödet från mjälten ven och tarmkäxvenen. Euthanatize musen genom blodtappning genom perfusion under narkos.
    4. Skölj levern med hjälp av saltlösning under hela perfusion förfarande för att hålla den fuktig.
    5. Tillsätt 0,1 ml härdare i MV-120 rör. Ändra heparin-saltlösning spruta till spruta silikon.
    6. Börja silikon perfusion med en perfusions-hastighet av 0,2 ml / min under ca 1 min för att Prefill katetersystemet och för att fylla i portvenen systemet. Stoppa silikon perfusion när fartyg på ytan blir blå.
  4. provtagning
    1. Håll lever in situ until silikon är helt polymeriseras efter cirka 15 till 30 minuter. Dissekera ligament som förbinder lever och intilliggande organ med omsorg för att hålla levern intakt. Explantatet levern och placera den i formalin för fixering.

3. Lever vensystemet Silikon Injection

  1. Utför laparotomi som utförs i steg 2,1 och utsätta operationsfältet helt.
  2. katetrar
    1. Dissekera portvenen i mikroskop med hjälp av mikro pincett. Placera en 6-0 silke sutur under extrahepatisk portvenen, i ungefär 1 mm avstånd till dess förgrening och knyta den löst för senare användning.
    2. Injicera beredda heparin saltlösning via penis ven (manlig) eller nedre hålvenen (hona) för systemisk heparinisering under 5 min.
    3. Sätt en 26 G kateter (kateter 1) med nålen i portådern och fixa det med en klämma. Sätt i en annan 26 G kateter (kateter 2) med nålen i nedre hålvenen och fixa det med en klämma.
    4. Ligera grenar av nedre hålvenen (inklusive vänster och höger njur vener) och dess bortre ände med hjälp av 6-0 syntetisk, monofilament, icke-absorberbara polypropylensutur.
  3. Heparin-saltlösning och silikonförening perfusion
    1. Ladda heparin-saltlösning i 5 ml spruta och slå på perfusion enhet. Fyll katetern ett helt med heparin-saltlösning för att undvika luftbubblor. Anslut förlängningsröret till katetern 1 och fixa det ordentligt. Starta heparin-saltlösning perfusion med en hastighet av 0,4 ml / min.
    2. Ligera pre-placerade 6-0 siden sutur för dubbel fastställande av katetern och blockerar blodflödet från mjälten ven och tarmkäxvenen. Euthanatize musen genom blodtappning genom perfusion under narkos.
    3. Skölj levern med hjälp av saltlösning under hela perfusion förfarande för att hålla den fuktig. Tillsätt 0,1 ml härdare i MV-120 rör. Exchange heparin-saltlösning spruta med sprut silikon.
    4. Placera en klämma på suprahepatic nedre hålvenen för att hindra utflödet av levern.
    5. Ansluta förlängningsröret till katetern 2 och börja silikon perfusion med en perfusions-hastighet av 0,2 ml / min under ca 2 min att nå en objektiv hepatisk vaskulär volym såsom rapporterats. Stoppa silikon perfusion när fartyg på ytan blir blå.
  4. provtagning
    1. Dissekera lever ligament undvika skador på levern. Explantatet levern och placera den i formalin för fixering.

4. Micro-CT (μCT) Skanning

För att skanna den explanterade levern provet med μCT behövs följande steg.

  1. Ta levern provet ur fixeringslösning. Placera levern på μCT bädden. Sätt μCT sängen med levern provet i μCT.
  2. Förvärva topogram innan skanningen. Använd en subscan för små leverprov och två subscans för stora prover.
  3. att välja81, CT-protokoll med en hög upplösning (t.ex. HQD-6565-390-90). Detta protokoll förvärvar 720 prognoser med 1.032 x 1012 bildpunkter under ett helt varv med skanningstiden för 90 sek per sub-scan. Starta μCT scan.

5. Histologiska seriesektioner

  1. Bädda levern provet i paraffin som helhet efter μCT scanning. Skär hela paraffin provet i 4μm sektioner, vilket resulterar i en serie av 2000 till 2500 sektioner.
  2. Stain sektioner med lämplig färgningsteknik för att visualisera molekylära händelser av intresse såsom Ki-67 som spridnings markör och HMGB1 som en markör för ischemisk skada. Bestäm sekvens av färgning med avseende på vetenskaplig fråga.
  3. Använd en hel diascanner att digitalisera de färgade sektionerna.
  4. Utför 3D-rekonstruktion av kärlträdet (s) (redan möjligt) och visualisera 3D-fördelning av molekylära händelser med avseende på vaskulär träd (forskning pågår).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

kvalitetskriterier

Kvaliteten på silikon injektion kan bedömas med blotta ögat under förfarandet. De små blodkärlen på lever yta fylla gradvis med den blå föreningen. Om det normala vaskulära strukturen observerades på levern ytan, var silikongummiinjektions kvalitet bra. Om perfusion volymen var otillräcklig, var de små blodkärlen på levern ytan inte helt fylld. I kontrast, överfyllning orsakas vaskulär bristning såsom visas med oregelbundna blå fläckar på ytan av organet. Båda orsakar svårigheter vid 3D-rekonstruktion i slutändan gör en procedur ett misslyckande.

För bättre utvärdering av injektionskvalitet, var μCT skanning följt av 3D vaskulär rekonstruktion med preklinisk programvara utförs. Injektion bestämdes att vara framgångsrik WHen segmentering resulterade i visualisering av en intakt komplett vaskulära trädet utan spruckna strukturer indikeras av synlig extravasering. Om kärlträdet verkade ofullständig (Fig. 1A), perfusion volym var otillräcklig. Om mer än en kärlträdet verkade eller extravasering sågs (Fig. 1B), perfusion volym eller tryck var otillräcklig. Detta var den mest troliga orsaken till ett misslyckande. Perfusionstryck kan teoretiskt variera något beroende på lösningens viskositet. Viskositet är beroende av polymerisations-tiden mellan blandning av föreningen och injektion i det vaskulära systemet. Eftersom en del manipulering krävs för blandning och insprutning, kan tidsintervallet variera något mellan 3 min till 5 min.

Om lösningen har låg viskositet, är perfusionstryck låg. I detta fall föreningen kan överföra till den icke-injicerade vaskulära trädet via sinus systemetvilket leder till en något högre perfusion volym. Om lösningen är ytterligare polymeriseras leder till en högre viskositet, kommer perfusionstryck stiga, vilket orsakar avbrott i kärlen och extravasering.

Fastställande av mål Perfusion Volym

Eftersom otillräcklig perfusion eller hyperperfusion skulle orsaka fel i injektion, standardisera perfusion volymen ansågs. Såsom rapporterats 2, är 6% av den hepatiska volym som upptas av blod och 44% av blodet i levern finns i de stora kärlen (t.ex. leverartären, portal ven). Levervolym i möss är cirka 1,3 ml 11. Därför var den totala kärlvolymen i portalen venösa systemet i normala möss uppskattas till mellan 0,03 ml och 0,04 ml. Flödeshastigheten sattes till 0,2 ml / min och den totala perfusion tiden satt till ungefär en minut resulterar i en total injicerade volymenpå cirka 0,2 ml.

Det behövs Denna till synes hög volym, eftersom katetersystemet måste förfylld, som tar ca 0,1 till 0,15 ml. Det behövs en extra volym av 0,05 ml för att fylla den proximala portvenen mellan lever hilum och ligeringen av katetern. Flöde för leversveninjektion också inställd på 0,2 ml / min, men den totala perfusion tid förlängdes till två minuter, vilket resulterar i en högre total volym av ca 0,4 ml. Total intrahepatisk vaskulär volym antogs vara liknande den totala portådern kärlvolymen. Emellertid den volym som krävs för att fylla det intrahepatiska hålvenen mellan infrahepatic ligering och suprahepatic klämman uppskattades med 0,2 ml.

Framgång

Sammanlagt 49 djur utsattes för silikon injektion: 22 djur i solcellsystem och 27 djur i the HV system. Vår framgång på injektion var 55% (12/22) i PV-gruppen och 89% (24/27) i HV-gruppen. Med hänsyn till att PV-gruppen användes för att etablera den silikoninjektionsteknik i början (n = 4), andelen framgångsrika injektion för PV-systemet bör på ett effektivt vara högre än 55%. Men μCT bilder som kommer från dessa injektioner var lämpliga för 3D-rekonstruktion och kvantitativ analys. Dessutom kan de vaskulära träd från antingen PV eller HV av 36 möss rekonstrueras med Imalytics Preklinisk programvara.

Parenkymal och Vascular Regeneration

En tidsupplöst μCT serie murina leverprov efter hepatektomi utsattes för en kvalitativ analys. Parenkymal regenerering bestod av 3D-tillväxt på kvarlevan levern. Vaskulär regeneration definierades som vävnad som uppvisade en ökning avlängd och diameter av kärl stam, med dess huvudgrenar och utväxt av ytterligare terminalgrenar, både portalen venösa och lever venös träd.

För närvarande har flera kvantitativa parametrar som är lämpliga för att beskriva vaskulär tillväxt och förhållandet mellan parenkymal förnyelse och vaskulär förnyelse är under utredning. Dessa inkluderar parametrar som indikerar kärltillväxt, inklusive maximal kärllängd (Fig. 2), vaskulär radie och kärltäthet i termer av total kärl längd / levervolym eller vaskulär volym / levervolym.

Totalt levervolym och volym av utvalda leverlober beräknades. I normala levrar, total levervolymen varierade från 1,2 ml till 1,6 ml (n = 6, både PV-gruppen och HV-gruppen). Det minskade till 0,6 till 0,7 ml efter att ha utfört en utökad leverresektionskirurgi genom att ta bort den vänstra latrala och median lob. Levern Volymen ökade kontinuerligt under levertillväxt. Genom post-operativ dag 7 (POD 7), ökade levervolymen till approximativt 88% av dess ursprungliga volym, det vill säga, genom att 2,6-faldigt. Ökningen av levervolym korrelerad med levervikt återhämtning.

Totalt kärl volymer av solcellsystem och HV-systemet beräknades. Totalt vaskulär volym HV systemet var högre än i solcellssystem, eftersom en del av intrahepatisk sämre hålvenen ingick. Totalt vaskulär volym solcellssystem varierade från 0,05 till 0,08 ml i normala möss. Det minskade till 0,03 till 0,04 ml efter 70% partiell hepatektomi. Genom POD 7, totala vaskulära volymen av den kvarleva levern ökade till 100% av ursprunglig volym. Totalt vaskulär volym HV varierade från 0,14 till 0,16 ml. Kärlvolymen minskade till 0,08 till 0,09 ml efter resektion. Inom den första postoperativa veckan, den totala kärlvolymen kvarlevan levern ökade by 94% av ursprungligt värde.

Som förhållandet mellan resultat, ökad vaskulär volym och parenkymal volym, var en kärltäthet beräknas närmare bestämt kärlvolymfraktionen (vaskulär volym dividerat med lever volym). Detta visade att vaskulär volymandel förblev relativt stabil under regenereringsprocessen.

3D-visualisering av molekylära händelser

Efter CT-skanning de utvalda proverna utsattes för seriell sektionering, vilket ger upp till 2000 bilder, som var helt digitaliserad och används för att rekonstruera portalen liksom lever venösa trädet 12. Detta är en förutsättning för framtida 3D-visualisering av molekylära händelser under regenerering i förhållande till den växande vaskulära trädet.

"Bild Figur 1. Kvalitetskontroll av silikon injektion. A. Ofullständig fyllning av rätt sämre portvenen (pilen till vänster) och caudatus portvenen (pilen i höger) visualiserades i Imalytics Prekliniska programvara som diskontinuiteter i kärlträdet. Detta indikerade en otillräcklig perfusionstryck eller perfusion volym eller förekomsten av luftbubblor. B. Extravasering av höger sämre portvenen visualiserades vilket indikerade avbrott i ett fartyg på grund av otillräcklig tryck eller hyperperfusion. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

figur 2
Figur 2. Mätning av maximal fartygslängd av högerunderlägsen portvenen. För att bestämma den maximala kärllängden, en startpunkt och en slutpunkt placerades vid roten och den distala änden av den högra underlägsna portvenen (RIPV) av den vaskulära masken (blått och magenta bollmarkörer) i preklinisk mjukvara. Den vaskulära banlängden av RIPV (10,95 mm) erhölls som en del av en utvärdering av "Path slingrigheten". Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Kontrasterande kärlträdet med silikon injektion och μCT scanning har införts i tumörmodeller och neurologiska sjukdomsmodeller ofta för att studera angiogena progression 5,7,8,10. Förbättringar i metoder för silikon injektion gjordes i föreliggande studie för att visualisera och kvantifiera vaskulär tillväxt efter partiell hepatektomi hos möss.

Det finns ett antal kritiska steg som behöver uppmärksamhet för att uppnå god perfusion kvalitet. Först av allt, är systemisk heparinisering rekommenderas starkt innan spolning av levern med heparin eller saltlösning för att undvika bildning av blodproppar inuti levern. Eliminering av luftbubblor från slangen är också viktigt för att uppnå god kvalitet av silikon perfusion. Bestämningen av perfusion hastighet och tryck bör först baserat på fysiologiska hemodynamiska parametrar 17. Perfusion tid speglar den totala injicerade volymen och beräknas ta den förväntade intravaskulärvolymen och förfyllning volymen av katetersystemet i beaktande.

Silikon är en mycket viskös förening, som skiljer sig från blod eller koksaltlösning. Därför är flera försök som behövs för att justera perfusionshastighet och tryck. Upprätthållande av konstant insprutnings flöde och tryck är nödvändigt för att förhindra allvarlig utvidgning eller bristning av små fartyg. Perfusion är satt i enlighet med den uppskattade behövs injektionsvolymen. Dock bör perfusion stoppas omedelbart när den blå föreningen blir synlig i fartyg på ytan av levern. I annat fall kan silikon rinna in sinusvågor och i en annan kärlsystemet som kommer att störa senare rekonstruktion och analys.

Normalt är silikon perfusion systematiskt via den vänstra kammaren i de flesta publicerade rapporter 1,3,15. Den vänstra ventrikeln är lätt att exponera för att möjliggöra fritt tillträde till injektionsstället. Emellertid är nackdelen att denna rutt är rather indirekt eftersom kontrastmedlet måste genomgå cirkulationen innan de når stället av intresse. Därför har det kirurgiska ingreppet av silikoninjektionsteknik modifierats i denna studie. I motsats till den ofta valda indirekt rutt ansökan utförs av andra, var silikonförening direkt injiceras i det vaskulära systemet av intresse, istället för att kontrastera hela kroppen. På detta sätt kan hastigheten och volymen av perfusion bättre kontrolleras. Portalen venösa systemet och lever venösa system kan perfusion och rekonstrueras separat för senare individuell analys, som visas i videon.

Begränsningen av denna modifierade procedur är tekniska svårigheter. Det är utmanande att framgångsrikt utföra en intraportal injektion med mycket trögflytande förening i möss, eftersom kärlstrukturen är så känslig. Det är ganska lätt att förstöra kärlen under förfarandet. Således portvenen dissekering och kateter insertion bör utföras försiktigt.

Kontrasterande av kärl träd och efterföljande μCT avbildning av explanterade lever är ett användbart verktyg för att visualisera och kvantifiera vaskulär regeneration efter partiell hepatektomi. Kvantitativa kärl parametrar kan användas för bättre förståelse av den kinetiska av vaskulär tillväxt i utvecklingen av leverregenerering. Dessutom är 3D-rekonstruktion av både lever vaskulära system baserade på seriesnitt tekniskt möjligt, om än som representerar en enorm arbetsbelastning.

Denna teknik kan tillämpas i flera modeller där visualisering och kvantifiering av vaskulär tillväxt är viktig. Dessutom är 3D-visualisering av molekylära händelser i förhållande till den underliggande vaskulära trädet vid räckhåll. Exempel på molekylära händelser av intresse kan vara att upptäcka spridning markör såsom Ki-67 eller markörer för ischemisk skada såsom HMGB1. Bedömning av spatialt upplöst molekylär event i närheten av regenererande kärlträdet inom regenere leverparenkym är en förutsättning för avancerade multi-skala systembiologi modellering. Detta silikoninjektionsteknik är en experimentell steg för att nå detta mål.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
PERFUSOR® VI B.BRAUN 87 222/0
Pipetus®-akku Hirschmann 9907200
Pipets Greiner 606180
micro scissors Fine Science Tools (F·S·L) No. 14058-09
micro serrefine Fine Science Tools (F·S·L) No.18055-05
Micro clamps applicator Fine Science Tools (F·S·L) No. 18057-14
Straight micro forceps Fine Science Tools (F·S·L) No. 00632-11
Curved micro forceps Fine Science Tools (F·S·L) No. 00649-11
needle-holder Fine Science Tools (F·S·L) No. 12061-01
1 ml syringe B.Braun 9161406V
5 ml syringe B.Braun 4606051V
extension and connection lines B.Braun 4256000 30 cm, inner ø 1.2 mm
6-0 silk (Perma-Hand Seide) Ethicon 639H
6-0 prolene Ethicon 8711H
Microfil® MV diluent FLOW TECH, INC
Microfil® MV - 120 FLOW TECH, INC MV - 120 (blue)
MV curing agent FLOW TECH, INC
Heparin 2500 I.E./5 ml Rotexmedica ETI3L318-15
Saline Fresenius Kabi Deutschland GmbH E15117/D DE
Imalytics Preclinical software Experimental Molecular Imaging, RWTH Aachen University, Germany
HepaVision Fraunhofer MEVIS, Bremen, Germany
NanoZoomer 2.0-HT Digital slide scanner Hamamatsu Electronic Press, Japan  C9600
Tomoscope Duo CT  CT Imaging GmbH, Erlangen, Germany TomoScope® Synergy

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Bearden, S. E., Segal, S. S. Neurovascular alignment in adult mouse skeletal muscles. Microcirculation. 12, (2), 161-167 (2005).
  2. Brown, R. P., Delp, M. D., Lindstedt, S. L., Rhomberg, L. R., Beliles, R. P. Physiological parameter values for physiologically based pharmacokinetic models. Toxicol.Ind.Health. 13, (4), 407-484 (1997).
  3. Dai, D., et al. Elastase-Induced Intracranial Dolichoectasia Model in Mice. Neurosurgery. (2015).
  4. Ding, B. S., et al. Inductive angiocrine signals from sinusoidal endothelium are required for liver regeneration. Nature. 468, (7321), 310-315 (2010).
  5. Downey, C. M., et al. Quantitative ex-vivo micro-computed tomographic imaging of blood vessels and necrotic regions within tumors. PLoS.One. 7, (7), 41685 (2012).
  6. Ehling, J., et al. CCL2-dependent infiltrating macrophages promote angiogenesis in progressive liver fibrosis. Gut. (2014).
  7. Ehling, J., et al. Micro-CT imaging of tumor angiogenesis: quantitative measures describing micromorphology and vascularization. Am.J.Pathol. 184, (2), 431-441 (2014).
  8. Ghanavati, S., Yu, L. X., Lerch, J. P., Sled, J. G. A perfusion procedure for imaging of the mouse cerebral vasculature by X-ray micro-CT. J.Neurosci.Methods. 221, 70-77 (2014).
  9. Gremse, F., et al. Hybrid microCT-FMT imaging and image analysis. J.Vis.Exp. (100), (2015).
  10. Jing, X. L., et al. Radiomorphometric quantitative analysis of vasculature utilizing micro-computed tomography and vessel perfusion in the murine mandible. Craniomaxillofac.Trauma Reconstr. 5, (4), 223-230 (2012).
  11. Melloul, E., et al. Small animal magnetic resonance imaging: an efficient tool to assess liver volume and intrahepatic vascular anatomy. J.Surg.Res. 187, (2), 458-465 (2014).
  12. Schwier, M., Bohler, T., Hahn, H. K., Dahmen, U., Dirsch, O. Registration of histological whole slide images guided by vessel structures. J.Pathol.Inform. 4, ((Suppl)), 10 (2013).
  13. Selle, D., Preim, B., Schenk, A., Peitgen, H. O. Analysis of vasculature for liver surgical planning. IEEE Trans.Med.Imaging. 21, (11), 1344-1357 (2002).
  14. Shergill, U., et al. Inhibition of of VEGF- and NO-dependent angiogenesis does not impair liver regeneration. Am.J.Physiol Regul.Integr.Comp Physiol. 298, (5), 1279-1287 (2010).
  15. Sueyoshi, R., Ralls, M. W., Teitelbaum, D. H. Glucagon-like peptide 2 increases efficacy of distraction enterogenesis. J.Surg.Res. 184, (1), 365-373 (2013).
  16. Wei, W., et al. Rodent models and imaging techniques to study liver regeneration. Eur.Surg.Res. 54, (3-4), 97-113 (2015).
  17. Xie, C., Wei, W., Zhang, T., Dirsch, O., Dahmen, U. Monitoring of systemic and hepatic hemodynamic parameters in mice. J.Vis.Exp. (92), e51955 (2014).
Visualisering av Vascular och parenkymal Regeneration efter 70% partiell hepatektomi hos normala möss
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Xie, C., Wei, W., Schenk, A., Schwen, L. O., Zafarnia, S., Schwier, M., Gremse, F., Jank, I., Dirsch, O., Dahmen, U. Visualization of Vascular and Parenchymal Regeneration after 70% Partial Hepatectomy in Normal Mice. J. Vis. Exp. (115), e53935, doi:10.3791/53935 (2016).More

Xie, C., Wei, W., Schenk, A., Schwen, L. O., Zafarnia, S., Schwier, M., Gremse, F., Jank, I., Dirsch, O., Dahmen, U. Visualization of Vascular and Parenchymal Regeneration after 70% Partial Hepatectomy in Normal Mice. J. Vis. Exp. (115), e53935, doi:10.3791/53935 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter