Abstract
転移性肝病変の切除後の腫瘍再発の高い発生率は、未解決の問題のまま。日常的な臨床イメージングによって検出できない小さな腫瘍細胞沈着物は、肝切除後の肝再生因子によって刺激することができます。これは、要因は、腫瘍の再発のために重要である、しかし、完全には明らかではありません。
提示されたマウスモデルは、肝切除後の再発性悪性病変の発症において役割を果たす機構を探索するために有用であり得ます。モデルは、マウスの肝臓組織の除去および（注射による）腫瘍誘発の規定量の-実行するために、簡単かつ再現可能な技術を兼ね備えています。動物は、単一の開腹術、30％肝切除、または70％の肝切除のいずれかで処理しました。全ての動物は、その後、残りの肝臓組織への腫瘍細胞の注射を受けました。観察の2週間後に、肝臓および腫瘍の大きさと重量とを評価しました免疫組織化学によって調べました。
70％肝切除後、腫瘍体積と重量が大幅に単独で開腹した（p <0.05）と比較して増加しました。また、免疫組織化学（のKi67）は切除群において増加した腫瘍増殖率（P <0.05）を示しました。
これらの所見は、肝臓内腫瘍増殖の肝再生メカニズムの影響を実証します。組織学的な後処理またはRNA分析のような方法と組み合わせることで、説明したマウスモデルは、肝臓内の腫瘍増殖と転移性疾患の再発に関与するさまざまな要因の精密検査のための基盤となる可能性があります。後肝切除転移の文脈で具体的な質問を探索する際、術後観察の長さのような変数の相当数は、注射または注入し、肝切除のタイミングのために使用される細胞株は、複数の角度を提供しています。この手順の制限はauのです、動物に適切な動物実験施設、特定の機器の取得へのアクセスを手順を実行するthorization。
Introduction
結腸直腸癌（CRC）は、全ての悪性腫瘍の約9％を占めます。これは、米国および世界中の両方の、第三の最も一般的な癌です。 30万から1年あたり50万人以上にCRC範囲からグローバル死亡率。患者の20％は彼らの大腸腫瘍の発見に肝臓転移に苦しみます。切除可能な転移は、通常、部分的な肝切除2,3によって処理されます。改善された外科技術、新しいマルチモーダル戦略と切除可能な転移の新しい定義は、患者4の増加のための可能な部分的な肝切除術の治療をレンダリングします。
二次肝悪性腫瘍の再発は、しかし、現代の消化管手術で挑戦的な臨床続発症です。肝転移の切除を受けたCRCを有する患者は、残肝5に新たな腫瘍を発症する30〜50％のチャンスがあります。したがって、上のさらなる研究が必要とされています肝転移の再発に関与するメカニズム。
約70％の肝臓切除は通常、残りの肝組織によっては数週間以内に補償されます。この再生には、インターロイキン6（IL-6）、腫瘍壊死因子α（TNF-α）、肝細胞増殖因子（HGF）、増殖因子β（TGF-β）を形質転換し、血管内皮増殖因子（VEGFのようなサイトカインを含む複数の機構を含みます）、マトリックスメタロプロテアーゼ（MMP-2及びMMP-9）およびCXCケモカイン6-11。これらの物質は、肝再生をサポートし、また、日常的な臨床イメージングによって検出されていない残りの肝臓に小さな腫瘍細胞の預金の成長を誘導することにより、一次および二次性肝悪性腫瘍の高い再発率を担当することがあります。この因果関係は、これまで証明されていません。
以下の仮説が設立されました。部分肝切除後、ライブを担当している増殖因子R肥大はまた、肝臓において以前に未知の腫瘍細胞の増殖を誘導し得ます。マウスモデルは、肝切除および腫瘍誘導の技術を組み合わせている設計されました。三十無胸腺ヌード-foxn1nu / nuマウスを10匹ずつの3群に分けました。それらの各々は、単独で、開腹術（グループA）、30％の肝切除術（グループB）または70％肝切除術（グループC）のいずれかで処理しました。全ての群の動物は、その後、休眠腫瘍細胞をシミュレートするために、肝臓の定義された残りの部分への腫瘍細胞の注射を受けました。その後、2週間観察し、動物は腫瘍成長および肝肥大を評価しました。
目的は、後の肝切除の腫瘍形成において役割を果たし得る分子と病原因子を探索するために使用することができるモデルを作成することでした。この方法は、評価するのに役立つかもしれない：肝臓再生に関与する内分泌因子の起源を、肝内TUMの責任のメカニズムまたは肝切除後の成長。そして、肝内腫瘍増殖の誘導に必要な肝切除量。彼らは基本的な生物学的原理の理解にと改良された治療の選択肢によって、人間に利益をもたらすことが期待できる知識の発展に貢献することを約束するため、次の方法が唯一の動物で行われています。 in vitroの方法は、ヒト病理の現実的な表現を提供することはできませんように起因するこれらの事項に関与する機構に、それは、 生体内で検討されなければなりませんでした。
これらの調査は、腫瘍の再発を減少させるための予防的な治療の選択肢に関連する標的の発見につながる可能性があります。
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Protocol
バイエルン、ドイツのミッテルフランケンの政府は、記載された手順のための権限を付与します。でも同様の実験は適切な当局による事前の承認を必要とします。
注：以下のマニュアルでは、AとBはそれに応じてマークされているグループに取り残さする必要がC.の工程を経て先に述べたグループのために使用することができます。
1.準備
- 、手袋を着用して顕微鏡下にポリスチレンパッドを置き、少しパッドの上の領域にレンズの焦点を合わせます。
- ポリスチレンパッドとそれにすぐ隣、他の半分以上の滅菌シートと場所の半分を分割します。
- 手術器具を滅菌し、ポリスチレンパッドの隣に滅菌シート上に置きます。
- アーチを形成するために、大きなペーパークリップを伸ばします。すぐ隣の動物の頭が位置する場所に - それを逆さま回し、先端にポリスチレンパッドにそれを押してください。
- 2肢間の気化器のマウスピースを置きますアーチの秒。 （ 図7）
- 動物の頭があるだろう場所から加熱ランプ40cm程度を設定します。ポリスチレンパッドのレベルで熱が40℃を超えていないことを確認します。
- 手術動物のための別々のケージを準備します。
- フレックスチューブ内の腫瘍細胞の定義された量と体積（50μlの最大）を準備し、氷の上に保管します。
2.麻酔
- プレキシグラスボックスにマウスを置き、高流量イソフルラン（10リットル/分の流量で5％イソフルラン）に麻酔導入を開始します。
- それは簡単に呼吸数（<20 /分）振盪深いあえぎの急激な減少により認識することができる死戦期呼吸の段階に入った直後に麻酔の異なる段階を経て、プレキシグラスボックスからマウスを削除します動物の体全体。
- 迅速に滅菌ドレープ覆われたポリスチレンパッド上に動物の腹アップを配置し、継続麻酔を維持するためにマウスピースに、マウスの鼻を挿入することにより、低流量イソフルランの通気。約1リットル/分の流量で1.8から2.2パーセントの吸気部分を使用してください。
- 毎分45〜60回の呼吸の間に理想的である呼吸頻度を計算することにより、動作中の麻酔の深さを評価します。そうでない場合に応じて吸気イソフルラン割合を適応させます。
注：彼らが有効になるまで、吸気イソフルラン分率の変化は、約60秒を要します。急速に大幅な変更を行うことは避けてください。その代わりに、徐々に麻酔のアプリケーションを変更します。
3.動作
- 適切な消毒剤と胸部と腹部を消毒し、その後手袋を変更します。
- 動物の大腿部にカルプロフェンの重量適応ボリューム（5ミリグラム/ kg体重）を注入します。
- ゆっくり麻酔の深さが十分であるかどうかをテストするためにピンセットで腹部の皮膚をつまみます。
- 慎重に周囲の組織からそれを公開するために剣状突起の周りの領域を分析。
- （内側から外側へ）剣状突起を介してステー縫合糸を配置し、クランプを使用して、動物の頭の上リテーナに両方のスレッドを添付します。
- 一緒にリトラクターの手足をつまみ、ゆっくりと動物の内部腹壁に沿って「U」字型リトラクターのヒントをご紹介します。
注：これらの措置は異なるローブへのアクセスを容易にするために、肝臓を露出させます。肝臓の中央値と左側葉の識別が可能になりましたする必要があります。 - 生理食塩水に浸した綿棒を使ってゆっくりと下方向に中葉を押してください。今中葉の表面と振動板との間に表示されます鎌状靱帯の腹側4分の3、解剖。
- 今、中央値をシフトするために、2つの生理食塩水に浸した綿棒を使用ローブとダイヤフラムに対して上向き側葉を残しました。
- 左側葉と尾状葉の間に薄い膜を可視化し、慎重にそれを分析。
注：グループAの動物にこのプロトコルを実行すると、この時点で3.18のステップにジャンプします。 - 左側葉の基部に沿って斜めサイズ4-0合字を置きます。
- 次に、元の位置に左側葉を返すために綿棒を使用しています。
- 慎重に、できるだけ葉の基部の近くに結紮糸を結ぶと十分に中断血液供給をテストするために葉に色の変化を評価します。
- ローブのベースラインを追跡することによって左側葉を切除し、切除した葉の重さに注意してください。
注：グループBからの動物にこのプロトコルを実行する場合は、この時点では3.18ステップにジャンプします。 - 左側葉の切り株や中葉のベースとの間に第2の合字を置きます。
- ワットなどの中葉を再配置エルと合字を結びます。再び、適切に中断血液供給をテストするために葉の色変化を評価します。
- 中葉を切除し、その重量に注意してください。
- 30 G針に1mlシリンジを接続し、任意の時点で注射器を傾けることなく、フレックス管からの腫瘍細胞とそれを埋めます。
- 劣っ右葉を露出させるために、動物の左側に腸のループを移動するには綿棒を使用してください。
- 垂直に対して30°の角度で「第三の手 "デバイスへの細胞にロードされた注射器を挿入します。
- 慎重にちょうど劣っ右葉上記の針でマウスの横にデバイスを移動します。
- 針の先端が劣る右葉の中央部になるまでゆっくりと第三のハンド装置内に注射器を進めます。
- 30-45秒の期間にわたって葉の中央部にボリューム全体を注入します。
- 出血が停止するまでに少なくとも3分間注射部位を圧縮します。 ステー縫合糸および開創器を取り外します。
- 単一のボタンの結び目を使用して再吸収性5-0縫合糸で筋膜を閉じます。
- 単一のボタンの結び目を使用して4-0、非吸収性縫合糸で皮膚を閉じます。
- 約1分間の高流量の酸素上でマウスを換気起動します。
4.術後の手順
- 十分な回復を確実にするために、次の半時間のために暖かい環境（約40℃）に動物を置きます。
- 72時間の術後用メタミゾールの5 mg / mlとして動物の飲料水を混合。
- 手続き後少なくとも3日間密接に縫合糸の整合性を調べます。
5.観察期間と安楽死
- 合計14日間毎日動物の体重を測定します。それぞれ自分の幸福と制限事項について、それらをスコア。
- 14日後、動物以下は2.1と動作するプロトコルaの2.2ステップ麻酔ND殺処分のための機関のプロトコルを進めます。
- ステップ3.4で説明したように正中開腹術を行います。腹部へのアクセスを容易にするために、切開1〜1.5センチメートルの尾側を拡張します。 3.7で指摘したように開創器を挿入します。
- 鎌状靱帯の残りの部分に沿って詳細に分析し、それが肝臓の頭側を出るときと同じように下大静脈を切りました。
- 鉗子で振動板をつかみ、ぶっきらぼうに肝臓と筋肉組織との間の空間に解剖することにより、振動板から肝臓を分離します。
- 後腹膜から動員肝臓組織を持ち上げ、それはまだに添付され、残りの構造それを解剖：後腹膜脂肪組織、下大静脈と門脈を。
- 誤って実際のサイズと重量に貢献する任意の追加の組織のための抽出後、肝臓を調べます。抽出された肝臓とその腫瘍は、図6に表示されます。
- infファイルから腫瘍を解剖右葉をerior。
- 腫瘍および肝実質の両方の大きさと重量を測定します。
- 組織分析のために必要に応じて追加の腹膜からの組織サンプル、リンパ節または他の器官を保存します
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Representative Results
私たちの具体的な実験では、30無胸腺ヌード-foxn1nu / nuマウスを含んでいました。これらは正中開腹、（生理食塩水50μlに溶解した）50万MC38腫瘍細胞の腫瘍細胞の注射を受け、続いて70％の肝切除、30％肝切除、または全くさらなる介入のいずれかで処理しました。
14日後に、残りの肝臓のほとんど完全な再生が30％または70％の肝切除の後に観察された（30％肝切除群の肝臓肥大指数は70％肝切除群から0.8対1.06でした）。
単開腹後、肝臓内の腫瘍の平均重量は332ミリグラム（：10から608 mgの範囲）でした。 P＆＃と70％肝切除後：30％肝切除対961 mgの後に（189 MG-3030 mgの範囲）：（76-1,873 mgの範囲）肝内腫瘍の平均腫瘍重量は656 mgでした60; 0.05（ 図1）。対1385ミリメートル3（範囲：411-2,366ミリメートル3）70％肝切除後、および511ミリメートル3（範囲：30％肝切除後、腫瘍体積が950ミリメートル3（439-2,326ミリメートル3の範囲）でしたP <0.05（ 図2）と、単独で開腹後87-1,693ミリメートル3）。
腫瘍組織から組織切片をKI-67の免疫組織化学を介して採取し、分析しました。スライド上の細胞は、それらの増殖速度に関して評価しました。 70％（P <0.05）の肝切除術を受けた動物から：61％（51から69パーセントの範囲）に比べ：開腹グループからの腫瘍細胞の平均増殖率は47％（39から56パーセントの範囲）でしたおよび53％（範囲：38から69%）30％（P = 0.22）の肝切除を受けた動物から、肝切除を受けた群では、細胞増殖の増加率を実証した （ 図3 - 5）。
図1：肝内腫瘍の重さ図は肝臓やショーから解剖後のグループA、BとCの間の平均腫瘍重量を比較するにはSEMを表すグループBおよびCエラーバーの腫瘍で重量を増加させた。 見るにはこちらをクリックしてください。この図の拡大版。
図2：肝内腫瘍の体積は、図は、肝臓から解剖後のグループA、BとCの間の平均腫瘍体積を比較し、ショーはSEMを表すグループBとCのエラーバーの腫瘍のボリュームを増加させました。 ANK ">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
図3：増殖速度 A群からの腫瘍標本からスライドのグループA. KI-67免疫組織化学からの腫瘍では、腫瘍細胞の軽度の増殖を示しています。スケールバー=100μmである。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
図4：増殖率 B群からの腫瘍標本からスライドのグループB KI-67免疫組織化学からの腫瘍では、腫瘍細胞の適度な増殖を示しています。スケールバー=100μmです。= "_空白」を取得>この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
図5：増殖速度グループCからの腫瘍標本からスライドのグループC KI-67免疫組織化学からの腫瘍では、腫瘍細胞の著しい増殖を示しています。スケールバー=100μmである。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
図6：グループBから抽出された肝臓/腫瘍試料は、この肝臓を30％肝切除と同時に腫瘍細胞の注射を行った後14日目に抽出しました。右下葉に大きな腫瘍が右上、中央値と尾状葉ながら、見ることができますsが著しい肥大介して行っています。
* =劣った右葉での腫瘍、SRL =優れた右葉、ML =中葉、CL =尾状葉。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
図7：ORテーブルの設定ポリスチレンパッドは、滅菌布で覆われています。曲がっオープンペーパークリップは、そのマウスピースとの呼吸管を覆う上端にパッドに圧 入されている。 この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。
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Discussion
げっ歯類で手術を行う前の実験では、バイアスのソースとして役立つことができる特定の変数を識別することができました。信頼性が高く、有効な結果を得るためには、以下の注意事項を考慮してください。
ルーチン術前の空腹時には肝再生13,14を阻害することができる肝脂肪症12、につながることができます。したがって、お勧めしません。肝細胞の最も高い有糸分裂活性は15日目を通して変化します。可能な場合は、すべてのグループのための日中の特定の時間に手続きを行っています。マウス肝再生は4-6週齢の動物において最も効果的です。生後10カ月以上経過した動物は、大幅に再生能力16が低下しています。バイアスの可能性を最小限にするために実験のために、同じ人種、性別および年齢のマウスを使用してください。無菌環境での作業は、このようなオープンな手順で一般的に重要です。特にathymiのような免疫不全の生物でビデオで使用さcマウス、早死や偏った結果につながる可能性があり、感染の危険性は、高いです。準備、手術、したがって、17を保証されているリカバリ領域からなる3ゾーンの設定を追求。 、その深遠な肝毒性効果のために、一般的に使用されるブプレノルフィンは、細胞内または術後の鎮痛療法18,19にはお勧めできません。十分な鎮痛を提供するために、カルプロフェンまたはメタミゾールのような他の物質を使用してください。メタミゾールは、多くの国で利用できないので、カルプロフェンはまた、処置後の疼痛管理のために使用することができます。メタミゾールを置換する3日間、一日一回に5mg / kg体重の皮下注射を行います。
回復マウスが食料や水へのアクセスが容易な温かい環境に置かれたときに術後の回復は最高の達成されます。理想的に、より脆弱なもの17を傷つけることから、より支配的な動物を防ぐために、一晩、他のマウスから分離されています。
プロトコルは非常に簡単ですが、jove_content ">、マウスでは手術のこの種を行うときに回避するためにいくつかのマイナーな落とし穴があります。鎌状靱帯の解剖は、腹壁への中葉の腹側面を接続する構造は、に不可欠です適切な肝臓の柔軟性を実現しています。この靱帯が下大静脈は頭側、注意がこの主要な静脈への損傷を防ぐために保証された肝臓を離れる点に非常に近いエリアに展開されるように、平均して約四分の三、それを解剖方法は、満足な動員を確保すると同時に、容器への適切な距離を維持します。切除プロトコルを実行する際リガチャー付きローブを連結する際の張力の適切な量を使用すると、途方もなく重要な課題です。空気ノット又は難締めリガチャーとの合字は不十分で、中断血液供給、出血、ショックや死につながることができます。同時に、attem徹底的に合字結び目を締めるためにptが周囲の組織や臓器に関連する損傷にリガチャ破裂する可能性があります。結紮完全性を評価する有効な方法は、ライゲーションされた葉の中チアノーゼ色変化の観察です。適切な縫合材料を選択することも重要な役割を果たしています。編組縫合糸はモノフィラメント材料はむしろソフト肝臓組織を通って解剖し、出血を引き起こすであろう一方で、組織を圧縮する可能性が高くなります。
マウスでは肝葉を取り除くもう一つの重要なステップは、合字の正確な位置決めを必要とします。ライゲーションは、ローブに入る主血管に垂直に実行されるべきです。これは中葉にかなり単純ですが、左側葉の適切な切除がより困難です。その血管が腹尾側方向に葉を入力してください。その結果、結紮糸は、リットルの劣る右葉に左突進ベース間の仮想線に沿って配置されなければなりませんアイバー。
中葉では、しかし、切除は下大静脈を損なう可能性があります。この主要な血管が葉の背側部分を介して実行されるため、それが肝臓の壊死につながる可能性がある、損傷を受けやすいです。さらに、この分野でも多くの張力で合字を結ぶ、横隔膜破裂および/または気胸になることがあります。
同等の結果を得るためにしようとすると、腫瘍細胞の適切な取り扱いもまた重要です。正確な細胞培養技術は、このプロトコルの一部であることを意味するものではないが、プロシージャ内の腫瘍細胞の処理は、あらかじめ最適な製剤と同様に重要です。腫瘍細胞を注射器に充填するときには、常にそれを直立に保つことが重要です。シリンジの主要な傾斜は、従って、注射時の細胞の喪失をもたらす、注射器壁に付着した腫瘍細胞を生じ得ます。わずかな傾斜が当たり、針を挿入するために、注射の時に保証されています劣っ右葉の表面にpendicular。
出血や腹膜転移が肝臓の表面上の穿刺部位からの出血や流出の結果として発生する可能性があります。したがって、3分間にわたり綿棒でローブの穏やかな圧縮は、肝実質からの出血を制御し、腹腔に漏れ腫瘍細胞液を防止するために不可欠です。
げっ歯類で腹腔内の操作手順プロトコルを含む出版物はほとんど腹部閉鎖のタイプに関する情報が含まれていません。しかし、この側面は、合併症の別の可能なソースです。でも、十分な痛みのコントロールと、動物は彼らの腹壁に異物を除去しようとします。結果は腹腔内感染、オープン腹部や死亡することができます。これは、創傷閉鎖の代わりに実行されている縫合糸と2層に腹壁を閉じるための両方の実行単一中断ステッチによって防止することができます。
（ハーランラボラトリーズBV、Kreuzelweg 53、NL-5961 NMホルストによって提供される）雌の無胸腺ヌード-foxn1nu / nuマウスは、この実験に使用しました。 T細胞欠損は、この品種は、比較的無制限の腫瘍の増殖を可能にし、腫瘍移植のために、したがって理想的な条件のために知られています。動物間の戦いをランク付けの影響を最小限にするために、唯一の雌の動物を使用しました。 C57BL / 6近交系マウスなどの異なる菌株を用いた予備的な結果も重要示され、まだ低いボリューム腫瘍増殖しています。このように、技術は非常に可能性があってもそれ以上のマウス系統で実用的かもしれません。
病原体は、腫瘍増殖20を妨げる可能性しかし、この設定では、免疫不全の生物を使用すると、特殊な動物衛生上の注意が必要です。我々の研究はhelpfuすることができますで行われました動物実験施設で行われているよう病原体21の存在を監視するためのセンチネル動物の使用などの対策バイアス源となる可能性を検出するリットル。
この実験は（マンハイム、ドイツの医学部で臨床化学研究所から入手した）MC38と呼ばれるマウス大腸癌細胞株を使用します。 5×10 5個の腫瘍細胞を生理食塩水を50μlに溶解しました。濃度は、この量は、二週間以内に固形腫瘍の形成のために理想的であると同定された予備実験において決定しました。これらの実験で使用した動物の免疫に応じて（上記の考察を参照されたい）、非常によく、ヒト結腸直腸癌細胞を使用し、従って、異種移植片を作成することが可能かもしれません。人間SW480腫瘍細胞を用いて、無胸腺ヌード-foxn1nu / nuマウスで行った初期テストが正常に切除後の残肝内腫瘍の成長を実証することができました。マウスの肝臓の大きさに、合併症を防ぐために、最大50μlにのみ使用ボリュームに推奨されます。この時点で可能な強化だろうルシフェラーゼと腫瘍細胞を標識すること。腫瘍細胞の成長およびサイズの近い監視が可能である場合に検討されている問題に応じて、興味のある情報を生じ得ます。
肝葉を連結する別の方法は、クリッピング法22またはクリッピング縫合ハイブリッド技術23を含みます。デバイスをクリッピングの位置決めは、しかし、クリッピング方法が困難なレンダリングしてもよいです。適切に行わ縫合結紮は、習得が容易な技術のままであり、この実験でローブを除去する最も費用効果的な方法である可能性が非常に高いです。
生きた動物は、この実験で使用されているので、それは適切な当局による事前の許可が必要です。地域によっては、これは、コストと時間のかかる作業であることができます。でも正式承認後、動物実験は、細胞培養試験または分子的方法などの研究方法よりもはるかに少ないアクセス可能です。のインフラに加え、現代の動物実験施設、特別な装置は、プロトコルを実行するために割り当てられなければなりません。また、2〜4週間の期間は、この技術を習得するためにスケジュールする必要があります。このプロトコルは、マウス系統の多数の細胞株の広い範囲に適用してもよいです。しかし、上述した可能な変形に対して、必ずしもすべての細胞株は、すべての生物において研究することができます。
このプロトコルを使用して調査研究の主な目標は、肝再生と肝悪性腫瘍の再発に対するその正確な効果に関与する複雑な成長因子システムになります。適切にこれらの可能な相関を調べるためには、異なる分子方法または細胞培養実験とは対照的に、動物実験を実施することが必須です。これらの方法ではなく、調査の無料の手段として使用されるべきです。いくつかの異なる肝切除モデルは、これまでに22-24公開されているが、この手順初めて十分に確立された操作に同時腫瘍細胞の注射を実装しています。
このマウスモデルは、マウスにおける肝切除はかなり簡単に実現可能かつ容易に再現可能な方法であることを示しています。マイナーおよびメジャー切除後の肝臓の再生は、2週間以内に肥大することによって、組織の損失を補償することができました。マウスは、70％までの肝臓体積の減少に対応することができます。
腫瘍細胞は、残りの肝臓の内部に増殖することができた固形腫瘍を確立することができます。切除肝組織の量と相関し、腫瘍増殖及び腫瘍細胞の増殖。大きな腫瘍重量及び容積によって、発現された残りの肝臓内の腫瘍増殖の活性化に切除リードのプロセス。増殖のこの大きい程度は、免疫組織化学検査によって証明することができました。
これはよく肝再生のFACの量ことが知られていますレータは、肝切除25,26の程度と肝臓肥大が増加するためにリリースしました。したがって、肝臓再生因子および腫瘍細胞増殖の間にリンクが存在してもよいです。これは、転移性再発は切除前に肝内転移の量と相関する臨床所見と一致しています。術前イメージングに表示され肝転移が診断のみで存在することができる、より多くの、まだ検出できない腫瘍細胞沈着しながら、氷山の一角を反映することができます。肝切除後の肝再生因子は、その後、最終的に再発転移として明らかになる、これらの腫瘍細胞の増殖を刺激することができます。
上記の相関は非常に可能性があるが、これまでに証明されていません。肝内腫瘍の進行上の肝再生機構の影響は、したがって、さらに分子解析を必要とします。正確な指示だけでなく、説明のビデオは、迅速な導入を可能にしますこのビデオで紹介した技術の。それは、このイベントのよく知られたチェーン内のミッシングリンクを発見しようとしている世界中の研究のさまざまな種類の基盤としての役割を果たすことができます。
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Acknowledgments
特別承認が技術的な質問で彼の援助のためのDr.ベンジャミンモッチュに行きます。また、作者は彼らのマルチメディアサポートのために博士マーカスForschnerとバークミュラーを感謝したい、彼女の社説の専門知識のためのエリカMagelkyとリサホルヌング、博士ローランドJurgonsとすべてのフランツ・ペンツォルト-センター、大学の教授ステファン・フォン・Hörsten（動物の取り扱いとケアのプロ意識のためのエアランゲン）。私たちは、MC38腫瘍細胞を提供するための臨床化学研究所、ハイデルベルク、ドイツの大学の医学部マンハイム教授マイケルNeumaierに感謝します。
本研究は、学位取得のための要件の履行で行われた「博士MEDを。」フリードリヒ・アレクサンダー大学エアランゲン・ニュルンベルク（FAU）で。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| Operation Microscope | Zeiss | OPMI-1 FC S21 | |
| Induction Cage (Plexiglas Box) | UNO BV, Netherlands | 180000132 | |
| Flowmeter + Connection Kit | UNO BV, Netherlands | 180000008 | |
| UNO Vaporizer Sigma Delta | UNO BV, Netherlands | 180000002 | |
| Key Filler for Anesthetic | UNO BV, Netherlands | 180000010 | |
| Activated Charcoal Filter Adsorber | UNO BV, Netherlands | 180000140 | |
| Gas Exhaust Unit | UNO BV, Netherlands | 180000118 | |
| Face Mask for mouse | UNO BV, Netherlands | 180000065 | |
| Vaporizer Stand | UNO BV, Netherlands | 180000006 | |
| Heat lamp | Physitemp Instruments | HL-1 | |
| Styrofoam Pad | RAYHER | 30074000 | |
| Third Hand Tool | TOOLCRAFT | ZD-10F | |
| Precision Scales | Kern | EW 220-3NM | |
| Scales | Kern | EMB 500-1 | |
| Sliding Caliper | MIB | MIB 82026100 | |
| Microdissection forceps | Braun/Aesculap | BD195R | |
| Microdissection scissors | Braun/Aesculap | FD100R | |
| Microdissection needle holder | Braun/Aesculap | BM563R | |
| Retractor | Fine Science Tools (F.S.T.) | No. 17001-0 | Type: Bowmann |
| Clamp | Braun/Aesculap | BJ002R | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Expendable Items (NOTE: Quantities are per animal and procedure) |
|||
| Foliodrape sterile cover (45 cm x 75 cm) | Hartmann | 2775001 | |
| Sterile Cotton Swabs (2x) | Hartmann | 4700151 | Peha |
| Sterile fluid (0.9% NaCl) | Braun | 3570310 | PZN=04454809 |
| Disinfectant (Softasept - 250 ml) | Braun | 3887138 | PZN=0762008808505018 |
| 2 x 1 ml syringe (Injekt-F ) | Braun | 9166017V | |
| 26 G canula (Sterican) - for Carprofen injection | Braun | 4665457 | |
| 30 G canula (Sterican) - for Tumor injection | Braun | 4656300 | |
| Caprofen (=Rimadyl) | Pfizer | QM01AE91 | |
| Metamizole (= Novaminsulfon) | Ratiopharm | 16543.00.00 | |
| 4-0 Vicryl suture | Ethicon | J835G | |
| 5-0 Prolene suture | Ethicon | 8618G | |
| SafeLock Flex-Tube 1.5 ml | Eppendorf | 22363778 | |
| 4 x 4 Gauze Sponge | Kendall/Covidien | UPC: 728795135355 | ASIN: B005BFQTWM |
| Large paperclip | ACCO | A7072510G | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Animals | |||
| Female athymic nude-foxn1nu/nu | Harlan Laboratories B.V. | Code 069 |
References
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