Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Immunology and Infection

Bioluminescence Imaging för att upptäcka sent stadium Infektion av afrikansk sömnsjuka

doi: 10.3791/54032 Published: May 18, 2016

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Etik
Allt arbete utfördes under godkännande av brittiska inrikesdepartementet Djur (vetenskapliga förfaranden) Act 1986 och London School of Hygiene & Tropical Medicine djurskydd och etikprövningsnämnden. ANLÄNDA riktlinje följs i denna rapport.

1. In vivo Passage av Bioluminescent Trypanosoma brucei brucei

  1. Ta en frysförvarade lager (benämnd stabilate) T. b. brucei stam GVR35-VSL-2 (tillgänglig från professor John Kelly vid London School of Hygiene & Tropical Medicine genom MTA) 9 från flytande kväve och låt jämvikt till rumstemperatur. Späd stabilate till 2 x 10 4 trypanosomer / ml i steril fosfatbuffrad glukoslösning (PBS-G) pH 8,0 (1 L PBS + 15 g glukos) 10.
    Obs: T. b. brucei GVR35-VSL-2 är icke-infektiös för människor och kräver Säpo licensierade anläggningar för att utföra experiment.
  2. inject en 20-25 g kvinnliga CD1 mus med 0,2 ml utspädda trypanosomer via den intraperitoneala vägen (ip) med en 25 G-nål. Detta är den "donator mus". Placera den infekterade musen i en specifikt patogenfria (SPF) -cage och foder ad libitum.
    Obs: CD1 möss är en utavlade stam och T. b. brucei GVR35 infektioner är väl kännetecknat av denna stam. Emellertid är detta protokoll också tillämpas på inavlade eller genetiskt modifierade stammar, men det är viktigt att notera att pälsfärg kan påverka känsligheten hos avbildnings 6,9.
  3. Övervaka perifert parasitemi efter blodprovstagning. Placera musen i en plastrainer och ta 5 pl av blod från svansen genom venpunktion med 21 G nål eller venesection och blanda 1/10 med 0,85% steril ammoniumklorid att lysera röda blodkroppar och göra det lättare att räkna.
  4. Räkna utspädda blodet i en Neubauer hemocytometer.
    1. Ladda det utspädda blodet in i båda kamrarna. Räkna hela centrala grid en kammare för att ge n trypanosomer. Koncentration av trypanosomer i blodet = N x 10 4 trypanosomer / ml, justera för eventuell utspädning faktor och beräkna medelvärdet av de två kamrarna.
      Obs: Efter ca 5-7 dagar efter infektion, bör perifer parasitemi stiga tillräckligt för att genomföra en infektion vid en koncentration av 2 x 10 4 trypanosomer / ml.
  5. När trypanosom nivåerna är höga nog för antalet möss som behövs, gå vidare till steg 1,6. En parasitemi nivå 6 x 10 4 trypanosomer / ml i en donator mus är tillräcklig för infektion av 10 möss.
    Notera: För statistiskt signifikanta gruppstorlekar, n = 6 för varje behandlingsgrupp av möss behövs åtta. För andra modeller av infektion, skulle kraft beräkningar måste göras för att fastställa lämpliga gruppstorlekar.
  6. Placera möss i en värmelåda (vid 28-30 ° C i ungefär 5 till 10 minuter) för att tillåta svansvenerna att vidga.För att inducera terminal anestesi, administrera 20 mg / kg pentobarbital IV med en 25 G-nål. Bekräfta musen sövs genom att försiktigt trycka på trampdynorna för att se till att det inte finns någon tillbakadragande reflex.
  7. Heparinisera en 21 G nål genom alikvotering 5 ml heparin vid 5000 USP enheter / ml i en Bijou rör och suger två gånger in och ut ur nålen ansluten till en 1 ml spruta.
  8. Ta hepariniserade 21 G-nål och 1 ml spruta, och utföra hjärtpunktering på sövda passagen musen genom att sätta nålen centralt under bröstkorgen (en sträng av blod pool i botten av nålen) och försiktigt dra tillbaka kolven för att inte kollapsa kammaren i hjärtat. Samla minst 0,7 ml blod.
  9. Späd infekterat blod för framställning av en ymp av 2 x 10 4 trypanosomer / ml i PBS-G pH 8,0 som steg 1,1 ovan.
    Obs: Vid denna punkt, den kvarvarande blod kan kryokonserveras att producera stabilate genom att blanda med 8% glycerol, 20% värmeinaktiverat fetalt calf serum (hi-FCS) och 72% infekterat blod. Långsamt frysa vid -80 ° C med användning av en långsamt frysa behållaren för att uppnå en kylningshastighet av -1 ° C / min, innan de överförs till flytande kväve.

2. Infektion av försöksmöss

  1. Placera CD1 honmöss (~ 21-25 g) i en uppvärmningslåda att försiktigt varmt att vidga vener. Placera det uppvärmda mössen in i en fasthållningsanordning för plast och injicera 0,2 ml utspätt inoculum intravenöst med en 25 G nål i svansvenen, vilket motsvarar 4000 trypanosomer per mus. Placera tryck på injektionsstället i efterhand för att hejda blödningen.
    Obs: Intraperitoneal infektion är en giltig väg för infektion och har använts i tidigare studier 10, men vi har funnit detta mindre reproducerbar än intravenöst.
  2. Randomisera infekterade möss och bur i grupper om tre i SPF-ventilerade burar. Som en kontroll, injicera CD 1 honmöss med vildtyp icke-självlysande parasit, T. b. brucei GVR35 (n =3).
  3. Övervaka infektion via blod Film Microscopy
    1. Spot 5 pl blod från venpunktion eller venesection på en glasskiva och utföra en blodutstryk (med hjälp av en andra glasskiva tryck försiktigt bloddroppen över bilden för att producera en tunn film). Låt objektglasen lufttorka.
    2. Fixera blodutstryk med 100% metanol och fläck med Giemsa under 10 min före sköljning med dH 2 O och låt lufttorka. Under 100X mål räkna antalet trypanosomer i 10 synfält (FOV).
      Obs: Blod filmning utförs parallellt hela djuret icke-invasiv avbildning så tidigt som en dag efter infektion. Vid behandling av ett antal djur är denna metod för trypanosom kvantifiering föredra framför hemocytometer räkning som proven kan förvaras vid rumstemperatur och räknades senare.

3. Bioluminescence Imaging på spår infektion

Obs: För att kontrollera infektionen, hela animal icke-invasiv bildåtergivning kan användas.

  1. Bered en förrådslösning av D-luciferin, eldfluga luciferas-substrat, i Dulbeccos fosfatbuffrade saltlösning (DPBS) vid 30 mg / ml. Filter sterilisera och frysa i alikvoter vid -20 ° C.
    Obs: D-luciferin är ljuskänsligt, därför skydda den från ljus genom att linda portioner i folie. Inte upprepat frysning och upptining luciferin eftersom det kan påverka aktiviteten 11.
  2. Värma en alikvot av D-luciferin till rumstemperatur. Ta bort varje mus från buren (inklusive kontrollmöss infekterade med nonbioluminescent vildtyp parasit stam) och injicera 150 mg / kg av den uppvärmda D-luciferin (utspädd i DPBS) intraperitonealt med en 25 G-nål. Placera möss i en isofluorane kammare för cirka 5 minuter för att inducera anestesi med 2% isofluoran / O 2 blandning på 2,5 l / min.
    Obs: Möss blir orörliga när de är under narkos. För imager som används här, kan 3 möss behandlas åt gången. Om möss är anesthettecknas längre än 30 minuter, kan ögon artificiell tår salva tillämpas för att förhindra ögon mössen från att torka ut.
  3. För kameran som beskrivs här, öppna programmet och initiera maskinen med hjälp av programmet enligt tillverkarens anvisningar. Förvärva bilder gång kamera och uppvärmd platta har nått temperaturen.
    Obs: Detta instrument är vanligtvis inte avstängd, vilket gör att maskinen för att utföra bakgrunds kalibreringar natten. I händelse av att den behöver för att starta, måste det köra en kalibreringskontroll först.
  4. Placera sövda möss i kameran (se 3.5). Använd stora svarta avgränsare mellan mössen att minimera blöda igenom något ljus självlysande signal. Bild möss med användning av en uppsättning av exponeringstider; 1, 3, 10, 30, 60 och 180 sekunder, med medel binning, en f / stopp och ett öppet filter och synfält E (12,5 x 12,5 cm 2).
    Obs: Kontroll möss infekterade med vildtyp nonbioluminescent GVR35 parasiter ger en background bioluminescens värde. Från en luciferin kinetik experiment (figur 6) med denna modell, har vi funnit att mareld signaltoppar vid 10 minuter efter administrering och avbildning tar ungefär fem minuter för 3 möss. Ta denna tidsplan i beaktande när anesthetizing och avbildning mössen.
  5. För att säkerställa fullständig avbildning av mössen, rotera för att erhålla en ventral, rygg- och sidovy. Upprätthålla konsekvens i storleksordningen orienteringen för avbildning mellan sekventiella djur.
  6. Efter bildbehandling, tillåter möss att återhämta sig från anestesi under observation innan han återvände till SPF-bur.
  7. Fortsätta avbildning möss var 7 dagar fram till dag 21 efter infektion. Det bör finnas en stadig ökning av mareld signal över hela djuret.
  8. Vid D21, bild och blodfilm mössen såsom beskrivits ovan, och dosen av möss med 40 mg / kg diminazene aceturate intraperitonealt. Detta läkemedel kommer att klara det perifera parasitemi men kommer inte att passera blod-brain barriär, och möjliggör därför bättre visualisering av CNS-infektion.
    Obs: Diminazene aceturate är ett väletablerat läkemedel som används för att behandla tidigt skede djur trypanosomiasis.
  9. Fortsätt bildbehandling och övervakning på D28 och D35.

4. Bekräftelse CNS Infektion

  1. Vid D35, bild möss enligt beskrivningen ovan (steg 3,1-3,4).
  2. Efter bildalstring, tillåter möss att återhämta sig från anestesi och exsanguinate möss enligt beskrivningen i steg 1,6-1,8, uppsamling av blod för ytterligare analys.
  3. Efter hjärtpunktion, BEGJUTA möss med 20 ml PBS (tillval: lägg till 3 mg / ml luciferin till perfusion lösning) via hjärtat att rensa blodet från organ och återinföra luciferin etikett som kan ha rensat från hjärnan regionen under tidsintervallet från steg 4,1.
  4. Försiktigt bort hjärnan genom att använda böjd sax, skär från basen runt omkretsen av skallen, och lyfta bort den övre delen av skallen, att låta hjärnansom skall försiktigt lyftas ut med böjda pincett.
  5. Placera utskurna hjärnan på ett avsnitt av svart plast och pipett 50 ul av 15 mg / ml luciferin över organ före avbildning, för att säkerställa tillräcklig luciferin har lagts till den utskurna hjärnan. Bilden med de inställningar som ovan. Detta kommer att visa lokaliseringen av infektionen till hjärnhalvorna.
    Obs: Nedströms kvantifiering av parasitemi på den utskurna hjärnan kan utföras genom qPCR som tidigare beskrivits 8. Andra alternativa tillämpningar nedströms kan omfatta histologi eller immunohistokemi för att identifiera parasiter i hjärnvävnaden efter fixering.

5. Kvantifiering av mareld Imaging

Obs: Bioluminescence kan kvantifieras med hjälp av regionen av intresse (ROI) med bildbehandlingsprogram och korrigerat för bakgrunds bioluminescens.

  1. Använda ROI verktyg, skapa en rektangulär ROI för hela djuret kvantifiering and den ligger över musen bilden för att täcka spetsen på näsan till basen av svansen på musen. Använd samma storlek rutan för varje djur och varje tidpunkt. När man tittar på ROI för hjärnan, använder en cirkulär ROI på samma sätt, placera den över musen huvudet regionen i bilden.
  2. Om så önskas, justera bilderna ska visas på samma spektrum för en visuell representation av infektion.
    Obs: Den programvara som används här genererar en färgkarta för varje bild justeras automatiskt för lägsta och högsta fotonräkningar. För att möjliggöra visuell jämförelse mellan en serie bilder, måste färgskalan ställas in på samma värden för alla bilder.
    1. Använda bilden med den högsta mareld och "Image justera fliken på verktygspaletten, välj en logaritmisk skala och en lämplig färgskala lägsta och högsta (som ska bestämmas empiriskt). Tillämpa denna skala för alla bilder i hela experimentet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Detta protokoll visar hur man följa sjukdomsprogression efter infektion av möss med T. b. brucei, en modell för human afrikansk sömnsjuka. Figur 1 visar tidslinje det experimentella protokollet, som visar tidsplanen för behandling och avbildningsstegen. Figur 2 visar en typisk synfält i en fast Giemsa-färgade blodutstryk användes för att kvantifiera perifer parasitemi, med trypanosomer och röda blodkroppar närvarande. Utveckling av infektionen hos djur kan följas genom mätning av bioluminiscens som i figur 3, som visar de infekterade djuren under loppet av ett experiment med samma djur avbildade vid varje tidpunkt. Genom infektionsförloppet en ökning av bioluminiscens kan observeras i alla djur under de första 21 dagarna som signalen blir mer spridd och intensiv, med höga regioner BLI (representerad som rödfrån värmen kartans skala) i mjälten området. Vid D21 möss behandlas med diminazene aceturate som beskrivs i figur 1, post-avbildning, och en droppe i bioluminescens kan observeras vid D28 som periferi infektion rensas, med låga nivåer av signalen som är närvarande i huvudet regionen hos mössen. Vid D35 förblir signalen fortfarande i huvudet regionen och har blivit mer intensiv indikerar en möjlig hjärninfektion. Hjärnan skärs för att bekräfta signalen är närvarande i hjärnvävnaden och kan sedan kvantifieras genom qPCR.

Traditionellt blodutstryk användes för att kvantifiera infektion progression och behandlingseffekter. Men dessa bara mäta perifer parasitemi, och kan inte användas för att utvärdera parasitnivåerna i hjärnan. Figur 4 kombinerar kvantifiering av både den perifera parasitemi och bioluminescens att demonstrera sjukdoms kinetik. På D7 hög BLI signal är närvarande på 10 8 figur 3 . Detta visar den större känsligheten hos mareld tillvägagångssätt över traditionella blod filmräkning.

För att verifiera att mareld i huvudet regionen verkligen lokalisera till hjärnvävnad, vid slutet av experimentet hjärnorna ut och bioluminesscens mätt ex vivo (Figur 5). En skillnad i infektionsbördan mellan hjärnor ses ofta och signal verkar inte lokalisera till specifika anatomiska regioner distribution av intensiv BLI signal kan variera mellan smittade djur. Till exempel, är stark BLI signal närvarande i den olfaktoriska bulben i mus 2 och 3 och i cerebellum i mus 3, medan hjärnan från mus 1 visar allmän fördelning av BLI signal över hela hjärnan. Som hjärnorna kan avbildas direkt efter culling mössen, kan ytterligare analyser utföras på hjärnvävnaden som vävnaden inte skadas i ex vivo imaging process.

Figur 1
Figur 1:. Timeline av experiment inklusive Imaging, provtagning och behandling på grund av den icke-invasiv art mareld avbildning, övervakning av infektion kan uppstå more oftast beskrivs i diagrammet. Provtagnings och avbildning var 7 dagar möjliggör identifiering av den ökande infektion. Behandlingen vid D21 med diminazene aceturate bort perifer parasitemi att möjliggöra bättre visualisering av huvudet och hjärninfektion. Diminazene aceturate är ett tidigt stadium läkemedel och inte kan passera blod-hjärnbarriären i mängder tillräckliga för att rensa sent stadium infektionen. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

figur 2
Figur 2:. Giemsa Stained trypanosomer På en fast blod film, Giemsa färgade trypanosomer (lila med rosa kärnor, stängd pil) är lätt att upptäcka mot de röda blodkropparna (färgas blå, öppen pil) och kan snabbt räknas för att erhålla antalet trypanosomer / 10synfält enligt en 100X mål. Skalstrecket betecknar 10 mikrometer. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figur 3
Figur 3: Bioluminescence avbildning av infekterade möss Tre representativa djur av en grupp av 6 möss infekterade med VSL-2 (M = mus) och en vildtyp infekterade kontrollen (infekterade med vildtyp nonbioluminescent parasit linje).. Luciferin också administreras till muskontroll före avbildning, som ger bakgrundsmätning. En värmekartskalan visas med rött indikerar höga nivåer av bioluminiscens, vilket motsvarar ett stort antal parasiter och blått indikerar låga nivåer av mareld (D = dag). Styr musen har ingen mareld som förväntat utan luciferas-uttryckande parasiter. bild f rom Burrell-Saward et al. 8 med tillstånd av Oxford University Press. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

figur 4
Figur 4:. Jämförelse av Bioluminescence och blod Film parasitemi Totalt bioluminiscens för varje helt djur kvantifierades som beskrivs i avsnitt 5 och perifer parasitemi kvantifieras genom att räkna parasiter i blodutstryk. Felstaplar anger standardavvikelse från medelvärdet. Bild från Burrell-Saward et al. 8 med tillstånd av Oxford University Press. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

5 "src =" / filer / ftp_upload / 54032 / 54032fig5.jpg "/>
Figur 5:. Ex vivo avbildning av utskurna hjärn perfusion hjärnan hos möss avbildas i figur 3 togs bort och avbildas som beskrivs i 4.5. Bioluminiscens mäts på en värme kartans skala som för figur 3. Styr hjärnan från en mus infekterade med vildtyp nonbioluminescent parasiter behandlades också med luciferin och kan observeras ingen bioluminiscens. Skalstrecket betecknar 1 cm. Denna siffra har ändrats från Burrell-Saward et al. 8 med tillstånd av Oxford University Press. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

figur 6
Figur 6: Kinetics of Luciferin Bioluminescence i VSL-2-infekterade möss.Tre VSL-2-infekterade CD1 möss injicerades med 150 mg / kg ip av luciferin och placerades omedelbart i kameran. Mössen avbildas under 60 minuter och deras bioluminiscens beräknades för att bestämma den optimala avbildningsfönstret efter luciferin administration. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Utvecklingen av en självlysande T. b. brucei GVR35 stammen tillåter visualisering av en trypanosominfektion från tidigt till sent skede. Tidigare infektionsmodeller kunde inte upptäcka sent skede, när parasiter är i hjärnan i realtid från blod film mikroskopi, och krävde utgallring och avlägsnandet av hjärnor från infekterade möss för att bestämma parasitbördan 12. Den bioluminiscens minskar inter-mus variation som en enda mus kan spåras hela helhet av infektionen och en snabb kvalitativ bedömning av infektion kan observeras i något skede. Den mycket känslig metod för mareld avbildning möjliggör låg nivå infektion kan identifieras tidigare än blod-film mikroskopi, med så få som 100 trypanosomer detekterbara genom avbildning jämfört med 5 x 10 3 trypanosomer / ml detekterbara genom mikroskopi 9. Dessutom, genom att följa samma djur under hela experimentet elimineraär behovet av separata djurgrupper för varje tidpunkt, vilket kraftigt minskar användningen av djur.

Avbildnings protokoll som beskrivs här kan anpassas till den vetenskapliga behov som den icke-invasiva natur innebär att ytterligare och mer frekvent avbildning kan utföras (med lämplig djuretik godkännande), men för bedömning av hjärninfektion D21 är den tidigaste tidpunkt punkt. Vid denna punkt, tidigt skede läkemedel inte längre är effektiva på att rensa det sena stadiet parasiter. Det är också absolut nödvändigt att mössen avbildas under samma betingelser vid varje tidpunkt. Till exempel bör samma exponeringstider och samma vy (ventrala eller dorsala) användas för att säkerställa noggrann mätning av infektionsförloppet.

Om avbildning ingen signal under föreligger (när det är känt att modellen ska ha en infektion), finns det ett antal steg som kan följas för att bestämma orsaken till problemet. För det första kan ökas exponeringstidentill högst 5 min som skulle kunna detektera mycket låga bioluminiscens signal. Om signalen fortfarande inte upptäcks och blodfilmer är positiva för parasit, skulle nästa steg vara att bekräfta om parasiten är fortfarande självlysande. Detta kan utföras genom användning av en kommersiell in vitro luciferasaktiviteten analysen och bioluminescens skulle detekteras med användning av en luminometer. Om det vid denna punkt parasiten är inte längre självlysande, skulle stabiliteten av konstruktionen i parasiten måste åtgärdas.

Färgen på mössen gör en skillnad till känsligheten hos avbildning som den utsända bioluminescens dämpas av mörk päls och hud 6,9. Val av musstam, såsom vita möss eller nakna möss kan därför förbättra resultaten. Om musen färg är begränsad, till exempel genom användning av en transgen linje, sedan rakning eller depilating mössen i en region av intresse kan i hög grad förbättra känsligheten 6.

deTrots den förbättrade känsligheten och signalera att bioluminescent modell producerar desto bioluminescens inte direkt korrelerar till den perifera parasitemi observerades i blodfilmer (dagar 7-21 visade i figur 4). Litteratur har dokumenterat att tidigt stadium infektion trypanosomiasis infekterar hemolymphatic systemet 1, och är inte enbart begränsad till blodsystemet och detta, tillsammans med infektion av perifera organ, kan förklara varför när perifer parasitemi är knappt detekterbar i blodfilmer, bioluminescens syns som är särskilt framgår av data för dag 7 i fig 3 och 4. Detta är dock inte innebära att mareld avbildning endast kan användas som ett kvalitativt mått på infektion, och ytterligare analys krävs för att bestämma absolut parasit börda.

Bioluminescence avbildning har förmåga att kunna användas tillsammans med andra infektiösa patogener som är svåra att monitor, med gnagarmodeller av Chagas sjukdom, malaria och toxoplasmos redan etablerade 13-16. Den höga signal-brusförhållande av mareld i kombination med dess förmåga att spåra i realtid infektioner kan ge en mer känslig, icke-invasiv läkemedels bedömning, samt få en bättre förståelse av CNS infektion kinetik, vilket gör det ett värdefullt verktyg i infectious sjukdomforskning.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

Vi tackar John Kelly och Martin Taylor (London School of Hygiene & Tropical Medicine) för att ge T. b. brucei GVR35-VSL-2 och Dr. Andrea Zelmer (LSHTM) för råd om in vivo imaging. Detta arbete stöddes av Bill och Melinda Gates Foundation Global Health Program (licensnummer OPPGH5337).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
PBS Sigma, UK P4417 tablets pH 7.4
Glucose Sigma, UK G8270 99.5% (molecular) grade
Ammonium chloride Sigma, UK A9434 99.5% (molecular) grade
Heparin (lithium salt) Sigma, UK H0878
Hi-FCS Gibco, Life Technologies, UK 10500-064 500 ml
DPBS Sigma, UK D4031 Sterile filtered
Mr. Frosty Nalgene, UK
Giemsa Sigma, UK G5637
D-Luciferin Perkin Elmer, UK
Sigma, UK 115144-35-9
Diminazene aceturate Sigma, UK D7770 Analytical grade
IVIS Lumina II Perkin Elmer, UK other bioimagers available e.g. from Bruker, Kodak
Living Image v. 4.2 Perkin Elmer, UK proprietary software for Perkin Elmer IVIS instruments; other instruments may have their own
1 ml Syringe Fisher Scientific, UK 10142104
20 ml Syringe Fisher Scientific, UK 10743785
25 G Needles Greiner Bio-one N2516
21 G Needles Greiner Bio-one N2138
Twin-frosted microscope slide VWR, UK 631-0117
1.5 ml Microcentrifuge tube StarLab, UK I1415-1000
7 ml Bijou tube StarLab, UK E1412-0710
Mouse restrainer Sigma, UK Z756903 our restrainer was made in-house, this is a similar model

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Brun, R., Blum, J., Chappuis, F., Burri, C. Human African trypanosomiasis. Lancet. 375, (9709), 148-159 (2010).
  2. Rodgers, J. Trypanosomiasis and the brain. Parasitology. 137, (14), 1995-2006 (2010).
  3. Barrett, M. P., Boykin, D. W., Brun, R., Tidwell, R. R. Human African trypanosomiasis: pharmacological re-engagement with a neglected disease. Br. J. Pharmacol. 152, (8), 1155-1171 (2007).
  4. Barrett, M. P., Vincent, I. M., Burchmore, R. J. S., Kazibwe, A. J. N., Matovu, E. Drug resistance in human African trypanosomiasis. Future Microbiol. 6, (9), 1037-1047 (2011).
  5. Jennings, F. W., Whitelaw, D. D., Urquhart, G. M. The relationship between duration of infection with Trypanosoma brucei in mice and the efficacy of chemotherapy. Parasitology. 75, (2), 143-153 (1977).
  6. Andreu, N., Zelmer, A., Wiles, S. Noninvasive biophotonic imaging for studies of infectious disease. FEMS Microbiol. Rev. 35, (2), 360-394 (2011).
  7. Sadikot, R. T., Blackwell, T. S. Bioluminescence imaging. Proc. Am. Thorac. Soc. 2, (6), 537-540 (2005).
  8. Burrell-Saward, H., Rodgers, J., Bradley, B., Croft, S. L., Ward, T. H. A sensitive and reproducible in vivo imaging mouse model for evaluation of drugs against late-stage human African trypanosomiasis. J. Antimicrob. Chemother. 70, (2), 510-517 (2015).
  9. McLatchie, A. P., et al. Highly sensitive in vivo imaging of Trypanosoma brucei expressing 'red-shifted' luciferase. PLoS Negl. Trop. Dis. 7, (11), e2571 (2013).
  10. Jennings, F. W., et al. Human African trypanosomiasis: potential therapeutic benefits of an alternative suramin and melarsoprol regimen. Parasitol. Int. 51, (4), 381-388 (2002).
  11. Wiles, S., Robertson, B. D., Frankel, G., Kerton, A. Bioluminescent monitoring of in vivo colonization and clearance dynamics by light-emitting bacteria. Methods Mol. Biol. 574, 137-153 (2009).
  12. Rodgers, J., Bradley, B., Kennedy, P. G. E. Combination chemotherapy with a substance P receptor antagonist (aprepitant) and melarsoprol in a mouse model of human African trypanosomiasis. Parasitol. Int. 56, (4), 321-324 (2007).
  13. Kamerkar, S., Davis, P. H. Toxoplasma on the brain: understanding host-pathogen interactions in chronic CNS infection. J. Parasitol. Res. 2012, 589295 (2012).
  14. Franke-Fayard, B., et al. Murine malaria parasite sequestration: CD36 is the major receptor, but cerebral pathology is unlinked to sequestration. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, (32), 11468-11473 (2005).
  15. Hitziger, N., Dellacasa, I., Albiger, B., Barragan, A. Dissemination of Toxoplasma gondii to immunoprivileged organs and role of Toll/interleukin-1 receptor signalling for host resistance assessed by in vivo bioluminescence imaging. Cell. Microbiol. 7, (6), 837-848 (2005).
  16. Lewis, M. D., et al. Bioluminescence imaging of chronic Trypanosoma cruzi infections reveals tissue-specific parasite dynamics and heart disease in the absence of locally persistent infection. Cell. Microbiol. 16, (9), 1285-1300 (2014).
Bioluminescence Imaging för att upptäcka sent stadium Infektion av afrikansk sömnsjuka
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Burrell-Saward, H., Ward, T. H. Bioluminescence Imaging to Detect Late Stage Infection of African Trypanosomiasis. J. Vis. Exp. (111), e54032, doi:10.3791/54032 (2016).More

Burrell-Saward, H., Ward, T. H. Bioluminescence Imaging to Detect Late Stage Infection of African Trypanosomiasis. J. Vis. Exp. (111), e54032, doi:10.3791/54032 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter